IL-23/GM-CSF抑制剂缓解强直性脊柱炎小鼠脊柱纤维化的机制研究

目的探讨粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)靶向抑制剂和白细胞介素(IL)-23靶向抑制剂联合使用缓解强直性脊柱炎(AS)小鼠脊柱纤维化的作用机制。方法招募健康受试者(HC组)和AS患者(AS组)各6例,采集其外周静脉血,检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-23、IL-17和GM-CSF的水平。建立AS小鼠模型。30只小鼠随机分为Control组、Model组、IL-17A Inh组(阳性对照组)、IL-23 Inh组、GM-CSF Inh+IL-23 Inh组,每组6只。ELISA法测定小鼠血清TNF-α、IL-23、IL-17和GM-CSF的水平。Western blot法测定小鼠脊柱周围肌肉/韧带组织上皮-间质转化(EMT)标志物E-cadherin、N-cadherin、snail、Vimentin的水平以及脊柱骨组织核因子-κB配体的受体激活因子(RANKL)、骨保护素(OPG)和碱性磷酸酶(ALP)的水平。micro-CT测定小鼠左后爪和脊柱(L5~6脊椎骨)新生骨和成熟骨体积。结果与HC组相比,AS组患者血清中TNF-α、IL-23、IL-17和GM-CSF水平升高(P<0.05)。与Control组相比,Model组小鼠血清中TNF-α、IL-23、IL-17和GM-CSF水平升高(P<0.05),脊柱周围肌肉/韧带组织E-cadherin的相对表达水平下调(P<0.05),N-cadherin、snail和Vimentin的相对表达水平上调(P<0.05),脊柱骨组织RANKL的相对表达水平上调(P<0.05),小鼠左后爪和L5~6脊椎新生骨体积增大(P<0.05)。与Model组相比,GM-CSF Inh+IL-23 Inh组上述指标的水平均逆转(P<0.05),IL-23 Inh组上述指标均无明显差异(P>0.05)。与Control组相比,Model组小鼠脊柱骨组织OPG和ALP的相对表达水平上调(P<0.05);与Model组相比,GM-CSF Inh+IL-23 Inh组上述指标无明显差异(P>0.05)。结论GM-CSF靶向抑制剂和IL-23靶向抑制剂联合治疗可以降低AS小鼠炎症水平,缓解脊柱周围肌肉、韧带组织纤维化,并抑制脊柱骨组织表达RANKL,减少新生骨形成和病理性骨重塑,保护脊柱的活性。

表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价

为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。

桂枝茯苓汤结合金刚藤胶囊治疗慢性盆腔炎的疗效及对MCP-1、TGF-β1、GM-CSF水平的影响

目的:探讨分析桂枝茯苓汤结合金刚藤胶囊治疗慢性盆腔炎(CPID)的疗效及对单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、粒-巨核细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平的影响。方法:回顾选取2022年1月~2024年1月我院妇产科收治的CPID患者共93例,按不同给药方法分为试验组52例和对照组41例。两组均给予奥硝唑联合左氧氟沙星治疗,试验组在此基础上给予桂枝茯苓汤结合金刚藤胶囊进行治疗,比较两组治疗2周后临床疗效、治疗前后中医症候评分、血液流变学[纤维蛋白原(Fib)、血浆粘度、血细胞比容]及血清MCP-1、TGF-β1、GM-CSF的变化。结果:治疗后,试验组临床疗效高于对照组(P<0.05);治疗后,试验组及对照组患者腰腹疼痛、带下量多、疲乏无力等各项中医症候积分相较治疗前均有下降,其中试验组下降更为明显(P<0.05);治疗后,试验组血细胞比容、Fib、血浆粘度相较治疗前明显改善,且改善效果优于对照组(P<0.05);治疗后,试验组血清MCP-1、TGF-β1、GM-CSF明显下降且降幅大于对照组(P<0.05)。结论:桂枝茯苓汤结合金刚藤胶囊治疗CPID,可有效缓解患者临床症状、改善血液流变学并降低血清MCP-1、TGF-β1、GM-CSF水平,临床疗效确切。

