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利用RACE方法克隆小麦β-1,3-葡聚糖酶基因的全长cDNA 被引量:5
1
作者 崔素萍 刘博 +1 位作者 黄丽丽 康振生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第7期79-84,共6页
【目的】研究小麦抗条锈菌的分子机制,在受条锈菌侵染的非亲和组合小麦叶片中克隆一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA。【方法】采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(RACE),在感染小麦条锈菌的小麦(水源11)叶片中进行-β1,3-葡聚糖酶基... 【目的】研究小麦抗条锈菌的分子机制,在受条锈菌侵染的非亲和组合小麦叶片中克隆一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA。【方法】采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(RACE),在感染小麦条锈菌的小麦(水源11)叶片中进行-β1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA的扩增。【结果】得到了一个1338 bp-β1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA,Genbank上注册号为DQ090946,测序结果和序列生物信息学分析结果表明,其与-β1,3-葡聚糖酶基因gi3757681和gi6782375的同源性分别为94.3%和92.1%。该全长cDNA具有完整的编码框,编码334个氨基酸,Genbank上注册号为AAY96422,与-β1,3-葡聚糖酶CAA77085和AAA32958的同源性分别为95.8%和86.7%。【结论】初步推断此全长cDNA是小麦中编码-β1,3-葡聚糖酶的一个新基因。 展开更多
关键词 小麦 条锈菌 Β-1 3-葡聚糖酶基因 分子克隆 全长CDNA race
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骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因全序列RACE扩增方法的建立 被引量:2
2
作者 唐博 曹贵方 +1 位作者 杨银凤 王秀梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期151-156,共6页
为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 c... 为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 cDNA的3′末端序列;采用反向嵌套PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素cDNA的部分序列,设计了1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1cDNA的5′末端序列。结果显示,获得了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因的全序列。证实,RACE技术用于防御素基因的扩增是可行的。 展开更多
关键词 Β-防御素 3’race 5’race 锚定PCR 反向嵌套PCR 骆驼
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Evaluation of Microstructure and Wear Properties of Ti-6Al-4V Alloy Plasma Carbonized at Different Temperatures 被引量:1
3
作者 张勇 WEI Qiulan +3 位作者 邢亚哲 JIANG Chaoping LI Xinghang ZHAO Zhiyu 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2015年第3期631-638,共8页
Ti-6A1-4V (TC4) alloys were plasma carbonized at different temperatures (900, 950, and 1 000 ℃) for duration of 3 h. Graphite rod was employed as carbon supplier to avoid the hydrogen brittleness which is ubiquit... Ti-6A1-4V (TC4) alloys were plasma carbonized at different temperatures (900, 950, and 1 000 ℃) for duration of 3 h. Graphite rod was employed as carbon supplier to avoid the hydrogen brittleness which is ubiquitous in traditional gas carbonizing process. Two distinguished structures including a thin compound layer (carbides layer) and a thick layer with the mixed microstructure of TiC and the a-Ti in carburing layer were formed during carburizing. Furthermore, it was found that the microstructure and the properties of TC4 alloy were significantly related to the carbonizing temperature. The specimen plasma carbonized at 950 ~2 obtained maximum value both in the hardness and wear resistance. 展开更多
关键词 TI-6A1-4V plasma carburizing LAYER wear resistance
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Store Environment:Its Importance and Consumers'Expectations on Casual-wear Chain Stores in Honk Kong
4
作者 朱惠靖 林美芝 《Journal of China Textile University(English Edition)》 EI CAS 1999年第4期29-33,共5页
This study attempted to examine the importance of storeenvironment in affecting consumers’store choice deci-sion;the relative importance among the three environ-mental factors;and consumers’expectations on store en-... This study attempted to examine the importance of storeenvironment in affecting consumers’store choice deci-sion;the relative importance among the three environ-mental factors;and consumers’expectations on store en-vironment for the casual-wear chain stores in HongKong.Julie Baker’s Three-category framework onstore environments namely ambient,design and socialfactors was adopted for investigation.The results indi-cated that the store environment was important in affect-ing consumers’selection of store for shopping.It alsorevealed that social factor was perceived relatively im-portant than ambient and design factors.Nine store ex-pectation dimensions were categorised and the resultdemonstrated that most respondents were concerned onthe social aspect in their expectation of having a satisfy-ing store environment. 展开更多
关键词 STORE environment casual - wear CHAIN STORE FASHION retailing Hong Kong
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Effect of Silicon Content on Wear Resistance of Al-Si Alloys 被引量:1
5
作者 顾书英 王汝耀 鲁薇华 《Journal of China Textile University(English Edition)》 EI CAS 1998年第3期88-91,共4页
The sliding wear behavior of hypoeutectic, eutectic and hypereutectic Al - Si alloys under lubricating condition was investigated. The wear mechanism of three kinds of alloys was discussed and an effective way to impr... The sliding wear behavior of hypoeutectic, eutectic and hypereutectic Al - Si alloys under lubricating condition was investigated. The wear mechanism of three kinds of alloys was discussed and an effective way to improve the wear reslstance of Al - Si alloys was put forward, that is increasing the silicon content. 展开更多
关键词 Al - SI ALLOY wear RESISTANCE SILICON .
