SOX7通过靶向调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤生长情况。通过脂质体法将人结直肠癌细胞系SW480细胞转染后,将细胞分为6组,分别为SOX7 NC组、SOX7 mimic组、SOX7 NC+H_(2)O_(2)组、SOX7 mimic+H_(2)O_(2)组、SOX7 NC+PHPS1组、SOX7 mimic+PHPS1组。通过Western blot实验检测各组SW480细胞SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路相关蛋白的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测SW480细胞的侵袭迁移能力,通过CCK-8检测SW480细胞的增殖。结果小鼠体内实验显示:SOX7 mimic组肿瘤体积明显小于SOX7 NC组(P<0.01),经过PHPS1干预的肿瘤体积明显增大,SOX7 mimic+PHPS1组肿瘤体积和SOX7 NC+PHPS1组的差异无统计学意义。体外实验发现:SOX7 mimic抑制了SW480细胞Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达(P<0.01),促进了p-SHP-2蛋白表达(P<0.01);加入H_(2)O_(2)和SHP-2抑制剂后SOX7 mimic组和SOX7 NC组的Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT的蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义,SHP-2、p-SHP-2蛋白的表达水平降低,但差异无统计学意义;细胞划痕、Transwell侵袭迁移实验和CCK-8实验结果表明SOX7通过氧化应激和SHP-2通路抑制了SW480细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01)。结论SOX7可通过靶向SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌增殖、侵袭和迁移。

SHP-2调控STAT3-PI3K-AKT信号通路对CNE-1细胞生物学行为的影响及其相关机制

目的:探究SHP-2如何调控STAT3-PI3K-AKT信号通路对CNE-1细胞中的活化状态及其对肿瘤生物学行为的影响,并进一步探讨其相关分子机制。方法:采用Western blot检测CNE-1细胞中SHP-2、STAT3、PI3K的表达水平。设CNE-1组为空白组;将空白慢病毒转染至CNE-1细胞后作为NC-SHP-2组;将si-SHP-2病毒转染到CNE-1细胞后作为si-SHP-2组,检测并比较各组SHP-2、STAT3、p-STAT3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的表达水平;平板克隆检测细胞增殖活性;CCK-8检测各组细胞活性;细胞划痕检测各组细胞迁移;Transwell检测各组细胞侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达水平。结果:SHP-2、STAT3、PI3K在CNE-1细胞中均为高表达。与NC-SHP-2组比较,si-SHP-2组细胞中的p-STAT3,p-PI3K和p-AKT表达显著下调(P<0.05),细胞相对数量、增殖速率、迁移和侵袭速率均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与NC-SHP-2组比较,si-SHP-2组细胞Bax和Caspase-3的表达水平升高;Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。结论:SHP-2在CNE-1细胞中高表达,SHP-2与STAT3-PI3K-AKT通路的激活密切相关,沉默CNE-1细胞中SHP-2的表达能有效降低鼻咽癌的发展。

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变导致小鼠髓系异常增殖

目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),并统计外周血Mac-1和Gr-1阳性细胞率及骨髓细胞中红系(Ter119)、髓系(Mac-1、Gr-1)、T(CD3)、B(B220)淋巴细胞系的阳性细胞率,观察骨髓造血干/祖细胞的集落形成(CFU)能力,Western blotting检测外周血白细胞经白细胞介素3(IL-3)和5μg/L,刺激后磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达水平。结果:SHP-2^(D61G/+)突变16周龄组小鼠较WT组外周血白细胞数增多(P<0.05),脾明显增大,同时外周血白细胞的Mac-1和Gr-1阳性细胞率增加(P<0.05),骨髓细胞中Mac-1和Gr-1的阳性细胞率也增多,但红系、淋巴细胞系的变化不明显。同时骨髓中粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)较正常对照组明显增加,白细胞经IL-3刺激后Akt和ERK蛋白磷酸化水平升高。结论:SHP-2D61G突变可能通过MAPK及PI3K的活化而导致小鼠髓系异常增殖。

