糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4表达变化及作用机制

目的:动态观察肾小球足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)在糖尿病大鼠模型肾组织中表达的变化,探讨α-actinin-4与蛋白尿发生的关系及导致其出现变化的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为两组:对照组及糖尿病组,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,分别于2、4、6、8周末检测每组大鼠24h尿蛋白定量并处死大鼠留取肾标本。电镜观察足细胞超微结构的变化;应用酶免法检测肾组织糖基化终产物(AGEs)的含量;应用免疫组化及Western-blot检测α-actinin-4蛋白的表达;RT-PCR检测α-actinin-4mRNA表达量的变化。结果:6周糖尿病组大鼠24h尿蛋白明显高于对照组(P<0.01),增高持续到8周(P<0.01);透射电镜显示8周糖尿病组大鼠足突出现节段性融合;从4周时糖尿病组大鼠肾组织AGEs含量明显升高(P<0.05),并持续到8周(P<0.01);与对照组相比,从4周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.05);与对照组相比,从2周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4mRNA表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.01)。结论:α-actinin-4表达降低参与了糖尿病大鼠蛋白尿的发生,而AGEs可能是导致α-actinin-4表达下调的原因之一。

糖尿病肾病患者肾小球中α-辅肌动蛋白-4和肾病蛋白的表达及其临床意义

目的通过检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中的表达，探讨其在糖尿病肾病患者蛋白尿发生中的作用。方法用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在测糖尿病肾病组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组患者肾小球组织中的表达。结果糖尿病肾病组nephrinmRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，糖尿病肾病组α-actinin-4mRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，两者表达存在正相关。结论糖尿病肾病患者肾小球组织nephrin和α-ctinin-4mRNA的表达减少，导致蛋白尿的产生。

六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的足细胞中α-辅肌动蛋白-4表达的影响

目的研究他克莫司( FK506)和嘌呤霉素( PAN)对肾小球足细胞凋亡和α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)mRNA及蛋白表达的影响,探讨FK506对足细胞的保护作用.方法体外培养小鼠肾小球足细胞,设置对照组、PAN组和FK506组,处理8 h、24 h、48 h后观察细胞形态,检测细胞凋亡率,并收集细胞进行实时荧光定量-PCR、Western blot检测α-actinin-4的mRNA及蛋白表达情况.结果 PAN组各时间段胞体面积较对照组明显缩小,FK506组胞体面积较PAN组增大.8 h时各组间足细胞凋亡率无明显差异(均P>0. 05);24 h及48 h时PAN组足细胞凋亡率[(8. 21 ± 0. 41)%、(16. 32 ± 0. 17)%]较对照组[(4. 28 ± 0. 35)%、(6. 27 ± 0. 28)%]明显升高,差异均有统计学意义(均P<0. 05),FK506组足细胞凋亡率[(6. 26 ± 0. 24)%、(13. 32 ± 0. 24)%]均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).8 h时各组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达无明显差异(均P>0. 05),24 h、48 h 时PAN组mRNA(2. 42 ± 0. 21、3. 78 ± 0. 25)和蛋白(0. 77 ± 0. 04、1. 22 ± 0. 10)表达量较对照组mRNA(1. 50 ± 0. 22、2. 15 ± 0. 15)和蛋白(0. 44 ± 0. 03、0. 83 ± 0. 07)显著增高,差异均有统计学意义(均P<0. 01);FK506组mRNA(1. 65 ± 0. 24、1. 70 ± 0. 32)和蛋白(0. 52 ± 0. 05、0. 56 ± 0. 07)表达量均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).结论 FK506可有效抑制PAN对足细胞的损伤作用,稳定α-actinin-4的表达,为临床应用FK506治疗肾小球疾病提供依据.

肾炎消白颗粒对糖尿病肾病大鼠α-actinin-4表达的影响

目的探讨肾炎消白颗粒对糖尿病肾病(DN)模型大鼠α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)表达的影响,探讨肾炎消白颗粒防治DN的机制。方法采用高糖、高脂饮食并行单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)方法致DN大鼠模型,随机分为空白对照组、模型对照组、盐酸贝那普利(洛汀新)组、肾炎消白颗粒高剂量组、肾炎消白颗粒低剂量组共5组。观察8周,检测大鼠尿白蛋白排泄率(UAE);将肾脏病理切片进行PAS染色,用光镜观察大鼠肾脏组织的病理改变;采用Westernblot技术检测大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达水平;采用RT-PCR方法检测大鼠肾组织α-actinin-4 mRNA表达。结果肾炎消白颗粒能明显降低尿UAE,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能减轻肾组织中系膜基质增生、基底膜的增厚及减轻足突的融合;采用Western-blot法,肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4 mRNA的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾炎消白颗粒能够降低DN模型大鼠尿UAE,通过上调DN大鼠肾脏足细胞相关蛋白α-actinin-4及α-actinin-4 mRNA的表达,降低尿蛋白的排出,达到保护肾脏的目的,延缓模型大鼠DN进展。

