microRNA-21在非小细胞肺癌患者体内外周血和癌组织中的表达水平及其通过调节PTEN蛋白参与抑癌的机制

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血清和癌组织中microRNA-21表达水平及其对肺癌细胞的侵袭和增殖影响。方法 32例NSCLC患者为研究组,30例同期肺部良性病变患者为对照组,采用Real-time RCR检测研究组肿瘤组织、癌旁组织及两组血清中microRNA-21的表达水平;此外,对肺癌细胞株A549转染microRNA-21的抑制物(inhibitor)或模拟物(mimics)后,采用transwell及CCK-8法观察microRNA-21对肺癌细胞株的侵袭及增殖的变化,并采用Western印迹检测A549中张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白水平。结果研究组血清及肿瘤组织中microRNA-21的表达水平显著高于对照组及癌旁组织(均P<0.05);A549转染microRNA-21 mimics后细胞的侵袭和增殖能力显著增加(P<0.05),转染microRNA-21 inhibitor后,细胞的侵袭和增殖能力显著降低(P<0.05),而PTEN蛋白转染后,表达水平与上述结果相反。结论 NSCLC患者肿瘤组织和血清中高表达的microRNA-21可能通过抑制PTEN蛋白参与癌细胞侵袭和增殖能力的调节。

microRNA-21、PTEN、RASA1及caspase-3在肾上腺醛固酮瘤中的表达及相关作用机制

目的研究microRNA-21(miR-21)、PTEN、RASA1及caspase-3在肾上腺醛固酮瘤中的表达情况,探究其内在相关性及对疾病的影响机制。方法采用荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测样本中miR-21及PTEN、RASA1、caspase-3的表达量,再用细胞转染建立人肾上腺皮质细胞(HACC)模型,采用Western Blot技术检测细胞模型中caspase-3表达量。结果miR-21在肾上腺醛固酮瘤和瘤旁组织中的表达量分别为0.109±0.050和0.040±0.019,差异有统计学意义(P<0.001);其中瘤组织样本中PTEN阳性表达率为22.91%(P=0.001),瘤旁组织样本中PTEN阳性表达率85.42%(P=0.001),RASA1阳性表达率分别为8.33%和60.41%(P<0.001),caspase-3阳性表达率分别为25.00%和89.58%(P<0.001),均差异有统计学意义。HACC细胞模型显示,当miR-21过表达时,caspase-3蛋白表达下调,细胞表现出过度增殖趋势;miR-21表达抑制时,caspase-3蛋白表达上调,细胞表现为生长抑制。结论肾上腺醛固瘤组织中miR-21高表达可能通过下调PTEN、RASA1及caspase-3,从而抑制细胞凋亡并参与肿瘤进展。

糖通饮靶向microRNA-21调控Smad7、PTEN抑制糖尿病肾病肾纤维化

目的:探讨糖通饮抑制糖尿病肾病肾纤维化的作用机制。方法:60只SD大鼠中随机选取10只作为正常对照组,其余采用高糖高脂饲料喂养联合STZ多次小剂量腹腔注射制备糖尿病肾病(DKD)大鼠模型,将造模成功的DKD大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦(13.5 mg/kg)阳性对照组及糖通饮低(6.21 g/kg)、中(12.42 g/kg)、高(24.84 g/kg)剂量组,每组10只,灌胃给药,1次/d,共8 w。检测各组大鼠FBG、24 h尿mAlb;HE及Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化;Western Blot检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、E-cadherin、FN、Vimentin、α-SMA蛋白表达;RT-PCR检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、FN、Vimentin α-SMA、E-cadherin mRNA及miRNA-21表达。体外实验对高糖状态下HBZY-1细胞进行miRNA-21过表达慢病毒转染并予糖通饮含药血清进行干预,Western Blot法检测细胞Smad7、PTEN、α-SMA蛋白表达,RT-PCR法检测细胞miR-21、Smad7、PTEN、α-SMA mRNA表达。结果:体内实验结果显示,与模型组比较,糖通饮能显著降低DKD大鼠肾组织FN、Vimentin、α-SMA mRNA及蛋白表达,显著升高Smad7、PTEN、E-cadherin mRNA及蛋白表达,显著降低miRNA-21表达及FBG、24h尿mAlb水平(P<0.05),改善DKD大鼠肾组织病理学变化。体外实验结果显示,经miRNA-21过表达慢病毒转染后,高糖状态下HBZY-1细胞中Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低,α-SMA mRNA及蛋白表达显著升高,糖通饮可使HBZY-1细胞中miRNA-21表达显著降低,Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高,α-SMA mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-21是糖通饮防治DKD的靶点之一,糖通饮可通过作用于miRNA-21进而良性调节其靶标Smad7、PTEN的表达,抑制糖尿病肾病肾纤维化。