金刚藤胶囊联合桂枝茯苓胶囊治疗慢性盆腔炎的疗效及对血清GM-CSF、MMP-2水平的影响

【目的】分析金刚藤胶囊联合桂枝茯苓胶囊治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎的疗效及对血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平的影响。【方法】将90例湿热瘀结型慢性盆腔炎患者随机分为联合组和单药组,每组各45例。单药组患者给予桂枝茯苓胶囊治疗,联合组患者在单药组的基础上联合金刚藤胶囊治疗,疗程为2周并随访1个月。观察2组患者治疗前后中医证候积分和血清GM-CSF、MMP-2水平的变化情况,比较2组患者的临床疗效、症状缓解时间、疾病复发和不良反应发生情况。【结果】(1)疗效方面,治疗2周后,联合组的总有效率为93.33%(42/45),单药组为66.67%(30/45),组间比较,联合组的疗效明显优于单药组(P<0.01)。(2)中医证候积分方面,治疗后,2组患者的下腹疼痛、腰骶疼痛、带下量多、月经量多、经行腹痛、神疲乏力等各项中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),且联合组对各项中医证候积分的降低幅度均明显优于单药组(P<0.05)。(3)症状缓解时间方面,联合组患者治疗后的白带恢复正常时间、下腹坠胀和腹痛缓解时间均较单药组明显缩短(P<0.01)。(4)血清学指标方面,治疗后,2组患者的血清GM-CSF、MMP-2水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且联合组对血清GM-CSF、MMP-2水平的降低幅度均明显优于单药组(P<0.05或P<0.01)。(5)疾病复发和不良反应方面,联合组的复发率和不良反应发生率分别为11.11%(5/45)、13.33%(6/45),均明显低于单药组的35.56%(16/45),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】金刚藤胶囊联合桂枝茯苓胶囊治疗,可以显著提高湿热瘀结型慢性盆腔炎的临床疗效,有效缩短症状缓解时间,降低血清GM-CSF、MMP-2水平。

RMPP患儿血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平变化及临床意义

目的探讨难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)患儿血清白细胞介素-17A(IL-17A)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平变化及临床意义。方法选取华北医疗健康集团邢台总医院2019年12月至2021年12月162例RMPP患儿作为研究组,另取同期120例普通肺炎支原体肺炎(GMPP)患儿作为对照组。收集两组一般资料,检测并比较两组血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平对RMPP患儿的诊断价值,采用单因素及多因素Logistic模型分析影响RMPP的因素。结果研究组肺不张、肺实变、胸腔积液占比、FEV1、FVC、CRP及D-D均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,RMMP患儿FEV1、FVC均与血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平呈负相关(P<0.05);Pearson相关性分析显示,RMMP患儿血清IL-17A与RANTES、GM-CSF呈正相关,RANTES与GM-CSF呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平联合诊断RMPP患儿的AUC为0.906,显著高于各自单独诊断的0.785、0.752和0.765(P<0.05);Logistic模型分析显示,存在肺不张(OR=2.052,P<0.001)、存在肺实变(OR=2.591)、存在胸腔积液(OR=2.309)、血清IL-17A≥10.77 pg/mL(OR=1.984)、RANTES≥32.95μg/L(OR=1.833,P<0.001)、GM-CSF10.58μg/L(OR=1.902)均为影响RMPP的独立危险因素。结论IL-17A、RANTES、GM-CSF在RMPP患儿血清中呈高表达,三指标联合检测的诊断效能较高,可为临床尽早诊断、尽早干预RMPP提供一定的帮助。