全文增补中
Microstructural Characteristics and Wear Performance of Plasma Sprayed Al_2O_3-13 wt. % TiO_2 Coating on the Surface of Extrusion Wheel
6
作者 ZHANG Xue-fei REN Li-min 《International Journal of Plant Engineering and Management》 2013年第3期165-172,共8页
The conventional Al2O3-13 wt. % TiO2 composite ceramic coatings are fabricated by plasma spraying on the surface of extrusion wheel. The microstrueture, morphology and phase compositions of the substrate and coat- ing... The conventional Al2O3-13 wt. % TiO2 composite ceramic coatings are fabricated by plasma spraying on the surface of extrusion wheel. The microstrueture, morphology and phase compositions of the substrate and coat- ing are investigated by using X-ray diffractometry (XRD) , scanning electron microsopy (SEM) and energy dis- persive spectroscopy (EDS). Moreover, the microhardness of the substrate and the coating are investigated using Vickers mierohardness tester, the friction and wear behaviors of the substrate and the coating are investigated by using a block-on-ring tribometer under dry sliding conditions with the load of 245 N. The results show that both γ-Al2O3 and α-Al2O3 phases are observed in the as-sprayed coatings, the mian phase is γ-Al2O3. There are white particulates Al2O3 on its surface. The Al2O3-13 wt. % TiO2 coating possesses higher mierohardness which is about 1018HV and 1.6 times that of the substrate. The wear performance of coating is better than that of the substrate. In a practical application, the life of the extrusion wheel which is plasma sprayed Al2O3-13 wt. % TiO2 coating on the surface is 1.2 times that of the conventional extrusion wheel, and the life is about 330 h. 展开更多
关键词 extrusion wheel plasma spraying Al2O3-13 wt. % TiO2 ceramic coating wear performance
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紫花苜蓿果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因全长克隆及分析 被引量:12
7
作者 龙瑞才 杨青川 +2 位作者 康俊梅 王凭青 秦智慧 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1075-1082,共8页
根据已知的与盐胁迫相关的EST序列,采用SMART RACE方法克隆了紫花苜蓿果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)全长cDNA,命名为MsALD(GenBank accession No.FJ896113)。序列分析结果表明,该cDNA全长1 487bp,包含一个1 194 bp的最大开放阅读框,编码39... 根据已知的与盐胁迫相关的EST序列,采用SMART RACE方法克隆了紫花苜蓿果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)全长cDNA,命名为MsALD(GenBank accession No.FJ896113)。序列分析结果表明,该cDNA全长1 487bp,包含一个1 194 bp的最大开放阅读框,编码398个氨基酸。经同源比对和进化树分析,MsALD基因编码的氨基酸与红三叶草、马铃薯、烟草等的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)氨基酸序列一致性高达90%以上,确定其属于第Ⅰ类果糖-1,6-二磷酸醛缩酶。半定量RT-PCR分析表明,MsALD基因可能与紫花苜蓿抗盐机理相关。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 果糖-1 6-二磷酸醛缩酶(ALD) SMART race 进化树 半定量RT-PCR
