大豆提取物-α-倒捻子素复合物的制备及其抗氧化活性

为提高难溶化合物α-倒捻子素溶解性,采用摇瓶-冷冻干燥法制备大豆提取物-α-倒捻子素复合物并对其进行结构表征和体外抗氧化活性评价。结果表明,在最佳工艺即大豆提取物质量浓度200 mg/mL、60℃、16 h、220 r/min下制得的复合物中α-倒捻子素溶解度为379.014μg/mL;复合物平均粒径为(1.21±0.015) nm,分布均一,且大豆提取物与α-倒捻子素之间可能通过氢键缔合;大豆提取物与α-倒捻子素具有协同抗氧化作用,大豆提取物-α-倒捻子素复合物对DPPH自由基和ABTS自由基清除作用强于同质量浓度的α-倒捻子素。

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的探究α-倒捻子素(α-mangostin)在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷(LPS/ATP)联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin干预组(分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组)。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,Western blot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解型半胱氨酸蛋白酶1(cleaved caspase-1)和白介素1β(IL-1β)表达及核因子κB(NF-κB)途径中p65的磷酸化水平(p-p65/p65)和BV-2细胞核中p65的表达。结果与Ctrl组相比,LPS/ATP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),但低浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin可显著改善LPS/ATP对小胶质细胞增殖活力的抑制作用(P<0.05),但高浓度(80μmol/L)α-mangostin可促进LPS/ATP对小胶质细胞的损伤(P<0.05)。与Ctrl组相比,40μmol/Lα-mangostin组小胶质细胞上清液中炎症因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白均无明显改变(P>0.05),而LPS/ATP组均显著增加(P<0.05);与LPS/ATP组相比,不同浓度α-mangostin干预组中IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和BV-2细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白表达随α-mangostin浓度的增加而依次降低,其中以LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组的降低程度最为明显(P<0.01)。结论α-mangostin可通过NF-κB途径抑制BV-2细胞中NLRP3炎性小体活化所介导的神经炎症反应。

α-倒捻子素/甘草酸纳米胶束的制备、表征及评价

制备α-倒捻子素/甘草酸纳米胶束(α-Mangostin/glycyrrhizic Acid Nanomicelles,α-MG/GA NMs),以提高α-倒捻子素(α-Mangostin,α-MG)的溶解度和抗氧化活性。以甘草酸(Glycyrrhizic Acid,GA)为载体制备α-MG/GA NMs,并进行工艺优化,表征和体外释放度、体外抗氧化活性评价。结果表明,在最佳工艺下制得的α-MG/GA NMs中α-MG溶解度为232.65μg/mL,比水中溶解度大了近1163倍;α-MG/GA NMs粒径为123.46 nm、PDI为0.24、Zeta电位为-20.94 mV;透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)显示其为类球形;冻干后在光照、高温、高湿条件下稳定性良好;傅里叶红外光谱(FT-IR)显示α-MG与GA可能发生氢键相互作用;体外释放结果表明α-MG/GA NMs能促进α-MG释放,具有缓释效果,在pH值7.4、5.0的释放介质中24 h累积释放率分别为47.03%、40.56%;与游离α-MG相比,α-MG/GA NMs的抗氧化活性更强,且GA与α-MG具有协同抗氧化作用,对DPPH自由基、ABTS+自由基清除作用的协同指数(CI值)分别为0.62、0.58。该研究制备的α-MG/GA NMs提高了α-MG的溶解度与抗氧化活性,为α-MG在食品、药品、化妆品等领域的应用提供了理论基础。

山竹中α-倒捻子素的生物活性研究进展

山竹(Garcinia mangostana L.)是一种具有营养和药用价值的热带水果,在传统医学中,其果皮常被用于治疗溃疡、炎症、疼痛、腹泻、痢疾和创伤等。山竹广泛的生物活性可能与山竹中的主要活性成分α-倒捻子素有关。α-倒捻子素是山竹果的主要成分,在山竹的多个部位均有分布,包括果壳,果实和树皮等,近年来受到广泛关注。然而,目前还缺乏对α-倒捻子素生物活性的全面总结,这不利于α-倒捻子素的开发。为进一步促进山竹的商业化,本文综述了近年来有关α-倒捻子素生物活性及其分子机制的研究报道,为α-倒捻子素的进一步开发利用提供理论依据。

