MALDI-TOF MS法快速鉴定散装即食食品中3种食源性致病菌

本研究旨在利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测并鉴定散装即食食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌。通过对点样方式、前处理方式、不同培养基及培养时间等各项实验条件的优化筛选确定最佳方法,并考察其检测限和稳定性,同时用所建立的方法与多重PCR法、VITEK 2等生化鉴定法进行结果比对,比较三者鉴定结果的一致性,最后进行批量食品样本检测来探寻MALDI-TOF MS鉴定法在散装即食食品中的适用性。结果表明,三种目标菌同一批次及不同传代次数的鉴定得分均大于95%,变异系数均小于2%,所建立的方法重复性和稳定性良好,且检测限为10^(5)CFU/mL,MALDI-TOF MS菌株鉴定结果与多重PCR法、生化鉴定法结果高度一致,且比二者检测用时更短,更加特异高效;在点样方式上,相较于夹心法与混合干滴法,三种覆盖法点样平均鉴定得分更高,均为99.9%,其中1μL+1μL覆盖法点样可获得的平均峰数目更多,特征峰更复杂且强度更高;而在前处理方式上,甲酸乙腈法与其他两种菌体处理方法相比可获得更多的出峰量和更高的峰强度,平均鉴定得分均在98%以上,且与数据库中图谱匹配度更高。综上所述,MALDI-TOF MS法在致病菌鉴定方面不仅灵敏特异、准确快速,且操作简便、结果直观,作为国标法的有力补充,为食源性致病菌的分析鉴定与分型溯源提供了新思路。

MALDI-TOF MS在鲍曼不动杆菌同源性分析中的临床应用评估

目的评估基质辅助激光解析电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)分析鲍曼不动杆菌(AB)同源性的临床应用价值。方法剔除同一患者或环境多次送检标本中的重复菌株,收集某三甲综合医院2020年5月—2021年2月神经内科重症监护病房(ICU)住院患者痰标本及环境标本分离的46株AB,使用VITEK-MS质谱仪检测菌株,应用SARAMIS Premium软件进行聚类分析,并采用多位点序列分型(MLST)的方法进行验证。结果通过MALDI-TOF MS和MLST聚类分析和比较,46株AB中,39株为MALDI-TOF MS的MS-a型,其中,22株为MLST的MT-A簇,包括ST208型3株,ST540型3株,ST195型8株,ST369型5株,以及ST136、ST436、ST1893型各1株;16株为MT-B簇,包括ST381型4株、ST469型11株和ST938型1株;1株为MT-C簇(ST1821);MS-b型1株为ST381;MS-c型2株为ST369;MS-d型1株为ST195;MS-e型2株分别为ST540、ST369;MS-f型1株为STN1。结论作为AB同源性分析工具,MALDI-TOF MS具有一定的局限性,其菌株同源性分析结果与MLST结果一致性低,分辨特异性低,不可取代MLST技术。

基于MALDI-TOF MS定量快速药敏试验在肺炎克雷伯菌对亚胺培南和替加环素药敏试验中的适用性分析

目的:探讨基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)的定量快速药敏试验(rAST)在肺炎克雷伯菌(KP)对亚胺培南(IPM)和替加环素(TGC)药敏试验中的实用性分析。方法:选取天津医科大学总医院2018年1月至2021年6月120株临床非重复KP,应用微量肉汤稀释法(BMD)检测其对IPM和TGC的最低抑菌浓度(MIC)值。采用优化甲酸提取法提取KP菌体蛋白,进行基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法的快速药敏试验[(MALDI-TOF MS)-based rAST]检测IPM和TGC的MIC值,并评估最佳的菌液稀释度和孵育时间。采用Cohen′s kappa统计来评估(MALDI-TOF MS)-based rAST法和标准参考BMD的一致性。结果:在不同的孵育时间,上述两种方法处理后的质谱均能成功鉴定KP(P>0.05);但优化后的甲酸提取法简化了操作流程,并且在菌量较低情况下的成功鉴定率高于常规方案。稀释25倍即菌液含量为6×10^(6) CFU/mL、孵育时间分别为2 h和3 h条件下,(MALDI-TOF MS)-based rAST法测得IPM(P<0.01)和TGC(P<0.001)的MIC值效果最佳;此条件下,(MALDI-TOF MS)-based rAST与BMD测得的MIC值相当,分别为IPM 70.83%(85/120)、TGC 66.67%(40/60),基本一致性(EA)分别为98.33%(118/120)、98.33%(59/60)。结论:(MALDI-TOF MS)-based rAST缩短了报告时间,是一种可靠的快速定量药敏试验方法。

