Nav1.7和Nav1.8选择性抑制剂对急性术后疼痛的镇痛效力

目的:评估钠通道Nav1.7及Nav1.8选择性抑制剂对急性炎性痛和术后疼痛的影响。方法:实验一:将健康小鼠(C57BL/6J)采用随机数字表法分为溶媒组(Vehicle)、Nav1.7抑制剂给药组(PF-05089771、GDC-0276、GX-201、Ds-1971a)和Nav1.8抑制剂给药组(VX-150、VX-548),行为学检测机械和热痛基础阈值以及福尔马林诱导的疼痛反应。实验二:构建足底切口损伤术后疼痛模型,将造模小鼠采用随机数字表法分为Vehicle组、Nav1.7抑制剂给药组(PF-05089771、GDC-0276)和Nav1.8抑制剂给药组(VX-150和VX-548),行为学检测切口损伤引起的机械和热痛过敏。另取造模小鼠的同侧L_(3)~L_(5)背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)组织,通过RNA-Seq、q PCR、WB、IF等方法检测Nav1.7和Nav1.8在术后疼痛模型中的表达变化。结果:Nav1.7选择性抑制剂PF-05089771和Nav1.8选择性抑制剂VX-548对基础痛阈、福尔马林所致炎性痛及足底切口损伤所致的痛觉过敏有缓解作用;造模同侧DRG组织Nav1.7和Nav1.8表达水平不变,但Nav1.8阳性大直径DRG神经元比例增加。结论:Nav1.7和Nav1.8选择性抑制剂对急性术后疼痛具有显著镇痛效力,Nav1.8在NF200阳性中大神经元的分布增加可能参与切口损伤所致痛觉敏化的发生。

1-甲基海因对慢性疼痛大鼠钠离子通道蛋白Nav1.8的干预作用

旨在研究1-甲基海因(1-methylhydantoin,MH)对钠离子通道(Nav channels,Navs)1.8的干预作用,为临床科学治疗疼痛提供理论依据,为实现“疼痛最小化”终极目标拓宽途径。选取60只SPF级SD大鼠通过随机分组设计,各组分别使用1-甲基海因(MH组)、利多卡因(L组)、氨溴索(A组)处理,第21和28天使用蛋白免疫印记法检测大鼠L4~L6段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)Nav1.8的蛋白表达,采用全细胞膜片钳技术检测MH作用下的Nav1.8通道峰电流。结果表明,与M组相比,MH能使Nav1.8表达显著下降(P<0.05)。MH对Nav1.8通道峰电流具有一定抑制作用,10和100μmol·L^(-1)MH对Nav1.8的电流抑制率分别为6.34%±3.13%和14.6%±1.52%,具有量效关系。提示MH能够下调慢性疼痛大鼠DRG中Nav1.8的表达,同时抑制Nav1.8电流,进而产生镇痛作用。

益气活血通络方联合针刺对糖尿病神经病理性疼痛大鼠背根神经节Nav1.7和Nav1.8表达的影响

目的 观察益气活血通络方联合“足三里”针刺治疗对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠背根神经节Nav1.7和Nav1.8表达的影响。方法 采用高脂高糖饲养联合单次小剂量腹腔注射链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型,通过检测大鼠的机械痛阈和热缩足反应时间判断DNP模型是否复制成功。将DNP大鼠随机分为模型组、针刺组、中药组、针药结合组。模型组予以生理盐水灌胃,针刺组针刺“足三里”20 min,中药组予以益气活血通络方(9 g/kg)灌胃,针药结合组予以针刺“足三里”联合益气活血通络方灌胃,另设空白组。每日治疗1次,每周治疗5 d,连续4周。治疗结束后取大鼠L_(4)—L_(6)背根神经节,Western blot法检测Nav1.7和Nav1.8蛋白表达水平,qRT-PCR法检测Nav1.7、Nav1.8 mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测大鼠背根神经节中Nav1.7、Nav1.8的荧光表达水平。结果 与模型组比较,针刺组、中药组、针药结合组大鼠机械痛阈显著升高(P<0.05),热缩足反应时间显著延长(P<0.05),背根神经节中Nav1.7、Nav1.8表达水平显著降低(P<0.05);与针刺组、中药组比较,针药结合组大鼠机械痛阈显著升高(P<0.05),热缩足反应时间显著延长(P<0.05),背根神经节中Nav1.7、Nav1.8表达水平显著降低(P<0.05)。结论 益气活血通络方联合针刺治疗DNP的效果优于单一疗法,其作用机制与抑制背根神经节中Nav1.7、Nav1.8表达有关。

