金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

加味补阳还五汤对术后腹腔粘连TGF-β1/Smad3通路和腹膜间皮细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨加味补阳还五汤对术后腹腔粘连转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad3通路和腹膜间皮细胞的上皮-间充质转化的影响。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组、加味补阳还五汤组。模型组、透明质酸钠组及加味补阳还五汤组进行术后腹腔粘连模型造模,透明质酸钠为阳性对照组,在手术造模后,一次性腹腔喷洒1%的透明质酸钠凝胶,0.5mL/kg。加味补阳还五汤组术后第2天开始灌胃,灌胃剂量为19.5g/(kg·d)。分别于术后7、14、28d分批将动物处死,每次每组处死9只大鼠。在损伤部位取材:应用免疫组织化学法观察粘连部位的纤维化通路相关蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表达情况;以及其下游胶原沉积相关蛋白Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,Col-Ⅲ)的表达情况和上皮-间充质转化(Epithelialmesenchy-maltransition,EMT)相关的蛋白E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smoothmuscleactin,α-SMA)的表达情况。结果①不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,TGF-β1/Smad3纤维化通路相关蛋白表达情况:与正常组比较,模型组TGF-β1蛋白表达增多(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组TGF-β1蛋白表达减少(均为P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad3蛋白表达增多(均为P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad3蛋白表达减少(P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad7蛋白表达减少(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad7蛋白表达增多(均为P<0.05)。②胶原沉积情况:术后7、14、28d3个时间节点,Col-Ⅰ蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组Col-Ⅰ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅰ蛋白表达减少(均P<0.01)。与正常组比较,模型组Col-Ⅲ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅲ蛋白表达减少(均P<0.01)。③EMT相关指标表达情况:不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,E-Cadherin蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组E-Cadherin蛋白表达减少(均P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组E-Cadherin蛋白表达增多(均P<0.05)。与正常组比较,模型组α-SMA蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组α-SMA蛋白表达减少(均P<0.05)。结论加味补阳还五汤防治术后腹腔的机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad3通路相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白、促进Smad7蛋白的表达抑制纤维化;促进E-Cadherin蛋白、减少α-SMA蛋白表达,减轻腹膜间皮细胞的EMT,抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表达减少细胞外基质的沉积,从而减轻腹膜粘连。

HDAC3抑制剂RGFP966通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体活化和EMT缓解子宫内膜纤维化

目的探讨HDAC3抑制剂RGFP966缓解子宫内膜纤维化的分子机制。方法将18只6~8周雌性SD大鼠随机分为3组,Control组、IUA模型组(即宫内粘连大鼠模型组)、RGFP966治疗组(IUA模型组给予HDAC3抑制剂RGFP966治疗),每组6只。建立IUA大鼠模型。ELISA测定大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平。qPCR法测定大鼠子宫内膜组织上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平。蛋白质印迹法测定大鼠子宫内膜组织TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1、STAT-1、AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β、IL-1β的表达水平。结果与Control组相比,IUA模型组大鼠子宫角壁变薄,血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05);E-cadherin mRNA相对表达水平降低,N-cadherin、α-SMA、Vimentin mRNA相对表达水平升高(P<0.05);TGF-β1、SMAD3、p-STAT-1蛋白质表达水平增强(P<0.05);AIM2、IL-18、cleaved-IL-1β的表达水平增强(P<0.05)。与IUA模型组相比,RGFP966治疗组部分逆转(P<0.05)了上述指标。STAT-1和IL-1β的表达水平在上述3个分组中无明显差异(P>0.05)。结论HDAC3的抑制剂RGFP966可通过下调TGF-β1/SMAD3/STAT-1信号通路抑制AIM2炎症小体和EMT,缓解子宫内膜纤维化。