α-倒捻子素调节骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的研究α-倒捻子素对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法先分离培养人原代OA软骨细胞,分别给予5、10、20μmol/L的α-倒捻子素处理后24、48、72 h运用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、MMP-3、MMP-13、过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、PPARδ、过氧化物酶增殖激活受体γ共激活子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;ELISA法检测细胞培养上清中的Ⅱ型胶原蛋白(collagen-Ⅱ)、蛋白多糖(proteoglycans,PG)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-6含有量。结果α-倒捻子素可显著促进细胞增殖,抑制细胞凋亡;显著促进Collagen-Ⅱ和PG的产生;显著抑制MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达;显著促进PPARγ、PPARδ、PGC-1α的表达,抑制TNF-α的表达。此外,α-倒捻子素还可显著抑制IL-1β和IL-6的产生。结论α-倒捻子素可通过增加PPARδ、PPARγ的表达,促进OA软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡和炎性反应,从而延缓关节软骨的破坏和退变。

应用Alamar Blue法与试管法测定α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核杆菌活性

选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。

α-倒捻子素对MKN45胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响及其作用机制

目的:探讨α-倒捻子素对人胃癌细胞MKN45增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响及其作用机制。方法:MTS法研究α-倒捻子素对人胃癌细胞MKN45增殖的影响;伤口愈合实验及Transwell实验分别用于研究α-倒捻子素对MKN45细胞体外迁移及侵袭的影响;采用大鼠动脉环实验检测α-倒捻子素对MKN45胃癌细胞血管生成的影响;ELISA实验检测α-倒捻子素对MKN45细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)表达的影响等;Western blot检测α-倒捻子素对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、神经-钙黏素(N-cadherin)及上皮-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达的影响。结果:α-倒捻子素能够明显抑制人胃癌细胞MKN45的增殖,且具有剂量依赖性;α-倒捻子素能够明显抑制MKN45细胞的迁移和侵袭;动脉环实验结果显示α-倒捻子素能够抑制MKN45细胞诱导的血管生成。ELISA结果显示,α-倒捻子素能够抑制VEGF、TNF-α、TGF-β及b FGF的蛋白表达;Western blot结果显示α-倒捻子素能够下调MMP-2、MMP-9及神经-钙黏素的表达,同时上调上皮-钙黏素的表达。结论:α-倒捻子素能够抑制MKN45人胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成,其发挥作用可能与以下两方面机制相关:(1)抑制调控肿瘤细胞迁移及血管生成相关蛋白的表达;(2)抑制MKN45细胞的上皮间质转化。

α-倒捻子素通过加剧自噬影响胃癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨α-倒捻子素对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法CCK8法检测α-倒捻子素对SGC7901细胞活力的影响,免疫荧光和流式细胞术检测α-倒捻子素对SGC7901细胞凋亡及细胞周期的影响,Western blot法检测细胞凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。统计分析的正态性检验采用Shapir-Wilk;服从正态分布的多组间比较采用单因素方差分析;方差不齐时,采用Welch矫正检验,两两间比较采用Games-Howell检验。结果 CCK8法结果显示,不同浓度的α-倒捻子素(10、15、20、25、30μmol/L)处理后组间细胞活力的差异有统计学意义(P<0.05)。qPCR结果表明,LC3而非Caspase蛋白的mRNA水平与α-倒捻子素浓度呈正相关(r=0.976,P<0.05)。在15μmol/L而非10μmol/L的α-倒捻子素处理系统中,6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA,10μmol/L)、巴弗洛霉素A(10μmol/L)、LY294002(10μmol/L)等自噬抑制剂均能显著缓解α-倒捻子素对SGC7901细胞的杀伤作用(P<0.05)。结论α-倒捻子素可能主要通过诱导自噬性死亡而影响人胃癌细胞的活力。

