中国人输血产生RhCE同种抗体的风险和预防策略

目的探索一种评估输血产生RhCE同种抗体风险的新途径,并制定选择RhCE相容供者的策略。方法根据兰德施泰纳法则和群体遗传学原理,确定在随机输血中供者与受者RhCE抗原错配的组合,根据中国人Rh血型分布大数据资料,计算错配组合的概率以及找到相容供者的机会。结果分析文献报告的458542例中国人RhD、C、c、E和e抗原分型资料,结果表明在只采用RhD同型输血的策略中,RhCE抗原错配占全部输血的25.16%,其中Rh表型DCCee、DccEE、DCcee和DccEe错配分别占比14.97%、5.01%、2.21%和2.26%,表型Dccee、DCCEE、DCCEe和DCcEE错配合计占比0.71%。Rh表型DCcEe个体可以接受任何Rh表型供者的血液。结论中国人Rh血型以高频率DCe单倍型为特征,Rh表型DCCee个体是随机输血后产生RhCE同种抗体的高风险群体。RhC、c、E和e抗原分型对寻找Rh抗原匹配供者有重要意义。使用常见RhCE表型相容供者的输血,可以预防大约90%的受者产生RhCE同种抗体。

1例RHD-CE(3-7)-D基因重组与RHCE变异型患者的血清学与分子生物学分析

目的 研究分析1例Rh血型弱D、弱cE患者的血清学与分子生物学特征,为该类患者的临床安全输血提供实验依据。方法 采用微柱凝胶卡法对患者红细胞进行ABO、RhDCcEe抗原的鉴定,同时采用试管法进行血型复核,抗人球蛋白卡法筛查不规则抗体;采用PCR-SSP法对RhDCcEe(RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe)基因型进行检测;三代全长测序技术对RHD/RHCE基因序列进行测序分析。结果 微柱凝胶卡法鉴定ABO、RhD、RhCcEe血型抗原的结果为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(1+)、RhC(4+)、Rhc(1+)、RhE(1+)、Rhe(4+)、对照孔(-);试管法ABO、RhD、RhCcEe抗原鉴定该患者表型为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(w+)、RhC(4+)、Rhc(w+)、RhE(w+)、Rhe(4+),对照管(-);抗人球蛋白卡法筛查患者不规则抗体阴性;PCR-SSP法血型基因分型RhDCcEe结果:RhD(+)、RhC(+)、Rhc(+)、RhE(+)、Rhe(+);RHD/RHCE基因结果:RHD单倍体1为外显子1-10全缺失,而单倍体2为外显子RHD-CE基因重组融合,且确认其重组类型为RHD-CE(3-7)-D,起点在外显子2(g.20238-20312之间),终点在外显子8(g49184-50480之间),同时RHCE基因第6外显子存在新碱基点突变RHCE*cE(827C>A)。结论RHD-CE(3-7)-D基因重组融合与RHCE*cE(827C>A)新等位基因突变可能引起D、cE血型抗原弱表达,为临床安全输血提供了重要的实验数据支持。

RhCE抗原基因分型和表型不一致与等位基因变异的相关性研究

目的探讨变异RhCE抗原的分子背景及RHCE基因的遗传学特征与基因多态性。方法采用单克隆抗-C、-c、-E和-e试剂检测10 373例RhD阳性和635例RhD阴性献血者的RhCE表型;选择942例标本PCR-SSP技术做RHCE基因分型,对基因分型与血清学分型不一致标本采用PCR-SSP检测22个主要RHCE变异等位基因,部分RHCE等位基因采用测序技术鉴定。结果共有54例标本(占94.27%)基因分型结果与血清学表型结果不一致,经PCR-SSP检测出22种与弱表达抗原相关的RHCE等位基因变异体,经血清学复检有36例标本RhCE抗原存在弱反应或极弱反应。结论在血清学检测时表达弱反应的RhCcEe抗原标本中检出多种RHCE等位基因类型,变异的等位基因可以影响基因分型预测血型抗原的准确性:RhCE表型和基因型不一致的原因可能由变异的等位基因或未发现的等位基因引起。