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火把梨14-3-3基因的克隆与序列分析 被引量:6
8
作者 王光勇 刘迪秋 +3 位作者 李旻 饶健 孙兵召 丁元明 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期55-61,共7页
依据火把梨(Pyrus pyrifolia Nakai)14-3-3蛋白的EST序列设计基因特异引物,采用快速扩增cDNA末端技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE),从云南火把梨中克隆一个新的14-3-3基因(Pp14-3-3)的全长cDNA序列。Pp14-3-3全长cDNA为1 10... 依据火把梨(Pyrus pyrifolia Nakai)14-3-3蛋白的EST序列设计基因特异引物,采用快速扩增cDNA末端技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE),从云南火把梨中克隆一个新的14-3-3基因(Pp14-3-3)的全长cDNA序列。Pp14-3-3全长cDNA为1 107 bp,具有84 bp 5'非编码区(Untranslated Regions,UTR)、786 bp开放读码框(Openreading frame,ORF),以及237 bp 3'UTR,编码含261个氨基酸的蛋白质。Pp14-3-3与其他物种14-3-3蛋白在中间功能区域高度保守,包含典型的14-3-3结构域。与已知植物14-3-3s家族成员间的氨基酸序列进行聚类分析,将Pp14-3-3聚为非ε大类14-3-3。Pp14-3-3在火把梨接受光照和没有光照的果皮以及幼嫩叶片中大量表达,且表达量稳定。对Pp14-3-3的基因克隆以及表达特性进行了分析,为后期深入研究该新基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 火把梨 race RT-PCR 14-3-3
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青稞4-香豆酸辅酶A连接酶基因4CL的克隆及表达分析 被引量:13
9
作者 杨晓云 杨智敏 +4 位作者 罗小娇 孔德媛 袁金娥 刘新春 冯宗云 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1603-1610,共8页
为了进一步了解4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase;4CL)基因在黄酮合成中的作用,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了青稞4CL基因(Hv4CL)的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR(q... 为了进一步了解4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase;4CL)基因在黄酮合成中的作用,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了青稞4CL基因(Hv4CL)的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术,对该基因在青稞4个胚乳发育时间段茎、叶和花中的表达情况进行研究。结果表明,Hv4CL基因cDNA序列全长2 107bp,该序列包含一个完整的开放阅读框(ORF,1 662bp),编码553个氨基酸。Hv4CL与小麦同源性最高(96%),且该蛋白序列中包含2个保守的box,即AMP结合盒:boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。qRT-PCR分析结果表明:4CL基因在青稞不同发育时期、不同组织的表达丰度不同,在茎中表达量最高,其次是叶和籽粒。 展开更多
关键词 青稞 黄酮 4-香豆酸辅酶A连接酶 race 表达模式
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爪哇根结线虫-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长克隆和序列分析 被引量:8
10
作者 张志荣 廖金铃 +5 位作者 崔汝强 卓侃 李迅东 郑静君 陈海燕 王鲜 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期517-522,共6页
以爪哇根结线虫为材料,根据同源序列法分别进行3′末端和5′末端的RACE,获得-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。此cDNA全长序列为1 675 bp,包括1 521 bp的完整ORF,编码一含506 aa的多肽。该基因命名为M j-eng3-,其推导蛋白的编码氨基酸... 以爪哇根结线虫为材料,根据同源序列法分别进行3′末端和5′末端的RACE,获得-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。此cDNA全长序列为1 675 bp,包括1 521 bp的完整ORF,编码一含506 aa的多肽。该基因命名为M j-eng3-,其推导蛋白的编码氨基酸与南方根结线虫的-β1,4-内切葡聚糖酶基因M I-ENG-1、M I-ENG-3和M I-ENG-4的同源性为95.3%、95.8%和85.3%,与另外5个植物寄生线虫β-1,4-内切葡聚糖酶基因推导蛋白PP-ENG-1、GR-ENG-1、GT-ENG-1、HG-ENG-1、HS-ENG-1编码氨基酸的同源性分别为51.2%、43.7%、43.7%、46.8%和45.3%。 展开更多