γ线诱发的白血病小鼠胸腺细胞SHP-2 mRNA变化的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2mRNA在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化情况 ,为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法 实验分为癌变组、未癌变组及对照组 ,应用PCR SSCP、DNA测序、荧光定量PCR法分别检测各组胸腺细胞SHP 2mRNA的突变及含量变化情况。结果 ①PCR SSCP示 9/14例癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的第 70 0～ 10 96bp间可能发生突变 ,但DNA测序结果不支持 ;②癌变组胸腺细胞SHP 2mRNA的含量与对照组及未癌变组比无明显变化。结论 在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中存在SHP 2的翻译异常 ,表现为翻译增强现象。

SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测

目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。

青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、磷酸化SHP-2蛋白表达的影响

目的探讨青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、Src同源区2含域磷酸酶-2(SHP-2)蛋白磷酸化的影响。方法分离培养原代慢性粒细胞白血病细胞,采用不同浓度青蒿琥酯(0、5、10、20μg·mL^(-1))进行干预,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制情况;细胞计数法检测细胞生存情况;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞术(FCM)检测青蒿琥酯对细胞凋亡及胀亡的影响;荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcr/abl融合基因mRNA表达;Western Blot检测P210、SHP-2及磷酸化SHP-2蛋白表达。结果青蒿琥酯可抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,降低细胞存活率和线粒体膜电位水平(P<0.05),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度药物和不同作用时间可导致细胞凋亡率及胀亡率明显升高(P<0.01),同时可降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2和磷酸化SHP-2蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,促进其凋亡和胀亡,以及降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2、磷酸化SHP-2蛋白在原代慢性粒细胞白血病细胞中的表达水平,达到治疗慢性粒细胞白血病(CML)的目的。

幽门螺杆菌对人胃癌细胞SGC-7901中SHP-2及细胞骨架的影响

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)刺激人胃癌细胞SGC-7901后,对细胞内SHP-2表达及细胞骨架的影响.方法:将临床分离的胃癌H pylori菌体裂解,以超声提取物刺激SGC-7901细胞1h,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法测定刺激前后SHP-2表达量的变化;并将PCR产物进行克隆和测序.将不同疾病(胃炎,胃溃疡,胃癌)的菌株H pylori超声提取物刺激SGC-7901细胞10min,采用phalloidin对细胞内骨架进行荧光染色,研究其对细胞骨架的影响.将野生型和突变型RhoA质粒转入细胞后,再以胃癌H pylori超声提取物刺激,进一步观察细胞内骨架的变化.结果:胃癌H pylori菌体超声提取物刺激SGC-7901细胞1h后,细胞内SHP-2表达量没有明显变化.胃炎,胃溃疡,胃癌H pylori菌体超声提取物刺激人胃癌细胞SGC-7901后,与对照组相比,细胞内骨架增多(65.4±0.510,63.37±0.475,64.53±0.522vs20.34±1.376,均P<0.05),但这三种菌株间相比无统计学意义.转染入野生型RhoA质粒的细胞经胃癌H pylori菌体超声提取物刺激后,细胞内骨架较未转染者增多(72.99±1.818vs61.78±1.288,P<0.05),而转染入无活性突变型RhoA质粒的细胞经刺激后,细胞内骨架与未转染者无明显差别.结论:胃癌H pylori超声提取物未能引起细胞内SHP-2mRNA表达量的改变;胃炎,胃溃疡,胃癌H pylori菌体超声提取物能够增加细胞内骨架的形成,其作用与H pylori菌种无关,RhoA活性的增强是其中的一个重要中间环节.

SHP-2重组腺病毒的包装及对心肌细胞的感染

目的采用HEK293细胞包装Ad-GFP-SHP-2和Ad-GFP-SHP-2-E76A并扩增Ad-GFP重组腺病毒并感染乳鼠心肌细胞。方法纯化两种载体;PacⅠ酶切线性化;线性化的载体转染入HEK293细胞进行包装;从病变的HEK293细胞分离重组腺病毒。利用重组的腺病毒感染乳鼠心肌细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果 PacⅠ酶切后,琼脂糖凝胶上显示有4.5 kb的条带;转染线性化的重组腺病毒载体入HEK293细胞中,反复冻融HEK293,其上清中含有重组腺病毒,当感染乳鼠心肌细胞感染复数为100时,感染效率大于90%。结论成功包装重组腺病毒,包装后的腺病毒可高效感染乳鼠心肌细胞。

硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响

目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方法检测硼替佐米处理淋巴瘤细胞株前后SHP-2基因的mRNA表达水平。结果:硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖性。在5-100 nmol/L硼替佐米处理后,Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2 mRNA的表达水平上调。结论:硼替佐米明显抑制Jurkat细胞株和Raji细胞株增殖,诱导其凋亡,上调细胞株SHP-2 mRNA的表达水平,表明SHP-2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡的调控。

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进组织白细胞浸润和器官损伤

目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白I的水平。结果 SHP-2D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白I水平亦显著增高(P<0.01)。结论 SHP-2D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2特异性抑制剂PHPS1通过促进泡沫细胞形成加速apoE-基因敲除小鼠早期动脉粥样硬化进展

目的研究酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src Homology 2 Containing Protein Tyrosine Phosphatase 2,SHP-2)特异性抑制剂苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(phenylhydrazonopyrazolonesulfonate1,PHPS1)对apoE基因敲除小鼠(apoE-/-小鼠)动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响作用。方法1.25%胆固醇高脂饲料饲养apoE-/-小鼠28只4周构建早期AS模型,随机分为对照组和PHPS1组。观察降主动脉斑块大小和细胞成分,评估斑块内信号通路及清道夫受体(scavenger receptor,SR)蛋白及mRNA的含量变化情况。氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)和绿色荧光微球加或不加PHPS1干预骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMDM)细胞16 h,观察BMDM内绿色荧光沉积情况。结果PHPS1组斑块内油红O面积、斑块大小、斑块内巨噬细胞含量比对照组显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。PHPS1组巨噬细胞内部绿色荧光强度比对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。PHPS1组白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)和SR-A1的mRNA表达量比对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。PHPS1组磷酸化细胞外信号调节酶(phosphorylated extracellular-regulated kinases,p-ERK)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白含量比对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论PHPS1主要通过激活细胞外信号调节酶及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路,影响SR的过表达从而增加了巨噬细胞对ox-LDL的吞噬能力最终促进了泡沫细胞的形成、促进AS进展。

抗小鼠SHP-1、SHP-2和SHIP三种蛋白酪氨酸磷酸酶单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备抗小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶的单克隆抗体（mAb），分别以SHP-1、SHP-2和SHIP重组蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，通过B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗相应磷酸酶的mAb。用Western blot检测mAb对重组蛋白和细胞中天然磷酸酶的反应性。共获得12株可稳定分泌抗磷酸酶mAb的杂交瘤细胞株。其中6株可分泌抗SHP—1 mAb（LX～SHPl．1～LX—SHP1．6），3株可分泌抗SHP-2 mAb（LX—SHP2．1～LX—SHP2．3），3株分泌抗SHIP mAb（LX—SHIP1～LX—SHIP3）。LX-SHP1．2～LX—SHP1．6，LX-SHP2．1和LXSHP2．3，以及LX—SHIP2和LX—SHIP3可应用于相应重组蛋白的Western blot检测。LX-SHP1．5，LX—SHP2，3，以及LX—SHIP2在EL-4细胞及原代T细胞相应天然磷酸酶分子的Western blot检测中有较好的实验效果。

白血病相关的激活突变SHP-2对小鼠体内血管新生能力的影响

目的研究激活突变SHP-2对小鼠体内血管新生的影响，以进一步研究其在肿瘤发展过程中的作用。方法利用SHP-2D61G激活突变敲入（knockin）模型及WT（wildtype）小鼠，局部皮下注射含成纤维细胞生长因子（FGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的基质胶）（Matrigel BasementMembraneMatirx），诱导血管新生，用比色法检测基质胶内血红蛋白（HB）的含量代表血管密度，用血细胞计数仪检测相应小鼠外周血HB浓度用以标准化基质胶内HB含量；并用免疫病理学方法检测基质）胶（Matrigel）内血管内皮细胞密度（CD31阳性）；用Transwell方法检测小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）迁移能力。结果SHP-2D61G杂合突变的小鼠（SHP-2D61G／＋）体内注射的基质胶栓内HB含量明显高于WT组（P〈0．01），CD31阳性细胞也明显增多，SHP-2D61G突变小鼠MEFs迁移能力明显增强（P〈0．01）。结论SHP-2D61G激活突变可能促进小鼠体内血管新生，这种促进作用可能与细胞迁移能力增强有关。

