右美托咪定通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路预防重型颅脑损伤患者PSH的疗效观察

目的探讨右美托咪定调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD)88/核转录因子(NF)-κB信号通路(TLR4/My D88/NF-κB)预防重型颅脑损伤患者阵发性交感神经过度兴奋(paroxysmal sympathetic hyperactivity,PSH)的临床疗效。方法选取本院2016年9月~2019年5月收治的100例重型颅脑损伤患者为研究对象,随机数字表法分为研究组和对照组各50例,研究组在麻醉诱导前给予1.0μg/kg负荷量的右美托咪定,后续以0.4μg·kg-1·h-1输注,对照组注射等量生理盐水。比较两组PSH发生率、临床症状、影像学表现、机械通气时间、气管插管/切开时长、ICU住院时间、总住院时长以及出院后3个月的GCS评分;同时检测两组治疗后外周血CD14+单核细胞中MyD88的荧光强度、TLR4、NF-κB表达水平,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果研究组7 d和3个月时PSH发生率显著低于对照组(P<0.05),且研究组总住院时长、ICU住院时长、术中气管切开比例以及机械通气时间均显著低于对照组,GCS评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。另外影像学结果显示两组患者的影像学病灶位置存在一定差异,对照组中患者病灶位于脑室系统及周围的比例高于研究组(P<0.05)。两组T1~T3时CD14+PBMC MyD88荧光强度、TLR4和NK-κB阳性表达率相比T0均显著增高(P<0.05),但研究组患者在T1~T3时MyD88荧光强度、TLR4和NK-κB阳性表达率相比对照组明显降低(P<0.05)。两组T1~T3时血清TNF-α表达水平相比T0均显著增高(P<0.05),但研究组T1~T3时血清TNF-α表达水平相比对照组明显降低(P<0.05)。结论右美托咪定可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路减少重型颅脑损伤患者机体氧化应激反应,从而有效降低PSH发生风险,改善患者预后。

健脾清化中药复方对大鼠慢性萎缩性胃炎TLR4-MyD88依赖途径蛋白表达及TNF-α的影响

目的观察健脾清化中药复方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠TLR4及下游My D88依赖途径相关蛋白表达及炎性因子TNF-α的影响,探讨健脾清化中药复方治疗CAG的分子机制。方法将53只Wistar大鼠随机分为空白组8只和CAG造模组45只,以"氨水+去氧胆酸钠+乙醇"法复制CAG大鼠模型。确认造模成功后,将造模组余下40只CAG大鼠随机分为模型组、维酶素组、中药低、中、高剂量组,各8只。各组给予相应药物灌胃,连续30 d。HE染色观察病理组织学改变,Western blot法检测TLR4、My D88、NF-κB、COX-2的蛋白表达量,ELISA法检测血清中TNF-α含量。结果模型组大鼠TLR4、My D88、NF-κB、COX-2蛋白表达水平明显增高(P<0.01),血清TNF-α含量明显增高(P<0.01)。与模型组比较,健脾清化中药复方低、中、高剂量组胃黏膜病变明显改善,TLR4、My D88、NF-κB、COX-2蛋白表达水平均明显下降(P<0.05或P<0.01),血清TNF-α含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论健脾清化中药复方可有效改善CAG大鼠胃黏膜组织病理改变,其治疗机制可能与降低组织中TLR4-My D88依赖途径中相关蛋白表达,以及抑制炎症因子的表达有关。

四君子汤激活TLR-2/MyD88信号通路促进小肠黏膜上皮细胞损伤修复

目的:探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用及机制。方法:采用血清药理学方法制备四君子汤含药血清;tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤含药血清对ICE-6细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TLR-2和My D88 mRNA表达;Western blot法检测TLR-2与My D88蛋白表达。结果:中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P<0.01);细胞损伤后12 h,中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P<0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P<0.05,P<0.01);中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可上调TLR-2及My D88 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:四君子汤可加速胃肠黏膜损伤修复过程,其机制可能与激活TLR-2/My D88信号通路,促进黏膜上皮细胞迁移和增殖有关。

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TLR4、MyD88表达的影响

目的探讨眼针治疗脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88)的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MACO)动物模型。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β水平,Western印迹检测大鼠缺血侧脑皮层TLR4、My D88蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β水平明显升高(P<0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白水平均显示高表达(P<0.01);眼针组同模型组相比,血清IL-1β水平显著下降(P<0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论眼针抑制脑皮层组织中TLR4、My D88的表达,降低炎症反应,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。

