锌对原代培养海马神经元MT mRNA表达的影响

目的 为探讨神经元锌内稳态机制。方法 采用实时荧光定量RT PCR法检测 :原代培养大鼠海马神经元 10 0 μmol L锌诱导后 ,不同时间点 (0、2、4、6和 8h)MT1 MT2 MT3mRNA的表达 ;及 0、5 0、75、10 0、12 5、15 0 μmol L锌诱导 4h后 ,各浓度组MT1 MT2 MT3mRNA的表达。 结果 基础状态下 ,MT的三个异构体在海马神经元内的表达峰度为 :MT3>MT1>MT2 ;在 0～ 10 0 μmol L范围内 ,MT1、MT2mRNA的表达随锌浓度增加而显著增加 ,锌浓度进一步增加时 ,MT1、MT2mRNA的表达进入平台期 ;MT3mRNA的表达随锌浓度的升高而下降 ;锌可显著上调MT1和MT2mRNA表达 ,峰值时间点在 6h左右 ;锌可使MT3mRNA的含量降低约6 0 %。结论 除MT3mRNA外 ,MT1和MT2mRNA在神经元内也有表达 ;象神经胶质细胞一样 。

镉胁迫下黑点青鳉(Oryzias melastigma)肝脏金属硫蛋白mRNA性别差异性表达研究

鱼类金属硫蛋白（metallothionein,MT）mRNA作为生物标志物已越来越多地应用到水环境重金属污染的监测中,然而重金属胁迫下鱼类MT mRNA表达是否具有性别差异性特征目前尚无相关报道。以海洋模式鱼类—黑点青鳉（Oryzias melastigma）为实验鱼类,首次克隆了其MT基因全长c DNA序列,分析了黑点青鳉MT基因和氨基酸序列特征,然后进一步研究了水体中镉暴露后雌、雄性黑点青鳉肝脏中MT mRNA表达的差异性。结果显示,黑点青鳉MT基因c DNA全长为385 bp,编码60个氨基酸,预测编码的多肽分子量为5 990 Da,含有脊椎动物MT基因特征性序列结构cys-x-cys、cys-x-x-cys和cys-x-cys-cys。镉胁迫下雌、雄性黑点青鳉肝脏MT mRNA表达结果显示,在0.8,4.0和8.0μg·L^-1环境浓度的镉暴露1~7 d条件下,与对照组相比,雄性黑点青鳉在所有的不同暴露浓度和不同暴露时间的实验组中肝脏MT mRNA几乎均被显著性诱导表达;而雌性黑点青鳉只在较高暴露浓度和较长暴露时间的实验组中才被显著性诱导表达,并且MT mRNA的表达水平比雄性低得多。上述研究结果表明,在相同的镉胁迫条件下,雄性黑点青鳉肝脏MT mRNA的表达比雌性更敏感;以黑点青鳉MT mRNA作为生物标志物监测海洋环境重金属污染生物效应状况时,应选择更敏感的雄性黑点青鳉作为监测鱼类。利用生物标志物监测水环境污染物生物效应时,监测动物的性别差异是一个应当考虑的重要因素。

重金属Cd^(2+)对土壤跳虫Folsomia candida金属硫蛋白mRNA转录水平诱导的研究

目前国内普遍采用传统种群和群落指标特征来进行重金属污染对土壤跳虫的研究。在国内首次通过添加不同浓度重金属镉(Cd^(2+))酵母喂食土壤跳虫室内实验种群白符跳(Folsomia candida),对白符跳体内金属硫蛋白(Metallothionein,MT)进行诱导,并采用实时荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,Real-time PCR)方法,测定其体内MT信使核糖核酸(m RNA)量的变化,从而判断Cd^(2+)诱导作用下MT表达量的变化。结果表明:Cd^(2+)染毒酵母饲料喂食28 d后,处理组与对照组(0 mg·kg^(-1) Cd^(2+))白符跳体内MT基因m RNA转录水平存在差异,MT表达量随Cd^(2+)处理水平的升高而显著上升。在浓度范围探测试验中,1 000 mg·kg^(-1) Cd^(2+)处理组和100 mg·kg^(-1) Cd^(2+)处理组的MT m RNA转录水平分别是对照组的9 355.53倍和731.13倍;在浓度梯度试验中,500 mg·kg^(-1) Cd^(2+)处理组的MT m RNA水平分别是对照组、12.5 mg·kg^(-1)和250 mg·kg^(-1)处理组的456.54、296.26和7.05倍,250 mg·kg^(-1)和12.5 mg·kg^(-1)处理组的MT m RNA水平分别是对照的64.78倍和1.54倍。这些结果说明:土壤弹尾纲白符跳体内金属硫蛋白m RNA转录水平能够被环境中的Cd^(2+)所诱导,并与之呈正相关关系。以此推测,土壤弹尾虫体内金属硫蛋白m RNA转录水平可作为评价土壤Cd^(2+)污染的潜在生物标志物特征。