微生物培养体系预处理在MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌的应用价值

目的分析微生物培养仪(HB&L)微生物培养体系预处理在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)快速鉴定血培养阳性样本病原菌的临床应用价值。方法收集2022年1月至2022年12月安阳市人民医院实验室常规方法鉴定的120份血培养报警后单一细菌感染的阳性样本,所有样本均接受HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理,将传统方法的鉴定结果作为“金标准”对照,运用MALDI-TOF MS鉴定。对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定的鉴定率;另外对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法在不同分值下MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定结果。结果HB&L微生物培养体系预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为116例,鉴定率为96.67%;分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为92例,鉴定率为76.67%,两种预处理方法鉴定率对比差异有统计学意义(P<0.05);在3.000~2.300分值下HB&L微生物培养体系MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定率均高于分离胶促凝管法,差异有统计学意义(P<0.05);在2.299~2.000、1.999~1.700、<1.700分值下两种预处理方法菌属鉴定率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论HB&L微生物培养体系是MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性样本病原菌优质的预处理方法,可大幅提升鉴定率,值得应用。

关于在MALDI-TOF MS技术背景下提高临床微生物检验实习教学能力的探讨

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中的一项革命性创新技术,给临床微生物诊断带来了极大的便利,同时也给临床微生物实习带教带来了新的挑战。本文阐述了MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验实习带教中的应用探讨,旨在充分运用MALDI-TOF MS技术结合传统鉴定技术,提高临床微生物检验实习的教学能力。

MALDI-TOF MS分析大肠菌群不合格餐(饮)具中的微生物污染情况

为了解餐(饮)具中大肠菌群污染情况及被污染的餐(饮)具是否有致病风险,对大肠菌群项目不合格餐(饮)具中的微生物进行菌种鉴定。将餐(饮)具复发酵阳性的培养物转接伊红美蓝琼脂平板进行分离,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对28批不合格餐具中分离到的62株野生菌株的单个菌落进行精确鉴定,鉴定率为93.55%,鉴定结果均与自动微生物生化鉴定仪鉴定结果一致。主要鉴定出阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐克罗诺杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、弗氏柠檬酸杆菌、阴沟肠杆菌等10种微生物。其中存在致病风险的微生物比例达68.97%,而28批次不合格餐(饮)具中存在致病风险的达26批次,占比92.86%。MALDI-TOF MS技术能同时且快速准确地鉴定出餐(饮)具中存在的不同微生物,而大肠菌群不合格餐(饮)具存在较高的致病风险,需加强餐(饮)具卫生管理与监测。

MALDI-TOF MS技术在微生物检验中的应用效果

目的探讨MALDI-TOF MS技术在微生物检验中的应用效果。方法选取2021年7月至2022年7月进行检验的540例血培养阳性样本为研究对象,每份样本分为2份,1份540例直接应用MALDI-TOF MS技术实施微生物检验,另1份540例进行标本接种后细菌鉴定,前者设为微生物检验组,后者设为细菌鉴定组,比较两组病原菌检出情况与感染检出情况。结果540份样本共分离出540株病原菌,革兰阳性菌分布如下,凝固酶阴性葡萄球菌有183例,金黄色葡萄球菌有37例,肠球菌有36例,链球菌有32例,革兰阳性杆菌9例,其他17例;革兰阴性菌分布如下,肠杆菌科细菌160株,革兰阴性非发酵菌44株,其他8株;酵母样真菌分布如下,白念9株,其他5株。细菌鉴定组的革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母样真菌检出率高于微生物检验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在微生物检验中应用MALDI-TOF MS技术可检出病原菌与感染性疾病,但检出价值低于细菌鉴定,如有必要可联合应用细菌鉴定,进一步明确患者的病原菌类型。