右归丸对肾阳虚证患者TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨右归丸治疗肾阳虚证的免疫调控机制。方法筛选9例肾阳虚证患者,均给予右归丸口服,连服1个月。分别于治疗前后采集患者外周静脉血,制备外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA,按照实时定量PCR(q PCR)实验流程,检测TLR4、My D88及NF-κBmRNA表达情况,并进行比较分析。结果治疗后,患者TLR4mRNA表达水平明显下调(P<0.05),My D88、NF-κB mRNA表达水平均明显上调(P均<0.05)。结论右归丸可以调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路的表达,这可能是右归丸良性调节肾阳虚证免疫功能的分子机制之一。

安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(My D88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗APA阳性流产作用机制。方法:将BALB/c小鼠(♀)随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.019 5 g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8 g/kg,以生药计),每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白Ⅰ为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,各给药组小鼠ig相应药物,空白对照组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续9 d。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫组化法测定胎盘组织TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88 m RNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2 m RNA表达水平和MD2、My D88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。结论:安子合剂可抑制APA阳性流产小鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路转导,这可能是其抗APA阳性流产的作用机制之一。

清热祛瘀固肾方对anti-β2GPI诱导下的滋养层细胞TLR4/MyD88信号通路的影响

[目的]以Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,My D88)通路为切入点,探讨清热祛瘀固肾方(简称清固方)对抗β2糖蛋白I抗体(anti-beta 2 glycoprotein I antibody,anti-β2GPI)诱导的人胎盘滋养层细胞HTR8损害的作用及机理。[方法]将40只雌性Wistar大鼠,随机分为清固方高、中、低剂量组和正常组。分组用药10d后心脏取血,分别制备含不同浓度清固方血清和正常血清。构建My D88和TLR4真核表达质粒,分别转染HTR8细胞。两组HTR8细胞各分成清固方高、中、低剂量组、肝素组、阴性对照组和空白对照组。阴性对照组及空白对照组给予正常血清,其它组则给予相应的含药血清干预。除空白对照组外,其它各组与小鼠单克隆anti-β2 GPI共孵育后采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中单核细胞趋化因子-1(monocyte hemotactic protein-1,MCP-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)浓度。[结果]经anti-β2GPI诱导的转染TLR4真核表达质粒的HTR8细胞经各组含药血清处理后,清固方高、中、低剂量组IL-1β浓度低于肝素组和阴性对照组,清固方高剂量组及空白对照组MCP-1浓度低于肝素组,差异有统计学意义(P<0.05);转染My D88真核表达质粒的HTR8细胞经各组含药血清处理后,清固方高、中、低剂量组及空白组对照IL-1β、MCP-1浓度低于肝素组,阴性对照组IL-1β、MCP-1浓度高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。清固方高、中、低剂量组、肝素组总凋亡率均低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01),空白对照组总凋亡率低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]清固方通过干预TLR4/My D88信号转导通路,抑制HTR8细胞表面β2-GPI/anti-β2GPI活化引起的IL-1β、MCP-1分泌和细胞凋亡。

miR-21靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调

目的探讨mi R-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性mi R-21,mi R-164,mi R-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒,并与mi R-21模拟物、mi R-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为mi R-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将mi R-21模拟物、mi R-21模拟对照物、mi R-21抑制物、mi R-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温(37℃)培养或冷暴露(30℃),以Western Blot法检测各实验组TLR-4/My D88蛋白水平。结果低温诱导气道上皮细胞内mi R-21水平提高(P<0.05),而mi R-164及mi R-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内mi R-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验证实,TLR-4为mi R-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染mi R-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/My D88蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/My D88的蛋白水平(P<0.05);而使用mi R-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/My D88的蛋白水平下调(P<0.05)。结论低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内mi R-21水平,降低TLR-4/My D88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能。

MyD88在Buerger’s病血管组织中的表达及其意义

目的对Buerger’s病患者血管中的髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,My D88)进行检测,观察My D88在Buerger’s病患者血管中的表达及分布。方法收集2013年7月至2015年7月我院Buerger’s病患者血管标本9例,同期非Buerger’s病(肿瘤、外伤)患者血管标本12例为对照组。运用RT-PCR、Western blot技术检测2组血管中My D88的表达水平。同时运用免疫组化、免疫荧光技术检测Buerger’s病血管中My D88的表达及分布规律。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,与对照组相比,Buerger’s病患者血管组织中My D88的m RNA和蛋白表达水平明显升高,具有显著统计学意义(P<0.01)。免疫组化、免疫荧光结果显示,在Buerger’s病患者血管组织中,My D88主要表达于内皮细胞和平滑肌细胞。结论 Buerger’s病患者血管组织中My D88基因和蛋白表达水平明显升高,且主要表达于血管平滑肌细胞和内皮细胞。这些结果表明My D88可能与Buerger’s病的发病密切相关,TLRs-My D88信号通路在Buerger’s病的发病机制中可能发挥着重要作用。