α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制

目的探讨α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制。方法采用细胞增殖实验(MTS法)研究α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌细胞体外增殖的影响;采用裸鼠皮下移植瘤模型研究α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌体内生长的影响;采用Transwell实验研究α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌细胞侵袭的影响;采用免疫组织化学法研究α-倒捻子素对MCF-7乳腺癌皮下移植瘤组织中翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)、基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白表达的情况;采用Western blot研究α-倒捻子素对MCF-7细胞中Erk、P38、MMP-2及MMP-9蛋白表达的影响。结果体外增殖实验结果显示,α-倒捻子素能够抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,且具有浓度和时间依赖性;α-倒捻子素能够剂量依赖性地抑制MCF-7乳腺癌的体内生长;α-倒捻子素能够抑制MCF-7乳腺癌细胞的侵袭;免疫组织化学结果显示,α-倒捻子素能够下调TCTP、MMP-2及MMP-9的蛋白表达;Western blot结果显示,α-倒捻子素能够抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达,如磷酸化的Erk、磷酸化的P38、MMP-2及MMP-9。结论α-倒捻子素能够抑制MCF-7乳腺癌增殖、生长及侵袭,其机制可能与抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达有关。

RP-HPLC-UVD法测定莽吉柿中α-倒捻子素的含量

[目的]建立一种测定莽吉柿(Garcinia mangostana L.)中α-倒捻子素(alpha-mangostin)含量的方法。[方法]采用反相高效液相色谱-紫外检测法(RP-HPLC-UVD)测定。色谱条件:迪马公司DiamonsilTMC18色谱柱(250.0mm×4.6mm,5.0μm);流动相,甲醇-水(83∶17);流速,1.0ml/min;柱温,25℃;紫外检测波长,317nm。[结果]在选定的色谱条件下,反相高效液相色谱-紫外检测法符合精密度、准确度和线性(R2>0.999)的基本要求,加样回收率为98.9%,RSD为1.87%。3批莽吉柿样品中α-倒捻子素含量分别为36.4、37.3、38.5mg/g,平均含量为37.4mg/g。[结论]该方法简便,准确,灵敏度高,重现性好,可用于莽吉柿中α-倒捻子素含量的测定。

α-倒捻子素对帕金森病小鼠的神经保护作用

目的探讨α-倒捻子素对帕金森病小鼠的神经保护作用。方法2018年7月至2019年8月,将40只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为四组,分别为对照组、模型组、α-倒捻子素给药组(低剂量组、高剂量组),每组10只。模型组与α-倒捻子素给药组使用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病小鼠模型。α-倒捻子素给药组分别给予5 mg•kg^(−1)•d^(−1)、15 mg•kg^(−1)•d^(−1)的α-倒捻子素灌胃给药。给药后14 d,使用爬杆实验、转棒实验、悬挂实验观测小鼠的行为学表现;高压液相电化学技术测定纹状体多巴胺、高香草酸、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的含量;免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶(TH)表达;TUNEL染色检测细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组(9.3±1.7)s、(205.8±31.3)s、(2.2±0.4)分、(2051.4±195.2)ng/g、(1677.3±128.0)ng/g、(395.8±41.1)ng/g、(1.00±0.17)、(1.00±0.14)、(1.00±0.15)比较,模型组小鼠的爬杆时间(19.8±3.5)s升高,转棒停留时间(118.9±28.4)s和悬挂实验得分(1.0±0.3)分均降低;纹状体多巴胺(911.3±88.5)ng/g、高香草酸(11190.5±83.3)ng/g、DOPAC(187.9±20.3)ng/g含量降低;黑质区TH表达降低;黑质区细胞凋亡水平升高;黑质区B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)(0.23±0.11)表达量降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)(3.15±0.42)和活化胱天蛋白酶-9(cleaved-caspase-9)(4.27±0.52)表达量升高(P<0.05)。与模型组比较,低剂量组和高剂量组小鼠的爬杆时间[(15.4±3.1)s、(11.9±2.6)s]降低,转棒停留时间[(166.7±19.9)s、(192.1±21.5)s]和悬挂实验得分[(1.5±0.4)分、(1.9±0.6)分]均升高;纹状体多巴胺[(1388.6±159.9)ng/g、(1728.2±180.6)ng/g]、高香草酸[(1366.7±109.2)ng/g、(1510.8±112.4)ng/g]、DOPAC[(266.5±33.7)ng/g、(320.3±40.4)ng/g]含量升高;黑质区TH表达升高;黑质区细胞凋亡水平降低;黑质区Bcl-2表达量[(0.44±0.19)、(0.94±0.22)]升高,Bax[(2.06±0.38)、(1.18±0.20)]和cleaved-caspase-9表达量[(2.29±0.43)、(1.30±0.28)]降低(P<0.05)。高剂量组的上述指标均优于低剂量组(P<0.05)。结论α-倒捻子素可以改善帕金森病小鼠的行为学表现,上调多巴胺及其代谢产物的含量,促进TH表达,抑制细胞凋亡水平。

