引进美国小麦种质资源抗病性及品质性状鉴定

为了挖掘新的种质资源,本研究对引自美国的442份小麦材料对白粉病和条锈病的抗病性、蛋白含量以及高分子量麦谷蛋白(HMW-GS)亚基组成进行了鉴定分析。抗病性鉴定结果显示,153份材料抗白粉病,27份抗条锈病,6份兼抗两种病害。蛋白质含量达到GB/T 17892-1999《优质小麦强筋小麦》一等(粗蛋白质含量≥15.0%)的样品有143份。高分子量麦谷蛋白检测发现,供试材料共含18种HMW-GS亚基和100种不同亚基组合类型,其中N,7+9,5+10出现次数最多,优质亚基1、2*、7^(oe)、17+18、5+10的材料分别占总材料数的25.6%、5.2%、27.8%、7.7%和25.6%,含7^(oe),5+10亚基的有36份,含2*,5+10亚基的有1份,含2*,7^(oe)亚基的有7份。综合抗病性及品质分析结果显示,PI 17738等11份材料至少抗1种病害,且蛋白含量≥15.0%,湿面筋含量≥35.0%,同时含有稀有优质亚基。以上11份材料可作为我国优质、抗病小麦培育亲本,为我国小麦抗病和品质遗传改良提供优异基因源。

优质强筋春小麦种质筛选及高分子量谷蛋白序列分析

小麦是重要的口粮作物,加工品质的遗传改良是小麦育种的重要目标之一。为了丰富小麦加工品质育种的基因资源,本研究在收集的种质资源中筛选出农艺性状优良的SG-1、SG-2和SG-3,并对其进行加工品质分析和籽粒储藏蛋白组成分析,并评估它们在育种上的利用价值和方式,使用SDS-PAGE、A-PAGE、高分子量谷蛋白亚基编码基因测序、SDS沉降值分析等技术,对这些小麦品种的籽粒储藏蛋白亚基组成进行分析。研究发现,SG-1携带非优质的高分子量谷蛋白亚基Dx2+Dy12,而SG-2和SG-3携带优质的高分子量谷蛋白亚基Dx5+Dy10。在醇溶蛋白方面,3份资源都检测到了γ-1型醇溶蛋白,但只有SG-3检测到了γ-2型醇溶蛋白。加工品质分析显示,SG-1的加工品质优于天津推广的优质强筋春小麦品种津强6号。高分子量谷蛋白亚基序列分析发现,SG-1和SG-3在By8亚基存在序列变异,表明尽管它们在SDS-PAGE水平上亚基类型一致,但在DNA序列上仍然存在变异。本研究结果初步解释了携带优质亚基的小麦品种在加工品质上表现不佳的原因可能是DNA序列存在差异。同时,研究人员还发现携带非优质亚基但具有优良加工品质的SG-1,说明SG-1可能存在其他能够提升小麦加工品质的机制。本研究拓宽了小麦加工品质育种的基因资源,并为加工品质形成机制的解析提供了新的资源和理论依据。

Separation/enrichment of the low-content high molecular weight natural protein using protein-imprinted polymers with ARPCs

We introduce a new method for separation/enrichment of the low-content cellular protein in high mo-lecular weight on the basis of molecular imprinting. The template protein, bacterial cloned immu-noglobulin binding protein (BiP), was selectively assembled with assistant recognition polymer chains (ARPCs) from their library, which consists of numerous limited length polymer chains with randomly distributed recognition and immobilizing sites. The assemblies of proteins and ARPCs were adsorbed by porous polymeric beads and immobilized by cross-linking polymerization. After the template was removed, the synthesized imprinted polymer was used to adsorb authentic BiP from endoplasmic re-ticulum (ER) extract, and its proportional content was enriched 45 times. It is the first time that the low-content cellular natural protein, whose molecular weight reaches 78 kDa, is enriched by molecular imprinting.

