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Pseudomonas exotoxin antisense RNA selectively kills hepatitis B virus infected cells 被引量:2
1
作者 Peter Hafkemeyer Ulrich Brinkmann +3 位作者 Elizabeth Brinkmann Ira Pastan Hubert E Blum Thomas F Baumert 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第18期2810-2817,共8页
AIM: To present an approach for selectively killing retrovirus-infected cells that combines the toxicity of Pseudomonas exotoxin (PE) and the presence of reverse transcriptase (RT) in infected cells. METHODS: PE antis... AIM: To present an approach for selectively killing retrovirus-infected cells that combines the toxicity of Pseudomonas exotoxin (PE) and the presence of reverse transcriptase (RT) in infected cells. METHODS: PE antisense toxin RNA has palindromic stem loops at its 5' and 3' ends enabling self-primed generation of cDNA in the presence of RT. The RT activity expressed in retrovirus-infected cells converts "antisense-toxin-RNA" into a lethal toxin gene exclusively in these cells. RESULTS: Using cotransfection studies with PE-expressing RNAs and β-gal expressing reporter plasmids, we show that, in HepG2 and HepG2.2.15 hepatoma cells as well as in duck hepatitis B virus (DHBV) infected cells, HBV or DHBV-polymerase reverse transcribe a lethal cDNA copy of an antisense toxin RNA, which is composed of sequences complementary to a PE gene and eukaryotic transcription and translation signals. CONCLUSION: This finding may have important implications as a novel therapeutic strategy aimed at the elimination of HBV infection. 展开更多
关键词 Gene therapy Pseudomonas exotoxin RETROVIRUS Reverse transcription
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Research Advances of Exotoxin Gene and Related Vaccines of Clostridium perfringens 被引量:1
2
作者 Sun Yu Wang Xiaoying +5 位作者 Dong Hao Qu Ping Hu Dongmei Zhao Bolin Shi Hui Song Xiaohui 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第2期108-111,共4页
Clostridium peringens, also called clostridium westergren, mainly causes diseases in ruminants, such as gas gangrene, enterotoxaemia, hemorrhagic enteritis of cattle and sheep. The bacteria are divided into five subty... Clostridium peringens, also called clostridium westergren, mainly causes diseases in ruminants, such as gas gangrene, enterotoxaemia, hemorrhagic enteritis of cattle and sheep. The bacteria are divided into five subtypes including A, B, C, D and E subtype, which can secrete more than 10 kinds of exotoxin,In these toxins, a, β, ε and ζ play a key pathogenic role. At present, the disease is prevented mainly by univalent vaccine, combined vaccine and muhivalent inactivated vaccine. And the genetic engineering subunit vaccine and nucleic acid vaccine has wide develop- ment prospects. In order to provide some reference for comprehensive prevention and deep research of C. pe^ringens, the etiological characteristics of C. perfrin- germ, pathogenic mechanism of exotoxin and research progress of related vaccines were reviewed, and the genetic engineering subunit vaccine and nucleic acid vac- cine development prospects were also discussed in this paper. 展开更多