益气解毒方通过TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究益气解毒方对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并从转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD3信号通路探讨其对增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法(1)将鼻咽癌细胞分为4组:溶剂对照组、益气解毒方0.5 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)2μg·mL^(-1)组,采用实时无标记细胞功能分析仪(real time cellular analysis technology,RTCA)监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(2)将鼻咽癌细胞分为5组:溶剂对照组、TGF-β110 ng·mL^(-1)组、TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、LY320088210μmol·L-1组,采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(3)随机将裸鼠分为模型组、益气解毒方组和5-Fu组。皮下部位注射细胞悬液制备鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,基本成瘤后,5-Fu组每2 d腹腔注射1次,其余组每天灌胃给药1次,连续3周。每隔3 d测量瘤体体积1次;Western Blot法检测各组组织中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与溶剂对照组比较,益气解毒方(0.5、1.0 mg·mL^(-1))组的细胞增殖曲线均下降,细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05,P<0.01),且E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.01),β-catenin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,益气解毒方组的鼻咽癌移植瘤体积明显减小(P<0.05),且益气解毒方组移植瘤组织中的β-catenin和N-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin蛋白表达明显上调(P<0.01)。加入TGF-β1信号通路激活剂和抑制剂后,与益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组比较,TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组的TGF-β1、SMAD3、β-catenin和N-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),且细胞增殖、迁移和侵袭的能力明显增强(P<0.01)。结论益气解毒方能够通过调控TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

白当归素通过调节TGF-β1/Smad3通路改善特发性肺纤维化的作用机制研究

为了研究白当归素(byakangelicin,BYAK)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的成纤维细胞激活和博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF),并初步探讨其作用机制.在细胞实验中,通过TGF-β1诱导肺成纤维细胞激活模型;在动物实验中,通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)和羟脯氨酸含量检测评价肺纤维化程度;免疫印迹技术(western blot,WB)检测肺纤维化相关蛋白α-SMA(alpha-smooth muscle actin)、细胞外基质生成蛋白CoL1A1(collagen type I)、Smad3、p-Smad3的表达.结果表明:与正常组相比,TGF-β1组α-SMA蛋白升高,CoL1A1显著发生上调,博来霉素诱导的小鼠肺组织结构遭到破坏;与模型组相比,白当归素可以剂量依赖地抑制TGF-β1诱导的α-SMA和CoL1A1的蛋白表达,同时显著改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程;进一步研究发现,白当归素通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,明显改善了博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程.白当归素可能是通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路抑制成纤维细胞活化和减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的生成,从而对特发性肺纤维化的预防和治疗具有潜在作用.

华山参通过TGF-β1/Smad3通路对体外纤维化的调节作用

[目的]研究华山参对重组小鼠转化生长因子β1以及香烟提取物(CSE)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)和人源支气管上皮细胞(BEAS-2B)的影响及相关机制。[方法]噻唑蓝(MTT)法筛选华山参生物碱、非生物碱、总提取物对NIH-3T3细胞的安全浓度;重组小鼠转化生长因子β1诱导NIH-3T3细胞24 h,进行天狼猩红染色,并计算相对胶原沉积率;MTT法分别筛选7种华山参生物碱单体对BEAS-2B细胞的安全浓度;CSE处理BEAS-2B细胞24 h后,进行β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测TGF-β1、Smad3、NLRP3蛋白的表达水平。[结果]华山参生物碱、非生物碱、总提取物均能抑制重组小鼠转化生长因子β1诱导的NIH-3T3细胞发生胶原沉积(P均<0.05);东莨菪碱和去水阿托品可以显著抑制CSE诱导的BEAS-2B细胞发生衰老(P均<0.05),并且能够显著抑制TGF-β1、Smad3、NLRP3蛋白的表达(P均<0.05)。[结论]华山参可能通过抑制TGF-β1/Smad3通路来调节体外肺纤维化的进程。

硫辛酸联合踝泵运动治疗糖尿病足的疗效及TGF-β1/Smad3信号通路的调控作用

近年来,糖尿病患病人数呈现快速增加的趋势。糖尿病足是糖尿病患者的严重并发症之一,严重影响患者的生存质量[1]。研究显示,国内糖尿病足发病率呈逐年上升趋势,糖尿病门诊中糖尿病足占3.67%,而截肢率已高于1%[2]。硫辛酸是糖尿病临床治疗的一线用药。

