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地黄花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用
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作者 秦艳红 鲁书豪 +5 位作者 文艺 高素霞 李绍建 刘玉霞 王飞 鲁传涛 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期246-253,共8页
基于反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术建立了针对地黄花叶病毒(Rehmannia mosaic virus,ReMV)的快速、特异、灵敏的RT-LAMP检测方法。根据ReMV外壳蛋白(coat protein,... 基于反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术建立了针对地黄花叶病毒(Rehmannia mosaic virus,ReMV)的快速、特异、灵敏的RT-LAMP检测方法。根据ReMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计了3组LAMP引物,通过引物筛选确定最佳引物组合;利用电泳检测及可视化方法(加SYBR GreenⅠ显色剂)进行RT-LAMP温度优化、特异性检测、灵敏度比较。结果表明:本研究建立的RT-LAMP方法最适检测温度为60℃,优化后的LAMP方法能特异性检测ReMV,灵敏度是常规PCR的1000倍,可检测到1.2×10^(-1)拷贝/μL的模板浓度。对60份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的阳性检出率为98.3%,高于常规RT-PCR方法(75%)。本研究建立的RT-LAMP检测技术为ReMV的准确检测提供了快速、高效的方法。 展开更多
关键词 地黄花叶病毒 反转录环介导等温扩增(rt-lamp) 快速检测
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基于CP基因的云南烟草花叶病毒RT-LAMP快速检测体系的构建 被引量:1
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作者 赵正婷 盖晓彤 +3 位作者 张俊蕾 卢灿华 姜宁 刘雅婷 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期154-162,共9页
为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引... 为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引物浓度比等进行逐一优化,建立了云南烟草TMV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为第4组,最适反应温度为60℃,甜菜碱、dNTPs、Mg^(2+)的最佳反应浓度分别为0.6、0.4、2.0 mmol/L,最佳内、外引物浓度比为4∶1,最佳反应时间40 min。优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可肉眼判断结果,特异性高,灵敏度是常规RT-PCR的10倍。RT-LAMP检测体系的建立为云南烟草TMV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 CP基因 rt-lamp 特异性 灵敏度
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Innovative COVID-19 Screening: RT-LAMP Assay for Spike and NSP1 Proteins
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作者 Muhammad Yousaf Amber Khan 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第6期256-265,共10页
Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and... Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and detection.Owing to this situation,RT-LAMP appears to be a novel method for the identification of COVID-19 because of its vast applications,including cost-effectiveness and time-saving.This research highlights the use of RT-LAMP,a more sensitive test than RT-PCR,for the assessment of SARS-CoV-2,the severe acute respiratory illness.To identify the spike(S)and NSP1 protein using RT-LAMP,170 total samples of coronavirus-suspected patients were served in this research.Health certifications and bioethical considerations were taken into consideration.After the sample was extracted from the patient's swabs,RNA was isolated,extracted,and purified.The response was then run on the RT-LAMP at the ideal temperature,and the outcomes could be observed with the unaided eye as they changed from pink to yellow.It is a simple method of determining if the test is positive or negative.For this purpose,both RT-LAMP and RT-PCR tests are used during these procedures.Genes linked with COVID-19 testing including S,nspl,and ORF are suited to coronavirus testing;they have 100%specificity and low sensitivity,but S has more specificity and sensitivity than nspl and ORF,respectively.Out of the 95 positive samples,89(93.68%)samples yielded favorable outcomes utilizing RT-LAMP,while 55 negative samples yielded 100%positive results.The present research demonstrates that RT-LAMP is less sensitive yet more selective for coronavirus detection. 展开更多
关键词 COVID-19 NSP1 SPIKE rt-lamp
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草莓白化伴随病毒RT-LAMP检测方法的建立
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作者 王涌 曾祥国 +4 位作者 肖桂林 温昕 周鑫鑫 邓江丽 韩永超 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期237-245,253,共10页
草莓白化伴随病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)能引起草莓白化病,与其他病毒复合侵染后会加重症状。本研究建立了SPaV的反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-... 草莓白化伴随病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)能引起草莓白化病,与其他病毒复合侵染后会加重症状。本研究建立了SPaV的反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),对反应体系的各条件进行评估优化后,检测了RT-LAMP的特异性和灵敏度,且对田间样品进行了测试。结果表明,优化后的反应体系包含2.5μL 10×Isothermal Amplification Buffer、6 mmol/L Mg^(2+)、1 mmol/L dNTPs、1μmol/L SPaV-FIP和SPaV-BIP,0.1μmol/L SPaV-F3和SPaV-B3,0.3μmol/L SPaV-LB,0.4 mol/L Betaine,0.256 U/μL WarmStart Bst 2.0 DNA Polymerase,0.12 U/μL WarmStart RTx Reverse Transcriptase,1μL RNA,反应条件为61℃恒温孵育40 min。采用优化后的反应体系,在特异性检测中,只有携带了病毒SPaV的样品才能发生阳性扩增。灵敏度测试中,RT-LAMP比RT-PCR灵敏度高10倍。田间应用中,RT-LAMP和RT-PCR检测结果一致。本研究建立的SPaV RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异,可供实验室及生产实践中应用,助力脱毒种苗的鉴定和田间病毒病调查。 展开更多
关键词 草莓白化伴随病毒 反转录环介导等温扩增 可视化 快速检测
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猪呼吸与繁殖综合症病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:21