MALDI-TOF MS在NTM临床分离株快速鉴定中的应用研究

目的 建立临床非结核分枝杆菌(NTM)分离株的快速鉴定方法,为临床NTM病的诊断和治疗提供参考。方法 收集2018-2020年泉州某三甲医院的临床疑似NTM感染患者的痰液、肺泡灌洗液、胸部穿刺液和脑脊液等标本,借助基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,通过改良前处理方法(甲酸提取法),摸索上机检测条件,建立临床NTM分离株的快速鉴定方法,并以16S rRNA测序为金标准,验证鉴定的准确性。结果 收集的50株临床NTM菌株,采用传统(常规)处理方法进行质谱鉴定,仅鉴定出4株,检出率为8.0%,而采用甲酸提取法共鉴定出24株,检出率为48.0%,两种方法检出率比较,差异有统计学意义(P<0.01),且改良处理后鉴定出的24株鉴定结果与PCR测序结果完全一致,符合率为100.0%。结论 初步建立的NTM甲酸提取前处理的质谱鉴定方法检出率明显提高,具有一定的临床应用价值。

MALDI-TOF MS在不同禽肉动物源性成分检测中的研究

[目的]建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术检测不同禽肉动物源性成分的方法,构建不同禽肉蛋白质分子指纹图谱标准数据库,对不同禽肉进行鉴别。[方法]样品用磷酸盐缓冲液提取,净化后用MALDI-TOF MS法测定。采用ChemPattern软件对不同禽肉蛋白图谱进行化学计量学分析,建立识别模型。[结果]鸡、鸭、鹅3种不同禽肉之间具有明显差异。首次建立不同禽肉蛋白质分子指纹图谱标准数据库,可一次性对每个样品中鸡、鸭、鹅等肉源性成分进行同时分析。[结论]建立的基于蛋白质组学的鸡、鸭、鹅源性成分鉴定系统具有简便、稳定、准确、重现性好的优点,适用于不同禽肉中鸡鸭鹅动物源性成分的鉴别。

MALDI-TOF MS快速鉴定联合直接药敏试验在尿路感染诊断中的应用评估

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速鉴定联合直接药敏试验在尿路感染(urinary tract infection,UTI)诊断中的临床应用价值。方法收集2022年5月至12月首都医科大学附属世纪坛医院清洁中段尿培养样本共2610份。全部通过MUS9600全自动尿液分析系统筛选后,经差速离心浓缩纯化后使用MALDI-TOF MS直接鉴定,使用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定和药敏系统,K-B法及ATB FUNGUS3进行直接药敏试验,并根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)发布的药敏试验标准进行结果判读。将其结果与清洁中段尿培养鉴定药敏结果进行比较。结果2610例清洁中段尿培养样本中经常规鉴定后共有阳性483例(483/2610,18.51%),阴性或疑似污染2127例(2127/2610,81.49%)。与MUS9600计数结果相比,阳性样本符合率为97.92%(472/483):其中杆菌97.90%(280/286),球菌98.48%(130/132),真菌92.31%(60/65)。阴性及污染样符合率为98.92%(2104/2127)。在这483个样本中,质谱快速鉴定符合率为90.48%(437/483),其中,革兰氏阴性菌92.86%(260/280),革兰氏阳性菌89.13%(123/138),真菌83.10%(54/65)。对部分阳性样本进行了直接药敏试验。革兰阴性杆菌数据显示,直接药敏试验与传统药敏试验的符合率为94.42%(5552/5880),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为4.42%(260/5880)、0.95%(56/5880)和0.20%(12/5880)。革兰氏阳性球菌数据显示,直接药敏试验与传常规药敏试验的符合率为91.91%(1340/1458),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为5.69%(83/1458)、1.65%(24/1458)和0.75%(11/1458)。假丝酵母菌药敏数据显示,直接药敏试验与传统药敏试验的符合率为77.69%(101/130),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为16.15%(21/130)、4.62%(6/130)和1.54%(1/130)。结论我们的发现表明,以MUS9600筛选,MALDI-TOF MS直接鉴定和Vitek 2 Compact、K-B法及ATB FUNGUS3直接药敏试验的组合为清洁中段尿培养提供了较直接、快速和可靠的鉴定和药敏结果,在尿路感染的早期诊断和合理治疗中具有显著的临床价值。