关键词 爪哇根结线虫 Β-1 4-内切葡聚糖酶 RT—PCR race
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cDNA文库与RACE方法结合克隆一个马铃薯病程相关蛋白基因cDNA(英文) 被引量:12
11
作者 田振东 柳俊 谢从华 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第11期996-1002,共7页
为克隆马铃薯晚疫病抗性相关基因 ,深入研究马铃薯晚疫病抗性机制 ,应用SMARTLD PCR技术 ,以晚疫病菌混合小种诱导 4 8h的水平抗性马铃薯 (SolanumtuberosumL .) (R gene free)叶片为材料 ,构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的cDNA文库... 为克隆马铃薯晚疫病抗性相关基因 ,深入研究马铃薯晚疫病抗性机制 ,应用SMARTLD PCR技术 ,以晚疫病菌混合小种诱导 4 8h的水平抗性马铃薯 (SolanumtuberosumL .) (R gene free)叶片为材料 ,构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的cDNA文库。为提高克隆全长cDNA的效率 ,将cDNA文库与RACE技术结合 ,依据本实验室得到的病原诱导表达片段测序结果 ,在其内部设计两个特异引物 ,与文库载体臂上的通用引物配对 ,以文库噬菌体DNA为模板 ,用高保真PCR分别扩增出cDNA 5′端与 3′端 ,从而简便、快捷地得到全长cDNA序列。采用此方法 ,在马铃薯中克隆了一个受晚疫病菌诱导表达的cDNA ,该cDNA长 90 4bp ,5′端有 2 9bp的非翻译区 ,3′端具有完整的polyA尾 ,包含一个 6 78bp的完整开放阅读框架 ,编码 2 2 6个氨基酸 (GenBank登录号 :AY 1 85 2 0 7)。BLAST检索发现其氨基酸序列与烟草一个新的病程相关蛋白基因NtPRp2 7具有 90 %的同源性 ,在马铃薯中尚未发现与之同源的已知基因。Northern杂交结果表明 ,水杨酸 (SA)、茉莉酸 (JA)、茉莉酸甲酯 (MeJA)、机械伤害和渗透胁迫都能诱导该基因表达。 展开更多
关键词 马铃薯 病程相关基因 NtPRp27-1ike基因 race CDNA文库
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三角帆蚌β-肌动蛋白基因的cDNA全长克隆及表达分析 被引量:9
12
作者 袁一鸣 李家乐 +2 位作者 汪桂玲 白志毅 李西雷 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期691-700,共10页
采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了三角帆蚌β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为1483bp,由长92bp的5′非翻译区(untranslated region,UTR),257bp的3′非翻译区,和1134bp的开放... 采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了三角帆蚌β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为1483bp,由长92bp的5′非翻译区(untranslated region,UTR),257bp的3′非翻译区,和1134bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)组成。阅读框共编码377个氨基酸,推算的分子量约为41.9ku,理论等电点为5.3。三角帆蚌β-actin氨基酸序列中Met178,Ser305,Ser321,Pro325,Val331,Pro346等6个氨基酸残基具有特异性,此外还发现3个特殊的氨基酸残基位点以及2个软体动物特有的氨基酸残基。三角帆蚌β-actin氨基酸序列与软体动物、节肢动物、脊椎动物的相似性高达98%~99%。NJ法系统进化分析显示三角帆蚌首先与软体动物聚在一起,然后与节肢动物聚在一起,再依次与鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。RT-PCR显示β-actin基因在外套膜、血液、肝、肾、胃、肠、鳃、斧足共8个组织的表达基本一致,具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 三角帆蚌 快速扩增cDNA末端(race) β-肌动蛋白基因 CDNA
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马鹿β-防御素-1cDNA全长克隆、序列信息及表达分析 被引量:3
13
作者 田巧珍 金鑫 +4 位作者 张曼 蔡硕 刘骄 王云鹤 杨银凤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期225-234,共10页