RHCE基因和RhCcEe抗原研究进展

RHCE基因编码RhCcEe抗原,与RHD基因一样,RHCE基因也存在许多基因变异体并形成许多RhCcEe抗原变异体,这些变异体可导致血清学抗原鉴定或基因分型出现一些假阳性或假阴。

多血型系统抗体鉴定和交叉配血策略一例抗-f合并抗-M

目的鉴定一例患者血浆中抗体的特异性并制定交叉配血的策略。方法采用盐水介质试管法和抗人球蛋白卡(LISS/Coombs卡)做抗体筛选和抗体鉴定,根据谱细胞、酶处理谱细胞及4℃谱细胞反应格局,确定患者血浆中意外抗体的特异性。结果患者Rh血型为CCDee,MN血型为NN。多种抗体鉴定结果显示,其血浆中存在同种抗体:Rh血型系统抗-f(f:ce复合抗原)合并MNS血型系统抗-M。结论抗-f仅与具有f抗原(R0、r)的红细胞反应,且能被蛋白水解酶增强;IgG类抗-M在4℃环境的反应性更强。经过输血免疫后,患者产生抗-f和抗-M抗体,交叉配血策略为优先选择无M抗原红细胞进行交叉配血,对配血相合的红细胞成分血进行RhCE抗原检测,选择无f抗原红细胞发血。

洛阳献血者Rh抗原和基因多态性研究

目的通过观察随机选择的献血者人群Rh表型频率，从表型推测RHCE基因频率，从而估测Rh单倍型频率。分析RH基因的遗传学特征和抗原多态性，为Rh血型在中国临床输血医学和产科学的应用提供理论依据。方法统计2005年1月～2011年12月356071例捐献全血的献血者中的RHD阴性数据，随机选择10373例RHD阳性献血者检测RhCE血清学表型。利用哈德～伯格遗传平衡定律检测吻合度，用方根法计算Rh基因频率和单倍型频率，妒检验分析不同分类的差异。结果Rh血型基因和单倍型频率为D：0．9329、d：0．0671、DCe：0．6153、DeE：0．2704，Dce：0．0341、DCE：0．0132、dCe：0．0123、dCE：0．0006、dcE：0．0024、dee：0．0518，与中国汉族人在基因平衡条件下的差异无统计学意义（x^2=13．16，P〉0．05）。RHCE基因和单倍型频率在不同RhD表达类型中的分布差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究准确估计了RH等位基因频率，证实了估测的单倍型频率的可靠性，血清学检测中携带RhC和／或RhE抗原的表型与不同表达的RhD类型有关。该结果可以代表中国汉族人的Rh抗原和基因多态性特点。需要制定标准的弱D定型方法和合理的输血策略，以避免抗球蛋白试验对弱D抗原的漏检。

RhD抗原表达与CE抗原的关系研究分析

目的探讨D抗原表达强弱与RhCE抗原的关系。方法采用微量板法对RhD阳性献血者检测Rh表型;抗球蛋白卡式法初筛RhD阴性标本进行确认并分型;吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性标本进行Del表型筛选。结果 D抗原在Rh表型不同时与抗体的凝集强度的平均值有差别,测得的D抗原凝集强度从强到弱依次为DccEE>DCCee>DccEe>DCcEe>DCcee,各表型之间抗原凝集强度存具有统计学意义(F=2.945,P<0.05);不同D表现型的RhCE表型构成是不同的,具体表现为一般D阳性与RhD阴性相比,前者C、E抗原所占比例较大,后者c抗原所占比例较大,弱D和Del型这2种特殊D阳性则表现在,C、c、E抗原比例介于两者之间。结论RHCE基因形成的抗原组合影响RHD基因表达D抗原,Cc,cc抗原组合的标本可能出现D凝集强度减弱或者极弱形成弱D或者Del型,甚至D抗原不表达形成D阴性。