Molecular basis of the high fidelity in protein synthesis

Aminoacyl-tRNA synthetases (aaRSs) are a family of ancient enzymes that are responsible for catalysis of the attachment of amino acids to their cognate tRNAs in the first step

啤酒高分子蛋白检测方法的评估及应用

通过对考马斯亮蓝法检测啤酒高分子蛋白含量的操作方法进行优化,提升其方法的重复性和稳定性,优化后该方法的重复性和稳定性相对标准偏差(RSD)分别为3.68%和3.92%。同时,对该方法检测的高分子蛋白含量与啤酒泡持性进行了相关性分析。结果表明,巴氏杀菌啤酒泡持值与高分子蛋白含量的Pearson相关系数为0.923(P<0.01);纯生啤酒在贮存3 d、1个月、2个月和4个月的泡持值和其高分子蛋白含量的Pearson相关系数分别为0.700(P<0.01)、0.739(P<0.01)、0.899(P<0.01)和0.883(P<0.01)。表明该方法不仅能用于啤酒高分子蛋白含量的检测,还能用于巴氏杀菌啤酒和纯生啤酒泡持性的监控。

高分子蛋白和蛋白酶A对纯生啤酒泡沫稳定性的影响

利用考马斯亮蓝法、荧光底物法分别跟踪检测啤酒酿造和贮存过程中高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化，研究影响纯生啤酒泡沫稳定性的关键因素。结果表明，各发酵罐因发酵阶段工艺参数的不同，导致高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化趋势存在明显差异。发酵阶段高分子蛋白含量缓慢降低，由入罐麦汁时的350～407.6 mg/L降到成品酒时的180.1～243.1 mg/L；蛋白酶A活力在回收酵母前增加，后达到最高值，其范围是18.27～30.13 U/mL，回收酵母后蛋白酶A活力下降，最终在成品酒中的蛋白酶A活力检测值为发酵过程中最高值的19.06%～36.4%。通过对成品纯生啤酒中高分子蛋白含量、蛋白酶A活力的跟踪，分析各自对泡持性的作用发现，高分子蛋白含量与泡持性（r=0.794，P＜0.01）显著正相关；蛋白酶A活力与泡持性及高分子蛋白含量之间没有显著相关性。

大豆高蛋白基因分子标记及其在大豆育种中的应用

选用高蛋白大豆黑农35和高油大豆黑农45作为亲本杂交获得F2分离群体,进行大豆高蛋白基因SSR分子标记。共筛选覆盖大豆全基因组的251对SSR引物,其中40对SSR引物在亲本间具有多态性,用这40对SSR引物分别对F2分离群体进行扩增,用Mapmaker Exp3.0和Mapmaker QTL1.1软件进行作图和定位分析。定位得到高蛋白QTL1个,与satt532连锁,遗传距离为0.2cM,贡献率为32.7%,位于大豆公共遗传图谱的D1a+Q连锁群。利用该引物在不同大豆材料中进行高蛋白材料检测和筛选,在56份高蛋白材料中筛选到47份,检出率达到83.93%。说明引物satt532具有一定的检测通用性,可以利用它筛选高蛋白大豆材料。

猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定(英文)

对猪乳中一高分子量蛋白 (HMWP)进行了分离纯化 ,并对其某些生化性质进行了鉴定。猪乳通过去脂得到脱脂乳 ,再去除酪蛋白得到乳清。对乳清进行硫酸铵分级盐析 ,猪乳中HMWP在 4 0 %饱和度硫酸铵盐析下有最大沉淀。收集 4 0 %饱和度硫酸铵盐析沉淀 ,经过溶解、透析得到HMWP的粗品。通过MonoQ离子交换柱 ,对其粗品进行两次层析提纯 ,得到了HMWP纯品 ,其纯度和得率分别为 97.85 %和 12 .31%。多种植物凝集素的Westernblotting鉴定表明 ,HMWP是一个糖基种类较少的糖蛋白 ,含有Man和GlcNAc。SDS PAGE和凝胶过滤分别测得HMWP的分子量为 114 .8kD和 115 .0kD。通过等电点测定 ,HMWP的pI为 5 .10。HMWP的氨基酸组分分析得知 ,其富含Asp、Glu、Gly和Cys,疏水性氨基酸较低 ,仅占 15 .5 9%摩尔分数。这些结果说明HMWP是一个易溶于水的、酸性的分泌性单体球蛋白。N端氨基酸序列测定结果为Ala Leu Val Gln Ser Gly Leu Asn Leu Val,通过从网络Genbank检索没有发现其同源蛋白的序列 ,说明其可能是一个新蛋白。