为了研究马鹿β-防御素-1(Red deerβ-defensin-1,redBD-1)基因的结构与功能,揭示该基因的组织表达规律。本研究利用PCR结合RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从马鹿舌黏膜中克隆redBD-1基因的cDNA全长序列并对其进行了生物... 为了研究马鹿β-防御素-1(Red deerβ-defensin-1,redBD-1)基因的结构与功能,揭示该基因的组织表达规律。本研究利用PCR结合RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从马鹿舌黏膜中克隆redBD-1基因的cDNA全长序列并对其进行了生物信息学分析,同时采用Real-time quantitative PCR(RT-qPCR)技术检测该基因在各组织的表达情况。结果表明,redBD-1基因的cDNA全长序列为455bp,开放阅读框(ORF)为192bp,编码64个氨基酸。生物信息学分析表明,redBD-1蛋白的理论分子量为6.94ku,有10个带正电荷的氨基酸残基,无带负电荷的氨基酸残基,理论等电点为10.85。预测redBD-1蛋白有一个分泌信号肽结构,无跨膜区,主要在细胞外发挥生理功能;6个保守的半胱氨酸残基分别以Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6连接形成3个分子内二硫键;成熟蛋白的三级结构是由β-折叠、延伸和无规则卷曲构成。redBD-1基因编码的氨基酸序列同源性最高的是梅花鹿β-防御素(siBD-1)为98.4%,其次是水牛肠β-防御素(BEBD)为92.2%,与人β-防御素-2(HBD-2)同源性最低仅为35.9%。RT-qPCR结果得出,redBD-1在被检器官中均有表达,在消化系统、呼吸系统以及生殖系统的大部分器官表达量较高,肝、肾和脾等实质性器官表达量相对较低。本试验为今后深入研究防御素基因功能以及马鹿黏膜免疫系统提供理论依据。 展开更多
关键词 马鹿β-防御素-1 race 基因克隆 序列分析 定量表达
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驯鹿β-防御素reBD-1全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:2
14
作者 杨银凤 郝永峰 +2 位作者 赵艳芳 余兴帮 都格尔斯仁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期657-662,共6页
为了获得驯鹿β-防御素reBD-1全长cDNA序列,根据已获得的reBD-1cDNA的已知序列设计1条序列特异性引物作为上游引物,反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,克隆reBD-1cDNA的3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据r... 为了获得驯鹿β-防御素reBD-1全长cDNA序列,根据已获得的reBD-1cDNA的已知序列设计1条序列特异性引物作为上游引物,反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,克隆reBD-1cDNA的3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据reBD-1cDNA的已知序列,设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,克隆reBD-1cDNA的5′末端序列。结果成功的克隆出了reBD-1cDNA的3′和5′末端序列,从而得到372bp的reBD-1cDNA全序列,其中包含44bp5′非翻译区(UTR)、192bp的开放读码框(ORF)、终止密码子TAA、118bp的3′UTR和poly(A)15。reBD-1cDNA全序列的获得为进一步研究其基因结构、基因表达和基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 5′race 3′race Β-防御素 驯鹿
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马铃薯低温响应的ScmiR390-5p及其靶基因表达与结构分析 被引量:5
15
作者 谢洁 王明 +4 位作者 丁红映 李青 王万兴 熊兴耀 秦玉芝 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2295-2308,共14页
【目的】研究马铃薯富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat receptor-like protein kinase LRR-RLK)类受体蛋白激酶基因SCLRRK1受miR390(ScmiR390-5p)调控响应非生物胁迫的机理。【方法】通过低温响应马铃薯miRNA测序分析与靶基因预测... 【目的】研究马铃薯富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat receptor-like protein kinase LRR-RLK)类受体蛋白激酶基因SCLRRK1受miR390(ScmiR390-5p)调控响应非生物胁迫的机理。【方法】通过低温响应马铃薯miRNA测序分析与靶基因预测,发现ScmiR390-5p通过调控1个可能的LRR类受体蛋白激酶基因对低温做出响应;利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)验证ScmiR390-5p和SCLRRK1响应低温胁迫的表达情况;利用RLM-5′RACE确定ScmiR390-5p作用于SCLRRK1的切割位点;利用PCR技术克隆得到SCLRRK1的DNA序列和CDS序列,生物信息学分析SCLRRK1的结构和功能;利用RT-qPCR分析ScmiR390-5p/SCLRRK1在马铃薯各组织中的表达情况及其响应各种非生物胁迫的表达情况。