HPLC法测定α-倒捻子素在小鼠体内的组织分布

目的:建立高效液相色谱法测定小鼠组织样品中α-倒捻子素的含量,研究其在小鼠体内的分布特征。方法:小鼠尾静脉注射α-倒捻子素注射液,不同时间点采集组织样品,采用高效液相色谱法测定其组织分布变化。结果:不同组织中α-倒捻子素在0.10~10.00μg·ml^(-1)(r≥0.99)范围内线性良好,低、中、高浓度的提取回收率分别为(74.65±2.76)%,(75.97±2.16)%,(79.83±2.30)%(n=5);相对回收率分别为(101.38±2.02)%,(101.82±2.77)%,(100.55±2.29)%(n=5)。α-倒捻子素在肺中分布最多,其次为脾、心、肾、肝,在脑组织中分布相对较低,给药2 h后脂肪组织中药物浓度显著性增加。结论:α-倒捻子素在小鼠多个脏器中均有分布,能透过血脑屏障,并且在周边室具有较强的组织亲和力。

α-倒捻子素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的：研究α-倒捻子素对过氧化氢（H2O2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用。方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H2O2处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H2O2对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19,再用200μmol/L H2O2处理24h,观察细胞活性变化。流式细胞仪检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平变化,免疫印迹法（Western blot）检测NF-kB蛋白表达变化。结果：CCK8法检测结果显示：当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时,ARPE-19活性无明显变化;当浓度达到16μmol/L时,细胞活性开始下降（P〈0.05）。H2O2诱导后,当α-倒捻子素浓度在0～16μmol/L之内时,α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性。ROS结果表示：H2O2诱导后,ROS表达量增高（P〈0.05）;8和12μmol/Lα-倒捻子素预处理,均可有效清除H2O2诱导产生的ROS（P〈0.05）。Western blot结果显示：H2O2诱导后NF-kB蛋白表达增高（P〈0.05）,12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H2O2诱导后ARPE-19的NF-kB蛋白表达（P〈0.05）。结论：H2O2诱导ARPE-19细胞氧化损伤,造成细胞活性下降,ROS表达量增加,经过α-倒捻子素预处理后,可有效提高细胞活性,清除ROS,活化NF-kB。