血流限制抗阻训练通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路减轻2型糖尿病大鼠肾纤维化

目的:探究血流限制抗阻训练对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾纤维化的影响及其通过抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad家族成员3(Smad3)信号通路减轻肾纤维化的潜在机制。方法:采用高脂饲料和链脲佐菌素(STZ)联合制备大鼠T2DM模型,造模成功后随机分为T2DM对照(CON,n=5)组、低负荷抗阻训练(LRT,n=5)组、高负荷抗阻训练(HRT,n=5)组、血流限制(BFR,n=5)组和血流限制抗阻训练(BFRT,n=5)组,进行为期8周的运动训练。记录各组大鼠肾脏指数、空腹血糖(FBG)、血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;通过HE和Masson染色观察肾脏形态学变化,并计算胶原容积分数(CVF);RT-qPCR检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、α-SMA和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平。结果:对比其他各组,血流限制抗阻训练组大鼠FBG、SCr、BUN和肾脏CVF显著下降(P<0.05),Klotho表达水平显著上升(P<0.05),TGF-β1、p-Smad3、CTGF和α-SMA表达水平显著下降(P<0.05),Smad3表达水平无显著变化(P>0.05)。结论:血流限制抗阻训练可减轻T2DM大鼠肾纤维化程度,其机制可能与上调Klotho表达,阻断TGF-β1/Smad3信号通路,从而抑制细胞外基质的沉积有关。

GNMT通过TGF-β1/Smad3信号通路抑制宫腔粘连纤维化及其机制研究

目的探究甘氨酸N-甲基转移酶(glycine N-methyl transferase,GNMT)对宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)纤维化的影响及其相关机制。方法体内实验:采用36只SPF级健康雌性SD大鼠(周龄为6~8周,体质量180~220 g)。分别构建SD大鼠IUA模型及GNMT过表达大鼠IUA模型,利用RT-qPCR、免疫荧光检测正常子宫与模型组子宫GNMT表达水平;进一步利用RT-qPCR及Western blot检测各组子宫纤维化相关分子mRNA和蛋白水平以及TGF-β1/Smad3信号通路激活情况;HE染色观察各组子宫内膜腺体数量;Masson染色分析各组子宫内膜纤维化程度。体外实验:利用TGF-β1构建人子宫内膜间质细胞(transformed human endometrial stromal cells,THESCs)纤维化表型模型,使用TGF-β1处理稳定转染过表达GNMT慢病毒的THESCs,RT-qPCR及Western blot检测纤维化表型相关分子mRNA和蛋白的表达情况;Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路相关蛋白表达;通过TGF-β1/Smad信号通路激活剂(SRI-011381)激活TGF-β1/Smad3信号通路,Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路及纤维化表型关键分子蛋白表达情况。结果体内实验:与对照组比较,IUA大鼠GNMT mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。过表达GNMT可降低IUA大鼠子宫组织纤维化相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN mRNA及蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1及其下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);HE和Masson染色显示过表达GNMT可增加IUA大鼠子宫内膜腺体数量并减轻纤维化程度(P<0.05)。体外实验:过表达GNMT可降低THESCs纤维化表型相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ和FN的mRNA和蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);TGF-β1/Smad3信号通路激活后,LV-GNMT+SRI-011381组中TGF-β1/Smad3信号通路及下游的纤维化表型相关分子CollagenⅢ、FN的蛋白水平均明显降低。结论过表达GNMT通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制子宫内膜纤维化,进而达到治疗IUA的作用。