关键词 Clostridiumperfringens exotoxin Pathogenic mechanism VACCINE
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Streptococcal Pyrogenic Exotoxin Genes SpeA and SpeB in Isolates of Streptococcus pyogenes from Children with Pharyngitis, Gezira State, Sudan
3
作者 Minas Mohamed Balla Adil Mergani +2 位作者 Mohamed Elamin A. M. E. Medani Adam Dawoud Abakar Ameer Mohamed Dafalla 《American Journal of Molecular Biology》 CAS 2022年第4期181-189,共9页
Background: Streptococcus pyogenes (group A streptococcus, GAS) is an important human bacterial pathogen. This organism possesses many virulence factors, Streptococcal pyrogenic exotoxinone of these. Aim: Detection of... Background: Streptococcus pyogenes (group A streptococcus, GAS) is an important human bacterial pathogen. This organism possesses many virulence factors, Streptococcal pyrogenic exotoxinone of these. Aim: Detection of Streptococcal pyrogenic exotoxin SpeA and SpeB in isolated Streptococcus pyogenes. Methods: Tow hundred throat swab samples were collected from children with pharyngitis referred to Pediatric Teaching hospital and ENT hospital Wad medani, Sudan, from January to November 2021. The questionnaire was filled out to collect clinical and demographic data. Throat swabs were collected and processed with the standard microbiological procedure to isolate Streptococcus pyogenes. Antimicrobial susceptibility testing was done on all GAS isolates using the Kirby Bauer disk diffusion method according to clinical laboratory standard institute (CLSI) guidelines. Detection of Spy 1258 gene and Streptococcal pyrogenic exotoxins SpeA and SpeB were done by using Multiplex PCR. Results: Amongst the Tow hundred collected samples fifty-one isolates (25.5%) were identified as S. pyogenes. Antibiotic susceptibility testing showed that all the GAS isolates were sensitive to Azithromycin and Penicillin. Sensitivity to Erythromycin, Gentamicin, Clarithromycin, Amoxicillin and Cephalexin were 88.2%, 86.3%, 45.1%, 41.2%, 13.7%, respectively. SpeA was detected in 17 (33.3%) and SpeB in 48 (94.1%). Conclusion: Streptococcal pyrogenic exotoxin genes SpeA and SpeB were detected in 17 (33.3%) and 48 (94.1%) respectively of Streptococcus pyogenes isolates. 展开更多
关键词 Streptococcus pyogenes Streptococcal Pyrogenic exotoxin Genes SUDAN SpeA SpeB
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儿童复发性A族链球菌性扁桃体炎免疫机制的研究进展 被引量:3
4
作者 施佳 蔡成 《基础医学与临床》 2023年第2期336-340,共5页
A族β溶血性链球菌(GAS)是儿童常见感染病原,其引起的扁桃体炎性反应反复发作,即为复发性A族链球菌性扁桃体炎(GAS-RT)。新近研究认为,GAS-RT并非传统意义上的感染性疾病,而是一种免疫敏感性疾病,经由超抗原(SAgs)和生发中心(GC)的滤泡... A族β溶血性链球菌(GAS)是儿童常见感染病原,其引起的扁桃体炎性反应反复发作,即为复发性A族链球菌性扁桃体炎(GAS-RT)。新近研究认为,GAS-RT并非传统意义上的感染性疾病,而是一种免疫敏感性疾病,经由超抗原(SAgs)和生发中心(GC)的滤泡辅助T细胞(Tfh)相互作用,发挥对GC的B细胞细胞毒作用来逃避免疫应答,该理论为临床提供了新的免疫靶向治疗的思路。 展开更多
关键词 复发性扁桃体炎 免疫机制 链球菌热原外毒素A T滤泡辅助细胞 细菌疗法