猪乳中一组高分子量多态性蛋白质的同源性鉴定

利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法从猪乳中分离纯化高分子量蛋白质B (HMWP-B)。 制备兔抗HMWP-B的多克隆抗体,免疫印迹结果表明,不同带型的HMWP之间存在免疫交叉反应,说明该组蛋白具有同源性,为其多态性假说提供了证据。

牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。

小麦品种百农AK58及其姊妹系的遗传构成分析

百农AK58是目前我国黄淮南部麦区大面积种植的小麦品种。利用表型、高分子量麦谷蛋白亚基、蛋白质含量及覆盖小麦全基因组的657对SSR分子标记分析了百农AK58姊妹系及其亲本的遗传构成,以发现大面积品种的亲本选配规律。百农AK58在小穗数、穗粒数、千粒重和单株穗数上略优于其姊妹系丰收60和百农4330。百农AK58的高分子量谷蛋白亚基组合与亲本郑州8960相同,为(1,7+8,5+10),其姊妹系丰收60和百农4330的亚基组合与亲本温麦6号相同,均为(1,7+9,5+10)。SSR标记分析表明,百农AK58对亲本周麦11、温麦6号和郑州8960遗传成分的继承率分别为47.4%、28.9%和23.7%,而丰收60的继承率分别为47.9%、30.7%和21.4%。可见,这2个品种在遗传上与周麦11有较大的相似性。百农4330继承这3个亲本的遗传成分比例非常相近,分别为33.1%、32.4%和34.6%。在A、B、D基因组及染色体水平上,3个亲本品种对后代的遗传贡献率也表现不均衡性。百农AK58有40个不同于丰收60和百农4330的SSR特异位点,主要分布于1A、4A、5A、6A、1B、4B、5B、6B、7B、1D、2D、3D和7D染色体,其中多数位点已知存在与产量、抗病等重要农艺性状相关的基因,推测这些特异位点在百农AK58成为大面积种植品种中发挥了重要作用。

猪乳中一组高分子量蛋白质的多态性及其与泌乳性能的关系

采用SDS PAGE法对 16 2头二花脸母猪和 5 0头大约克母猪乳中一组高分子量蛋白质 (HMWP)进行了检测 ,计算了该位点基因型频率、等位基因频率和遗传多样性指数 ,并运用线性模型统计方法分析二花脸母猪该位点不同基因型与母猪泌乳性能的关系。结果表明 ,在猪种群中 ,乳中HMWP存在A (相对分子质量 14 6 80 0± 14 0 0 ) ,B ( 114 80 0± 4 0 0 ) ,C ( 10 86 0 0 )和D ( 10 14 0 0± 6 0 0 ) 4种带型 ,分别受 4个等位基因HA、HB、HC 和HD 控制。在二花脸猪乳中HMWP表现出BB、BD和DD 3种基因型 ,其频率分别为 0 6 6 6 7,0 2 716和 0 0 6 17;两个等位基因HB 和HD 频率分别为 0 80 2 5和0 1975 ;遗传多样性指数为 0 3170。大约克猪乳中HMWP表现出BB、AB和BC 3种基因型 ,其频率分别为 0 880 0 ,0 10 0 0和 0 0 2 0 0 ;等位基因HA、HB 和HC 的频率分别为 0 0 5 0 0 ,0 94 0 0和 0 0 10 0 ;遗传多样性指数为 0 1138。在二花脸猪种群中 ,不同HMWP基因型在乳糖浓度上存在显著差异 (P <0 0 5 ) ,但在乳蛋白浓度差异不显著 (P >0 0 5 )。