G-CSF联合GM-CSF及高剂量G-CSF治疗急性髓系白血病化疗后中性粒细胞缺乏的疗效观察

目的:探讨高剂量G-CSF方案和G-CSF联合GM-CSF方案治疗及预防急性髓细胞白血病化疗后粒细胞减少的临床疗效与安全性。方法:回顾性分析53例接受化疗的急性髓系白血病患者,对比常规剂量G-CSF、高剂量G-CSF以及G-CSF联合GM-CSF在化疗后的应用,观察中性粒细胞绝对值、中性粒细胞减少持续时间、中性粒细胞减少伴发热发生概率及各组治疗不良反应的区别。结果:高剂量G-CSF组与G-CSF联合GM-CSF组较标量G-CSF组中位ANC减少的持续时间明显缩短,中性粒细胞减少合并感染的发生率明显减少,高剂量G-CSF组与G-CSF联合GM-CSF组之间无统计学差异,三组之间安全性相仿。结论:G-CSF联合GM-CSF方案以及高剂量G-CSF方案治疗及预防急性髓细胞白血病化疗后粒细胞减少安全有效。

装载阿霉素和GM-CSF的纳米颗粒增强宫颈癌抗肿瘤免疫反应的研究

目的:探索pH敏感型纳米颗粒(DGNPs)是否可以实现化疗药物阿霉素(Dox)和免疫细胞因子GM-CSF的共递送,并在肿瘤局部释放药物,实现对宫颈癌的协同抗肿瘤效应。方法:采用纳米沉淀法制备Dox纳米粒,然后用无溶剂包埋方法负载GM-CSF。电镜观测纳米颗粒DGNPs形态;HPLC检测Dox从DGNPs中的释放,ELISA检测GM-CSF从DGNPs中的释放;使用活体成像技术观测DGNPs在荷瘤小鼠体内的生物分布;利用小鼠移植瘤模型检测DGNPs的体内抑瘤活性;通过免疫组化检测CD4+和CD8+T细胞的肿瘤浸润情况;Western blot检测肿瘤组织中caspase-3的表达情况。结果:成功制备DGNPs,电镜观测其具有均匀的纳米颗粒形态;DGNPpH在pH=6.5时Dox的释放量明显高于pH=7.4时的释放量,但pH对DGNPpH和DGNPnon释放GM-CSF无明显影响;活体成像显示DGNPpH显著聚集于肿瘤组织;小鼠移植瘤模型显示,相较于回输DGNPnon组及Dox与GM-CSF联合回输组,DGNPpH抑制肿瘤生长的能力更强(P<0.01),且CD4+和CD8+T细胞的浸润增强(P<0.0001),肿瘤组织中c-caspase-3表达增强(P<0.0001)。结论:DGNPpH可以方便地实现Dox和GM-CSF的共递送,在宫颈癌肿瘤组织中有效富集,并展现出显著的抑制肿瘤生长及增强抗肿瘤免疫反应能力。因此,DGNPpH有可能在今后发展成为一种针对宫颈癌的可靠的免疫化疗策略。

hGM-CSF基因的克隆及重组腺病毒的构建

目的采用RT-PCR技术、基因重组技术及脂质体转染技术等克隆得到hGM-CSF基因并获得高滴度重组腺病毒。最终目的是为GM-CSF造血干细胞肿瘤基因治疗提供基础研究准备。方法应用RT-PCR技术从人脐带血淋巴细胞中克隆出hGM-CSF基因,再应用基因重组技术构建含hGM-CSF基因的重组腺病毒载体,进而通过反复转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒。结果克隆出hGM-CSF基因,经测序证实结果正确;得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的基因。结论用LoxP/Cre体外重组法成功构建了hGM-CSF的复制缺陷型重组腺病毒。