【结果】RT-qPCR结果表明,低温诱导ScmiR390-5p表达,SCLRRK1的表达则受到低温的抑制,ScmiR390-5p和SCLRRK1的表达在低温胁迫下呈负相关性;RLM-5′RACE分析表明,ScmiR390-5p作用于SCLRRK1的切割位点是ATTCCT//CCTGAGTT,马铃薯ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在低温响应中起作用。克隆结果表明SCLRRK1的CDS序列长度为2 685bp,编码894个氨基酸,DNA序列长度为3 549 bp,含有1个内含子、2个外显子、3′非编码区和5′非编码区,ScmiR390-5p的靶位点位于SCLRRK1 CDS序列内部(960—981 bp,GGAACTATTCCTCCTGAGTTT)。生物信息学显示SCLRRK1是1个富含亮氨酸重复序列(leucine-richrepeat,LRR)的类受体蛋白激酶基因,编码的蛋白属于跨膜分泌蛋白。马铃薯组织表达RT-qPCR分析显示,ScmiR390-5p在叶中的表达量最高,根次之,茎中(地上茎、块茎和匍匐茎)表达量较低;而SCLRRK1的表达情况与ScmiR390-5p相反,其在叶中的表达最低,在茎中表达最高(匍匐茎>块茎>地上茎)。多种非生物胁迫结果显示,ScmiR390-5p和SCLRRK1表达在NaCl胁迫下呈负相关,ScmiR390-5p受到NaCl胁迫诱导表达。与对照相比,ABA和6-BA处理下ScmiR390-5p表达先下降之后呈波浪小幅回调;6-BA处理下SCLRRK1表达持续升高,ABA处理下SCLRRK1表达先上升后下降。GA3、PEG和IAA处理8 h时,ScmiR390-5p的表达达到峰值,GA3、PEG和IAA处理都能诱导SCLRRK1表达,但其变化趋势与ScmiR390-5p相关性不强。【结论】SCLRRK1具备编码LRR类受体蛋白激酶的核酸、氨基酸序列和结构基础,是ScmiR390-5p的靶基因;ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在马铃薯组织器官中具备明显作用;ScmiR390-5p在转录后水平通过抑制马铃薯SCLRRK1的表达对低温胁迫做出响应,同时,马铃薯ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在NaCl和6-BA胁迫响应中起作用,但不对ABA、GA3、IAA和PEG胁迫做出响应,ScmiR390-5p和SCLRRK1分别在转录水平受到ABA、GA3、IAA和PEG胁迫信号调控。 展开更多
关键词 马铃薯 ScmiR390-5p SCLRRK1 实时荧光定量PCR RLM-5′race
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茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化 被引量:4
16
作者 陈啸天 高丽萍 +3 位作者 赵磊 刘亚军 王云生 夏涛 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期707-713,共7页
儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基... 儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基因的1 944 bp的全长序列,开放阅读框区域为55~1 587 bp,编码510个氨基酸,推测其分子量为57.1 kDa,等电点为9.06。该基因重组至pET-32a(+)表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中温度诱导条件;利用钴离子吸附柱纯化了目的蛋白。该研究为开展F3’5’H酶的反应动力学、酶的器官组织定位等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 类黄酮3’ 5’-羟化酶 race 原核表达
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大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因的cDNA全长克隆及表达分析 被引量:5
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作者 刘士力 王雨辰 +4 位作者 张德华 张宇飞 练青平 李倩 胡廷尖 《中国农学通报》 CSCD 2013年第35期96-101,共6页
为了克隆分析大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因的cDNA序列,并研究该基因的组织表达规律。采用RT-PCR和RACE法,从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)肌肉中分离和克隆大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因。结果表明:大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因全长1710... 为了克隆分析大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因的cDNA序列,并研究该基因的组织表达规律。采用RT-PCR和RACE法,从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)肌肉中分离和克隆大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因。结果表明:大鳞副泥鳅β-肌动蛋白基因全长1710 bp,其中5'-UTR长73 bp,3'-UTR长509 bp,编码区长1128 bp,编码375个氨基酸。大鳞副泥鳅β-肌动蛋白与其他鱼类氨基酸的同源性大于98%,核苷酸同源性大于87%;系统进化分析表明:大鳞副泥鳅β-肌动蛋白在进化上高度保守;qRT-PCR结果表明:β-肌动蛋白基因在大鳞副泥鳅的肌肉、心、肝、脾、肠、胃、精巢和卵巢共8种组织中都有表达。研究结果不仅为利用β-肌动蛋白基因作为内参基因分析大鳞副泥鳅的基因表达研究提供了序列依据,而且可为大鳞副泥鳅的分子系统学研究提供序列参考。 展开更多