MALDI-TOF MS在临床微生物鉴定中的应用进展

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种新型的软电离生物质谱技术,是鉴定微生物的快速、可靠和高通量诊断工具。该技术可在几分钟内确定微生物的分离物,与传统鉴定方法相比,每个样本的快速周转时间和耗材成本最低,导致MALDI-TOF MS越来越多地用于世界各地的临床实验室[1]。在过去十几年中,MALDI-TOF MS已被广泛用作鉴定微生物的快速可靠方法,MALDI-TOF MS可将常规工作流程中用于微生物鉴定的时间缩短约1天。改进了微生物菌落的样品制备,提高了鉴定的准确性和速度[2]。MALDI-TOF MS也用于检测血液、脑脊液和尿液,因为它可以直接识别这些液体样品中的微生物,而无需事先培养或继代培养[3-4]。此外,MALDI-TOF MS目前正与流式细胞术等其他技术相结合,以扩大临床应用范围[5]。本文拟对MALDI-TOF MS的原理及在临床微生物鉴定中的应用进行概述,同时探讨该技术仍存在的局限性和未来前景。

基于MALDI-TOF MS快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力评价

目的研究基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力。方法本研究为前瞻性研究,选择2019年5月至2021年5月来河南省儿童医院进行治疗的中枢神经系统感染患者的脑脊液样本90例作为研究对象,分别对以上样本进行基于MALDI-TOF MS快速鉴定以及常规细菌培养,分别对以上样品进行病原菌鉴定以及药敏试验结果分析。结果本研究中共计鉴定革兰氏阴性菌38例,革兰氏阳性菌42例,真菌10例。本研究中利用短期培养物MALDI-TOF MS鉴定的总体正确率为92.22%。其中革兰氏阴性菌的鉴定正确率为82.33%,革兰氏阳性菌的鉴定正确率为95.23%,真菌的鉴定正确率为90.00%;通过对革兰氏阴性菌对阿米卡星、苄卡西林、氨苄西林、氨曲南、头孢唑林、头孢吡肟、头孢他啶、头孢呋辛、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、呋喃妥因、哌拉西林、妥布霉素、复方新诺明等抗生素的耐药情况进行短期培养以及常规药敏实验分析显示,两种方法的诊断一致性较强,通过对革兰氏阳性菌对氨苄西林、青霉素、环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、利奈唑胺、莫西沙星、呋喃妥因、苯唑西林、利福平、美罗培南、四环素、替加环素、复方新诺明、万古霉素等抗生素的耐药情况进行短期培养以及常规药敏实验分析显示,两种方法的诊断一致性较强。结论基于MALDI-TOF MS快速鉴定脑脊液中病原菌的结果与常规培养检测方法一致,可作为临床治疗的重要依据。

MALDI-TOF MS对临床侵袭性丝状真菌的快速鉴定技术的研究

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在临床常见丝状真菌鉴定中的应用价值。方法收集2017年4月—2019年7月本院各种类型临床标本中分离培养的65株丝状真菌,以及某三甲医院惠赠的26株丝状真菌。这91株丝状真菌通过传统形态学鉴定、DNA测序及MALDI-TOF MS鉴定方法后,以DNA测序结果为标准,与另外2种方法的鉴定结果进行统计学比较,评价MALDI-TOF MS在临床丝状真菌鉴定上的应用。结果在28℃和35℃条件下培养的菌株经质谱仪鉴定后,χ^(2)检验显示P>0.05,提示培养温度差异对结果的影响无统计学意义;以DNA测序结果为金标准,传统形态学方法的正确鉴定率为81.3%(74/91),而基于MALDI-TOF MS技术的正确鉴定率可达97.8%(89/91);研究中,使用“甲酸乙腈提取法”提取蛋白后,丝状真菌质谱鉴定的正确率为90.1%(82/91),而“磁珠研磨法”提取蛋白后的质谱鉴定率则为97.8%(89/91)。结论临床常规工作中使用质谱仪鉴定常见丝状真菌时,培养温度不会影响质谱鉴定结果;改良“磁珠研磨法”提取蛋白后质谱仪鉴定的正确率优于质谱仪推荐“甲酸乙腈提取法”;MALDI-TOF MS技术在常见丝状真菌的鉴定上,相比于传统形态学鉴定,该技术更快速、客观、高效及准确。