TRPV1和NaV1.8在食管高敏感中的作用和机制研究

背景:食管高敏感是胃食管反流病(GERD)患者烧心等症状产生的重要原因。瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)和电压门控钠离子通道1.8(NaV1.8)可能在食管高敏感的调控中发挥重要作用。目的:检测TRPV1、NaV1.8在GERD动物模型食管和迷走神经感觉神经元中的表达,探究其在食管高敏感中的作用。方法:12只雄性豚鼠随机分为对照组和GERD组,后者通过饮用盐酸胃蛋白酶溶液建立GERD模型。通过观察动物体质量变化、食管炎症组织学评分和炎症细胞因子表达验证造模成功与否。通过分析心率变异性(HRV)明确动物是否处于内脏高敏感状态。以免疫荧光法、qRT⁃PCR和蛋白质印迹法检测食管、迷走神经结状神经节和颈静脉神经节中的TRPV1、NaV1.8表达、分布和共表达情况。结果:GERD组食管炎症组织学评分显著高于对照组(0.85±0.43对0.22±0.45),促炎细胞因子表达增高,抗炎细胞因子表达降低,体质量增长缓慢(P均<0.05)。造模前两组HRV指标低频/高频(LF/HF)比值无明显差异(P>0.05),造模后GERD组LF/HF比值显著增高(P<0.05)。GERD组食管黏膜上皮和颈静脉神经节TRPV1、NaV1.8表达和共表达均显著上调(P均<0.05),结状神经节中两者表达无明显变化(P均>0.05)。结论:在食管酸暴露情况下,食管黏膜上皮TRPV1、NaV1.8表达增高,迷走神经颈静脉神经节中两者表达亦显著上调,促进迷走神经通路伤害性信号的传递,最终导致食管高敏感发生。

Nav1.7、Nav1.8和交感芽生在大鼠SNI模型神经病理性疼痛形成过程中的作用

目的 探讨部分神经损伤(spared nerve injury,SNI)致神经病理性疼痛过程中背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内Nav1.7、Nav1.8以及交感神经芽生之间的关系。方法 将实验大鼠随机分为对照组(Control组,n=18)和手术组(SNI组,n=18),于术后第3、7、14、21天测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT),于术后7天和21天取术侧腰段DRG,分别检测Nav1.7、Nav1.8、生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP43)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的mRNA表达及蛋白含量,并且进行荧光染色。结果 与对照组相比,SNI组MWT降低,且呈时间依赖性。SNI术后7天DRG中Nav1.7、Nav1.8、GAP43和TH的mRNA表达和蛋白含量同步增加。免疫荧光半定量发现Nav1.7、Nav1.8、GAP43在SNI术后21天中大直径神经元异常表达增多。TH与Nav1.7、Nav1.8阳性神经元周围形成篮状结构。结论 坐骨神经损伤后DRG内中、大型神经元的交感神经芽生及篮状结构与其Nav1.7、Nav1.8同步增加有关。这一现象可能是神经病理性疼痛异常形成的因素之一。

大鼠骨癌痛模型的制备及电压依赖性钠通道Nav1.8在其背根神经节的表达研究

目的建立大鼠骨癌痛模型并观察电压依赖性钠通道Nav1.8在其背根神经节(DRG)的表达,以探讨Nav1.8在癌症性疼痛中的作用。方法在雌性SD大鼠左胫骨内注射Walker256细胞(103/μl、104/μl、105/μl)后1、3、5、7、10、14天观察机械痛敏阈值和CO2激光热痛敏阈值的变化,与对照组大鼠进行比较,分析癌痛组大鼠出现痛阈降低的时间。于接种细胞后14天取双侧胫骨做病理切片观察肿瘤生长情况。RT-PCR检测癌痛组及对照组大鼠L5～L6DRGNav1.8基因的表达。结果所有接种Walker256细胞的大鼠均可见胫骨内实质性肿瘤的膨胀性生长和严重的骨质重构。各癌痛组大鼠分别于第7～14天出现进行性加重的疼痛行为学改变,其左侧(癌痛侧)DRGNav1.8的表达明显升高(P<0.05),对侧的表达与对照组之间无明显差异。结论胫骨内注射Walker256细胞的大鼠在产生浸润性生长的骨肿瘤同时,可伴进行性的痛觉过敏,是骨转移瘤相关疼痛研究可靠的动物模型。Nav1.8基因在骨癌痛模型大鼠DRG中的表达水平上调,提示该通道可能参与骨癌痛的发生过程。