关键词 大鳞副泥鳅 race Β-肌动蛋白 CDNA
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人肝刺激因子基因5′-侧翼序列克隆和结构分析 被引量:3
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作者 王新楠 宋智刚 +3 位作者 吴媛 陈莉 赵彦艳 安威 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1171-1176,共6页
为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定... 为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定hHSS基因转录起始位点 。 展开更多
关键词 hHSS 5′-侧翼序列 5′race 基因转录
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湖羊Lrh-1基因cDNA序列及组织表达谱分析 被引量:4
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作者 王利红 高勤学 +1 位作者 张伟 王锋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1360-1368,共9页
本研究以湖羊肝脏为材料对肝受体类似物-1(Liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列进行RT-PCR和RACE测定,并用DNAman、Tmpred、Signal P 3.0、Expasy等生物信息学分析软件和在线工具,对Lrh-1cDNA序列及其蛋白的理化特性、跨膜... 本研究以湖羊肝脏为材料对肝受体类似物-1(Liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列进行RT-PCR和RACE测定,并用DNAman、Tmpred、Signal P 3.0、Expasy等生物信息学分析软件和在线工具,对Lrh-1cDNA序列及其蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽和二级结构进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法检测湖羊Lrh-1基因的组织表达谱。结果表明,湖羊Lrh-1基因cDNA序列全长1 488bp,与牛的核酸序列相似度最高,为98%,编码区共编码495个氨基酸,氨基酸序列与牛、人、马、猴、犬、小鼠、褐鼠的氨基酸同源性分别为98%、97%、96%、97%、97%、86%和86%;Lrh-1mRNA在湖羊脑、消化及生殖系统组织中均有表达且具有组织特异性,其中在下丘脑组织中的表达量相对最高。 展开更多
关键词 湖羊 肝受体类似物-1(Lrh-1) race 序列分析 组织表达
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小麦ζ-胡萝卜素脱氢酶cDNA全序列的克隆 被引量:7
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作者 丛玲 刘璐 +4 位作者 汪成 姚琴 汪越胜 杨广笑 何光源 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期1-3,共3页
目的:从普通小麦品种EM12中克隆ζ-胡萝卜素脱氢酶(ζ-carotene desaturase,ZDS)基因的cDNA全长序列。方法:根据已报道的EST序列,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,对EST两端未知序列进行扩增、克隆和测序。结果:克隆得到cDNA全长序列215... 目的:从普通小麦品种EM12中克隆ζ-胡萝卜素脱氢酶(ζ-carotene desaturase,ZDS)基因的cDNA全长序列。方法:根据已报道的EST序列,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,对EST两端未知序列进行扩增、克隆和测序。结果:克隆得到cDNA全长序列2150bp,其ORF序列为1707bp,预测编码568个氨基酸残基,推测蛋白质分子量62.5kDa,带有一段19aa的信号肽序列。结论:根据同源序列分析,该序列与水稻ZDS蛋白的同源性为97%,与玉米ZDS蛋白的同源性为91%,而且与其他高等植物的ZDS都具有较高的同源性。该基因序列的分离与克隆为进一步开展小麦β-胡萝卜素生物合成机制的研究和利用转基因技术提高小麦β-胡萝卜素含量的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ζ-胡萝卜素脱氢酶(ZDS) 小麦 race RT-PCR
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