100例RhD初筛阴性孕妇D放散型表型筛查及基因型分析

目的对100例Rh D阴性孕妇进行D放散型（Del）表型筛查及基因型分析,同时进行抗体筛查和鉴定,以指导Del血型孕妇的产前监测。方法 2016年2月—2016年11月期间,收集100例多次妊娠且初筛为Rh D阴性的孕妇外周血标本,采用抗球蛋白凝胶卡法检测Rh D血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验;采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;抗球蛋白凝胶卡法进行不规则抗体筛查及抗体鉴定。采用吸收放散试验进行Del血型表型鉴定,同时采用序列特异性聚合酶链反应（PCR-SSP）进行RHD＊01EL.01（RHD＊1227A）等位基因检测,应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）对Del表型标本RHD基因合子型进行进一步分析;对D变异型标本,进行D抗原表位检测（D-Screen）和RHD基因10个外显子的PCR扩增及直接测序分析。结果 100例标本中检出Del表型27例（27%）,均没有产生抗-D,其中21例Rh CE抗原分型为Ccee（77.8%）,4例为CCee（14.8%）,2例为Cc Ee（7.4%）;25例RHD基因型为RHD＊01EL.01/01N.01（92.6%）,2例RHD＊01EL.01/RHD＊01EL.01（7.4%）。此外还检出D变异型4例（4%）,其中包括2例部分DⅥ3,1例弱D25和1例弱D15,均未产生抗-D。检出Rh D真阴性血型69例,其中产生抗-D 9例（12.7%）,且有2例合并抗-C;产生抗-c E合并抗-Jkb1例。结论携带有RHD＊01EL.01等位基因的＂亚洲型＂Del血型孕妇在Rh D阳性胎儿的免疫刺激下,很可能不会产生抗-D,属于完全性Del（complete Del）血型。

PCR-SSP RHD基因定型方法的初步应用

目的采用序列特异性引物PC R技术(PC R-SSP)进行R H D基因定型。方法采用新近报道的PC R-SSP R H D定型方法检测10例R hD阳性个体,包括2例哈萨克族人、2例蒙古族人、2例藏族人和4例维吾尔族人,以及11例R hD阴性个体(汉族10例、维吾尔族人1例),并通过测序和内含子检测分析1例汉族个体的R H D基因型。结果全部样品的PC R-SSP检测结果与血清学表型相符,1例汉族R hD阴性个体鉴定为D放散型,携带R H D1227A等位基因,1例个体的检测结果提示携带融合R H D基因。测序分析显示该融合基因的第1、2和第10外显子序列与正常R H D基因相应外显子相同,而缺失其余外显子,由于R H D基因和R H C E(e)基因的第2外显子序列相同,笔者采用PC R方法检测R H D基因第2内含子,结果为阴性,说明该个体携带的融合基因为R H D-C E(2-9)-D2等位基因。结论PC R-SSP可用于中国人R h血型D抗原基因定型。

RhCE抗原弱表达的分子基础与RHCE变异等位基因相关性研究

目的探讨血清学检测中弱反应的C，C，E或e抗原的分子生物学基础以及RHCE基因多态性，为Rh抗原在临床输血医学、遗传学和免疫学等方面的应用提供理论依据。方法随机选择2010年1月至2011年12月于本中心行全血捐献的RhD阳性献血者10373例为研究对象。采用U型微板法，单克隆抗-C，-c，-E，和-e试剂检测其RhCE血清学表型，通过血清学试管法复检，并鉴定携带弱C，c，E或e抗原的样本。采用多重PCR-序列特异性引物（SSP）技术检测基因银行公布的22个RHCE等位基因，DNA序列分析技术鉴定特异的RHCE等位基因（本研究遵循的程序符合本中心人体试验委员会所制定的伦理学标准，得到该伦理会批准，并与之签订临床研究知情同意书）。结果10373例全血捐献者中，检测到229例样本携带弱C，c，E或e抗原，其中共检测出22种具有明确单核苷酸突变的等位基因，多态性基因RHces（R114W），RHcE（E1，Ew；M167K），RHCE（M267K），RHCe（L297P），RHce（VS；L245V），RHces（G331C）和RHcE（L303Q）检出频率最高，最可能的变异单倍型为Dce，dce，DCe，DcE。这些RHCE等位基因变异体与C，c，E和e抗原的血清学免疫原性减弱相关，且大多数变异的RHCE等位基因和正常的RHCE等位基因以杂合体形式存在。结论RHCE基因的分子机制与RHD基因具有相似性，在弱表达CcEe抗原的样本中多种RHCE等位基因类型被检出，变异的等位基因可以影响Rh抗原的免疫反应性。阐明RhCE抗原表达异常的分子基础有助于优化血清学检测准确率。