中药复方益糖康对糖尿病大鼠NaV1.8蛋白及mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方益糖康对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病模型大鼠背根神经节(DRG)中NaV1.8蛋白及mRNA表达的影响。方法:将健康雄性Wistar大鼠40只,体重200-250g,随机分为空白对照组、模型组和益糖康组,其中,模型组和益糖康组采用STZ 55mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,然后分别给予安慰剂和益糖康5mL.次-1.天-1灌胃,6周后,采集大鼠背根神经节(DRG)标本,用免疫组化和RT-PCR方法分别检测其NaV1.8蛋白和mRNA表达水平。结果:模型组和益糖康组大鼠DRG中NaV1.8蛋白表达灰度值分别为102.19±10.62,134.04±6.56,mRNA表达积分吸光度比值分别为0.219±0.031,0.137±0.014。模型组大鼠DRG中NaV1.8蛋白和mRNA表达水平均显著上调,益糖康组较模型组NaV1.8蛋白和mRNA表达水平均显著降低。结论:中药复方益糖康可能对NaV1.8通道有阻断作用,是其改善糖尿病痛性神经病症状的机制之一。

脉冲射频对保留性神经损伤大鼠Nav1.8 mRNA表达的影响

目的:通过观察保留性神经损伤(spared nerve injury,SNI)模型大鼠接受脉冲射频(pulsed Tadiofrequency,PRF)治疗后疼痛行为学和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)电压门控钠离子通道1.8(Nav1.8)m RNA的表达水平,探讨PRF治疗神经病理性疼痛的可能机制。方法:选择SD大鼠32只,随机均分成4组:空白对照组(C组)、模型组(SNI组)、假治疗组(Sham组)和治疗组(PRF组)。于制模前0天,制模后4、6、8、10天,PRF治疗后6、12、18、24、30、36、42天测定四组大鼠机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);在PRF治疗6天后每组各处死2只大鼠,42天后每组处死剩余大鼠,取其腰4、5的背根神经节,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析各组大鼠背根神经节Nav1.8 m RNA的表达情况。结果:SNI术后,SNI组、Sham组和PRF组大鼠的MWT较C组显著降低(P<0.01);PRF治疗后,PRF组大鼠的MWT及大鼠背根神经节Nav1.8 m RNA相对表达量显著高于SNI组和Sham组(P<0.01)。结论:PRF治疗对SNI神经病理性疼痛大鼠具有镇痛作用,Nav1.8可能是PRF发挥镇痛作用的一个关键靶点。

APA微囊化BCCs移植逆转神经性疼痛大鼠背根神经节Nav1.8 mRNA表达下调

目的 观察APA微囊化牛肾上腺嗜铬细胞 (BCCs)移植对坐骨神经慢性挤压伤 (CCI)大鼠背根神经节 (DRG)Nav1 8mRNA表达的影响。方法 SD大鼠分为 4组 ,每组5只 ,即对照组 (C组 ) ,正常大鼠 ;CCI组 ,右侧坐骨神经结扎 ;APA组 ,CCI模型后 7d ,蛛网膜下腔移植 5 0 0～ 6 0 0个APA空囊 ;APA BCCs组 ,CCI模型后 7d蛛网膜下腔移植 5× 10 6个APA微囊化BCCs。测定各组移植前和移植后 7d的触诱发痛阈值 (g)和CO2 激光刺激痛阈值 (ms)。移植后 7d行为学测定后取DRG冰冻切片 ,按照原位杂交法检测各组DRG中Nav1 8mRNA表达的变化。结果 CCI组和APA组大鼠L4和L5DRGNav1 8杂交信号较C组明显降低 (P <0 0 1) ,两组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。APA BCCs组扎侧触诱发痛阈值和CO2 痛阈值高于CCI组和APA组结扎侧 (P <0 0 1) ,同时DRG中Nav1 8杂交信号较CCI组和APA组明显升高 (P <0 0 1) ,于C组差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 APA微囊化BCCs蛛网膜下腔移植可使CCI大鼠DRG中表达量下降的Nav1 8mRNA恢复正常表达 ,APA微囊化BCCs蛛网膜下腔移植的镇痛作用和促进DRG中Nav1

鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节Nav1.8表达的影响

目的探讨鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节(DRG)电压门控Nav1.8的影响。方法将24只SD大鼠,用随机数字表法分为3组,每组8只,腹腔注射乙酸建立急性炎性内脏痛模型,实验中经L3、L4的留置管给药。对大鼠进行行为学评分,灌注取材L5或L6DRG,用免疫荧光染色方法观察Nav1.8表达的变化。结果单纯乙酸组行为学评分高于芬太尼组(P<0.05);与空白对照组相比,单纯乙酸组、芬太尼组Nav1.8表达均增加,而芬太尼组Nav1.8表达程度低于单纯乙酸组(P<0.05)。结论鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠的镇痛效应不仅与阿片受体有关,与Nav1.8也关系密切。

骨癌痛大鼠钠通道Nav1.8的表达与行为学变化

目的观察钠通道Nav1.8在Walker256乳腺癌细胞所致胫骨骨癌痛大鼠背根神经节(DRG)及丘脑中的表达变化,探讨Nav1.8与癌痛的相关性。方法将Wistar大鼠随机分为癌痛组(n=15)和假手术组(n=15)。在癌痛组大鼠胫骨内注入密度为107/m L的Walker256乳腺癌细胞,建立骨癌痛模型;假手术组在大鼠胫骨内注入相同体积的生理盐水。术后8、11、14、17、21 d评估机械性异常性疼痛和热痛觉过敏。造模21d进行影像学检查后,取其DRG及丘脑组织,荧光实时定量RT-PCR观察Nav1.8 mRNA在DRG和丘脑中的表达变化,免疫荧光观察Nav1.8蛋白在DRG中的表达。结果癌痛组大鼠术后各时间点出现了明显的机械性痛觉过敏,机械性缩足阈值与术前和假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);术后癌痛组热刺激缩足反射潜伏期无显著变化,与术前及假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Nav1.8 mRNA在手术侧DRG及手术对侧丘脑中的表达明显上调(P<0.05);手术对侧DRG和同侧丘脑中的Nav1.8 mRNA与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Nav1.8的表达上调与大鼠骨癌痛的发生有一定关系。

康泰胶囊对大鼠DRG神经元上电压门控性钠通道Nav1.8受体的影响

目的观察康泰胶囊对IBS内脏高敏感性大鼠结肠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元Nav1.8通道受体的影响,探讨康泰胶囊治疗IBS的作用机制。方法采用慢性不可预计应激法建立内脏高敏感性IBS大鼠模型,应用腹部回缩反射(AWR)、尿D-木糖排泄实验、焦虑行为测试及血清皮质醇水平对模型内脏敏感程度进行评估,采用实时荧光定量PCR方法检测大鼠DRG神经元上Nav1.8通道受体mRNA表达水平,观察康泰胶囊对内脏高敏感IBS大鼠DRG神经元上Nav1.8通道受体mRNA表达水平的影响。结果康泰胶囊可以明显降低模型大鼠AWR评分(P<0.01),明显升高模型大鼠尿D-木糖排泄率(P<0.05),增加模型大鼠进入开臂次数和开臂滞留时间百分比(P<0.01),显著降低血清皮质醇水平(P<0.01),明显降低大鼠DRG神经元上Nav1.8通道受体mRNA表达水平(P<0.01)。结论康泰胶囊能抑制应激引起的内脏高敏感IBS大鼠DRG神经元上的Nav1.8通道受体表达,从而降低结肠背根神经元兴奋性,是其治疗IBS的作用机制之一。

槲皮素对大鼠DRG神经元Nav1.8电流的作用及机制

研究槲皮素(Que)对大鼠脊髓背根神经节(DRG)神经元Nav1.8通道电流(INav1.8)的作用。在急性分离的大鼠DRG神经元上,用全细胞膜片钳技术,观察Que干预INav1.8的剂量-反应关系以及Que影响的Nav1.8通道电压依赖的激活和失活特性。结果显示Que(10,30,100μmol/L)可浓度依赖地抑制DRG神经元INav1.8峰值,峰值抑制率分别为(15.32±3.43)%,(22.92±8.24)%和(47.29±11.42)%,半数抑制浓度(IC50)为121.38μmol/L,Hill系数为0.76;100μmol/L Que可使DRG神经元的Nav1.8通道激活曲线向去极化方向偏移了0.83 m V,失活曲线向超极化方向偏移了1.86 m V;且与干预前比,半数失活电压(V1/2)为-(40.23±0.25)m V,有显著性差异(P<0.01)。说明Que可浓度依赖和电压依赖地抑制DRG神经元Nav1.8通道活性,进而降低痛觉信息的传递,改善慢性内脏痛。