MEBT/MEBO对大鼠慢性难愈合创面组织中MMP-2、CXCL1、GM-CSF蛋白表达的影响

目的观察湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、趋化因子配体1(CXCL1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)蛋白表达的影响。方法将72只SD大鼠随机分为急性皮损组、慢性创面组、贝复新组、美宝组各18只,除急性皮损组外,其余组皮下注射氢化可的松建立慢性难愈合创面,注射完成后用生理盐水清理创面,贝复新组创面敷贝复新凝胶,美宝组创面敷美宝烧伤膏,均每日上下午各换药1次。观察各组大鼠伤后第3,7,14天创面情况并取创面肉芽组织,Masson染色观察创面中胶原纤维生成情况,ELISA法检测肉芽组织中MMP-2含量,免疫组化法检测创面组织中CXCL1、GM-CSF蛋白表达情况。结果美宝组大鼠创面愈合速度快于慢性创面组和贝复新组。Masson染色显示各组创面组织中胶原纤维含量随伤后时间的延长逐渐增加;伤后第3,7天,美宝组胶原纤维含量均明显高于慢性创面组和贝复新组(P均<0.05);伤后第14天,各组胶原纤维含量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。创面组织中MMP-2含量,贝复新组随伤后时间延长而增加(P<0.05),美宝组随伤后时间延长而减少(P<0.05);伤后第3天,美宝组创面组织中MMP-2含量明显高于慢性创面组(P<0.05);伤后第7天,美宝组和贝复新组创面组织中MMP-2含量下降但与慢性创面组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);伤后第14天,美宝组创面组织中MMP-2含量明显低于慢性创面组和贝复新组(P均<0.05)。贝复新组伤后创面组织中CXCL1表达平均光密度随伤后时间延长降低,伤后第14天明显低于伤后第3天(P<0.05);伤后第3,7,14天创面组织中GM-CSF表达平均光密度比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。美宝组伤后第3,7,14天创面组织中CXCL1表达平均光密度比较差异均无统计学意义(P均>0.05);伤后第7,14天创面组织中GM-CSF表达平均光密度均明显低于伤后第3天(P均<0.05),且伤后第14天明显低于伤后第7天(P<0.05)。慢性创面组、贝复新组、美宝组伤后第3,7,14天创面组织中CXCL1表达平均光密度和伤后第7天创面组织中GM-CSF表达平均光密度比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。伤后第3天,美宝组创面组织中GM-CSF表达平均光密度与慢性创面组比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于贝复新组(P<0.05);伤后第14天,美宝组创面组织中GM-CSF表达平均光密度明显低于慢性创面组(P<0.05)。结论MEBT/MEBO可能通过促进胶原纤维的生成,调节MMP-2及GM-CSF、CXCL1蛋白的表达,从而加快慢性难愈合创面组织的修复。

LAIR-1对GM-CSF介导的JAK/STAT信号通路的调节作用及其对Mo7e细胞功能的影响

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1,LAIR-1)对粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)依赖的Mo7e细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨LAIR-1调节GM-CSF功能的分子机制,为进一步研究LAIR-1在造血细胞分化中的作用提供资料。方法采用LAIR-1慢病毒表达载体(LV-LAIR-1)转染GM-CSF依赖的Mo7e细胞,建立稳定高表达LAIR-1的Mo7e-LAIR-1细胞株,并采用流式细胞术、Western blot法检测、反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)以及激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)鉴定LAIR-1分子的表达;采用CCK-8试剂盒、FITC Annexin V凋亡试剂盒以及Transwell实验分别检测LAIR-1对Mo7e细胞功能的影响;采用Western blot法检测LAIR-1对酪氨酸蛋白激酶/信号转导及转录激活因子(janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路影响。结果经LV-LAIR-1转染的Mo7e细胞高表达LAIR-1分子;与对照组比较,LAIR-1能够显著抑制Mo7e细胞的增殖(P<0.001),促进细胞迁移(P<0.05),但对细胞凋亡无明显影响(P>0.05);GM-CSF能够上调JAK2、STAT1、STAT3和STAT5的磷酸化水平,而LAIR-1的表达能够明显抑制STAT1、STAT3和STAT5蛋白酪氨酸的磷酸化水平。结论免疫抑制性受体LAIR-1可能通过抑制细胞因子GM-CSF介导的JAK/STAT信号通路的活化,参与对髓系造血细胞分化的调节。