镉暴露对肾细胞凋亡、自噬、氧化损伤及TGF-β1/Smad3/miRNAs信号通路的影响

目的探讨镉(Cadmium,Cd)对人胚胎肾细胞293[human embryonic kidney(HEK)293 cell line,HEK293]细胞凋亡、自噬、氧化损伤以及转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-beta 1,TGF-β1)/Smad同源物3(SMAD3)重组蛋白(Recombinant SMAD family member 3,Smad3)/微核糖核酸(microRNAs,miRNAs)信号通路的影响。方法用氯化镉(Cadmium chloride,CdCl2)处理HEK293细胞6、12和24 h(model),将不做任何处理的细胞设为空白组(control)。通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测细胞增殖,通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)双染法检测细胞凋亡,通过水溶性四氮唑-1(Water-soluble tetrazolium salt-1,WST-1)法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力,染色试剂盒检测细胞自噬,蛋白印迹(Western Blot,WB)检测TGF-β1和Smad3蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-21的表达。在此基础上,HEK293细胞分别用TGF-β1/Smad3通路阻断剂SIS3(CdCl2+SIS3组)、miR-空白对照(Negative Control,NC)(CdCl2+miR-NC组)以及miR-21 inhibitor(CdCl2+miR-21 inhibitor组)处理48 h,检测经不同方法处理后Cd暴露HEK293细胞凋亡、自噬、氧化损伤变化,以及TGF-β1/Smad3/miRNAs信号通路相关因子的表达水平。结果同一剂量下CdCl2染毒HEK293细胞(模型组)增长速度呈现时间效应变化,增长速度明显变慢。Cd暴露后,模型组细胞凋亡率(83.09±5.42)%、自噬率(77.16±8.91)%以及TGF-β1、Smad3蛋白表达量均显著高于对照组,模型组细胞中SOD活力显著高于对照组(P<0.05)。阻断TGF-β1/Smad3信号通路后,SIS3组细胞凋亡率(51.32±5.32)%、自噬率(43.52±2.46)%、TGF-β1、Smad3蛋白表达量均较模型组降低,SOD活力较模型组升高(P<0.05)。下调Cd暴露HEK293细胞中miR-21的表达后,与NC组比较,miR-21 inhibitor组细胞凋亡率(46.18±4.95)%、自噬率(40.56±6.42)%、TGF-β1、Smad3蛋白表达量均显著下降(P<0.05),SOD活力相对升高。结论Cd暴露引起肾细胞的氧化损伤、自噬与凋亡,并表现出一定的时间依赖性。环境Cd暴露可引起TGF-β1/Smad3相关miRNA-21的表达升高而导致肾功能损伤,并且相关miRNA-21可能通过TGF-β1/Smad3通路在暴露诱导的肾细胞自噬、凋亡与氧化损伤等过程中发挥一定作用。

β2肾上腺素受体通过TGF-β1/Smad3信号通路调控创面愈合中的纤维增生

目的探讨β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,ADRB2)在创面愈合过程中对纤维增生的调控机制。方法将12只小鼠背部皮肤随机注射非特异性敲减ADRB2基因的腺相关病毒(AAV-ADRB2组,n=6)和对照病毒(AAV-NC组,n=6)21 d后,在背部建立全层皮肤缺损创面愈合模型。记录术后第1、3、5、7天创面愈合率;采用H-E染色、Masson染色和免疫组化染色观察创面组织结构、纤维化程度及α-平滑肌肌动蛋白表达;定量PCR检测ADRB2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA水平;Western印迹法检测胶原纤维1A1、胶原纤维3A1、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果术后第5、7天,AAV-ADRB2组创面愈合率显著下降(P<0.05),伴随表皮增厚、炎症细胞增多、纤维细胞减少、胶原沉积降低;α-SMA水平显著下降(P<0.05);COL1A1/COL3A1比例减少(P<0.05);ADRB2 mRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-1和MMP-8 mRNA水平升高(P<0.01);TGF-β1/Smad3蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论ADRB2敲减通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少创面纤维化反应和结缔组织含量,提高MMP mRNA水平,降低Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例。

