表达TGF-βⅡ受体的腺相关病毒载体抑制小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞的增殖和肺转移

目的研究腺相关病毒(AAV2)介导的TGF-βⅡ受体(TβRⅡ)胞外结构域和IgG2a Fc段融合基因对小鼠4T1细胞在体内增殖和迁移的影响。方法通过分子克隆构建表达sTβRⅡ-Fc的腺相关病毒核心质粒载体pAAV-sTβRⅡ-Fc,转染至HEK 293T细胞验证分泌性sTβRⅡ的表达。在HEK 293T细胞中共转染重组腺相关病毒核心质粒pAAV-sTβRⅡ-Fc、衣壳蛋白表达质粒pAAV2和辅助质粒pHelper以制备AAV2-sTβRⅡ,碘克沙醇密度梯度离心法纯化病毒。Western blot检测AAV2-sTβRⅡ对TGF-β信号通路下游关键蛋白Smad2/3磷酸化水平的影响,以及经治疗后各组小鼠4T1移植瘤内E-钙黏蛋白、波形蛋白、p-Smad2/3的表达水平。构建Luciferase标记的4T1细胞并荷瘤BALB/c小鼠,荷瘤小鼠随机分为处理组AAV2-sTβRⅡ、对照组AAV2-GFP和溶剂对照组PBS(6只/组),各组病毒均经尾静注射到小鼠体内。小动物活体成像观察AAV2-sTβRⅡ在小鼠体内对4T1移植瘤增殖的影响。免疫组织化学检测肿瘤组织Ki67蛋白的表达水平。免疫荧光检测小鼠肝脏内sTβRⅡ蛋白的表达水平。H&E染色观察小鼠肺部肿瘤转移灶和主要脏器的病理学改变。结果pAAV-sTβRⅡ-Fc重组质粒构建成功并在HEK 293T细胞中分泌表达sTβRⅡ。AAV2-sTβRⅡ能够感染4T1细胞并显著降低TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化(P<0.05)。AAV2-sTβRⅡ可显著抑制小鼠4T1移植瘤在体内的增殖(P<0.05)与肺转移,同时处理组肿瘤组织中E-钙黏蛋白表达水平显著上升(P<0.05)、波形蛋白表达水平显著下降(P<0.01)、Smad2/3磷酸化水平显著下降(P<0.05)、肿瘤组织Ki67蛋白显著下降。sTβRⅡ可在肝脏中表达,AAV2-sTβRⅡ未引起小鼠体质量下降和心、肝、脾、肾组织的病理学变化(P>0.05)。结论重组腺相关病毒载体AAV2介导的TβRⅡ胞外结构域编码序列,可阻断4T1细胞中的TGF-β信号通路,显著抑制小鼠体内4T1细胞增殖和肺转移。

肝豆灵片通过调控PKCβⅡ/ACSL4/ALOX5信号通路改善肝豆状核变性铁死亡的机制

基于PKCβⅡ/ACSL4/ALOX5信号通路,探讨肝豆灵片对TX小鼠肝豆状核变性铁死亡的影响以及对CuCl 2诱导的HT22细胞铁死亡的作用机制。将TX小鼠分为对照组、模型组、肝豆灵片组、Fer-1组、谷胱甘肽组,HT22细胞分为对照组、模型组、肝豆灵片组、Fer-1组、肝豆灵片+Fer-1组,采用HE染色检测各组小鼠海马组织病理学改变,蛋白质免疫印迹检测各组小鼠海马组织与HT22细胞中PKCβⅡ、ACSL4、ALOX5蛋白的表达,以及HT22细胞中SLC7A11、GPX4蛋白的表达,微量法检测各组TX小鼠海马组织中Fe 2+的浓度,微板法检测各组HT22细胞中SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)、GSH-Px水平,实时荧光定量聚合链式反应检测各组HT22细胞中PKCβⅡ、ACSL4、ALOX5 mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,模型组海马组织出现明显损伤,PKCβⅡ、ACSL4、ALOX5蛋白表达均明显增高,SLC7A11、GPX4蛋白表达明显下降,Fe 2+的浓度明显升高(P<0.05);与模型组相比,肝豆灵片组、Fer-1组和谷胱甘肽组海马组织的病理损伤均得到改善,且肝豆灵片组效果明显;肝豆灵片组和Fer-1组能抑制HT22细胞铁死亡,PKCβⅡ、ACSL4、ALOX5蛋白与mRNA表达较模型组均明显减少,MDA的浓度明显降低(P<0.05),SOD活力及GSH-Px浓度明显增加(P<0.05)。肝豆灵片能减轻TX小鼠海马组织铁死亡,抑制CuCl 2诱导的HT22细胞铁死亡,其机制可能与下调PKCβⅡ/ACSL4/ALOX5信号通路,减轻细胞内脂质过氧化有关。

