miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

miR-17-5p通过调控PKD2对肺腺癌HCC827细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-17-5p在肺腺癌细胞中的表达及miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人肺腺癌细胞系HCC827和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-17-5p的表达水平。实验分为miR-17-5p过表达组(miR-17-5p mimics组)、miR-17-5p低表达组(miR-17-5p inhibitor组)和阴性对照组(NC组)。通过CCK-8、流式细胞术、Transwell实验探讨miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。最后通过Targetscan数据库预测出PKD2是miR-17-5p下游潜在的靶基因,利用实时荧光定量PCR和Western-blot实验验证miR-17-5p与PKD2之间的相互作用关系。结果:miR-17-5p在HCC827细胞中高表达(P<0.001),上调miR-17-5p后显著促进了肺腺癌细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)及迁移(P<0.05)并抑制凋亡(P<0.01)。miR-17-5p与PKD2的3’UTR存在直接结合位点,并且过表达miR-17-5p在mRNA和蛋白水平均显著促进了PKD2的表达(P<0.01)。结论:PKD2是miR-17-5p的直接靶基因,miR-17-5p通过调控PKD2影响肺腺癌细胞的生物学行为。

LncRNAHOTAIR靶向miR-17-5p/TXNIP对狼疮性肾炎进展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA同源盒基因转录反义RNA(LncRNAHOTAIR)靶向miR-17-5p/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对狼疮性肾炎(LN)进展的机制。方法取60只MRL/lpr雌性小鼠,随机分为模型组、LncRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组、阴性对照组和LncRNAHOTAIR敲低+miR-17-5p antagomir组,每组12只,另取12只C57BL/6J雌性小鼠作为对照组,检测各组小鼠肾功能、免疫器官指数;以HE染色实验检测各组小鼠肾组织病理形态;以酶联免疫吸附测定(ELASA)法测定各组小鼠血清抗双链DNA(dsDNA)、免疫细胞因子免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织LncRNAHOTAIR、miR-17-5p及TXNIP表达。以双荧光素酶报告基因实验检测小鼠肾小球系膜细胞中LncRNAHOTAIR对miR-17-5p、miR-17-5p对TXNIP的靶向调节。结果与对照组比较,模型组小鼠肾组织发生严重病理损伤,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达降低(P<0.05),尿蛋白浓度、血尿素氮(BUN)、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达升高(P<0.05)。与模型组比较,Ln⁃cRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组小鼠肾组织病理损伤减轻,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达升高(P<0.05),尿蛋白浓度、BUN、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达降低(P<0.05)。下调miR-17-5p可减弱敲低LncRNAHOTAIR组对模型组小鼠各指标的作用。结论敲低LncRNAHOTAIR可通过上调miR-17-5p而降低TXNIP表达,进而减少LN小鼠免疫炎性因子产生,增强其免疫功能,抑制体内炎症发生发展,最终减轻小鼠肾组织损伤并改善其肾功能。

特发性扩张型心肌病患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系

目的 探讨特发性扩张型心肌病(IDCM)患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系。方法 选取2019年1月至2023年1月绵阳市游仙区中医医院和四川省人民医院联合收治的IDCM患者136例(IDCM组),根据IDCM患者是否继发心力衰竭分为心衰组40例和非心衰组96例。选取同期68名无心脏病的健康志愿者设为对照组。比较IDCM组与对照组、心衰组与非心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)。分析血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心功能指标的相关性。采用ROC曲线分析miR-34a-5p、miR-17-5p对IDCM继发心衰的预测价值。结果 IDCM组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IDCM组的血清NT-proBNP、hs-TnT水平高于对照组,LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清NT-proBNP水平高于非心衰组,LVEF低于非心衰组,LVEDD高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与血清NT-proBNP水平呈正相关(r=0.498,r=0.306,P<0.001)。血清miR-34a-5p联合miR-17-5p预测IDCM继发心衰的灵敏度为0.875,特异度为0.802。结论 IDCM患者存在miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平上调情况,且miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心衰具有关联,对预测心衰有一定价值。