ACTN4在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测ACTN4蛋白及mRNA在肝细胞癌中的表达,探讨其与肝细胞癌患者临床病理特征的关系,并分析其与肝细胞癌患者术后生存期的关系。方法:利用qRT-PCR和免疫组化方法检测肝细胞癌标本及对应癌旁组织中ACTN4的表达,并利用统计学方法进行统计分析。结果:qRT-PCR结果发现ACTN4在肝细胞癌组织中表达显著高于癌旁组织,免疫组化结果发现肝细胞癌组织中ACTN4阳性率显著高于癌旁组织(P=0.029)。Mann-Whitney U检验发现肝细胞癌组织中ACTN4阳性表达与肝细胞癌患者淋巴转移情况呈正相关,且具有统计学意义,与其他临床病理特征无显著相关性。Kaplan-Meier生存曲线发现ACTN4阳性表达与患者术后生存期呈负相关,且具有统计学意义。结论:ACTN4在肝细胞癌的发生及进展中起着至关重要的作用。

ACTN4、HPV16 E7检测在食管癌患者诊断及预后判断中的价值

目的探讨α-辅肌动蛋白4(ACTN4)联合人乳头瘤状病毒(HPV)16 E7检测在食管癌患者诊断及预后判断中的价值。方法选取2019年1月至2021年5月该院收治的80例食管癌手术患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织ACTN4、HPV16 E7的表达,并分析HPV16 E7、ACTN4表达与临床病理特征及食管癌患者预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线对HPV16 E7、ACTN4用于诊断食管癌的价值进行分析。结果HPV16 E7在食管癌细胞膜和细胞质呈黄棕色,在食管癌组织中阳性表达率为70.00%(56/80),在癌旁正常组织阳性表达率为17.50%(14/80),两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。ACTN4位于细胞质和细胞膜上,呈现淡黄色,在ACTN4组织中阳性表达率为65.00%(52/80),在癌旁组织表达为22.50%(18/80),两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。HPV16 E7的阳性表达率与食管癌患者年龄、肿瘤最大径、肿瘤类型无关(P>0.05),而与病理分级、淋巴结转移、N分期、M分期有关(P<0.05);ACTN4的阳性表达与食管癌患者年龄、肿瘤最大径、肿瘤类型无关(P>0.05),而与病理分级、淋巴结转移、N分期、M分期有关(P<0.05)。HPV16 E7检测用于食管癌诊断的灵敏度为81.30%,特异度为80.70%,曲线下面积(AUC)为0.768;ACTN4检测的灵敏度为74.2%,特异度为76.5%,AUC为0.713;HPV16 E7、ACTN4联合检测的灵敏度为90.60%,特异度为86.20%,AUC为0.825。ACTN4阳性的食管癌患者的2年生存率为42.30%(22/52),ACTN4阴性的食管癌患者2年生存率为71.42%(20/28),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV16 E7、ACTN4均在食管癌中呈高表达,并且与病理分级、组织分期和淋巴结转移相关,二者联合检测对食管癌临床诊断及预后有重要价值。

ACTN4通过靶向NDUFV1对食管鳞状细胞癌的细胞增殖的影响

目的探究α-辅肌动蛋白-4(ACTN4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况及其对ESCC细胞增殖的影响。方法采用免疫组化实验检测ESCC组织及配对正常组织中ACTN4的表达,统计学方法分析ACTN4与临床病理特征的相关性;构建ACTN4 shRNA慢病毒表达载体,利用慢病毒包装技术建立ACTN4稳定低表达的ESCC细胞株,Western blot检测敲低效果,克隆形成实验检测ACTN4敲低对细胞增殖的影响;基于前期黑色素瘤A375细胞中ACTN4敲低的蛋白质组学分析结果,选取候选下游靶蛋白并在ESCC细胞中进行验证。结果免疫组化实验结果显示,ESCC组织中的ACTN4表达量高于正常组织(P<0.0001);成功构建ACTN4 shRNA慢病毒质粒并获得稳定低表达ACTN4的ECA109细胞株;克隆形成实验结果表明,ACTN4敲低抑制ECA109细胞的增殖;ESCC细胞中ACTN4的敲低下调NADH∶泛素氧化还原酶核心亚基V1(NDUFV1)蛋白的表达。结论ESCC细胞中,高表达的ACTN4能够促进细胞增殖,并上调NDUFV1的蛋白表达。

应用细菌双杂交系统技术寻找与人PCIA1基因相互作用的基因

目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原（homo sapiens cross-immune reaction antigen）基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒pTRG-cDNA文库大规模地共转化报告菌株,筛选并分离具有相互作用的pTRG-cDNA阳性克隆,经DNA序列分析和生物信息学确定靶基因。结果发现7种靶蛋白基因,其中3种基因功能尚不清楚,其余4种具有重要生理功能,突变或表达异常都会导致严重疾病;α-辅肌动蛋白-4（actinin,alpha4,ACTN4）、鞘脂激活蛋白原（prosaposin,PSAP）或真核翻译起始因子（eukary-otic translation initiation factor 3,subunit 10 theta,EIF3S10）过表达都会促进肿瘤发生和演进。结论细菌双杂交系统技术探测蛋白质之间的相互作用,是一种提供新基因功能研究信息的有效方法;PCIA1基因表达与肿瘤形成、侵袭和转移密切相关。