生殖支原体16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应检测的比较研究

目的对生殖支原体(Mg)16Sr RNA基因和Mg Pa基因Taq Man荧光聚合酶链反应(PCR)检测结果进行比较,选取敏感度更高的靶基因进行Taq Man荧光PCR检测。方法选取Mg 16Sr RNA基因和Mg Pa基因为靶基因,根据已报道文献设计合成特异性扩增引物和探针,对泌尿生殖道拭子标本进行Taq Man荧光PCR检测,对Mg不同靶基因Taq Man荧光PCR检测结果进行统计学分析。结果 Mg 16Sr RNA基因Taq Man荧光PCR检测敏感性为90%,Mg Pa基因Taq Man荧光PCR检测敏感性为97.5%。结论 Mg Pa基因Taq Man荧光PCR敏感性要高于16Sr RNA基因Taq Man荧光PCR。

巢式-荧光定量PCR技术快速检测生殖支原体

目的建立生殖支原体巢式-荧光定量PCR快速检测技术。方法针对生殖支原体MgPa基因的保守片段(1414~1561bp),利用Primer express3.0设计引物及探针,巢式PCR扩增临床样本,纯化后克隆到载体,制备阳性标准品。优化PCR反应条件,研究其特异性、灵敏性和重现性。结果构建了含MgPa基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在101~109拷贝数之间有较好的线性关系。该方法检测阳性率高达15.4%,能特异性检测生殖支原体,而人型支原体、解脲脲原体、沙眼衣原体等检测为阴性;灵敏度高,可检测到10个拷贝数;3组重复试验的变异系数均小于3%。结论本研究建立了生殖支原体的快速检测技术,具有检测阳性率高、特异性强、灵敏度高、重现性好等特点。