化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制

目的:研究化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制。方法:本次前瞻性研究的研究对象为80例脓毒症肺损伤患者,研究时间为2019年3月至2022年12月,将研究对象按随机数字表法分为2组各40例。对照组采用基础治疗,研究组在对照组基础治疗上服用化痰通腑方。连续治疗5 d。比较2组疗效情况、入住重症监护室(ICU)时间、机械通气时间,以及根据1个月随访结果记录28 d病死率,比较2组治疗前后脓毒症症状评分、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))、肺泡动脉氧分压差[Pa(A-a)O_(2)],以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量和Smad3蛋白表达水平。结果:治疗结束后,2组脓毒症症状评分(恶心呕吐评分除外)均低于治疗前(P<0.05),研究组脓毒症症状评分均低于对照组(P<0.05);研究组入住ICU时间和机械通气时间均低于对照组(P<0.05),为期1个月的随访结果显示,2组均无28 d病死病例;研究组治疗总有效率92.50%高于对照组75.00%(P<0.05);治疗结束后,2组PaO_(2)/FiO_(2)均高于治疗前(P<0.05),研究组PaO_(2)/FiO_(2)高于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组Pa(A-a)O2均低于治疗前(P<0.05),研究组Pa(A-a)O_(2)低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论:化痰通腑方治疗脓毒症肺损伤疗效良好,可改善机体炎症水平和提高预后,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路的表达有关。

基于TGF-β1/Smad3通路的仿生物电刺激联合补肾化瘀方治疗宫腔粘连的机制研究

本研究旨在探讨仿生物电刺激联合补肾化瘀方治疗宫腔粘连的机制,特别是基于TGF-β1/Smad3信号通路对子宫内膜纤维化的影响。方法 随机选取120例中、重度宫腔粘连患者,随机分为对照组、电刺激组、中药组、联合治疗组,通过比较治疗前后子宫内膜厚度、子宫动脉血流指数、3U-PDA参数,结合胶原染色和蛋白免疫印迹法检测子宫内膜组织胶原纤维沉积程度及TGF-β1、Smad3蛋白表达量的变化,评估疗效。结果 初步数据显示,经过治疗,患者的子宫内膜组织出现厚度增加,血管指数、血流指数改善,并且TGF-β1、Smad3蛋白表达量有所下降,提示治疗可能通过影响TGF-β1/Smad3通路抑制子宫内膜的纤维化。结论 仿生物电刺激联合补肾化瘀方能够有效治疗中重度宫腔粘连,其机制可能涉及对TGF-β1/Smad3通路的调节,这一发现为宫腔粘连的防治提供了新的策略和理论支持。

青黛对炎症性肠病TGF-β1/Smad3信号通路相关分子表达的临床研究

目的:探讨青黛对炎症性肠病转化生长因子β1/信号传导蛋白3(TGF-β1/Smad 3)信号通路相关分子表达的临床效果。方法:选取2021年1月—2023年1月在景德镇市第二人民医院被确诊为溃疡性结肠炎或克罗恩病的患者共80例,根据随机抽签方式对其进行分组,包括观察组和对照组,两组各40例,对照组采取常规治疗,观察组则在此基础上采取青黛口服治疗,连续治疗2个月。比较两组临床疗效、TGF-β1/Smad 3表达、免疫功能及不良反应。结果:观察组治疗总有效率为90.00%,明显高于对照组的60.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组TGF-β1/Smad 3表达差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组TGF-β1/Smad 3 protein及mRNA表达均高于治疗前,且观察组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组CD3^(+)、CD4^(+)水平均高于治疗前,CD8^(+)水平均低于治疗前,且观察组CD3^(+)、CD4^(+)水平均高于对照组,CD8^(+)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组治疗不良反应总发生率分别为10.00%、20.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:青黛可通过修复炎症性肠病患者TGF-β1/Smad 3信号通路,改善临床疗效,具有较高临床价值。

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞侵袭数明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-590-5p表达,可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭以及抑制细胞凋亡,可能与通过TGF-β1/Smad3通路调控有关。

AACO方调控TGF-β1/Smad3信号通路保护慢性心力衰竭小鼠心肌纤维化的作用机制研究

目的基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨AACO方防治慢性心力衰竭(CHF)心肌纤维化的可能作用机制。方法将40只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、AACO方组和卡维地洛组,每组10只。采用主动脉弓缩窄术建立CHF小鼠模型,分别予相应药物灌胃,假手术组和模型组予等量双蒸水灌胃,连续8周。超声心动图检测小鼠心脏功能;HE染色观察心脏病理变化;Masson染色和苦味酸天狼猩红染色检测心脏组织胶原容积分数(CVF)和纤维化程度;免疫荧光染色检测心脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;RT-qPCR检测心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA表达;Western blot检测心尖组织α-SMA、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)显著减少,左室舒张末期内径(LVIDd)显著增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,心肌间质疏松,心脏组织CVF、纤维化面积比显著增加(P<0.01),心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA及TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、ColⅠ蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,AACO方组小鼠LVEF、FS显著增加,LVIDd显著减少(P<0.01),心肌细胞排列较为规则,心脏组织CVF、纤维化面积比显著减少(P<0.05,P<0.01),心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA及TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、ColⅠ蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论AACO方可显著抑制CHF模型小鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