α-倒捻子素抑制阿霉素诱导的小鼠局灶节段性肾小球硬化

目的:观察α-倒捻子素(alpha-mangostin,α-MG)治疗对阿霉素诱导的局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomurularsclerosis,FSGS)的肾脏保护作用。方法:BALB/c小鼠尾静脉注射阿霉素(10mg/kg)诱导阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)模型后分为两组:1)AN+生理盐水组,用生理盐水灌胃;2)AN+α-MG组,用α-MG(12.5 mg/kg)灌胃。灌胃每日1次,从阿霉素注射当日开始。另取10只小鼠作为对照组。6周后处死小鼠,在光学显微镜下观察肾组织病理学改变;检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血胆固醇等肾功能相关生化指标水平;检测肾组织中超氧阴离子,丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;检测血清中IL-1β,IL-18,IL-10,脂联素水平;用免疫组织化学、RT-PCR和Western印迹检测肾组织中TGF-β1,I型胶原蛋白(collagen I,Col I),α-SMA,沉默信息调控因子1(silent information regulator 1,Sirt1),核苷酸结合结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平。结果:α-MG治疗可降低AN小鼠血肌酐、蛋白尿、尿蛋白/尿肌酐、血胆固醇,增加肌酐清除率、血浆白蛋白(P<0.05);缓解肾小球硬化和间质纤维化;下调纤维化指标Col I和α-SMA的表达(P<0.05);减少肾组织超氧阴离子的产生,降低MDA和GSH水平以及增加CAT和SOD活性(P<0.05);降低血清炎性因子IL-1β和IL-18水平,升高抗炎因子IL-10和脂联素水平(P<0.05);促进肾组织中Sirt1表达,抑制NLRP3的表达(P<0.05)。结论:α-MG治疗能够改善阿霉素诱导的FSGS小鼠肾功能,延缓肾小球硬化和间质纤维化进程。α-MG通过促进肾脏Sirt1表达和抑制NLRP3表达而发挥抗炎和抗氧化作用。

α-倒捻子素对癫痫小鼠学习记忆及海马神经元的保护作用

目的:探讨α-倒捻子素对癫痫小鼠学习记忆及海马神经元的保护作用。方法:50只ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组:正常对照组、模型组及α-倒捻子素低、中、高剂量组,每2 d腹腔注射1次戊四氮,共28 d,构建癫痫小鼠模型。α-倒捻子素灌胃给药28 d后,根据Racine分级标准评价小鼠行为学改变;Morris水迷宫试验检测小鼠空间学习和记忆能力;TUNEL染色和Western blot检测海马区神经元凋亡情况和凋亡相关蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马区炎症因子含量,包括白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α);Western blot检测NRF2/HO-1信号通路相关蛋白的表达。结果:模型组小鼠均出现肢体阵挛、频繁点头、摔倒等癫痫症状,达到RacineⅤ级发作标准,而α-倒捻子素组小鼠潜伏期延长,发作程度减轻,持续时间缩短,且高剂量的作用优于中、低剂量。与模型组比较,α倒捻子素高剂量组小鼠跨平台潜伏期显著缩短,跨平台次数显著增加,神经元凋亡显著减少,海马组织中Caspase-3蛋白表达及TNF-α、IL-1β含量显著降低,Livin、NRF2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:α-倒捻子素治疗癫痫小鼠可改善其空间学习记忆能力,抑制海马神经元凋亡,降低炎症水平,其作用机制可能与活化NRF2/HO-1信号通路有关。

α-倒捻子素对奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺上皮细胞促炎反应的抑制作用

本试验旨在探索α-倒捻子素对奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌诱发感染奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)促炎反应的抑制作用。用微量稀释法测定α-倒捻子素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);CCK-8法测定α-倒捻子素的细胞毒性作用;RT-PCR和ELISA法分别测定细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA和蛋白表达水平;Western Blot法测定NF-κB p-p65蛋白的表达量。结果显示:α-倒捻子素对金黄色葡萄球菌的MIC为1.6μg/mL;α-倒捻子素在0~3.2μg/mL范围内对bMECs增殖没有明显的影响(P>0.05);添加不同终浓度的α-倒捻子素(0.4、0.8μg/mL和1.6μg/mL)不仅均能抑制金黄色葡萄球菌入侵bMECs(P<0.01),还能显著抑制金黄色葡萄球菌感染bMECs引起的TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA转录水平和蛋白水平的升高(P<0.01);金黄色葡萄球菌感染bMECs后可显著上调NF-κB p65蛋白磷酸化水平(P<0.01),添加0.4μg/mL和1.6μg/mL终浓度的α-倒捻子素可显著降低p65蛋白磷酸化水平(P<0.01),但是添加0.8μg/mL终浓度的α-倒捻子素也能降低p65蛋白的磷酸化水平,但无统计学意义(P>0.05)。结果表明α-倒捻子素对金黄色葡萄球菌有较强的抗菌作用,能够显著抑制金黄色葡萄球菌对bMECs的侵袭,有效缓解金黄色葡萄球菌感染bMECs引起的TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的上调,其抗炎的分子机理可能与NF-κB信号通路相关。