兔抗鼠钠通道Nav1.8多克隆抗血清的制备

目的制备高效价的兔抗鼠钠通道Nav1.8多克隆抗血清。方法合成鼠Nav1.8钠通道C末端短肽;用该短肽免疫兔获得抗血清;利用硫酸铵盐析法对抗血清进行纯化获得粗提的抗体;琼脂糖凝胶双扩实验测定抗体效价。结果经免疫得到了兔抗鼠Nav1.8多克隆抗血清;免疫组化表明兔抗鼠钠通道Nav1.8多克隆抗血清在三叉神经痛患者患支神经中有表达。结论兔抗鼠钠通道Nav1.8多克隆抗血清可用以代替人类抗Nav1.8多克隆抗血清用于三叉神经痛的检测。

脊髓背角神经元上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的机制

目的观察鞘内注射钠通道抑制剂619C89对脊髓缺血再灌注损伤引起的痛觉过敏大鼠的痛阈、脊髓背角神经元中Nav1.8通道表达的影响。方法 SD大鼠随机分为3组：假手术组（S组）、痛觉过敏组（H组,缺血再灌注前3 d鞘内注射30μL生理盐水）、钠通道抑制剂组（I组,缺血再灌注前3 d鞘内注射619C895μg/30μL）。S组仅暴露主动脉弓而不结扎,其他各组开胸后无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再开放,建立SCIRI引起的痛觉过敏模型。各组手术前均于L_（5-6）鞘内置管并连续注射3 d。术后1、3、5、7、14 d分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;取第4~6节腰段脊髓,采用免疫双荧光法观察背角神经元状态及其Nav1.8的表达,Real time-PCR法检测各组大鼠脊髓组织Nav1.8表达。结果与S组相比,术后各观察点（尤以第7天为著）H组大鼠热痛阈和机械性痛阈降低,损伤后7 d脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达增加（P〈0.05）;I组大鼠热痛阈和机械性痛阈值明显提高（P〈0.05）,脊髓组织中Nav1.8 mRNA的表达降低（P〈0.05）。免疫双荧光染色显示,损伤后7 d,H组大鼠脊髓背角Nav1.8的荧光强度明显增加,且主要表达在NeuN表达阳性的神经元的胞浆中;且与S组相比,H组中NeuN/Nav1.8双阳性的细胞数量明显增多,而I组双阳性的细胞数量减少（P〈0.05）。结论脊髓背角神经元通过上调Nav1.8通道参与缺血再灌注损伤后痛觉过敏的形成。

SiRNA抑制大鼠背根神经节神经元电压依赖型钠通道Nav1.8表达的实验研究

目的应用小片段干扰RNA(SiRNA)转染原代培养背根神经节(DRG)神经元,观察SiRNA干扰DRG神经元基因Nav1.8表达的有效性。方法根据RNA干扰的原理及SiRNA的设计原则,设计2个长度为21bp的以Nav1.8基因为靶点的SiRNA(SiRNAa和SiRNAb),另选择相同长度的无义双链RNA作为阴性对照RNA。T7RNA聚合酶的作用下体外转录合成SiRNA,阳离子脂质体转染试剂将SiRNA导入体外培养DRG神经元,于转染后48h提取RNA,采用RT-PCR和荧光定量PCR检测Nav1.8基因的表达情况。结果在靶向Nav1.8的两个SiRNA序列中,SiRNAa转染神经元后导致Nav1.8基因表达显著降低(48.32±6.84)%,SiRNAb使Nav1.8表达降低(23.32±3.19)%,P均<0.01,阴性对照SiRNA对Nav1.8的表达不产生影响。结论利用体外转录合成的SiRNA成功转染原代培养的DRG神经元,并诱导产生内源性Nav1.8基因的特异性表达抑制。具有较高干扰效应的SiRNA片段可应用于抑制Nav1.8基因表达,进而研究Nav1.8的功能及在疼痛治疗中的作用。