表达猪源GM-CSF蛋白的重组PRRSV构建及鉴定

为提高猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)弱毒疫苗的免疫效果,本研究以高致病性PRRS弱毒疫苗株HuN4-F112感染性分子克隆为基础,在NSP2区域删除了110个氨基酸,将猪源GM-CSF基因和PRRSV ORF6转录引导序列(TRS6)通过融合PCR方法插入HuN4-F112疫苗株的ORF1b和ORF2a之间,构建了全长重组质粒pHN4-△110-GM-CSF。将该重组质粒采用SwaⅠ酶切线性化,经体外转录病毒基因组RNA后转染BHK-21细胞,然后在Marc-145细胞中进行病毒拯救及传代。结果显示重组病毒感染Marc-145细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR、DNA测序、MluⅠ酶切鉴定和免疫荧光鉴定结果显示,救获的重组PRRSV含有GM-CSF基因并能够有效表达,将其命名为rHN4-△110-GM-CSF。生物学特性分析表明重组病毒与亲本病毒在Marc-145细胞中具有相似的生长特性,插入的外源基因具有良好的遗传稳定性。由于GM-CSF能够活化树突状细胞,是一种良好的免疫佐剂。该重组病毒的构建为动物体内免疫保护攻毒试验评价奠定了基础。

类风湿关节炎病情活动度与肌骨超声半定量评分及GM-CSF、COMP相关性研究

分析类风湿关节炎(RA)病情活动度与肌骨超声半定量评分及粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)相关性。方法 选取2020年1月-2021年6月间,于驻马店市中医院风湿免疫科行疾病诊治的RA患者96例。根据荷兰风湿病专家提出的关节疾病活动度评分标准(Disease Activity Score in 28 joints DAS28)将RA分为缓解组(14例)、低活动组(30例)、中活动组(32例)及高活动组(20例)4组,分别对4组内RA患者行肌骨超声半定量评估,抽取外周静脉血3ml,检查血清GM-CSF、COMP水平差异,同时采用Spearman相关性检验RA活动度、肌骨超声半定量评分及GM-CSF、COMP相关性。结果 缓解组肌骨超声半定量评估中,滑膜增生、血流信号、骨侵袭、关节积液和总分均低于低、中、高活动组;低活动组分别低于中活动组、高活动组;中活动组低于高活动组。4组患者滑膜增生、血流信号、骨侵袭、关节积液和总分差异比较有统计学意义(P<0.05)。缓解组患者血清GM-CSF、COMP水平分别低于低、中、高活动组;而低活动组的血清GM-CSF和COMP水平也显著低于中活动组和高活动组;同时,中活动组的血清GM-CSF和COMP水平也低于高活动组。所有这些差异在统计上都具有显著意义(P<0.05)。Spearman相关性分析得知,RA病情活动度、肌骨超声半定量评分、血清GM-CSF、COMP 水平呈正相关(r=0.720、0.84、0.7677 P<0.05)。结论 类风湿关节炎病情活动度与肌骨超声半定量评分、血清GM-CSF、COMP水平有关,高活动患者肌骨超声半定量评分、血清GM-CSF、COMP水平明显升高。