镉诱导缢蛏(Sinonovacula constricta)体内金属硫蛋白基因变化规律研究

采用荧光定量PCR法,研究了缢蛏体内7种组织中金属硫蛋白(MT)mRNA的组织特异性表达,以及不同浓度梯度重金属Cd2+对缢蛏内脏团中MT mRNA的诱导效应。结果表明,在自然状态下,MT mRNA在缢蛏内脏团中的相对表达量最高;在不同浓度重金属Cd2+胁迫条件下,缢蛏内脏团中MT mRNA的诱导表达具有明显的剂量效应和时间效应,即随着Cd2+浓度的增加,MT mRNA的最大表达量明显升高,而随着时间的变化,MT基因的表达呈现脉冲式波动,具有较强的时间依赖性。在3h和48h缢蛏内脏团中MT基因表达量与重金属Cd2+浓度之间具有较好的线性相关性,说明缢蛏内脏团中MT mRNA表达变化可以作为指示环境重金属Cd2+污染的一个生物参考指标。

锌对5—15周龄鹅免疫、抗氧化功能、金属硫蛋白-Ⅰ基因表达量的影响及变量相关性分析

【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)m RNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P<0.05),设计6个处理,每处理6次重复,每重复10只(公母各半);各处理饲粮中锌水平分别为:27.46(Ⅰ组)、77.46(Ⅱ组)、127.46(Ⅲ组)、177.46(Ⅳ组)、227.46(Ⅴ组)、277.46(Ⅵ组)mg·kg-1(基础饲粮中含锌),试验进行11周。【结果】(1)胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数受饲粮中锌水平的影响,随锌水平的升高呈现先升高后降低趋势;当锌水平为127.46 mg·kg-1时,胸腺指数最高(P<0.05);当锌水平为77.46 mg·kg-1时,脾脏指数、法氏囊指数最高(P<0.05)。(2)饲粮锌水平为177.46 mg·kg-1时,鹅副黏病毒疫苗免疫后7日的抗体滴度最高(P<0.05);饲粮锌水平为157.41 mg·kg-1时,鹅副黏病毒疫苗免疫后14日的抗体滴度最高(P<0.05)。(3)当饲粮锌水平为153.84 mg·kg-1时,鹅血清和肝脏总抗氧化能力(T-AOC)活性最高(P<0.01);当饲粮中含锌127.46 mg·kg-1时,血清和肝脏过氧化氢酶(CAT)活性最高(P<0.01);当饲粮锌水平为148.33 mg·kg-1时,鹅血清和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性最高(P<0.05);当饲粮中含锌148.33 mg·kg-1时,血清和肝脏铜锌超氧化物歧化酶(Cu Zn-SOD)活性最高(P<0.01);当饲粮中锌水平为177.46 mg·kg-1时,血清和肝脏中丙二醛(MDA)最低(P<0.05)。(4)饲粮中锌能显著提高MT-I m RNA表达量(P<0.05),当饲粮中锌水平为177.46 mg·kg-1时,肝脏MT-I m RNA表达量最高(P<0.01)。(5)肝脏中MT-I m RNA表达量与肝脏中T-AOC(r=0.94)、Cu Zn-SOD(=r 0.97)活性指标呈极显著性正相关(P<0.01),与CAT(r=0.85)、GSH-Px(r=0.89)活性呈显著正相关(P<0.05),与MDA呈负相关(r=-0.70,P>0.05);肝脏中MT-I m RNA表达量与血清中T-AOC(r=0.99)、CAT(r=0.92)和Cu Zn-SOD(r=0.94)活性均呈极显著正相关(P<0.01),与GSH-Px呈正相关(r=0.81,P>0.05),与MDA呈负相关(r=-0.39,P>0.05)。【结论】(1)饲粮中适宜水平锌能够促进鹅免疫器官发育,增强T-AOC、CAT、GSH-Px、Cu Zn-SOD抗氧化酶活性,降低MDA水平。(2)饲粮中锌能够干预肝脏MT-I m RNA表达量,从而调节机体抗氧化能力。(3)鹅饲粮中锌水平在77—150 mg·kg-1范围内机体处于高位免疫和抗氧化状态。

日粮锌水平对生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1基因表达的影响

本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2～3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期23d。结果表明:日粮锌添加水平对生长肉兔平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著性影响(P>0.05),对平均日采食量(ADI)影响显著(P<0.05);不同锌水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响显著(P<0.05),对肝脏CuZn-SOD和GSH-Px活性影响极显著(P<0.01);随日粮锌水平的增加,肝脏、肾脏MT-1mRNA相对表达丰度呈先升高后降低趋势(P<0.01),80mg/kg添加水平时2种锌源MT-1mRNA相对表达丰度均达到最高。MT-1mRNA相对表达丰度可以作为评价动物机体锌营养状况的敏感指标。