MALDI-TOF MS自建数据库对丝状真菌临床分离株鉴定能力的评估

目的评估MALDI-TOF MS自建数据库对丝状真菌临床分离株的鉴定能力。方法分子测序技术明确41株拟建库丝状真菌的种属信息。采用标准提取法分别对拟建库菌株幼稚菌落和成熟菌落进行MALDI-TOF MS自建数据库处理;另采用236株丝状真菌临床分离株评估该自建数据库的鉴定能力。结果41株建库丝状真菌分属于10属25种。自建数据库包含82张参考质谱图。采用MALDI-TOF MS自建数据库可将评估菌株种水平鉴定率由商业数据库的29.2%(69/236)提升至67.5%(159/236);将自建数据库与商业数据库联合后,评估菌株种水平鉴定率为76.3%(180/236),且无错误鉴定情况。与形态学方法相比,MALDI-TOF MS自建数据库对临床常见曲霉菌株的鉴定无优势,对于曲霉少见种和非曲霉丝状真菌,其种水平鉴定率为61.8%(34/55),显著优于形态学方法(16.4%,9/55)。结论MALDI-TOF MS自建数据库有助于提高实验室丝状真菌鉴定能力,在形态学方法鉴定困难的少见丝状真菌鉴定方面其作用更为显著。

MALDI-TOF MS自建库对不同来源大肠埃希菌的鉴定能力验证

目的 收集并建立具有特征的大肠埃希菌MALDI-TOF MS自建库,并观察自建库对不同来源大肠埃希菌菌株的鉴定能力。方法 采集2019年3月-2020年8月新疆医科大学第五附属医院检验科临床标本分离出的142株人源性大肠埃希菌菌株;采集自北京市怀柔区和延庆区养殖场分离出的40株动物源性大肠埃希菌菌株。通过16S rRNA测序确定其种属,并进行MALDI-TOF MS鉴定,筛选出合格的蛋白质指纹图谱,使用MicroID 4.0自建库功能对其进行建库。分别使用本地及北京收集的大肠埃希菌菌株对自建库进行验证,评估自建库对不同来源的大肠埃希菌的鉴别区分能力。结果 基于40株合格的人源性大肠埃希菌菌株的蛋白指纹图谱建立自建库,人源性与动物源性大肠埃希菌菌株对自建库进行验证,鉴定结果分别为96%、83%高度可信,其鉴定结果可信程度差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本次建立的自建库可用于区分鉴定人源性与动物源性的大肠埃希菌菌株,自建库的4个代表性特征峰具有地域特征,可用作不同地区菌株的鉴别与参考图谱数据库的补充。

MALDI-TOF MS基质HCCA与含巯基生命物质加成反应的质谱研究

采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)研究含巯基的生命物质(氨基酸、肽及蛋白质)与MALDI常用基质α-氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA)之间的加成反应,并分别考察了其在酸性、弱酸性和碱性条件下的反应情况。结果表明,在碱性条件下,含巯基的生命物质易与HCCA发生加成反应,使待测物在质谱图中产生189.0 u的质量数迁移。此外,使用高分辨质谱分析加成产物,并通过串联质谱分析进一步确认其为共价结合产物。此研究为确定MALDI基质与含巯基的生命物质之间的加成反应提供了依据,以期减少质谱中基质对含有巯基化合物测试的干扰,为基质的选择提供参考。