牛miR-17~92基因簇在牛睾丸中的表达及其生物学功能分析

牛miR-17~92基因簇由6个不同的功能miRNAs组成,参与牛睾丸发育与精子发生。本研究从牛基因组中获得miR-17~92基因簇序列信息进行物种保守性分析,再采用半定量PCR的方法检测miR-17~92基因簇前体miRNA在睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾及不同活力精子中的表达水平,利用miWalk、TargetScan 7.2及miRTarBase 8.0等在线网站预测成熟miRNA的靶基因,并利用KOBAS3.0对预测靶基因进行GO和KEGG通路分析。结果表明,牛miR-17~92基因簇在哺乳动物进化中具有保守性,该基因簇的6个miRNA前体在睾丸组织中呈现高表达,均显著高于附睾组织;而这6个miRNA前体在附睾的不同位置也具有表达差异,其中pre-miR-19a在附睾尾中表达显著高于附睾体和附睾头,pre-miR17和pre-miR20a在附睾中未检测到表达;在不同活力精子中,高活力精子的bta-miR-17-5p、bta-miR-18、bta-miR-20a的表达水平显著高于低活力精子;生物信息学分析结果表明,6个miRNA一共预测到2 940个靶基因,这些靶基因主要通过MAPK信号通路、PI3K-AKT信号通路、FoxO信号通路等参与调控牛睾丸功能。本研究分析了miR-17~92基因簇在牛睾丸中的表达分布,为miR-17~92基因簇对牛睾丸发育和调控精子活力的作用机制研究提供参考依据。

SOX4靶向miR-17对结肠癌细胞HCT-116生物学行为的影响

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)及miR-17在结直肠癌中的表达及对HCT-116细胞生物学行为的作用。方法收集2020年3月至2022年1月在河北北方学院一附院和张家口市第一医院的27例结直肠癌患者组织标本并检测SOX4及miR-17的表达水平,并分析与临床病理特征的关系。利用慢病毒转染技术干预HCT-116细胞的SOX4及miR-17表达。检测各组细胞中SOX4和miR-17的表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力、细胞活性变化和相关蛋白表达。结果与正常组织比较,结直肠癌组织中SOX4表达水平升高。SOX4及miR-17在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),SOX4和miR-17的表达和病理分期、淋巴结转移、肝转移情况相关,差异有统计学意义(P<0.05),而与肿瘤的大小、分化程度无相关(P>0.05)。SOX4模拟组细胞增殖能力、迁移能力及细胞活性显著高于对照组及SOX4抑制剂组(P<0.05)。SOX4抑制剂组与对照组相比迁移及增殖相关蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论SOX4在结直肠癌组织中表达上调,SOX4的表达可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,miR-17可能是其下游调控靶点。

胞磷胆碱钠联合尤瑞克林对缺血性脑卒中患者miR-17-5p、miR-29b表达的影响

目的探讨胞磷胆碱钠、尤瑞克林对缺血性脑卒中患者miR-17-5p、miR-29b表达的影响。方法以在医院进行治疗的100例缺血性脑卒中患者为观察对象,并利用随机表法分为对照组、联合组,时间为2023年2月至2024年2月,分别给予尤瑞克林单一治疗及胞磷胆碱钠、尤瑞克林联合治疗。检测两组脑血流灌注指标、炎症因子、氧化应激、miR-17-5p、miR-29b水平和临床疗效,统计并记录患者不良反应。结果两组治疗前CBF、CBV、hs-CRP、miR-29b、IL-6、TNF-α、miR-17-5p比较,差异无统计学意义(P>0.05);患者在经过治疗后,CBF、CBV、miR-29b、SOD、GSH-Px水平升高,hs-CRP、IL-6、TNF-α、miR-17-5p、MDA水平降低,且联合组CBF、CBV、miR-29b、SOD、GSH-Px水平高于对照组,hs-CRP、TNF-α、IL-6、miR-17-5p、MDA水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组不良反应发生率、治疗总有效率高于对照组(P<0.05),不良反应轻微,均可耐受。结论胞磷胆碱钠、尤瑞克林联合能够改善患者临床疗效,提高患者预后。