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融合PE38的抗CD70纳米抗体免疫毒素的制备及其对肾透明细胞癌786-O细胞的杀伤作用
5
作者 徐新兰 刘畅 +2 位作者 张鑫 胡倩倩 李江伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期665-671,共7页
目的:构建靶向CD70分子的重组免疫毒素,通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白,体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性。方法:通过基因工程手段,将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个... 目的:构建靶向CD70分子的重组免疫毒素,通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白,体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性。方法:通过基因工程手段,将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个连接子与pET21a-PE38基因片段相连,获得重组表达载体pET21a-Nb 2B3-PE38并转入BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、纯化与鉴定。用间接ELISA及FACS法检测Nb 2B3-PE38与CD70分子的结合活性,MTT法检测Nb 2B3-PE38对高表达CD70分子的肾透明细胞癌786-O细胞的体外杀伤活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Nb 2B3-PE38对786-O细胞凋亡的影响。结果:成功构建抗CD70纳米抗体重组免疫毒素Nb 2B3-PE38,纯化获得纯度>90%的重组蛋白,SDS-PAGE及WB检测结果表明目的蛋白正确表达,分子量为56000。纯化后的Nb 2B3-PE38能与重组CD70抗原及786-O细胞表面的CD70分子特异性结合;25μg/mL Nb 2B3-PE38即对786-O细胞产生极显著的杀伤作用(P<0.001),并且促进786-O细胞的细胞凋亡(P<0.01),其杀伤效应强于阳性对照顺铂(P<0.01)。结论:成功制备了特异性靶向CD70分子的免疫毒素Nb 2B3-PE38,其能够有效杀伤786-O细胞并诱导细胞凋亡且效果强于顺铂。 展开更多
关键词 CD70 铜绿假单胞杆菌外毒素 纳米抗体 PE38 重组免疫毒素 肾透明细胞癌 786-O细胞 细胞毒性 靶向治疗
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具杀线虫活性的苏云金杆菌筛选研究 被引量:17
6
作者 罗兰 谢丙炎 +2 位作者 杨宇红 冯兰香 杨之为 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期314-316,共3页
Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates... Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates to B. xylophilus showed the action of exotoxin higher than that of endotoxin. 展开更多
关键词 杀线虫活性 苏云金杆菌 化学药剂防治 植物寄生线虫 筛选 植物线虫 残留农药 真菌病害
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猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究 被引量:12
7
作者 刘建杰 陈焕春 +4 位作者 何启盖 吴斌 李冲 徐晓娟 陈汉阳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期177-180,共4页
利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫 BALB/c小鼠,间隔 2 周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒... 利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫 BALB/c小鼠,间隔 2 周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的ELISA抗体和7型菌的血凝抗体,第2 次免疫 2 周后用 5LD50的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高,用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83.3%和91.7%,从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株,初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。 展开更多
关键词 亚单位 小鼠 免疫后 菌苗 保护力 加强免疫 大肠杆菌表达 猪胸膜肺炎放线杆菌 猪传染性胸膜肺炎 菌株
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假单孢杆菌外毒素基因的克隆及用于裸鼠大肠癌基因治疗 被引量:8
8
作者 曹广文 戚中田 +3 位作者 粟山茂树 潘欣 张晓琴 杜平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期106-109,共4页
目的:建立假单孢杆菌外毒素A(PEA)基因的组织特异性抗大肠癌基因疗法。方法:用PCR法从绿脓杆菌基因组DNA中克隆PEAⅡ+Ⅲ区基因,引入Kozak序列、终止信号和酶切位点,测序。构建PEA基因转录受人癌胚抗原(C... 目的:建立假单孢杆菌外毒素A(PEA)基因的组织特异性抗大肠癌基因疗法。方法:用PCR法从绿脓杆菌基因组DNA中克隆PEAⅡ+Ⅲ区基因,引入Kozak序列、终止信号和酶切位点,测序。构建PEA基因转录受人癌胚抗原(CEA)启动子调控的逆转录病毒载体。共转染法体外研究PEA基因表达对报告基因表达的特异抑制作用。用DNA体内直接转染法于裸鼠体内观察PEA基因的抗人类肿瘤作用。结果:所克隆的PEA序列与已报道序列基本相同。CEA启动子调控的PEA基因可在大肠癌细胞中特异性抑制荧光素酶基因表达,在裸鼠体内对人大肠癌模型的直接转染能特异抑制人大肠肿瘤的生长。结论:PEAⅡ+Ⅲ区基因作为治疗基因。 展开更多