11味中药多糖提取物对不同MHCB-LβⅡ基因型鸡新城疫抗体水平和IFN-γ、IL-4含量的影响

为探讨11味中药多糖提取物对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响,采用PCR-RFLP方法将1日龄雄性良凤青脚麻鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,并分别给予高、中、低剂量中药多糖提取物和生理盐水,采用ELISA法测定血清中新城疫抗体水平和IFN-γ、IL-4含量。结果显示:(1)不同剂量中药多糖提取物能提高各MHC B-LβⅡ基因型鸡ND抗体水平和IFN-γ、IL-4含量,且高剂量组中AA基因型个体高于AB、BB基因型个体,中、低剂量组中AB基因型个体高于AA、BB基因型个体;(2)AA基因型个体ND抗体水平和IFN-γ含量在高剂量组高于中、低剂量组,AB、BB基因型个体ND抗体水平和IFN-γ、IL-4含量在中剂量组高于高、低剂量组。结果表明11味中药多糖提取物能不同程度促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡ND抗体生成和细胞因子IFN-γ、IL-4的分泌,且在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡中的最适免疫调节剂量不同。

PKC-βⅡ、NF-κBp50在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的研究蛋白激酶C-βⅡ(Protein kinase C-βⅡ,PKC-βⅡ)、核因子κBp50(Nuclear factor of kappa Bp50,NF-κBp50)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达情况与其意义。方法采用免疫组化方法检测68例DLBCL,7例淋巴结反应性增生中PKC-βⅡ、NF-κBp50的表达。结果 PKC-βⅡ、NF-κBp50在68例DLBCL的阳性表达率分别为77.94%(53/68)和70.59%(48/68)。PKC-βⅡ在DLBCL亚型中表达的差异有统计学意义(P<0.001),NF-κBp50在DL-BCL亚型中表达的差异具有统计学意义(P<0.05),PKC-βⅡ、NF-κBp50在DLBCL中non-GCB(非生发中心型)中表达高于GCB(生发中心型)。它们在性别、民族、年龄、部位方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。PKC-βⅡ与NF-κBp50在DLBCL中的表达呈正相关(rs=0.429,P<0.001)。结论 PKC-βⅡ和NF-κBp50在DLBCL不同亚型之间表达的差异,可能有助于DLBCL亚型的诊断和预后的判断。PKC-βⅡ对NF-κBp50表达有正向调节作用,在DLBCL的发生和发展中起着重要的作用。

加味补肝汤对实验性糖尿病大鼠坐骨神经PKC-βⅡ表达的影响

目的观察加味补肝汤对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠坐骨神经PKC-βⅡ表达的干预效应,探讨其对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用。方法选用健康的雄性Wistar大鼠60只,随机取40只用1%链脲佐菌素50 mg/kg诱发糖尿病模型,20只注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。分别于治疗后第4周、8周末2个时间点用免疫组织化学法检测坐骨神经中PKC-βⅡ蛋白的表达,通过Motic Images Advanced彩色图文分析系统分析免疫组化PKC-βⅡ的效果。结果在第4周、8周模型组坐骨神经中PKC-βⅡ阳性的表达比正常组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),加味补肝汤干预后PKC-βⅡ的阳性表达比模型组表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味补肝汤能抑制糖尿病大鼠坐骨神经中PKC-βⅡ的表达,对糖尿病大鼠周围神经病变有一定的干预作用。