基于TGF-β1/SMAD3信号通路探讨“易层”贴敷对膝骨关节炎模型大鼠滑膜纤维化的干预机制

目的:观察“易层”贴敷对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠滑膜纤维化的干预作用及其对转化生长因子β1(TGF-β1)/细胞信号转导分子3(SMAD3)信号通路的影响,探索其对KOA的治疗机制。方法:将27只大鼠随机分为空白组、模型组和易层组,每组9只,模型组和易层组大鼠双膝采用前交叉韧带横断术(ACLT)制作KOA模型。造模成功后第14天开始,易层组采用“易层”贴敷疗法,即先后予复方三黄油膏、三色散敷药敷膝关节,每日贴敷8 h,连续贴敷28 d;模型组造模成功后不做干预。于易层组干预完成后,同期处死各组大鼠,取膝关节滑膜组织,备测。取每组3只大鼠的膝关节滑膜组织,固定、包埋、切片,分别行苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色观察纤维化情况。免疫组化法观察每组3只大鼠膝关节滑膜组织TGF-β1、SMAD3、磷酸化-SMAD3(p-SMAD3)等TGF-β1/SMAD3信号通路相关指标表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法和实时荧光定量PCR(q PCR)法分别检测每组3只大鼠膝关节滑膜组织Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、肌动蛋白α(α-SMA)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)、TGF-β1、SMAD3、高迁移率族蛋白1(HMGB1)的相对蛋白和基因表达量。结果:HE染色和天狼星红染色后病理图片显示,与空白组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织纤维化程度和炎性细胞浸润程度明显加重,易层组较模型组滑膜组织纤维化程度、炎性细胞浸润程度减轻。免疫组化法结果显示,与空白组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织TGF-β1、SMAD3、p-SMAD3表达明显增多,阳性着色(褐色)密集;易层组大鼠膝关节滑膜组织上述指标表达明显降低,阳性着色稀疏。Western blot法和q PCR法检测结果显示,模型组大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β1/SMAD3信号通路的关键指标HMGB1、TGF-β1、SMAD3蛋白和基因相对表达明显高于空白组(P<0.05),易层组上述指标的表达则显著低于模型组(P<0.05);模型组大鼠膝关节滑膜组织中促纤维化相关因子TIMP1、Collagen I、α-SMA蛋白和基因相对表达明显高于空白组(P<0.05),易层组上述指标表达显著低于模型组(P<0.05)。结论:“易层”贴敷可能通过抑制TGF-β1/SMAD3信号通路活化从而改善滑膜纤维化,延缓KOA进展。

圣草酚通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的:探讨圣草酚对糖尿病肾病(DN)肾纤维化的影响及其作用机制。方法:采用多次小剂量注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药物组(二甲双胍,0.5 g/kg)及圣草酚低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),另设置对照组,每组12只。各给药组给予相应药物灌胃干预,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续12周。收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白含量;腹主动脉取血,测定空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量;HE染色观察肾脏组织病理学变化;Masson染色观察肾脏组织纤维化程度;qRT-PCR检测肾组织中TGF-β1、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA表达水平;Western blot检测肾脏组织中TGF-β1、p-Smad3、Smad3、α-SMA蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾脏出现明显损伤及纤维化,FBG、BUN、Scr和24 h尿蛋白含量均显著升高(P<0.05),肾脏组织中TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ等mRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad3和α-SMA等蛋白表达水平均显著提高(P<0.05);与模型组相比,圣草酚中、高剂量组和阳性药物组大鼠肾损伤明显改善,肾纤维化程度明显降低,FBG、BUN、Scr和24 h尿蛋白含量均显著降低(P<0.05),肾脏组织中TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad3和α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而圣草酚低剂量组大鼠以上各指标变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:圣草酚可显著改善DN大鼠肾纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