普通小麦HMW谷蛋白亚基与蛋白质含量和沉降值的关系

对148个不同小麦品种高分子量麦谷蛋白亚基与蛋白质含量、沉降值之间的关系进行了研究。结果表明:G lu-1三位点控制的亚基等位变异与品质性状关系密切。A 1位点1亚基和N出现的频率基本相当,对蛋白质含量效应N>1,对沉降值1>N;B 1位点7+9亚基对出现频率最高,其次为7+8,各亚基对蛋白质含量效应为17+18>7+8>7>7+9>6+8>14+15>13+16,对沉降值的作用为7+8>13+16>17+18>7+9=7>14+15>6+8;D 1位点5+10亚基对频率高于2+12,各亚基对蛋白质含量效应以5+10>2.2+12>2+12>2+10,沉降值效应以2.2+12>5+10>2+12>2+10。具有亚基N,17+18,5+10组合类型的小麦品种可成为蛋白含量较高的品种;1,7+8,2.2+12组合类型的小麦品种可成为加工品质较好的品种。

高分子量麦谷蛋白亚基对小麦蛋白质品质特性的影响

为了明确高分子量麦谷蛋白亚基对小麦籽粒蛋白质品质特性的影响,以陕西关中和河南豫北农户大田种植的80份小麦品种为材料,分析不同小麦品种HMW-GS组成及其对籽粒蛋白质品质特性的影响。结果表明,不同位点及位点内单个亚基都对籽粒蛋白质品质特性有显著影响。3个不同位点对小麦籽粒蛋白质品质性状影响的大小顺序为Glu-D1>Glu-B1>Glu-A1。在Glu-A1位点内,1>Null;在Glu-B1位点内,14+15>7+8>7+9;在Glu-D1位点内,5+10>2+12>4+12。参试品种中亚基组合为1/7+8/5+10和Null/7+8/2+12的小麦品种蛋白质品质特性较好。

猪乳中一高分子量蛋白质的非血源性证据

目的探讨猪乳一高分子量蛋白质B(HMWP-B)是否来自于血液以及是否为猪乳所特有等问题。方法利用兔抗HMWP-B的多克隆抗体,通过免疫印迹实验来检测泌乳母猪血液中是否存在HMWP-B。结果实验结果证实HMWP-B在泌乳母猪血液中不存在,由此推测HMWP-B可能为来源于乳腺细胞自身合成而非血源性的乳蛋白;同时,结果还表明牛乳和兔乳中不存在HMWP-B,提示HMWP-B可能为猪乳所特有的乳蛋白。结论本实验为证明HMWP-B是由猪乳腺细胞自身合成而不是来自于血液的乳蛋白提供了一定的证据,这为深入开展该蛋白质的功能研究奠定了基础。

高压处理对大米蛋白溶解性及其分子特征的影响

研究了pH 8.0和pH 10.0条件下500 MPa高压处理对热变性大米蛋白溶解性的影响,并用Sephadex G-100色谱和SDS-PAGE分析了其分子特征的变化,用扫描电镜观察了大米蛋白的表观特征。结果显示,pH 8.0时500 MPa处理可使大米蛋白的溶解性由12.03%提高到19.15%,pH 10.0时高压处理则可由16.60%提高到24.87%。高压处理后的大米蛋白颗粒表面疏松,可使较大的蛋白质分子溶出,也产生了更小的蛋白质分子,且高压与非高压时溶出的蛋白质组分具有不同的紫外吸收特征。高压处理后的可溶性蛋白中均含有14、35 ku和少量22 ku亚基,非可溶性部分中除上述亚基外,还含有12、16、110 ku亚基。表明不同高压处理影响大米蛋白的溶解性能和分子特征,但对亚基的影响不明显。