饲粮中不同锌源及锌水平对固始鸡和AA肉鸡肝脏金属硫蛋白含量及基因表达的影响

为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周龄前,随着周龄增长,肝脏中MT含量和MT mRNA水平显著升高,而4周龄后随周龄显著降低。以肝脏中MT含量评定的锌源间相对生物利用率与以MT mRNA表达水平为指标评定的结果一致性较好,说明肝脏中MT含量和MTmRNA表达水平是评定锌源相对生物利用率的有效指标,相比较而言,MT含量受品种、周龄和锌添加水平的影响大于MTmRNA表达水平。

五种锌源对肉仔鸡生长性能、金属硫蛋白基因表达及组织锌含量的影响

为了探究同一添加水平的5种锌源对AA肉仔鸡生长性能、小肠金属硫蛋白(MT)mRNA及组织锌含量的影响,试验采用单因子随机设计,将240只1日龄AA肉仔鸡随机分成5组,选用玉米-豆粕型基础日粮(含锌22.68 mg/kg),在日粮中分别加入2种无机锌(ZnO、ZnSO4)和3种氨基酸螯合锌[赖氨酸锌(Lys-Zn)、蛋氨酸锌(Met-Zn)、甘氨酸锌(Gly-Zn),含锌量均为90 mg/kg],试验期为21 d,测定肉仔鸡生产性能、组织锌含量及MT mRNA相对表达量。结果表明:5种锌对肉鸡生长性能、肝脏和血液锌含量均无显著影响(P>0.05)。Gly-Zn和Met-Zn组的胰脏、胫骨锌含量和小肠MT mRNA相对表达量显著高于2个无机锌组(P<0.05);Lys-Zn组胰脏、胫骨锌含量和空肠MT mRNA相对表达量显著高于ZnO组(P<0.05),与ZnSO4组无显著差异(P>0.05),但有升高趋势。3种氨基酸螯合锌组中,Gly-Zn组和Met-Zn组胫骨锌含量、十二指肠MT mRNA相对表达量显著高于Lys-Zn组(P<0.05);2种无机锌组中,ZnO组胰脏、胫骨锌含量显著低于ZnSO4组(P<0.05)。说明Gly-Zn和Met-Zn能显著提高肉仔鸡小肠MT mRNA表达水平,增加组织锌含量。

膜型基质金属蛋白酶表达促进大鼠血管内膜SMC迁移的研究

目的探讨血管内膜增生(IH)过程中膜型基质金属蛋白酶(MT-MMP)mRNA的表达与平滑肌细胞(SMC)迁移的关系。 方法建立大鼠血管IH模型,以原位杂交法检测术后血管壁中MT-MMP mRNA的表达,并以特殊染色及Desmin免疫组化法对SMC进行半定量测定,观察两者的相关性。 结果IH过程中,MT-MMP mRNA与Desmin表达之间存在一定的相关性。术后前4周呈正相关(r=0.933,P<0.05),而此后表现为负相关(r=-0.42,P=NS)。 结论IH早期(术后1月),MT-MMP mRNA过度表达,激活MMPs,介导SMC由中膜向内膜迁移。

破壁灵芝孢子粉对长期镉暴露大鼠金属硫蛋白表达的影响

目的研究破壁灵芝孢子粉(GLS)对长期镉暴露大鼠金属硫蛋白(MT)基因表达的影响。方法雄性SD大鼠80只,随机分为4组,每组20只,即正常对照组(C)、单独染镉(Cd)和2个给药组(灵芝孢子粉0.5 g/kg和1.0 g/kg+Cd Cl2,即GCd_L和GCd_H组)。除C组外,所有大鼠隔天腹腔注射Cd Cl2(2 mg/kg),GCd_L和GCd_H组每天灌胃灵芝孢子粉混悬液,C组和Cd组大鼠灌胃等体积生理盐水。实验过程观察动物一般表现并定期称重,分别于30、60和90 d处死取肝组织,原子吸收光谱法(AAS)检测90 d肝组织中各亚细胞细胞核、线粒体、微粒体、细胞质Cd含量;采用real time RTPCR法检测MT-1mRNA、MT-2mRNA基因表达。结果与单独染镉组比较,对照组与给药组(GCd)体重差异有统计学意义(P<0.05);灵芝孢子粉使镉在肝组织中各亚细胞的分布发生显著变化(P<0.05);与对照组比较,灵芝孢子粉可诱导镉中毒大鼠MT-1mRNA、MT-2mRNA基因表达上调(P<0.05),且呈时间、剂量效应。结论灵芝孢子粉对长期镉暴露大鼠肝组织有保护作用,其机制可能与调节MT-1mRNA、MT-2mRNA基因表达水平有关。