肺癌中蛋白激酶C-α、βⅡ及δ的表达及意义

目的检测PKCα-、β-Ⅱ、-δ在肺癌中的表达以探讨其与肺癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测84例肺癌原发灶及30例非小细胞肺癌淋巴结转移灶中PKC-α、-βⅡ、-δ的表达,分析其在肺癌的不同组织类型、不同分化程度以及原发灶与淋巴结转移灶之间表达的差异及意义。结果PKC-α、-βⅡ与-δ在84例肺癌的阳性率分别为61.9%、70.2%和66.7%,在不同肺癌组织类型之间差异无显著性。PKC-α阳性率在小细胞癌(SCLC,58.3%)与非小细胞肺癌(NSCLC,62.5%)及其高中分化组(70.2%)与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-βⅡ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(75.0%)及其高中分化组(74.5%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-δ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(70.8%)及其高中分化组(78.7%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(56.0%)之间差异无显著性。比较PKC-α、-βⅡ与-δ在30例淋巴结转移NSCLC的原发灶与转移灶的表达,3组阳性率差异无显著性。结论PKC-α、-βⅡ与-δ的异常激活,在肺癌发生、发展过程中起重要作用。但3种亚型的作用各有不同,PKC-βⅡ可能是促进癌前病变的增生;PKC-α过表达与PKC-δ表达降低促进癌细胞增殖与凋亡减少,而癌分化降低、恶性程度增加。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中TLR4介导的MyD88依赖性途径的影响

试验旨在探讨不同剂量中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低剂量组和对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h收集细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6mRNA的表达量(P<0.05);中、低剂量组AA基因型鸡TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于高剂量组(培养16h时TLR4基因除外),高剂量组BB基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养32和48h时TLR4基因除外)),低剂量组BC基因型TLR4、MyD88、TNAF-6基因的表达量高于其他剂量组(培养16h时TLR4基因除外)。结果表明,中药复方多糖发挥机体免疫调节作用的机制是通过与淋巴细胞表面TLR4结合,激活下游MyD88依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,且不同MH-C B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响

探讨中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4信号转导通路下游TRIF依赖性途径主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终质量浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低、对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测TRIF、IRF3、IFN-β基因mRNA的表达。结果显示:(1)与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P<0.05)。(2)中、低剂量中药复方多糖组AA基因型鸡TRIF、IRF3基因mRNA的表达量各个时间段均高于高剂量组,IFN-β在24、32、48h高于高剂量组,高剂量中药复方多糖组BB基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组,低剂量中药复方多糖组中BC基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组。表明中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,并且对促进其信号通路主要元件mRNA的表达的最适cCHMPS剂量有一定的影响。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞免疫信号分子表达的影响

试验旨在探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响。采用PCR-SSCP方法对500只试验鸡进行MHC B-LβⅡ基因分型,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为200、100、75、50、25、0μg/mL的中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用ELISA方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养液中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、钙离子(Ca^(2+))、一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量(P<0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量最高,BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为75μg/mL时,AA基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca^(2+)、NO和iNOS的含量最高。本试验结果表明,中药复方多糖能不同程度地提高各MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP、cAMP、NO、Ca^(2+)和iNOS的含量,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。

TGF-βⅡ型受体与Fn在小鼠肾泌尿小管发育中的表达

目的观察转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)及纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾泌尿小管发育中的时空性表达,探讨TGF-βRⅡ和Fn与泌尿小管发育的关系。方法采用免疫组织化学技术结合体视学方法,测定不同胚龄(E12、14、16、18 d)及生后日龄(P1、3、7、14、21、28、42 d)小鼠肾泌尿小管TGF-βRⅡ和Fn的表达及其含量变化。结果TGF-βRⅡ在各期肾小管及集合管内均有表达,其表达量随着发育逐渐增加,但在各期近端小管强烈表达,各期集合管表达较强,而各期远端小管表达较弱;Fn在各期肾小管、集合管的基底膜处均有表达,其表达量随着发育逐渐增加。结论TGF-β和Fn可能对小鼠肾泌尿小管的发育以及成熟泌尿小管结构的维持起重要作用。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、IL-8和TNF-α mRNA表达量的影响

探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、TNF-α、IL-8mRNA表达量的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC BLβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量(P<0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高。中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量略有不同。