布洛芬对MyD88基因沉默中性白细胞中NF-kB蛋白表达的影响

目的:研究布洛芬对脂多糖(LPS)介导的My D88基因沉默中性白细胞中一氧化氮(NO)产生能力和TLR4-NF-k B通路中核转录因子kB(NF-kB)蛋白表达的影响。方法:用密度梯度法分离正常健康者外周血中性白细胞并用免疫磁珠纯化,用Nucleofection转染系统将MyD88 siRNA基因转染入纯化后的中性白细胞;用0、5、10、50及100μmol/L布洛芬联合1 mg/L LPS分别刺激正常中性白细胞和已转染的My D88基因沉默的中性白细胞,用流式细胞仪检测已沉默MyD88基因的中性白细胞中NO水平,用Western Blot检测MyD88和NF-k B蛋白表达水平。结果:不同浓度的布洛芬均可以明显抑制正常中性白细胞和MyD88基因沉默中性白细胞产生NO,并呈剂量依赖,50μmol/L布洛芬浓度时抑制率最高;正常人中性白细胞MyD88和NF-κB的表达水平也随布洛芬浓度升高而降低,50μmol/L布洛芬时对MyD88和NF-κB的抑制率最高;选择50μmol/L布洛芬处理正常中性白细胞和MyD88基因沉默的中性白细胞,可明显抑制正常和My D88基因沉默中性白细胞中MyD88-和NF-κB蛋白的表达,与仅加LPS组比较,差异有统计学意义(P<0.01);正常细胞和MyD88基因沉默细胞之间产生NO水平和My D88-、NF-κB蛋白的表达水平比较P>0.05。结论:布洛芬可抑制LPS介导的MyD88基因沉默中性白细胞中NO产生,其机制可能与下调MyD88和NF-κB蛋白水平有关。

草鱼MyD88基因组结构解析及启动子活性探讨

草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国重要的淡水经济鱼类,病毒和细菌性疾病对其造成了重大损失[1]。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)引起的草鱼出血病,是对草鱼危害最大的传染性疾病之一。GCRV是双链RNA病毒,属呼肠孤病毒科(Reoviridae),水生呼肠孤病毒属(Aquareovirus),G亚型[2]。高密度集约化养殖更增长了疾病暴发的频率,严重地影响了草鱼养殖的经济效益。

纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂调控TLRs/MyD88通路对高糖诱导HAECs自噬及凋亡的影响

目的:探讨纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT-2i)调控TLRs/My D88通路对高糖诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)自噬及凋亡的影响。方法:选用HAECs,将细胞分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)和SGLT-2i+HG组(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L的SGLT-2抑制剂)。检测出各细胞生长活力、细胞凋亡水平、细胞TLRs、My D88 m RNA表达水平,细胞TLRs、My D88、Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II蛋白表达以及自噬水平。结果:与NG组相比,HG组细胞增值率显著降低(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞增值率显著上升(P<0.05)。12 h时24 h时时间点,与NG组相比,HG组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞凋亡率均显著下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Bax、Bcl-2表达水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组自噬相关蛋白Beclin 1、LC3II水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Beclin 1、LC3II水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组TLRs、My D88蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞TLRs、My D88表达水平下降(P<0.05)。结论:SGLT-2通过调控TLRs My D88通路抑制高糖诱导的人主动脉内皮细胞自噬及凋亡。