超高压对花生分离蛋白分子结构影响及机理研究

[目的]对超高压处理花生分离蛋白而导致的性质变化进行初步的机理研究。[方法]以花生分离蛋白为原料,运用SDS-PAGE、红外光谱、差示扫描量热仪、扫描电镜等手段初步探究了超高压对花生分离蛋白分子结构的影响。[结果]通过SDS-PAGE发现,一些蛋白质分子中的亚基发生了解离;通过红外光谱检测表明,蛋白质的降解加剧,整个溶液中蛋白质分子的离子化程度加强,分子上的电荷分布增加;通过差示扫描量热仪检测表明,在较低的压力(≤400 MPa)下,花生蛋白发生降解,成为一些亚基单位,然后亚基单位逐步伸展,使得球状蛋白内部的极性基团和疏水基团暴露出来;通过扫描电镜检测表明,花生蛋白颗粒在压力的作用下变得更加细小。[结论]以上结构的变化,可能是超高压下花生蛋白性质发生变化的原因。

蛋白酶A和高分子蛋白对纯生啤酒泡持性的影响及对策

在优化蛋白酶A和高分子蛋白检测方法的基础上,对影响纯生啤酒泡沫稳定性最为关键的因素蛋白酶A和高分子蛋白在酿造过程中的变化进行了研究,并对这两个因素对纯生啤酒贮存过程中泡持性变化的影响及影响这两个指标的因素进行了研究。

小麦突变体AS208中Glu-B1位点缺失对籽粒中蛋白体形成和储藏蛋白合成与加工相关基因表达的影响

高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)是小麦籽粒贮藏蛋白的重要成分,其组成、表达和含量决定面团弹性和加工品质。本研究以Glu-B1位点上1Bx20和1By20双亚基沉默的小麦无性系变异体AS208为材料,以AS208的来源亲本轮选987作为对照,对AS208中Glu-B1位点的沉默机制和1Bx20、1By20亚基沉默对种子中蛋白体融合以及合成加工相关基因表达的影响进行了研究。Southern blot分析发现AS208比轮选987少2条特异带,染色体原位杂交(FISH)结果显示轮选987中有6条染色体出现杂交信号,而在AS208中有4条染色体出现杂交信号,表明AS208基因组中缺失Glu-B1位点。透射电镜观察发现,与轮选987相比,AS208的籽粒蛋白体形成过程,以及蛋白体大小和形状基本一致。qRT-PCR检测发现,在12个与籽粒蛋白质合成与加工相关基因中,有7个的表达模式两品种相似,有8个的表达量在AS208中高于在轮选987中,特别是Bip、PDI-1和PDI-5基因(高1.5~2.0倍)。本研究结果表明,小麦Glu-B1位点的基因对种子中蛋白体的形成没有明显影响,但一定程度上刺激了多数蛋白质合成和加工相关基因的表达,保证了种子内蛋白含量、蛋白体外形和大小基本不变,表现负反馈调节效应。

小麦高分子量谷蛋白亚基与小麦品质性状关系的研究

采用 SDS- PAGE方法 ,通过对 4个优质亲本与 3个农艺亲本间杂交获得的 F2 群体的每一单株及其亲本进行小麦高分子量谷蛋白亚基 ( HMW- GS)组成分析 ,并对每一 F2 单株上 F3籽粒群体的高分子量谷蛋白亚基组成与其籽粒蛋白质含量、SDS-沉降值的关系进行研究 ,结果表明 :小麦高分子量谷蛋白亚基组成不同的群体间籽粒蛋白质含量差异不显著 ,但其 SDS-沉降值差异达显著或极显著水平。根据本研究 ,建议在我国小麦品质遗传育种中 ,采用 SDS- PAGE法 ,选择优质材料作亲本 ,在杂交早代 ,选择具有 5+10亚基对的单株 ,并结合测定蛋白质含量、 SDS-沉降值及其它品质性状进行后代选择 ,培育品质优良的小麦品种 。