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作者 鑫婷 侯绍华 +5 位作者 贾红 郭晓宇 丁家波 李延鹏 丁敏 朱鸿飞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期185-191,共7页
【目的】建立一种适用于猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速、灵敏、特异性检测方法,即一步反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)。【方法】设计3对针对PRRSVN基因的8个位点的特异性引物,用优化后的反应体系检测RT-LAMP的特异性、灵敏性并对临... 【目的】建立一种适用于猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速、灵敏、特异性检测方法,即一步反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)。【方法】设计3对针对PRRSVN基因的8个位点的特异性引物,用优化后的反应体系检测RT-LAMP的特异性、灵敏性并对临床样本进行检测。【结果】RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测仅需要70min,肉眼即可观察检测结果,该方法具有良好的特异性,灵敏度是RT-PCR的10000倍,在对50份猪血液样本RNA的检测中,该方法与传统的RT-PCR检测方法具有很好的统一性(κ=0.83)。【结论】RT-LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测PRRSV,并适用基层和现场检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 rt-lamp 检测
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水稻黑条矮缩病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:25
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作者 周彤 杜琳琳 +1 位作者 范永坚 周益军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1285-1292,共8页
【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物... 【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物浓度、MgSO4浓度、反应温度和时间进行优化。将感病水稻总RNA梯度稀释后进行灵敏性检验并与RT-PCR比较分析。选择RBSDV和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)验证该方法的特异性。用本RT-LAMP方法检测田间病株。【结果】RT-LAMP检测方法可排除SRBSDV的干扰而特异地检测植物和飞虱体内的RBSDV,与RT-PCR灵敏性基本一致。检测结果易于判定。【结论】RT-LAMP检测方法适合寄主植物和介体体内RBSDV的快速检测。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 rt-lamp 检测
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二重荧光RT-LAMP方法鉴别检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒 被引量:13
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作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期996-1004,共9页
口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了... 口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了2套特异性引物,在每条内引物的5′端标记荧光基团,通过扩增产物颜色判断检测结果。优化反应条件,建立了可同时检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP方法。结果显示,该方法灵敏性高,每个反应最低能够检测到100个拷贝混合模板;特异性好,能在同一个反应管里检测到两种病毒,对其他牛病原体无扩增;干扰性小,扩增效率不受模板浓度影响。本研究建立的口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒二重荧光RT-LAMP方法具有简便、快速、特异、敏感等优点,可用于FMDV和VSV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 水泡性口炎病毒 二重荧光rt-lamp 检测
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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量:10
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作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) rt-lamp 浊度 特异性 敏感度
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猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量:16
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作者 张兴娟 孙元 +1 位作者 刘大飞 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期864-868,共5页
本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ... 本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果。该方法可检测出不同基因型的CSFV野毒株,其检出极限为2.5TCID50的CSFV,与实时荧光定量RT-PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率达100%,与引物-探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%。该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 野毒株 rt-lamp 鉴别诊断
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鱼类传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:8
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作者 刘淼 徐黎明 +6 位作者 卢彤岩 赵景壮 曹永生 刘红柏 尹家胜 张金凤 冯剑 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1065-1071,共7页
将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV... 将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法。针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green I荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致。该方法实现了检测结果的可视化。特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA。本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 聚合酶蛋白 rt-lamp 可视化检测
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美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立 被引量:12
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作者 曾少灵 孙洁 +9 位作者 秦智锋 阮周曦 林庆燕 花群义 曹琛福 杨俊兴 吕建强 张彩虹 陈兵 陈书琨 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期22-27,共6页
设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好... 设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 rt-lamp 猪蓝耳病 猪蓝耳病病毒高致病性变异株
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辣椒黄脉病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:10
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作者 汤亚飞 何自福 +1 位作者 佘小漫 蓝国兵 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期100-104,共5页
辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription lo... 辣椒黄脉病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)是影响世界辣椒生产的重要病毒,也是广东省辣椒上主要病原病毒之一。本研究根据PeVYV基因组P3蛋白基因序列设计了2对引物,建立了该病毒的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。该方法70min便可完成对PeVYV的检测,无需特殊的设备,灵敏度比普通RT-PCR高10倍,对田间疑似病样的检出结果与RT-PCR的结果一致。本研究建立的PeVYV RT-LAMP检测方法具有快速、灵敏和操作简便等优点,适合于对PeVYV病样快速、准确检测与鉴定。 展开更多