胰腺癌中TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的研究

目的:通过对TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的基因表达分析,了解两种受体的基因表达与胰腺癌的相关性。方法:对12例正常胰腺组织和35例胰腺癌标本进行ABC免疫组织化学染色分析,P<005有意义。结果:TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的阳性率分别为686%(24/35)和60%(21/35)两者均阳性为514%(18/35);并发现两种受体的基因表达与胰腺癌的分期有关(P<001),而TGFβⅡ受体与胰腺癌的分化程度有关(P<005)。结论:提示两种受体的表达与胰腺癌的发生有关,且对此癌的诊断有意义。

转化生长因子βⅡ型受体与纤维连接蛋白在小鼠肾发育中的表达

目的观察转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)及纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨TGF-βRⅡ和Fn与肾发育的关系。方法采用免疫组织化学技术,结合免疫印迹法,检测不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织TGF-βRⅡ和Fn的表达及其含量变化。结果TGF-βRⅡ在各期肾小体、肾小管及集合管内均有表达,并随肾的发育其表达量逐渐增加(P﹤0.05);Fn在除逗号小体以外的各期肾小体、肾小管及集合管的基底膜处均有表达,随着肾的发育其表达量逐渐增加(P﹤0.05)。结论TGF-β和Fn可能对小鼠肾发育以及成熟肾脏各结构的维持起重要作用。

二甲基亚硝胺致大鼠肝癌前病变TGF-βⅡR的表达及中药的调节

目的 :研究二甲基亚硝胺 ( DMN)致大鼠肝癌前病变肝组织 TGF- β R的表达及中药的调节作用。方法 :以 DMN诱导大鼠肝硬化、肝癌前病变模型 ,免疫组化 ABC法检测肝组织 TGF- β R的表达和分布。结果 :DMN腹腔给药 18周 ,致肝硬化、肝癌前病变大鼠模型 ,表现为血清γ- GT、AFP的增高 ,肝细胞异常增生 ,肝组织 TGF- β R的表达显著降低 ;人参鳖甲煎丸可有效阻止或延缓肝硬化及肝细胞的异型增生。结论 :人参鳖甲煎丸预防肝组织癌变的机理可能是诱导肝细胞表达 TGF- β R。

一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ型受体的构建

目的设计并构建一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ受体(tTGF-βRⅡ)。方法 RT-PCR方法扩增TGF-βⅠ的CDS序列、tTGF-βRⅡ,并将其分别克隆至pGBKT7和pGADT7载体中。利用酵母双杂交和GST-pulldown试验检测tTGF-βRⅡ与TGF-βⅠ间的相互作用。人工合成该tTGF-βRⅡ多肽。结果成功地设计并克隆了一种新的tTGF-βRⅡ,其可以与配体TGF-βⅠ结合。结论制备的tTGF-βRⅡ可以作为TGF-βRⅡ的拮抗剂,竞争性的与TGF-βⅠ结合,为瘢痕治疗奠定了基础。

转化生长因子βⅡ在胃癌、肠化组织中的表达及细胞凋亡的研究

目的 探讨正常胃粘膜、胃粘膜肠化生组织及胃癌组织中TGF βⅡ的表达及细胞凋亡情况。 方法 采用免疫组化法检测其TGF βⅡ表达 ,采用DNA原位末端标记法 (TUNEL)检测其细胞凋亡。 结果 正常胃粘膜、肠化生组织及胃癌的细胞凋亡指数(% )分别为 1 72 7± 1 5 93、5 16 1± 4 6 73、1 6 2 2± 2 46 9;TGF βⅡ阳性率分别为 10 % (1/10 )、2 9 5 % (13/4 4 )、73 6 % (31/4 2 )。 结论 由正常胃粘膜、肠化生到胃癌TGF βⅡ表达率逐渐上升 ,而细胞凋亡指数则肠化组织中最高 ,胃癌组织中较低 ,提示TGF βⅡ。

转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:针对转化生长因子-!(TGF-β)Ⅱ型受体基因的不同部位,构建不同TGF-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA(shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法:用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1neovector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果:3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论:成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3,并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。