miR-17通过调控自噬影响TGF-β1诱导的肺纤维化

目的探讨miR-17对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的体外肺纤维化细胞模型自噬和纤维化的影响机制。方法重组人TGF-β1蛋白诱导人胚肺成纤维细胞HFL1,构建肺纤维化细胞模型,CCK-8检测细胞活力,ELISA试剂盒检测细胞上清中羟脯氨酸(Hyp)含量,鉴定造模成功与否。将细胞分成对照组、模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、miR-17inhibitor组和miR-17inhibitor+3-MA组。CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和纤维化标志物α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达。结果TGF-β1诱导后HFL1细胞活力升高(P<0.01),细胞上清中Hyp含量升高(P<0.01),体外肺纤维化细胞模型构建成功。与对照组相比,模型组细胞活力显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著升高(均P<0.01);与模型组相比,miR-17inhibitor组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01);与3-MA组相比,miR-17inhibitor+3-MA组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01)。结论抑制miR-17可通过激活自噬抑制TGF-β1诱导的肺纤维化。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17～92基因簇的表达，初步探讨miR-17～92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela／Siha、Ishikawa／HEC-1A、H0—8910／HO．8910PM、SKOV3／SK0v3．TR30／SKOV3-DDP、COCl／COCl-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17—92基因簇的表达水平；应用miRWalk数据库、nfiR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17～92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比，miR-17～92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9．86，P〈0．001）；在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10-35，P〈0．005）；与人正常卵巢细胞系IOSE386相比，miR-17～92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COCl、COCl／DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3／DDP均呈上调表达（F=12．64，P〈0．001）。，预测得出miR-17～92基因簇的靶基因为ABCAJ、ARHGAP21、BAP1、C100ff46、CCND1、CD4等共30个；通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17—92基因簇参与的生物学过程共8个，KEGGpathway分析得出miR-17～92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达，且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17～92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

目的:探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及迁移的分子机制。方法:收集2017年6月至2018年6月承德市中心医院62例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18或pcDNA3.1-HMGA2转染A549和NCI-H460细胞,用CCK-8法、Transwell实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18对miR-17-5p或miR-17-5p对HMGA2的靶向调控作用。构建敲降HCG18的A549细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果:lncRNA HCG18在NSCLC组织和细胞中均高表达(均P<0.01),发生淋巴结转移及晚期NSCLC患者中HCG18的表达显著提高,且HCG18高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低(均P<0.01)。转染Si-HCG18显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P<0.01),上调上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),小鼠移植瘤体积显著减小(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证了HCG18与miR-17-5p靶向结合,以及miR-17-5p与HMGA2靶向结合。转染miR-17-5p后NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制(均P<0.01),促进上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),而转染miR-17-5p+HCG18后可抑制miR-17-5p的作用。结论:HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控

microRNAs(miRNAs)是近年发现的一种高度保守的非编码小RNA,它们通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解,在转录后水平调控基因的表达,参与调控哺乳动物多个器官的发育过程和人类疾病的发生。miR-17-92基因簇是一个高度保守的基因簇,编码miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1等7个miRNAs。大量证据表明,miR-17-92基因簇miRNAs参与了心、肺、免疫系统的发育、血管生长及前脂肪细胞的分化等过程。此外,miR-17-92基因簇miRNAs在多种肿瘤中高表达,能作为致癌基因诱发淋巴瘤和血管化肿瘤的发生,但它也可以作为抑癌基因抑制乳腺癌细胞的增殖。文章对miR-17-92基因簇miRNAs在哺乳动物器官发育及肿瘤发生中的作用进行综述。

鸡mir-17-92基因簇的结构、功能及其调控

mir-17-92基因簇(mir-17-92cluster)是脊椎动物的一个保守miRNA基因簇,在哺乳动物细胞增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中起重要的调控作用。同时,mir-17-92基因簇又是一个癌基因,在多种肿瘤中表达。尽管对mir-17-92基因簇的研究非常广泛,但其作用机制还不完全清楚。鸡mir-17-92基因簇的结构组成特点、功能及其作用机制尚未见研究报道。该文根据同一miRNA基因簇的miRNAs在功能上相关的特点,以鸡mir-17-92基因簇序列为研究对象,采用生物信息学研究方法和手段,开展了鸡mir-17-92基因簇的基因组结构、miRNAs序列组成、靶生物学过程和信号通路以及miRNAs结合位点分布特点等分析研究。结果发现,鸡mir-17-92基因簇调控MAPK、Wnt和TGF-β等多个重要细胞信号通路;miRNA结合位点分布分析显示,该miRNA基因簇多个成员共同作用于同一个靶基因,提示该基因簇的miRNAs成员以组合和协同的方式调控靶基因。该研究为深入了解mir-17-92基因簇如何调控癌症和发育中的关键细胞过程奠定了基础。