Nav1.8通道在部分神经损伤大鼠背根神经节及外周神经的表达

目的分析Nav1.8通道在坐骨神经部分神经损伤(SNI)大鼠背根神经节(DRG)及外周神经的表达。方法将24只SD大鼠随机分为SNI组及假手术组。SNI组建立SNI模型,假手术组仅暴露坐骨神经及其分支,荧光金逆行标记DRG腓肠神经元胞体。术前和术后第7、14天测定大鼠腓肠神经支配区域机械刺激伤害感受阈值(MWT)。术后第14天,采用免疫荧光染色检测大鼠DRG及外周神经中Nav1.8阳性的神经纤维密度。结果术后7d及14d,SNI组的MWT均低于术前1d的数值及假手术组(均P<0.05),而假手术组各时间点MWT比较差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,SNI组大鼠DRG荧光金阳性区域和荧光金阴性区域、腓肠神经、胫神经、腓总神经及腓肠神经支配皮肤区域中Nav1.8阳性的神经纤维密度均增高,胫神经支配皮肤区域中的密度降低(P<0.05)。结论Nav1.8通道在DRG未受损神经元区域、未受损神经及支配皮肤区域中表达增高,这可能是SNI大鼠神经病理性疼痛发生的重要机制。

Nav1.8在疼痛中的研究进展

Nav1.8是相关神经病理性和炎性疼痛的重要离子通道,对其进行深入、全面的了解具有重要意义。本文从Nav1.8的分子结构、表达、功能、药物开发等方面出发,对Nav1.8的表达部位、调节机制、参与疼痛种类、以及高选择性药物研究情况进行详细介绍。并就Nav1.8在疼痛中的研究现状和趋势发展进行详细综述。

Nav1.8在足底切口痛模型大鼠背根神经节中表达的研究

目的:观察足底切口痛模型大鼠术后行为学改变及背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中Nav1.8表达的动态变化,探讨Nav1.8与术后痛觉敏化的关系。方法:雄性SD大鼠36只随机分为足底切口痛组(n=30)和对照组(n=6),分别于术前、术后2h、1d、2d、3d、5d测定大鼠的机械性痛阈和热痛阈;测痛后取同侧L4-L6节段背根神经节,运用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测大鼠背根神经节中Nav1.8的表达。结果:切口痛组大鼠术后痛阈下降,术后2 h机械性痛阈和热痛阈降至最低(P<0.05),Nav1.8表达量最高(P<0.05);术后1 d热痛阈和机械性痛阈开始恢复,Nav1.8表达也逐渐下降。结论:切口痛术后痛觉敏化与Nav1.8表达的动态变化趋势基本一致,Nav1.8参与急性术后痛觉敏化的形成与维持过程,在急性术后疼痛中发挥重要作用。

敬钊毒素-Ⅲ对Nav1.8通道的抑制作用

敬钊毒素-Ⅲ（Jingzhaotoxin-Ⅲ,JZTX-Ⅲ）是从敬钊缨毛蛛毒液中分离到的一种门控调节型毒素,能选择性抑制钠通道亚型Nav1.5激活,但对其他6种钠通道亚型（Nav1.1~Nav1.4、Nav1.6和Nav1.7）无抑制作用。为了更好地研究钠通道结构与功能之间的关系,采用全细胞膜片钳技术检测了JZTX-Ⅲ对表达在ND7/23细胞上的Nav1.8通道的影响。结果显示,JZTX-Ⅲ抑制Nav1.8电流,并且这种抑制作用具有时间和浓度依赖性,抑制时间常数和IC50值分别为41.15±0.6 s和1.4±0.23μmol/L;1μmol/L JZTX-Ⅲ使Nav1.8通道的电流-电压关系曲线和激活曲线分别向去极化方向漂移10 mV和9 mV,使Nav1.8通道的稳态失活曲线向超极化方向漂移16 mV,明显改变Nav1.8通道的激活和稳态失活动力学。此外,钠通道序列比对结果提示JZTX-Ⅲ可能通过结合Nav1.8通道DIIS3~S4连接环上的Lys（K）残基抑制Nav1.8通道。以上研究结果为进一步探索钠通道结构与功能之间的关系奠定了基础。