关键词 假单孢杆菌外毒素 大肠肿瘤 基因疗法
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动物绿脓杆菌病研究进展 被引量:57
9
作者 牛钟相 李雅林 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期16-18,共3页
随着养殖业规模化的不断扩大,由绿脓杆菌引起的动物疫病有上升趋势。近年来,有关绿脓杆菌导致的疫病主要有:规模化养狐场母狐的流产、羊群的化脓性肺炎、雏鸡的败血症等,其他动物绿脓杆菌病的报道也日渐增多。该菌给规模化养殖场造成了... 随着养殖业规模化的不断扩大,由绿脓杆菌引起的动物疫病有上升趋势。近年来,有关绿脓杆菌导致的疫病主要有:规模化养狐场母狐的流产、羊群的化脓性肺炎、雏鸡的败血症等,其他动物绿脓杆菌病的报道也日渐增多。该菌给规模化养殖场造成了很大威胁。为了探讨有效控制本病的方法,特对动物绿脓杆菌病的流行病学、病原学、临床症状、病理变化及发病机理、诊断、防制等方面的研究情况进行综述。 展开更多
关键词 动物 绿脓杆菌病 绿脓杆菌 流行病学 临床症状 病理变化 发病机理 诊断 防制
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铜绿假单胞菌外毒素A全长基因的扩增与克隆 被引量:8
10
作者 胡晓梅 胡福泉 +2 位作者 饶贤才 黄建军 金晓琳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期93-95,共3页
目的 从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法 从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切... 目的 从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法 从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论 成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外毒素A全长基因 扩增 克隆
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铜绿假单胞菌外毒素A表达载体的构建及可溶性表达 被引量:5
11
作者 胡晓梅 饶贤才 +2 位作者 黄建军 金晓琳 胡福泉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期156-158,共3页
目的 实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的可溶性表达。方法 用基因重组技术构建pMAL PEA原核分泌型表达载体 ,并在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,然后利用直链淀粉树脂对表达蛋白进行亲和层析纯化。结果 酶切鉴定及测序结果表明pMAL ... 目的 实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的可溶性表达。方法 用基因重组技术构建pMAL PEA原核分泌型表达载体 ,并在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,然后利用直链淀粉树脂对表达蛋白进行亲和层析纯化。结果 酶切鉴定及测序结果表明pMAL P2X载体上成功地插入了PEA全基因。用IPTG诱导目的基因表达 ,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的 2 0 %。表达产物经超声处理后 ,80 %的融合蛋白存在于上清液中 ,说明实现了PEA的可溶性表达。表达的融合蛋白经亲和层析纯化后进行SDS PAGE电泳 ,显示为一条蛋白带 ,分子量约为 112kD。结论 成功地对PEA全基因进行了可溶性表达和纯化 ,获得了稳定表达的工程菌 ,为深入研究PEA的致病机制和制备用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外毒素A 重组质粒 基因表达
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产气荚膜梭菌外毒素基因与相关疫苗的研究进展 被引量:14
12
作者 孙雨 王晓英 +5 位作者 董浩 曲萍 胡冬梅 赵柏林 石慧 宋晓晖 《中国草食动物科学》 CAS 2016年第2期58-62,共5页
产气荚膜梭菌也称魏氏梭菌,是引起气性坏疽、肠毒血症、出血性肠炎等反刍动物疾病的主要病原。该菌能够分泌α、β、ε、ι、γ、η、θ、κ、λ、μ、ν等多种外毒素,其中a、β、ε、ι毒素是主要的致病因子。产气荚膜梭菌引起的疾病... 产气荚膜梭菌也称魏氏梭菌,是引起气性坏疽、肠毒血症、出血性肠炎等反刍动物疾病的主要病原。该菌能够分泌α、β、ε、ι、γ、η、θ、κ、λ、μ、ν等多种外毒素,其中a、β、ε、ι毒素是主要的致病因子。产气荚膜梭菌引起的疾病通常发病急、死亡快,因此,疫苗免疫是预防该病的主要方法。近年来,随着对a、β、ε等毒素功能研究的深入,研究毒素相关的基因工程亚单位疫苗成为研究热点,并且有望弥补传统类毒素疫苗的安全性不高、稳定性差等缺点。文章从产气荚膜梭菌的病原学特点、主要外毒素的致病机制以及毒素相关疫苗的研究进展进行综述,以期为产气荚膜梭菌的综合防控和基因工程亚单位疫苗与核酸疫苗的研发提供一定的参考。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 外毒素 致病机制 疫苗
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嵌合重组caspase-3诱导表达促进肿瘤细胞凋亡 被引量:3
13
作者 贾林涛 张立红 +4 位作者 于翠娟 纪宗玲 曹云新 王成济 杨安钢 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期272-277,共6页