关键词 辣椒黄脉病毒 rt-lamp 快速检测
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禽新型黄病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:12
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作者 李兆龙 陈仕龙 +4 位作者 林锋强 王劭 程晓霞 朱小丽 陈少莺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期659-663,共5页
根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立了一种适用于禽新型黄病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法。根据禽新型黄病毒E蛋白基因序列,在保守区设计了一套针对禽新型黄病毒基因8个区域的6条特异性引物,并对反应条件进行优化。... 根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立了一种适用于禽新型黄病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法。根据禽新型黄病毒E蛋白基因序列,在保守区设计了一套针对禽新型黄病毒基因8个区域的6条特异性引物,并对反应条件进行优化。结果表明该方法对NDRV、GPV、MDRV、NDV、ILTV、FPV均无扩增反应,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化观察;扩增反应只需要在常规水浴锅中进行,45min内可完成反应;该方法对禽新型黄病毒RNA的最小检测限为1pg,灵敏度是一步法RT-PCR方法的100倍。本研究建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行禽新型黄病毒的快速检测。 展开更多
关键词 禽新型黄病毒 rt-lamp 检测方法
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马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化 被引量:7
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作者 高彦萍 张武 +4 位作者 王国祥 席春艳 吴雁斌 梁宏杰 吕和平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期259-264,306,共7页
马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法... 马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 反转录环介导等温扩增(rt-lamp) 检测方法
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小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用 被引量:8
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作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2020年第4期1-7,共7页
旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标... 旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%~100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 蓝舌病病毒 多重荧光rt-lamp 检测
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禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:5
16
作者 石霖 王秀荣 +9 位作者 孙阮洋 李雁冰 程荣华 于学武 曹东 薛树山 赵培 徐晓龙 马勇 郑世民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期383-386,共4页
为建立一种禽流感病毒(AIV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检... 为建立一种禽流感病毒(AIV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。 展开更多
关键词 禽流感 rt-lamp 诊断方法
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猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究 被引量:5
17
作者 杨素 沙才华 +6 位作者 顾海洋 董尚智 廖秀云 徐海聂 薄清如 罗宝正 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期136-141,共6页
应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 rt-lamp 检测方法 研究
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荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测BVDV方法的建立及应用比较 被引量:6
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作者 段进刚 樊新丽 +5 位作者 葛婷 卞赛赛 高窦 代婧 阿热阿依.海依拉提 雷程红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期170-174,179,共6页
为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单... 为建立一种快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的方法,试验采用RT-LAMP和荧光定量RT-PCR两种检测方法,与通用RT-PCR方法在特异性、灵敏性、样品检出率、试验设计复杂程度、扩增反应效率、使用仪器简单程度和检测成本高低七个方面对BVDV进行了综合性比较分析。结果表明:试验建立的RT-LAMP方法与荧光定量RT-PCR、通用RTPCR方法相比具有特异性强、灵敏度高、样品检出率和扩增反应效率高、操作简便快速、低成本等特点。说明RT-LAMP方法对快速、灵敏诊断牛病毒性腹泻病、防止疫情的扩散具有重要意义。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral DIARRHEA virus BVDV) 牛病毒性腹泻病 荧光定量RT-PCR rt-lamp 通用RT-PCR 快速检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:6
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作者 陈希文 汪谦 +6 位作者 尹苗 李莲 罗文涛 杨凤 郭爱伟 周杰珑 王雄清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1630-1636,共7页
为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP),针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝... 为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP),针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR GreenⅠ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。 展开更多
关键词 逆转录环介导等温扩增(rt-lamp) 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 快速检测
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李属坏死环斑病毒(PNRSV)RT-LAMP检测方法的建立 被引量:4
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作者 韩剑 罗明 +2 位作者 殷智婷 周国辉 张祥林 《新疆农业大学学报》 CAS 2014年第4期327-332,共6页
针对李属坏死环斑病毒(PNRSV)外壳蛋白(CP)基因保守序列,设计了1套特异性识别CP基因中6个不同区段的环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化,建立了适用于PNRSV的RT-LAMP检测技术,对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果... 针对李属坏死环斑病毒(PNRSV)外壳蛋白(CP)基因保守序列,设计了1套特异性识别CP基因中6个不同区段的环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化,建立了适用于PNRSV的RT-LAMP检测技术,对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果显示,此方法能够特异性的检测出PNRSV,对马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、黄瓜花叶病毒(CMV)、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)的检测均为阴性,灵敏度高于RT-PCR 10倍。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒(PNRSV) 反转录环介导等温扩增(rt-lamp) CP基因 检测
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