人类GM-CSF受体生物学特性的研究

为了探讨人类ＧＭＣＳＦ受体（ＧＭＲ）的功能特性，将编码人ＧＭＲα和βｃ亚单位的ｃＤＮＡ转染到无ＧＭＲ表达的小鼠前Ｂ细胞系ＢａＦ３中。阳性转染子功能检测表明，表达ＧＭＲα的ＢａＦ３克隆能与配体低亲和力结合（Ｋｄ＝３．４ｎｍｏｌ／Ｌ），并仅在高浓度配体诱导后出现增殖反应；而共表达ＧＭ－Ｒα／β的ＢａＦ３克隆则能以高亲和力方式与配体结合（Ｋｄ＝９９ｐｍｏｌ／Ｌ），并表现出配体依赖性细胞增殖；增殖信号的传导与配体通过诱导βｃ磷酸化而活化胞浆Ｊａｋ２、Ｓｈｃ及Ｓｈｃ相关蛋白Ｐ１４５（ＳＨＩＰ）有关。提示这些信号分子可能在连结造血生长因子受体与细胞有丝分裂及其它反应的“激酶瀑布”中发挥着关键作用。

携带鼠GM-CSF基因的穿梭质粒抗结肠癌作用研究

目的 探究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的穿梭质粒能否对BALB/c小鼠结肠癌有疗效。方法 构建表达鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)的穿梭质粒。实验分为pT7 mGM-CSF组(质粒组)、空载体对照组(pT7 GFP组)和溶剂对照组(PBS组)。Elisa检测pT7 mGM-CSF体外转染真核细胞后的表达量;选取雌性BALB/c小鼠,用表达近红外荧光蛋白(IRFP)的鼠结肠癌细胞株(CT26-IRFP)皮下植瘤;采用瘤内注射方式给药,游标卡尺测量实验组BALB/c小鼠肿瘤生长的情况;用小动物活体成像仪观察BALB/c小鼠体内肿瘤IRFP荧光强度表达情况并记录存活率;IHC法检测瘤组织内免疫细胞浸润情况。结果 与pT7 GFP组和PBS组比较,质粒组的表达在转染pT7 mGM-CSF质粒的293T细胞上清中的含量达到600pg/mL;和溶剂PBS组相比,质粒组与pT7 GFP组动物肿瘤生长趋势更为平缓,给药第21d,与PBS组比较,质粒组治疗效果明显;在治疗28d后质粒组小鼠存活率为40%,与pT7 GFP和PBS组相比有显著性差异;携带mGM-CSF基因的穿梭质粒组IRFP基因表达的荧光信号与pT7 GFP组和PBS组相比有显著性差异(P<0.05);IHC检测结果显示质粒组瘤组织内有大量的T淋巴细胞、NK细胞浸润聚集。结论 mGM-CSF基因修饰的穿梭质粒对鼠结肠癌具有明显的抑瘤效应,可能与质粒pT7 mGM-CSF有效刺激免疫细胞浸润有关。

人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究

目的 研究人参总皂甙 (TSPG)对人淋巴细胞表达GM CSF的影响 ,及其与人粒细胞 巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法 采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果 TSPG能显著刺激粒细胞 巨噬细胞系造血祖细胞 (CFU GM)增殖 ;经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM CSF样活性 ;TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM CSF蛋白和mRNA表达。结论 TSPG可能通过直接和 或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM CSF ,进而促进CFU

GM-CSF重组腺病毒扩增的骨髓树突状细胞体外经肿瘤抗原刺激后诱导抗肿瘤免疫应答

用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒感染小鼠骨髓细胞，观察扩增到的骨髓树突状细胞的生物学功能。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒一次性感染骨髓细胞，１ｗ后能从一只小鼠股骨中扩增到２．４×１０６～３．３×１０６树突状细胞，扩增到的骨髓树突状细胞表达ＭＨＣ－Ⅱ、ＭＨＣ－Ⅰ、Ｂ７－１、Ｂ７－２和Ｉ－ＣＡＭ－１等免疫分子，分泌一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ，对同种异体Ｔ细胞具有很强的刺激活性，体外经Ｂ１６肿瘤瘤苗刺激后免疫同系小鼠，能诱导出抗原特异性的ＣＴＬ活性，使免疫动物产生更强的保护性免疫反应，抵抗Ｂ１６细胞的攻击。提示可用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒从骨髓中扩增足够数量的树突状细胞，用于肿瘤的免疫治疗和基因治疗。