宣肺开闭汤通过抑制TGF-β1/Smad3通路减缓小鼠肺纤维化进展

【目的】探讨宣肺开闭汤对肺纤维化小鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只小鼠随机分为空白组,模型组,宣肺开闭汤低、中、高剂量组及宣肺开闭汤高剂量+转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路激活剂(SRI-011381)组,每组10只。除空白组,其余各组小鼠采用博来霉素诱导构建肺纤维化模型。干预结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理学变化并进行炎症评分,马松(Masson)染色法观察肺组织纤维化改变并进行纤维化评分,免疫组织化学染色法观察肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织中Hyp含量,蛋白印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、Smad3的蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中TGF-β1、Smad3的mRNA表达。【结果】与空白组比较,模型组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);宣肺开闭汤低、中、高剂量组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均低于模型组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与宣肺开闭汤高剂量组比较,宣肺开闭汤高剂量+SRI-011381组小鼠肺泡腔炎症评分、肺纤维化评分、肺组织中α-SMA阳性表达水平、Hyp含量及TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】宣肺开闭汤可减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨lncRNA H19对慢性心力衰竭大鼠的影响

目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad同源物3(Smad3)信号通路探讨长链非编码RNA H19(lncRNA H19)和微小RNA(miRNA)-200a对慢性心力衰竭大鼠心功能及心肌纤维化的影响。方法:选择清洁级成年健康雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为假手术组和模型组,分别12、48只。采用结扎法构建心力衰竭模型大鼠,造模成功后,按随机数字表法分为心力衰竭组、lncRNA H19阴性对照组(阴性对照组)、lncRNA H19过表达组(过表达组)、lncRNA H19过表达+miRNA-200a过表达组(联合过表达组),每组12只。阴性对照组、过表达组和联合过表达组分别于第1、4、7、10、13、16天在大鼠尾部通过静脉注射lncRNA H19阴性对照质粒5 mL/(kg·d)、lncRNA H19质粒5 mL/(kg·d)、lncRNA H19质粒5 mL/(kg·d)和miR⁃NA-200a质粒2 mL/(kg·d);心力衰竭组、假手术组仅注射等剂量生理盐水,1次/d。末次注射2 d后,采用心脏彩色多普勒超声仪检测大鼠心功能指标[左心室心脏射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)];采用Masson染色法检测大鼠心肌纤维化情况,测定胶原容积分数(CVF);采用实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织lncRNA H19、miRNA-200a转录水平;采用Western blot法检测大鼠心肌组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,其余4组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显升高,LVFS、LVEF和lncRNA H19转录水平均明显降低(P<0.05);与心力衰竭组、阴性对照组比较,过表达组和联合过表达组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显降低,LVFS、LVEF和ln⁃cRNA H19转录水平均明显升高(P<0.05);与过表达组比较,联合过表达组LVEDD、LVESD和TGF-β1、Smad3蛋白表达水平及miRNA-200a转录水平均明显升高,LVFS、LVEF均明显降低(P<0.05),lncRNA H19转录水平差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠心肌组织仅有少量胶原分布,组织细胞排列紧密无明显缝隙;与假手术组比较,心力衰竭组大鼠心肌组织出现大量增生的胶原,细胞排列不均匀,CVF明显升高(P<0.05);与心力衰竭组、阴性对照组比较,过表达组大鼠心肌组织胶原增生明显缓解,细胞整齐分布,CVF明显降低(P<0.05);与过表达组比较,联合过表达组大鼠心肌组织仍有大量胶原分布,细胞间隙扩大,CVF明显升高(P<0.05)。结论:lncRNA H19过表达可减轻心肌纤维化和心脏损伤程度,改善心功能,可能与调控TGF-β1/Smad3信号通路,抑制miRNA-200a表达有关。