通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞 ,建立了野生型caspase 3(wt casp3) ,大小亚基序列颠倒的重组caspase 3(r casp3) ,和N端融合绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜肽段的嵌合重组caspase 3(cr casp3)的诱导表达细胞系 .蜕皮素诱导后细胞中检测到目的... 通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞 ,建立了野生型caspase 3(wt casp3) ,大小亚基序列颠倒的重组caspase 3(r casp3) ,和N端融合绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜肽段的嵌合重组caspase 3(cr casp3)的诱导表达细胞系 .蜕皮素诱导后细胞中检测到目的基因的表达 ,MTT检测和细胞计数结果表明 ,r casp3和cr casp3诱导表达后有效地导致HeLa细胞死亡 ,通过测定细胞中caspase 3活性 ,以及细胞周期检测、DNA梯状电泳条带检测(DNAladder)、电镜观察等证实r casp3和cr casp3诱导表达后细胞发生了凋亡 ,且二者的促凋亡活性相当 ,而wt casp3诱导表达细胞并未出现上述效应 .结果表明 ,与野生型caspase 3活化需要上游分子的切割不同 ,重组caspase 3具有自发的促凋亡活性 ,而N端PE肽段的融合不影响这种活性 ,因此PE转膜结构域和重组caspase 3有望参与构建能转膜进入细胞内部 。 展开更多
关键词 嵌合重组 CASPASE-3 诱导 肿瘤 细胞凋亡 绿脓杆菌外毒素 转膜肽段
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两种提取铜绿假单胞菌外膜囊泡的方法比较 被引量:6
14
作者 张佳星 沈犁 +3 位作者 华子瑜 刘岚 周薇 姜俊如 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期279-282,共4页
目的对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较。方法分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blo... 目的对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较。方法分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blotting对OMV中所含ETA进行比较;建立OMV感染人肺癌上皮细胞A549模型并检测IL-8表达水平。结果超滤浓缩法提取的OMV中存在明显的细胞碎片、鞭毛等杂质,产量为21.3μg/1010个细菌,密度梯度离心提取的OMV无明显杂质存在,产量为48.7μg/1010个细菌;相比于超滤浓缩法,密度梯度离心法提取的OMV中含有更高浓度的ETA且诱导A549细胞产生更高水平的IL-8。结论 Optiripe密度梯度离心法提取的PA的OMV的产量和纯度和ETA含量以及激活宿主细胞炎性应答的能量均高于超滤浓缩法。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜囊泡 超滤浓缩 密度梯度离心 外毒素A IL-8
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变性高效液相色谱检测乳制品和化妆品中绿脓杆菌的研究 被引量:4
15
作者 曹际娟 郑秋月 +3 位作者 孙哲平 王秋艳 裴轶君 赵昕 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期139-142,共4页
目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法:利用所报道的绿脓杆菌外毒素A(ETA)基因设计引物和探针,并对该方法进行特异性、灵敏度、精密度等方面的考察。结果:用该方法未检测到绿脓杆菌的近源种及其他细菌的... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法:利用所报道的绿脓杆菌外毒素A(ETA)基因设计引物和探针,并对该方法进行特异性、灵敏度、精密度等方面的考察。结果:用该方法未检测到绿脓杆菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,检测灵敏度可达到100CFU/ml。结论:用PCR结合变性高效液相色谱检测绿脓杆菌不仅特异性好、灵敏度高,且快速简便。 展开更多
关键词 DHPLC 绿脓杆菌 外毒素A基因 检测
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蟹源拟态弧菌最佳产毒条件的筛选 被引量:8
16
作者 李玉英 李槿年 余为一 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期468-473,共6页
通过体外试验,探讨了培养条件的改变对蟹源拟态弧菌(HX-4)产毒量的影响。结果表明,培养基种类、氯化钠浓度、初始pH、溶解氧、培养温度和时间的不同均可影响细菌产毒量,HX-4菌株的最佳产毒条件为细菌接种于起始pH为8.0,含0.5%NaCl-BHI... 通过体外试验,探讨了培养条件的改变对蟹源拟态弧菌(HX-4)产毒量的影响。结果表明,培养基种类、氯化钠浓度、初始pH、溶解氧、培养温度和时间的不同均可影响细菌产毒量,HX-4菌株的最佳产毒条件为细菌接种于起始pH为8.0,含0.5%NaCl-BHI培养基,28℃振荡培养36h或静置培养48h。同时,通过动物实验测定了外毒素的致病性,结果显示,外毒素粗提液对小鼠及河蟹均有致病性。粗提液的溶血活性越高,对动物的致死率也越高。具有蛋白酶活性而无溶血素活性的粗提液,对动物只有致病性,而无致死性。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 拟态弧菌 最佳产毒条件 筛选
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苏云金杆菌B24-14及其β-外毒素对植物寄生线虫的作用 被引量:6
17
作者 茆振川 唐文华 +1 位作者 王汝贤 张力群 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期34-37,共4页