辐射诱导性启动子调控GM-CSF基因的表达

构建携带早期生长反应基因 (Egr 1)启动子的GM CSF和增强绿色荧光蛋白 (EGFP)双顺反子基因表达载体 (Egr EG)。通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EG) ,采用FACS分析EGFP表达的阳性细胞 ,用RT PCR、ELISA及集落增殖法分析GM CSFmRNA、GM CSF含量的表达及对CFU GM的增殖作用。结果显示 :HFCL/EG细胞证实有外源性基因EGFP和GM CSF的整合和表达及对CFU GM的增殖作用。提示Egr 1调控序列启动的GM CSF基因修饰的基质细胞经辐射造血因子表达明显增高 ,并对造血细胞具有一定的保护作用。

双表达载体研究GM-CSF对HCVC基因免疫应答的影响

目的 HCV C蛋白基因诱导的免疫应答较弱 ,因而增强 HCV C蛋白基因免疫对于开发 HCV疫苗具有极其的重要性。方法将 GM- CSF基因与 pc15 4基因插入双表达载体 pc DNA3 .0 BA构建成双价质粒 pc DNA3 .0 BApc15 4 GM- CSF,肌肉免疫 Balb/ c小鼠。结果 GM- CSF和 pc15 4在 Cos- 7细胞中同时获得瞬时表达 ;pc DNA3 .0 BApc15 4 GM- CSF双价质粒较单价 pc DNA3 .0 BApc15 4诱导小鼠产生抗体的几何平均滴度显著增高 ( P=0 .0 4 ) ,而 pc DNA3 .0 BApc15 4 + pc DNA3 .0BAGMCSF混合质粒较单价质粒 pc DNA3 .0 BApc15 4诱导小鼠产生抗体的滴度极显著降低 ( P<0 .0 1)。HCV C蛋白抗原特异性的脾淋巴细胞增殖能力 ,双价质粒较单价及单价混合质粒极显著增高 ( P<0 .0 1)。结论双表达载体同时输送 GM- CSF与pc15 4基因能增强 Balb/ c小鼠对 HCV C蛋白基因的体液免疫应答及免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力。

GM-CSF对MUC1基因疫苗抑制乳腺癌生长的增强作用

目的 :观察GM CSF有无增强MUC1基因疫苗对EMT6乳腺癌生长的特异性抑制作用。方法 :采用股四头肌肌肉注射法 ,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1 MUC1免疫雌性BALB/c小鼠 ,每 3wk 1次 ,共 3次。每次基因免疫后 1、3、5d ,皮下注射GM CSF 10 0 μL(1μg/ 10 0 μL)。最后 1次基因免疫后第 3周 ,接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞。两周后观察、记录肿瘤的生长情况。于肿瘤细胞接种后第 4 3天 ,处死全部动物 ,称量肿瘤的质量。用 4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性。结果 :接种肿瘤细胞后 4 3d ,MUC1基因疫苗加GM CSF组、MUC1基因疫苗组、pcDNA3.1加GM CSF组及pcDNA3.1组 ,EMT6肿瘤的大小依次为 (135± 33.8)mm3 、(2 5 0± 34.3)mm3 、(5 6 8± 4 3.6 )mm3 和 (5 96± 4 8.2 )mm3 ;平均瘤质量 (g)依次为 (0 .81± 0 .4 2 )g、(1.2 3± 0 .4 1)g、(2 .30± 0 .4 8)g及 (2 .2 8± 0 .5 8)g。与对照组相比较 ,MUC1基因疫苗组EMT6肿瘤的生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;与单独MUC1基因疫苗组相比较 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组抗肿瘤生长的作用有显著差异 (P <0 .0 5 )。在效靶比为 10 0∶1、5 0∶1、2 5∶1和 12 .5∶1时 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率 ,依次为 6 8.5 %、 5 3.4 %?