噬菌体肽库筛选转化生长因子βⅡ型受体亲和肽

目的:从噬菌体随机肽库中筛选转化生长因子β(TGF-β)Ⅱ型受体的亲和短肽。方法:以重组可溶性人TGF-βⅡ型受体作为靶标,应用噬菌体随机十二肽库进行筛选,经过3轮淘选,提取阳性噬菌体克隆ssDNA,测序并进行序列分析。结果:通过筛选噬菌体获得富集,挑选10个能与人TGF-βⅡ型受体特异性结合的噬菌体克隆,测序得到4个核酸序列,未发现共有保守序列。结论:通过噬菌体肽库技术能筛选出与TGF-βⅡ型受体结合的噬菌体展示肽,为进一步研究TGF-βⅡ型受体亲和短肽及在抗肝纤维化中的作用提供依据。

道地通管汤对输卵管炎大鼠转化生长因子-βⅡ型受体和Smad2的mRNA表达的影响

目的观察道地通管汤对输卵管炎大鼠输卵管组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)mRNA和Smad2 mRNA的影响。方法 68只雌性SD大鼠,随机抽取12只作为正常组,剩余大鼠采用混合菌制成输卵管炎模型,建模成功的48只大鼠分为模型组和道地通管汤低、中、高剂量组,各12只。正常组与模型组给予生理盐水灌肠,道地通管汤低、中、高剂量组分别给予不同浓度的道地通管汤灌肠[0.35 g/(100 g·d)、0.7 g/(100 g·d)、1.4 g/(100 g·d)],并于给药第15天、30天随机抽取每组6只大鼠检测其输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的相对表达量情况。结果 (1)与正常组比,模型组给药第15、30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均增高(P<0.05);道地通管汤各剂量组给药第30天时,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)与模型组比,给药第15、30天时道地通管汤中、高剂量组TGF-βRⅡ和Smad2mRNA的表达量均降低(P<0.05),给药第15天时道地通管汤低剂量组TGF-βRⅡ的表达量也降低(P<0.05)。(3)道地通管汤各剂量组中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量呈低剂量组>中剂量组>高剂量组,给药第30天时道地通管汤低剂量组与道地通管汤高剂量组的TGF-βRⅡ表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)道地通管汤各剂量组中,给药第30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均低于给药第15天,其中道地通管汤各剂量组中Smad2 mRNA的表达量组内比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论道地通管汤能抑制输卵管炎性大鼠输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2的mRNA表达;道地通管汤给药30 d作用效果较好,且道地通管汤中剂量与高剂量作用效果相近。

转化生长因子βⅡ型受体-IgG Fc嵌合蛋白的基因治疗改善环孢霉素A的肾脏毒性

目的 本研究旨在探讨转化生长因子 βⅡ型受体 IgGFc(TGF βRⅡ /IgGFc)嵌合蛋白基因转染对小鼠环孢霉素A(CsA)肾毒性的作用。方法 雌性ICR小鼠予低钠饮食 1周后分为 3组 ,每组 6只 ,CsA组和TGF βRⅡ /IgGFc干预组每日皮下注射CsA 2 5mg/kg ,对照组每日皮下注射等量橄榄油。在给药的第 1天和第 7天 ,CsA组在布比卡因预处理的胫骨肌处注射 5 0 μgpCAGGS lacZ ,TGF βRⅡ /IgGFc干预组注射等量 pCAGGS TGF βRⅡ /IgGFc,均联合电穿孔 ,给药2周后处死。采用Northernblot测定肾组织中TGF β1mRNA水平 ,采用免疫组织化学和ELISA法测定肾组织和血浆中TGF β1蛋白水平。利用石蜡切片PAS和Masson’strichrom染色半定量评分评估肾小管损害和肾间质纤维化程度。结果 CsA用药 2周后 ,CsA组血浆和肾脏TGF β1表达持续增高 ,小管间质病变明显 ;TGF βRⅡ /IgGFc干预组血浆TGF β1水平与对照组相仿 ,而肾组织TGF β1表达较CsA组降低 5 0 % (P <0 .0 1) ,对小管间质病变具有保护作用 (P <0 .0 1)。结论 TGF βRⅡ /IgGFc基因转染有效抑制了CsA引起的小管间质病变。