白藜芦醇苷通过抑制microRNA-21表达抑制肝癌细胞增殖和迁移

原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍在寻找有效的治疗手段.白藜芦醇苷可抑制肺癌细胞以及大肠癌细胞的增殖,但其在肝癌中的作用及具体作用机制并不清楚.本文探讨白藜芦醇苷对大鼠肝癌是否具有预防作用,及其对肝癌细胞系增殖和侵袭的影响.构建大鼠原发性肝癌模型,将其分为正常组、模型组及白藜芦醇苷预防组.病理检测结果显示,与模型组相比,白藜芦醇苷预防组的肝癌发生率明显降低.检测肝组织中microRNA-21表达情况,结果显示,白藜芦醇苷预防组肝中microRNA-21表达明显降低,并且microRNA-21的靶基因PTEN表达上调.在肝癌细胞系SMMC7721和Hep G2中加入白藜芦醇苷,细胞增殖及侵袭能力明显下降,同时伴随microRNA-21表达降低,PTEN表达升高.这提示,白藜芦醇苷可能通过抑制microRNA-21的表达,抑制肝癌的发生,本文结果为预防原发性肝癌提供了新的理论依据,但其临床疗效还需要进一步验证.

miR-21调控PTEN及PDCD4基因治疗化疗性卵巢早衰

目的:探讨miR-21在化疗性卵巢早衰大鼠模型中的治疗潜能及其可能机制。方法:体外构建miR-21慢病毒载体(LV-miR-21)。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、空载组及miR-21组,通过腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立化疗所致卵巢早衰大鼠模型。建模后往miR-21组大鼠双侧卵巢注射LV-miR-21,注射后第1、15、30、45、60天分批处死大鼠。阴道脱落细胞涂片检测大鼠动情周期;化学发光法与免疫放射法测定性激素水平;进行卵巢称重、计数各级卵泡数;TUNEL法测定卵巢组织颗粒细胞凋亡率;qRT-PCR、Western blot法检测miR-21靶基因PTEN、PDCD的mRNA及蛋白水平。结果:体外成功构建miR-21慢病毒载体。实验结束时,miR-21组有64%(16/25)大鼠恢复规律动情周期。注射后第15、30、45、60天,miR-21组的E_2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率均高于模型组和空载组(P=0.000),FSH水平以及PTEN、PDCD4的mRNA、蛋白表达较相应时间点的模型组和空载组显著下降(P=0.000)。注射后第30、45、60天,miR-21组的卵巢重量显著高于模型组和空载组,但仍低于空白对照组;注射后第45、60天,miR-21组各级卵泡数均多于模型组和空载组(P=0.000);结论:miR-21在化疗诱导卵巢早衰大鼠模型中具有治疗潜能,其具体作用机制可能与下调靶基因PTEN、PDCD4有关。

化浊颗粒对2型糖尿病大鼠肝组织微小RNA-21/PTEN/PI3K/AKT信号通路的调控作用

目的观察化浊颗粒对2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肝组织微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)/磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法将40只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、罗格列酮组。除正常对照组外,其余组别采用高糖、高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立T2DM大鼠模型。造模后中药组及罗格列酮组分别以化浊颗粒和罗格列酮灌胃,模型组与正常对照组给予生理盐水灌胃。连续灌胃10周后处死各组大鼠,Q-PCR检测大鼠肝组织中miR-21、PTEN、PI3K、AKT mRNA水平,Western blot检测大鼠肝组织PTEN、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组PTEN蛋白及mRNA表达下调,miR-21、PI3K、AKT mRNA表达水平升高,PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药组及罗格列酮组大鼠肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达上调,miR-21、PI3K、AKT mRNA表达水平降低,PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论T2DM大鼠肝组织中miR-21及其靶基因PTEN调控的PI3K/AKT信号通路表达异常,化浊颗粒通过下调miR-21、上调PTEN表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路、改善胰岛素抵抗,发挥治疗T2DM的作用。

MicroRNA-21对儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的探讨MicroRNA-21(miR-21)及其靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白在儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡中的调控作用。方法选取2013年8月至2015年3月儿童中耳胆脂瘤患者手术标本23例,提取并培养其中耳胆脂瘤角质细胞,分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组以介导miR-21抑制体的慢病毒载体转染中耳胆脂瘤角质细胞,阴性对照组转染空慢病毒载体,空白对照组不进行处理,利用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中miR-21和PTEN基因、PDCD4蛋白的表达,利用EdU和TUNEL法检测各组细胞的增殖和凋亡情况。结果实验组胆脂瘤角质细胞中miR-21表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PTEN基因和PDCD4蛋白的表达明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),EdU阳性细胞显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),TUNEL阳性细胞显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 MiR-21可负性调控其靶基因PTEN和PDCD4的表达,miR-21抑制体可有效抑制儿童胆脂瘤角质细胞的增殖活性,促进细胞的凋亡。

miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤组织中的表达及临床意义

本研究旨在检测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者肿瘤石蜡组织中miR-21的差异性表达与PTEN相关性及其临床意义。采用Real-time-PCR方法检测26例DLBCL患者及10名正常对照的miR-21表达,应用聚合物免疫组化检测系统检测PTEN蛋白水平。结果表明,26例DLBCL石蜡组织中miR-21的表达量为6.586(1.10,38.22),显著高于正常对照[0.791(0.35,2.87)](P<0.05),在26例DLBCL中有6例PTEN蛋白(23%)阳性,而在20例(77%)中为阴性。DLBCL中miR-21表达水平与PTEN蛋白水平呈负相关,其高表达与DLBCL血清LDH水平呈正相关、Ⅲ/Ⅳ期患者miR-21表达水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05),与临床亚型无关(P>0.05)。结论:在DLBCL中miR-21表达升高可能提示肿瘤恶性程度高,预后不良,PTEN可能是miR-21的靶基因。

microRNA-21靶向PDCD4/PTEN对大鼠ADSCs凋亡的抑制作用

该研究探究miR-21对大鼠ADSCs凋亡的影响,为提高ADSCs移植存活率提供依据。该研究建立大鼠ADSCs体外凋亡模型,采用qRT-PCR检测miR-21的表达。在ADSCs中采用Lipofectamine 2000转染miR-21 mimics,qRT-PCR检测miR-21 mimics转染效率。CCK-8、Hoechst 33258检测大鼠ADSCs过表达miR-21对细胞存活率的影响;Western blot检测大鼠ADSCs过表达miR-21后凋亡相关蛋白表达量。结果显示H2O2诱导细胞凋亡后,miR-21在ADSCs中的表达明显下调。大鼠ADSCs转染miR-21 mimics后,ADSCs中miR-21的表达量较对照组显著提高了7.4倍。与miR-21 scramble组相比,ADSCs过表达miR-21后,ADSCs存活率显著升高,促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达量显著降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显升高。与对照组相比,miR-21过表达后,PDCD4和PTEN mRNA无显著变化,但PDCD4和PTEN蛋白表达明显下调。利用PDCD4 siRNA和Phen阻断PDCD4和PTEN的表达后,Caspase-3、Bax的表达水平显著降低,Bcl-2的表达水平显著升高。该研究得出miR-21通过靶向PDCD4/PTEN增强大鼠ADSCs对凋亡的抑制作用。

Targeted suppression of miRNA-21 inhibit K562 cells growth through PTEN-PI3K/AKT signaling pathway

Objective To investigate the K562 cells biological function and related molecular changes in PTEN-PI3K/AKT signaling pathway of leukemia K562 cells by inhibiting the miRNA-21 expression to explore its pathogenesis of leukemia.Methods The chemical synthetic miRNA-

白藜三醇抑制血管平滑肌细胞增殖及其相关机制

目的探讨白藜三醇（RSV）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的调控及其相关机制。方法采用组织块贴壁法体外培养VSMCs，细胞分为3组：空白组（CON组）、FBS组（含20％胎牛血清的培养基）、RSV组。CCK-8法检测血管平滑肌细胞活性以确定RSV最佳作用浓度及时间，qPCR法检测各组细胞内mi-croRNAs的表达水平。为了证实RSV是否通过调控miR-21的表达发挥抗VSMCs增殖作用，除了上述3组，另增加miR-21过表达组（miR-21mimics组）和沉默组（miR-21inhibitor组）：miR-21mimics＋RSV组、miR-21inhibitor组、miR-21mimics组和miR-21转染阴性对照组（NC组），Westernblot检测各组人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达水平，流式细胞术（FCM）检测各组细胞周期明确细胞增殖状况。结果与CON组相比，FBS组miR-21表达明显上调（P〈0．05），RSV组miR-21表达明显下调（P〈0．05）。与CON组相比，FBS组和miR-21mimics组PTEN蛋白表达量下降（P〈0．05），而细胞明显增殖（P〈0．05）；RSV组和miR-21inhibitor组PTEN蛋白表达量升高（P〈0．05），PCNA蛋白表达下降，细胞增殖明显抑制（P〈0．05）。与miR-21mimics＋RSV组相比，miR-21mimics组PTEN蛋白表达量下降，而PCNA蛋白表达增多，细胞明显增殖（P〈0．05），RSV组则相反（P〈0．05）。结论RSV通过抑制miR-21表达而调控其下游靶基因这一途径在大鼠VSMCs中发挥抗增殖作用。