分离戈壁土壤样品 ,获得 1株芽孢杆菌菌株B2 4 14 ,经 16SrDNA序列分析鉴定为苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)。用乙醇分级沉淀和紫外扫描方法 ,提取B2 4 14菌株的 β 外毒素。用细胞培养板法检测其对松材线虫 (Bursaphelenchusxy... 分离戈壁土壤样品 ,获得 1株芽孢杆菌菌株B2 4 14 ,经 16SrDNA序列分析鉴定为苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)。用乙醇分级沉淀和紫外扫描方法 ,提取B2 4 14菌株的 β 外毒素。用细胞培养板法检测其对松材线虫 (Bursaphelenchusxylophilus)的毒杀效果 ,结果表明 :在 4mg·mL-1质量浓度下处理 8h ,线虫的杀死率可以达到93 75 % ,致死中质量浓度为 5 74 μg·mL-1;随处理时间延长和外毒素质量浓度的提高 ,毒杀效果也明显增强 ;6种质量浓度的 β 外毒素处理线虫 ,其死亡率与毒素质量浓度的自然对数呈正相关 ,相关系数为 0 981。温室防病试验表明 ,B2 4 14菌株的液体菌剂可以有效地防治根结线虫 (Meloidogynespp .) ,处理 2 1d黄瓜苗根结减退率达到71 6 %~ 84 6 % ,经多次试验其防治效果均与对照呈显著差异。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 β-外毒素 植物寄生性线虫
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绿脓杆菌外毒素A对兔角膜基质细胞的毒性作用 被引量:3
18
作者 郝继龙 王菲 +2 位作者 周鸿雁 赵文霞 谷树严 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期488-490,共3页
目的:探讨绿脓杆菌外毒素A兔对角膜基质细胞的毒性作用。方法:含兔角膜基质细胞(1×105.mL-1)三维胶原凝胶表面添加提纯的不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)后,放入无血清MEM培养液中37℃培养24 h,采用光学显微镜观察... 目的:探讨绿脓杆菌外毒素A兔对角膜基质细胞的毒性作用。方法:含兔角膜基质细胞(1×105.mL-1)三维胶原凝胶表面添加提纯的不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)后,放入无血清MEM培养液中37℃培养24 h,采用光学显微镜观察培养的兔角膜基质细胞形态学变化,采用酶联免疫吸附法检测损伤的兔角膜基质细胞释放的乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)各组兔角膜基质细胞释放的LDH,与不添加绿脓杆菌外毒素A组比较,差异均有显著性(P<0.01)。添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A各组较不添加绿脓杆菌外毒素A组,角膜基质细胞形态发生变化,细胞由长纺锤形变为圆形,细胞伪足减少。结论:绿脓杆菌外毒素A,破坏角膜基质细胞,对兔角膜基质细胞毒性作用有剂量依赖性。 展开更多
关键词 假单胞菌 铜绿 角膜基质细胞 外毒素类 乳酸脱氢酶
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含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化 被引量:5
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作者 刘晓明 郭学军 +3 位作者 马从林 朱平 孟锐奇 李吉平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期38-41,共4页
将表达含绿脓杆菌外毒素(PEA)受体结合区基因的质粒pET-EAB转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达了含PEA受体结合区的重组蛋白(称PE34)。PE34主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶... 将表达含绿脓杆菌外毒素(PEA)受体结合区基因的质粒pET-EAB转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达了含PEA受体结合区的重组蛋白(称PE34)。PE34主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶-脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用2mol/L脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达75%,在8mol/L脲存在条件下,SephacrylS-200凝胶滤过,DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析纯化,获得SDS-PAGE1条带的PE34,纯度达95.8%,得率为24.5%。 展开更多
关键词 绿脓杆菌外毒素A 大肠杆菌 包涵体 纯化
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用小鼠复制仔猪水肿病的模型试验 被引量:7
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作者 陈德坤 王文秀 +1 位作者 孔庆波 雷利辉 《动物医学进展》 CSCD 2003年第4期79-80,共2页
以幼鼠和成年鼠为试验动物 ,分别经腹腔注射细菌或外毒素。试验结果表明 ,注射细菌后能够导致成年鼠死亡的最小细菌数为 2×1 0 10 ,成年鼠注射细菌后 1 2~ 96 h死亡 ,剖检死亡鼠可见皮下、淋巴结、肝、脾和肺脏出血 ,十二指肠和... 以幼鼠和成年鼠为试验动物 ,分别经腹腔注射细菌或外毒素。试验结果表明 ,注射细菌后能够导致成年鼠死亡的最小细菌数为 2×1 0 10 ,成年鼠注射细菌后 1 2~ 96 h死亡 ,剖检死亡鼠可见皮下、淋巴结、肝、脾和肺脏出血 ,十二指肠和胃壁水肿。幼鼠注射细菌后 1 2~ 48h死亡 ,导致幼鼠死亡的最小细菌数为 3× 1 0 9,死亡鼠剖检结果与成年鼠相同 ;注射外毒素后 ,成年鼠出现典型的神经症状 ,最后死亡。致成年鼠死亡的毒素最小剂量为 1 m L,注射外毒素后 1 2~2 8h死亡。剖检死亡鼠可见皮下胶冻样水肿 ,皮下淋巴结出血水肿 ,脏器表面多汁 ,胃肠壁水肿 ,十二指肠和胃底壁尤其严重 ,积聚大量黄色黏稠液体。幼鼠注射外毒素后 4~ 2 8h死亡 ,其神经症状和死亡剖检结果与成年鼠基本相同 ,水肿病变更典型。本研究结果表明 ,细菌外毒素是引起水肿病的关键性因子 。 展开更多
关键词 小鼠 复制 仔猪 水肿病 诊断模型 试验 最小细菌数 神经症状 剂量
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