布地奈德混悬液对哮喘模型小鼠肺组织TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探究布地奈德混悬液对哮喘模型小鼠肺组织TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)/核因子κB(nuclear factor-κB,,NF-κB)通路的影响。方法:使用4%鸡蛋清白蛋白与2%的Al(OH3)共同致敏小鼠,建立咳嗽变异性哮喘小鼠模型40只,将模型大鼠分别使用低、中、高剂量(0.2、1.0、2.0 g/kg)布地奈德混悬液和孟鲁司特钠进行干预,1次/日连续干预14 d,于干预14 d时采集小鼠的支气管肺泡灌注液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、气管及肺组织,对各组BALF中的白细胞(white blood cell,WBC)、嗜酸性粒细胞、血清γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,Il-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平差异开展比较,对各组小鼠肺组织黏膜上皮增生程度评分、炎症细胞浸润程度评分、病变总评分差异,以及TLR4、My D88、p65蛋白表达差异进行分析。结果:分析显示,布地奈德混悬液能够显著降低哮喘模型小鼠BALF中白细胞及嗜酸性粒细胞数量,同时还能够改善小鼠气管和支气管黏膜上皮增生与肺组织炎症细胞浸润状态,且干预后小鼠肺组织中的TLR4、My D88、p65蛋白表达水平出现了明显的降低。结论:布地奈德混悬液对改善小鼠哮喘效果较好,其作用机制可能与该药能够调节TLR4、My D88、p65蛋白表达,进而影响炎症和免疫反应进程有关。

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88非依赖信号通路的作用研究

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TWP低、中、高剂量组(3,6,12 mg·kg^(-1)),硫唑嘌呤(AZA)组(6 g·kg^(-1)),每组15只。各组分别给予相应药物连续灌胃14 d。每隔3 d评估UC大鼠疾病活动指数(DAI)。14 d后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分。采用Western blot法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/My D88非依赖信号通路相关分子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB,IFN-γ)在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果提示,DAI评分、大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。RT-PCR及Western blot实验均提示,与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/My D88非依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。与AZA组相比,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子IFN-γmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义。因此,在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,My D88非依赖信号通路参与了炎症活动的调控,TWP可以通过抑制TLR4/My D88非依赖信号通路抑制IFN-γ的释放,发挥抗炎作用,其作用强度与剂量呈正相关。

乌梅丸及其拆方对溃疡性结肠炎大鼠炎性因子及TLR9/MyD88/NF-κBp65信号通路的影响

目的:探讨乌梅丸及其拆方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠炎性因子及TLR9/My D88/NF-κBp65信号通路的影响,并分析其作用机制。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组、乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组、乌梅丸辛开组、乌梅丸苦降组、乌梅丸补益组。三硝基苯磺酸/乙醇法造模2d后给药4周,观察大鼠疾病活动指数(DAI)及结肠黏膜损伤程度,ELISA法检测结肠黏膜白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(INF-γ)水平,免疫组化法观察Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(My D88)、细胞核因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组均能显著升高IL-4,降低INF-γ水平,显著减少结肠黏膜TLR9、My D88、NF-κBp65的蛋白表达(P<0.01),且效果优于其它乌梅丸拆方组。结论:乌梅丸组、乌梅丸辛开苦降组对UC大鼠结肠黏膜炎症有较好的缓解作用,其作用机制可能与调节炎性因子平衡,抑制TLR9/My D88/NF-κBp65信号通路的异常活化有关;辛开苦降、寒温并施的配伍方式可能是乌梅丸治疗UC的内在机制之一。

人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化

目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组。博来霉素组和hf PMSC治疗组分别经气管内注入50μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50μL PBS。hf PMSC治疗组,在造模3 d后,经尾静脉注射200μL含5×105个hf PMSC。第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(My D88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度。结果所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45。与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hf PMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及My D88和TGF-β蛋白水平。结论hf PMSC可通过My D88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化。

普伐他汀改变小鼠巨噬细胞极性发挥抗炎的机制

目的通过研究普伐他汀改变小鼠巨噬细胞极性而发挥抗炎作用,探讨他汀类药物防治动脉粥样硬化的机制。方法用L929细胞上清诱导小鼠骨髓细胞形成M0巨噬细胞及在此基础上以LPS+IFN-γ刺激,使其形成M1型巨噬细胞,然后给予50μmol/L普伐他汀钠、TLR4特异性受体抑制剂(抑制12 h后)+50μmol/L普伐他汀钠进行药物干预;ELISA测定细胞上清白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)的分泌水平;流式细胞术测定细胞膜表面抗原CD16/32、CD206的表达;荧光定量PCR检测TLR4、My D88及IRF5 mRNA的表达。结果 M1型巨噬细胞IL-12、CD16/32的含量和TLR4、My D88、IRF5 mRNA的表达均升高,普伐他汀钠作用后巨噬细胞IL-10、CD206的含量升高,TLR4、My D88、IRF5 mRNA的表达降低(P<0.05);TLR4特异性受体抑制剂+50μmol/L普伐他汀钠干预与单纯性50μmol/L普伐他汀钠干预巨噬细胞相比,影响不明显(P>0.05)。结论普伐他汀可改变巨噬细胞极性发挥抗炎的作用,可能通过影响TLR4-My D88-IRF5细胞信号传导通路具有抗动脉粥样硬化的作用。