Gab2在SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变所致小鼠髓系异常增殖中的作用

目的:观察SHP-2信号通路中关键接头蛋白Gab2对SHP-2激活突变引发的小鼠髓系异常增殖是否具有调控作用。方法:用Gab2-/-和SHP-2D61G/+模型小鼠建立4种基因型(SHP-2+/+、Gab2-/-、SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/+/Gab2-/-)小鼠,解剖分析其脾大小,外周血白细胞计数,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系细胞表面标志分子Mac-1和Gr-1并计数Mac-1和Gr-1阳性髓系细胞比例,骨髓造血干/祖细胞集落形成实验检测小鼠造血干细胞或祖细胞对细胞因子反应性,Western blotting和免疫沉淀实验检测骨髓来源肥大细胞经IL-3刺激后磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)的活化水平,以及Gab2与SHP-2蛋白的结合情况。结果:敲除Gab2后显著减轻SHP-2激活突变导致的小鼠髓系增殖表型,主要表现在:脾指数减小,外周血白细胞减少,小鼠髓系来源的Mac-1和Gr-1阳性细胞比例降低。与SHP-2D61G/+小鼠相比,经IL-3刺激后,骨髓细胞的集落形成能力显著降低;骨髓来源肥大细胞内p-ERK和p-Akt表达明显下调,SHP-2D61G/+/Gab2-/-小鼠肥大细胞内无Gab2与SHP-2结合。结论:敲除Gab2可以明显减轻SHP-2D61G/+激活突变导致的小鼠髓系异常增殖,这种减轻作用可能与SHP-2无法与Gab2结合而导致下游信号途径ERK和Akt活化减弱有关。

SHP-2在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨SHP-2蛋白在结直肠癌中的表达情况及其与病理特征的关系.方法采用免疫组织化学法和Western blot方法检测SHP-2蛋白在人结直肠癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理因素的关系.结果结直肠癌组织中S H P-2阳性表达率为25.6%(43/168),与正常结直肠组织比较,差异有统计学意义(P<0.05).结直肠癌组织中SHP-2的蛋白水平为0.2396±0.0655,与配对正常结直肠组织比较(0.7665±0.1133),差异有统计学意义(P<0.0001).SHP-2蛋白的低表达与分化程度和淋巴结转移有关,与性别、年龄、浸润程度、远处转移、TNM分期无关.结论SHP-2可能在结直肠癌的发生发展过程中起抑制作用,并可能成为潜在的治疗靶点.

结直肠癌组织SHP-2和STAT3蛋白表达及临床意义

目的观察STAT3和SHP-2蛋白在结直肠癌中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学法检测168例结直肠癌及40例癌旁正常组织中STAT3和SHP-2的表达情况,分析其表达与结直肠癌临床病理参数的关系;采用Western-blot方法检测40例结直肠癌组织及其癌旁正常组织中STAT3和SHP-2的表达情况。结果免疫组化结果显示,STAT3阳性表达率在结直肠癌组织明显高于正常大肠组织,而SHP-2阳性表达率在结直肠癌组织明显低于正常大肠组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测方法显示,在结直肠癌组和正常组中,STAT3的蛋白水平分别为0.421 3±0.112 7和0.301 7±0.079 9,SHP-2的蛋白水平分别为0.239 6±0.065 5和0.766 5±0.113 3,且组间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。STAT3蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有关,与性别、年龄、浸润程度无关;SHP-2蛋白的低表达与分化程度和淋巴结转移有关,与性别、年龄、浸润程度、远处转移、TNM分期无关。结直肠癌中,STAT3和SHP-2蛋白表达呈负相关(r=-0.501,P<0.05)结论在结直肠癌组织中,STAT3高表达,SHP-2低表达,两者可能共同参与了肿瘤发生、发展的过程,并可能成为潜在的治疗靶点。

硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响研究

目的观察硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响。方法利用淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞进行传代培养,用1.0、5.0、25.0和100.0 nmol/L不同浓度的硼替佐米进行处理,观察不同时间段细胞增殖抑制率和凋亡率,比较实验组和对照组SHP-2基因表达水平。结果随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞抑制率增加;随着干预时间延长,相同硼替佐米浓度时,Jurkat细胞、Raji细胞抑制率也增加。随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率增加;随着干预时间延长,干预浓度相同时,Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率也增加。对照组的SHP-2表达量小于硼替佐米干预组,且干预时间相同时,随着浓度增加,SHP-2表达量升高;药物浓度相同,随着干预时间延长,SHP-2表达量升高。结论硼替佐米可抑制淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖,促进凋亡并提高SHP-2基因表达量,相关作用与浓度有关。

SHP-2和转化生长因子β在中老年患者宫颈鳞癌组织中的表达

目的观察宫颈癌患者癌组织SHP-2和转化生长因子β的表达及其与宫颈癌分型的关系。方法纳入2009年7月至2012年4月在沈阳医学院奉天医院妇产科住院治疗的120例宫颈鳞癌患者、80例宫颈上皮内肿瘤患者及30例宫颈正常患者,取宫颈组织,免疫组化染色检测宫颈组织中SHP-2和转化生长因子β的表达;实时RT-PCR和Western印迹检测宫颈组织SHP-2 mRNA和蛋白的表达。结果免疫组化染色显示,SHP-2和转化生长因子β主要表达在胞浆,且其表达均在宫颈鳞癌组织中最高,其次是宫颈上皮内肿瘤组织,在正常宫颈仅有少量表达。实时RT-PCR和Western印迹检测结果与免疫组化结果一致。宫颈鳞癌组织SHP-2 mRNA和蛋白的表达明显高于宫颈上皮内肿瘤组织和正常宫颈组织(P<0.05);与正常宫颈组织比较,宫颈上皮内肿瘤组织SHP-2 mRNA和蛋白的表达明显增高(P<0.05)。结论 SHP-2和转化生长因子β共同参与宫颈癌的形成,并与宫颈癌的分型有关。

宫颈病变患者SHP-2与CD4^+T表达意义的研究

目的了解SHP-2与CD4+T在患者血液中的表达情况及关系,探讨宫颈癌发生的免疫机制。方法 45例宫颈癌患者,32例CIN患者,14例正常宫颈患者。Westernblot方法检测人外周血淋巴细胞中SHP-2蛋白的表达,流式细胞仪检测人外周血CD4+T的表达。结果血液中SHP-2的表达在宫颈癌组明显高于CIN组与正常宫颈组,差异有统计学意义。血液中CD4+T的表达在宫颈癌组明显低于CIN组与正常宫颈组,差异有统计学意义。结论宫颈癌组SHP-2高表达,CD4+T低表达。SHP-2负调控T细胞的激活,使宫颈癌发生成为可能。

SHP-2抑制对单核细胞生物学活性的影响

目的本研究拟在细胞水平探讨SHP-2参与免疫调节机制的机理,证实了SHP-2与宫颈癌发生的免疫机制有关。方法 SiHa细胞分别与THP-1细胞、SHP-2封闭肽预处理的THP-1细胞进行共培养;ELISA法检测不同处理因素的THP-1细胞培养上清中IL-6的浓度;MTT法检测不同处理因素THP-1细胞对SiHa细胞杀伤作用。结果 MTT检测结果:THP-1细胞组OD值明显高于封闭肽组,两组间差异有统计学意义(q=4.448,p<0.05)。ELISA法检测IL-6的结果:仅培养THP-1细胞的培养上清中IL-6的浓度明显低于给予封闭肽的THP-1细胞培养上清中IL-6的浓度,两组间差异有统计学意义(t=3.533,P<0.05)。结论抑制THP-1细胞中SHP-2的表达后,THP-1细胞分泌的IL-6明显增多,导致它对SiHa细胞的杀伤作用明显增强。SHP-2在宫颈癌的发生中起着重要作用。