鸡miR-17-92基因簇上游调控区功能分析

miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因在于鸟类miR-17-92基因簇上游的基因组序列都存在一个gap,且该基因簇启动子的位置和序列也还不清楚。为此,本研究采用染色体步移的方法获得鸡miR-17-92基因簇上游gap区序列,并采用生物信息学分析和报告基因及截短突变技术开展该gap区的功能分析。染色体步移分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游gap区全长1704 bp,GC含量达80.11%。生物信息学分析显示,鸡miR-17-92基因簇上游gap区内1段200 bp的序列与人、牛、小鼠等9种动物miR-17-92基因簇上游序列保守性较高,且该区域为人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇宿主基因的核心启动子区。将克隆的gap区序列插入pGL3 basic荧光素酶报告基因载体,构建成启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。荧光素酶报告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)报告基因的活性是pGL3 basic空载体活性的417倍,证明所克隆的gap区片段是鸡miR-17-92基因簇宿主基因的启动子。为进一步分析该启动子的结构和功能,构建gap区片段的5'端缺失突变(缺失448 bp)和3'端缺失突变(缺失894 bp)的荧光素酶报告基因载体。与pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突变分别使启动子报告基因活性降低19.82%和60.14%。这些数据提示,鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的重要调控区位于-3400/-2506。本研究结果为进一步开展鸡miR-17-92基因簇的转录调控奠定了基础。

miR-17～92基因簇过表达调控PTEN、BIM蛋白对卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药的影响

目的:分析miRNA-17~92基因簇过表达与卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药的关系,为卵巢癌化疗耐药的研究提供理论依据。方法:脂质体法将构建的p EGFP-N1-miR-17~92质粒转染入卵巢癌SKOV3细胞。Real time-PCR法及Western blot法分别检测转染前后miR-17~92及BIM、PTEN表达。结果:与SKOV3细胞相比,空质粒p EGFPN1转染的SKOV3-p EGFP-N1细胞miR-17~92含量0.970,与对照组比较差异无统计学意义(t=0.581,P=0.620);过表达质粒p EGFP-N1-miR-17~92转染的SKOV3-p EGFP-N1-miR-17~92细胞miR-17~92含量2.082,与对照组比较差异有统计学意义(t=-5.602,P=0.030);SKOV3-p EGFP-N1-miR-17~92细胞组的miR-17~92 mRNA相对表达量与SKOV3-p EGFP-N1细胞组比较,差异有统计学意义(t=-8.473,P=0.014)。不同浓度紫杉醇作用于转染p EGFP-N1-miR-17~92质粒后细胞,miR-17~92过表达使BIM蛋白表达下降,对PTEN蛋白表达的影响不明显。结论:miR-17~92基因簇与卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药有关。miR-~92基因簇过表达影响卵巢癌耐药的机制是通过下调BIM蛋白而非PTEN蛋白参与。

miR-17-92基因簇与肿瘤

微小RNA(miRNA)是近年来新发现的与肿瘤的发生发展密切相关的一类RNA。它可通过调控其靶标基因参与的信号通路,影响肿瘤的发生和发展,发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能,因此miRNA失调在肿瘤中起重要作用。较多的研究发现,miR-17-92簇与肿瘤的发生密切相关,具有癌基因和抑癌基因双重功能。本文就miR-17-92簇在肿瘤中的作用机制及功能作一综述。

过敏性鼻炎病人外周血MALAT1、miR-17-5p的表达及临床意义

目的:探讨过敏性鼻炎病人外周血肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、微小RNA17-5p(miR-17-5p)的表达水平及其临床意义。方法:选取过敏性鼻炎病人125例作为观察组,择同期体检健康者62名作为对照组。以荧光定量聚合酶链反应检测受试者外周血MALAT1、miR-17-5p表达水平,绘制ROC曲线评估外周血MALAT1、miR-17-5p对过敏性鼻炎发生的诊断价值,Spearman相关性分析外周血MALAT1、miR-17-5p与病人疾病严重程度的相关性,再以多因素logistic回归分析影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素。结果:观察组外周血MALAT1 mRNA水平低于对照组,miR-17-5p水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,MALAT1 mRNA曲线下面积为0.812,miR-17-5p曲线下面积为0.845,MALAT1 mRNA灵敏性优于miR-17-5p,特异性低于miR-17-5p,两者联合检测诊断价值更高;中重度过敏性鼻炎病人血清MALAT1 mRNA水平明显低于轻度病人(P<0.05),miR-17-5p水平明显高于轻度病人(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血MALAT1 mRNA水平与过敏性鼻炎疾病严重程度呈负相关关系(r=-0.779,P<0.01),miR-17-5p水平与疾病严重程度呈正相关关系(r=0.774,P<0.01);多因素logistic回归分析结果显示,低水平MALAT1 mRNA、高水平miR-17-5p为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素(P<0.05)。结论:过敏性鼻炎病人外周血中MALAT1 mRNA呈低表达,miR-17-5p呈高表达,与疾病严重程度关系密切,为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素,可能作为诊断过敏性鼻炎及评估疾病严重程度的潜在指标。

转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P<0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。