利拉鲁肽对链脲霉素致糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用机制分析

目的探究利拉鲁肽对链脲霉素致糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用机制。方法60只SD大鼠中随机取12只作为空白对照组,其余48只大鼠随机分为模型组和低、中、高剂量利拉鲁肽组。采用一次性腹腔注射链脲霉素(55 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模前7 d皮下注射低、中、高剂量的利拉鲁肽(35μg/kg、70μg/kg、140μg/kg),1次/d,连续注射7 d。空白对照组和模型组以等量生理盐水替代。处理结束后,检测大鼠心功能指标[左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、射血分数(EF),短轴缩短率(FS)]和空腹血糖水平。HE染色和Masson染色观察大鼠心肌损伤和纤维化程度;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MyD88)及核因子κB P65(NF-κB P65)表达。结果与空白对照组相比,模型组大鼠LVESD、LVEDD、空腹血糖、CVF、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88及NF-κB P65磷酸化水平明显升高,EF、FS明显降低(P<0.05),心肌病理损伤显著增加。与模型组相比,利拉鲁肽处理组LVESD、LVEDD、空腹血糖、CVF、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88及NF-κB P65磷酸化水平明显降低,EF、FS明显升高(P<0.05),心肌病理损伤明显减轻。结论利拉鲁肽可呈剂量依赖性地降低大鼠血糖水平,保护糖尿病大鼠心肌损伤,抑制TLR4/MyD88/NF-κB活化后介导的炎症反应可能是其作用机制。

DHRS2抑制肝细胞肝癌增殖和转移的功能研究

目的:研究脱氢酶/还原酶SDR家族成员2(DHRS2)对肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其作用的可能机制。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DHRS2在HCC组织中的表达情况。Kaplan meier plotter数据库分析DHRS2的表达对HCC患者预后的影响。Western blot检测DHRS2在HCC细胞系Huh-7、HepG2、SK-hep-1及正常肝细胞系LO2中的表达水平,选择DHRS2表达最低的HCC细胞系进行DHRS2过表达质粒转染,分为NC组和oe-DHRS2组。CCK8检测各组细胞增殖能力;平板克隆实验检测各组细胞克隆形成能力;细胞周期实验检测各组细胞周期;Transwell实验检测各组细胞转移能力;Western blot检测各组细胞中TLR4/MyD88信号通路活性。结果:TCGA数据库分析结果显示,DHRS2 mRNA在HCC组织中的表达低于正常肝组织(P<0.05)。Kaplan meier plotter数据库分析结果显示,低表达DHRS2的HCC患者预后较差。Western blot结果显示,DHRS2在HCC细胞系的表达水平均低于正常肝细胞系LO2,选择表达水平最低的Huh-7细胞进行DHRS2过表达质粒转染(P<0.05)。oe-DHRS2组Huh-7细胞增殖、克隆形成和转移能力下降,细胞周期阻滞在G2/M期,oe-DHRS2组Huh-7细胞TLR4/MyD88信号通路活性被抑制(P<0.05)。结论:DHRS2可能通过下调TLR4/MyD88信号通路抑制HCC细胞增殖和转移,可能是治疗HCC的潜在靶点。

西红花酸对RAW264.7巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及机制探讨

目的探讨西红花酸对RAW264.7巨噬细胞株TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及其机制。方法常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,设计合成My D88 siRNA,用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,同时用西红花酸和My D88 siRNA进行干预。RT-PCR法测定RAW264.7巨噬细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1和IFN-β水平,Western blotting法测定NF-κB/p65和p-JNK1/2的水平,ELISA法检测IL-6和TNF-α水平。结果西红花酸可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1 mRNA的表达,下调p-JNK1/2和p65蛋白表达水平,降低IL-6、TNF-α的分泌水平;My D88 siRNA可以阻断西红花酸对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的作用,但西红花酸和My D88 siRNA对LPS刺激IFN-βmRNA表达的阻断作用不明显。结论西红花酸对RAW264.7巨噬细胞的TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用可能通过My D88信号通路实现。