叔胺化合物在MALDI-TOF MS中形成脱氢正离子[M-H]^+的机理研究

通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测试含叔胺结构单元的一系列肉桂酰胺衍生物,发现谱图中会产生明显的[M-H]^+峰,而在电喷雾质谱(ESI-MS)测试结果中则只观察到[M+H]^+峰。使用不同基质,在MALDI-TOF谱图中始终可见明显的[M-H]^+。推测在MALDI电离源中叔胺化合物首先发生单电子转移或质子转移形成M^+.或[M+H]^+,在次级电离过程中粒子间的不断碰撞下,气相中的离子-分子反应继续进行,其结构中叔胺氮原子与邻位碳原子经脱氢形成亚胺离子。由于C≡N双键与相邻苯环形成稳定的共轭体系,降低了亚胺离子内能,使其大量产生,在MALDI-TOF MS谱图中表现为[M-H]^+。DFT化学计算结果表明,由[M+H]^+脱氢气形成[M-H]^+为热力学自发过程,进一步选取其他含有叔胺基团的化合物进行MALDI-TOF MS测试,实验结果与上述结论相符。

利用MALDI-TOF MS检测鲍曼不动杆菌对替加环素耐药性的研究

目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对鲍曼不动杆菌的鉴定效果,同源性分析能力及自建库效果。方法利用MALDI-TOF MS技术鉴定107株鲍曼不动杆菌,再进行药物敏感性分析,筛选出替加环素耐药和敏感的鲍曼不动杆菌,利用筛选出的鲍曼不动杆菌建立替加环素耐药和敏感鲍曼不动杆菌数据库,最后进行自建库验证。结果 MALDI-TOF MS将107株细菌鉴定为103株鲍曼不动杆菌、3株琼氏不动杆菌和1株医院不动杆菌,利用K-B法和微量肉汤稀释法检测103株鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性,得到37株替加环素耐药和39株替加环素敏感的鲍曼不动杆菌,两种方法的一致率为68. 82%(64/93),76株鲍曼不动杆菌经同源性分析得到院内泛耐药鲍曼不动杆菌的分布,最后,自建库对替加环素耐药鲍曼不动杆菌的正确检出率为87. 4%,替加环素敏感菌株的正确检出率为77. 5%。结论 MALDI-TOF MS可快速鉴定鲍曼不动杆菌、琼氏不动杆菌及医院不动杆菌,可对鲍曼不动杆菌进行同源性分析,通过自建库可预测鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药性。

MALDI-TOF MS与16SrDNA方法对肠杆菌科微生物鉴定比较分析

为了研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法鉴定肠杆菌科微生物及其对微生物系统分类学相关分析的准确性,采用MALDI-TOF MS对金桔表面分离的10种肠杆菌科微生物进行蛋白质图谱收集,通过比对图谱特征峰实现微生物的鉴定与系统进化学分析;同时对10种微生物进行16SrDNA提取与测序,得到分子生物化学水平鉴定,并采用邻近连接法对16SrDNA序列做系统进化树分析。结果表明:MALDI-TOF MS与16SrDNA测序对10种肠杆菌科微生物鉴定结果中,克雷伯菌属2株菌鉴定种级有偏差,其他8种一致;MALDI-TOF MS与16SrDNA测得的数据都可计算微生物相关性,从而得到微生物系统发育树,两株系统发育树中同属级微生物归类的亲缘位置与方向一致,但不同属肠杆菌科微生物的亲缘距离与位置差异较大。MALDI-TOF MS法鉴定农产品表面微生物具有快速、准确的特点,但准确建立系统发育相关性还需要扩大数据库和优化算法。

金黄色葡萄球菌及其甲氧苯青霉素耐药性的MALDI-TOF MS鉴定

用MALDI_TOFMS细菌指纹图谱鉴定细菌 ,建立区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的MALDI_TOFMS分析方法,检测了76株从临床标本中分离得到的金黄色葡萄球菌 ,用软件进行聚类分析,以nuc(耐热核酸酶)基因和mecA(耐药)基因聚合酶链反应(PCR)检测结果为参照 ,74 %的菌株经MALDI_TOFMS给出了正确的鉴定结果;金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的质谱图有很大差别 ,各自有其特征峰;经过软件聚类分析 ,76株实验菌株划分为敏感群和耐药群;与PCR检测结果对照 ,有7株菌PCR检测mecA基因为阴性 ,而经MALDI_TOFMS鉴定为耐药株 ,表型鉴定表明其中有5株为敏感株;利用细菌指纹图谱和数据库检索对大多数菌株实现了正确鉴定;MALDI_TOFMS分辨率高 ,甚至可以区分株间的差异 ,实现了区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株;