α-倒捻子素衍生物合成及其抑制磷酸二酯酶4活性研究

以α-倒捻子素为先导化合物设计合成一系列衍生物并测试其对磷酸二酯酶4(PDE4,phosphodiesterase 4)的抑制活性。首先α-倒捻子素在DDQ作用下氧化环合得到中间体1,然后经烷基化、还原、水解、酰化等化学反应合成6-位取代的目标化合物;采用[3H]标记液体闪烁计数法测试了衍生物体外抑制PDE4活性。最终设计、合成了11个目标化合物,其结构经1H NMR、13C NMR、HRMS等波谱数据分析确证。活性测试结果表明7个化合物(4a、4b、5、6、8、11和13)的PDE4抑制活性强于α-倒捻子素,其中化合物5的活性最强(IC_(50)=247 nmol/L)。

α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症

旨在证明α-倒捻子素可以缓解脂多糖(LPS)诱导的IEC-6细胞的炎症并揭示其机制。笔者在体外培养的IEC-6细胞中构建LPS诱导的炎症模型,并通过流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、定量PCR(Q-PCR)、蛋白印迹(Western blot)的方法检测α-倒捻子素对LPS诱导的炎症是否有缓解作用。结果表明,5μmol·L-1的α-倒捻子素预处理可以显著降低LPS诱导的前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在IEC-6细胞中的分泌,以及环氧合酶2(COX-2)、IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P<0.05)。通过对炎症相关信号通路NF-κB的探究可见,α-倒捻子素能显著抑制Toll样受体4(TLR4)mRNA和NF-κB相关蛋白磷酸化IκBα(pIκBα)和磷酸化p65(pp65)的激活(P<0.05)。综上所述,α-倒捻子素可以通过TLR4/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导的IEC-6细胞的炎症,并且可能是治疗炎症疾病的潜在选择。

微乳载药体系对α-倒捻子素抗滑膜细胞增殖的增效作用研究

目的:α-倒捻子素(α-mangostin,MG)是一种具有潜在的抗风湿活性的多酚。为改善其药动学特性,我们制备了MG的微乳体系(MG-loaded microemulsion,MG-ME),本研究拟进一步揭示MG-ME可能存在的增效性特征。方法:本研究分析比较了MG-ME相对于其溶液在细胞摄取率、增殖抑制率、通路调控能力及体内关节保护效率等方面的差异。体外实验采用类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)为研究对象,MG在细胞内分布采用HPLC法测定,细胞活力采用MTT法测定,通路的调控作用采用Western blot法检测,体内药效以对佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠的治疗效果为依据。结果:微乳显著提高了细胞对于MG的摄取,强化了MG对HFLS-RA细胞中p38和NF-κB信号通路的调控,并对该细胞的体外增殖产生更为高效的抑制作用;同时相对于溶液体系,MG-ME进一步改善了药物对AA大鼠的关节保护作用。结论:结果表明微乳能增强滑膜组织对于MG的摄取,提高滑膜细胞对于药物刺激的敏感性,从而切实提高药物的体内疗效,是极具潜力且值得深入研究的抗风湿药物的有效载体。

α-倒捻子素新型给药系统研究进展

α-倒捻子素(α-MG)是从传统药材山竹干燥果皮中分离得到的氧杂蒽酮类化合物的主要成分之一,具有广泛的药理活性。其水溶性差,口服给药时生物利用度低,皮肤给药时渗透性差,毒副作用大,临床应用受限。该文对近年来国内外关于α-MG新型给药系统的研究进展进行了综述,考察α-MG新型给药系统,以解决α-MG成药性差的问题。