紫草素类化合物β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁的药理作用研究进展

紫草是紫草科紫草属多年生草本植物,是我国传统的中药植物。β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁是一种从紫草根部提取的紫草素类化合物,具有抗癌、抗炎、抑菌、抗病毒等多种药理活性。该文对β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁的药理作用及其机制的相关研究进行综述,为其临床应用提供理论依据。

紫草药材的HPLC指纹图谱研究及其β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁的含量测定

目的：研究紫草药材的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并测定其中β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁的含量。方法：色谱柱为ACEC18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-0．1％甲酸溶液（70：30，V/V），检测波长为516nm，流速为1．0ml／min。结果：所得紫草药材的HPLC指纹图谱分离度、精密度、重复性和稳定性均良好；10批紫草药材指纹图谱的相似度均〉0．950。β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁的进样量在0．3～9．0μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9999）；平均加样回收率为101．40％，RSD=4．08％（n=6）；不同产地紫草药材中肛乙酰氧基异戊酰阿卡宁的含量差异较大。结论：伊乙酰氧基异戊酰阿卡宁可作为紫草药材含量测定和指纹图谱研究的指标性成分。所半方法可以为2015年版《中国药典》紫草药材标准的修订提供一定的依据。

基于“辨色论质”的新疆紫草质量评价研究

目的:测量紫草的色泽,测定紫草中6个主要紫色素类成分(乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素)的含量,研究新疆紫草色泽与6个主要紫色素成分含量的相关性。方法:采用分光测色仪测定样品粉末的L、a、b值用于表征紫草的色泽。国际照明委员会(CIE)制定了Lab颜色模型,是人类视觉的数字化描述,L值越大表示亮度越大,a值增大表示偏红减小表示偏绿,b值增大表示偏黄减小表示偏蓝;采用高效液相色谱法(HPLC)测定紫色素类成分的含量,使用SPSS软件计算L、a、b值与6个主要紫色素含量的相关程度。结果:135批样品乙酰紫草素的含量为0.01%~3.39%,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量为0.00%~1.95%,去氧紫草素含量为0.00%~0.23%,异丁酰紫草素含量为0.01%~1.13%,异戊酰紫草素含量为0.02%~2.88%,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量为0.01%~2.17%。紫草药材的L(黑_白)色度值与乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁和异丁酰紫草素3个成分的含量呈显著负相关关系,斯皮尔曼相关系数在-0.138和-0.222之间;a(绿_红)色度值与β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁的含量均呈现显著的正相关,斯皮尔曼相关系数在0.176和0.355之间;b(蓝-黄)色度值与乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁均呈现显著的相关性,其中,与β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁呈正相关,系数为0.290,与其余4个成分呈负相关,系数在-0.325和-0.633之间。结论:建议紫草(新疆紫草)的含量测定项修订为β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁不得少于0.30%并且异丁酰紫草素不得少于0.29%。

新疆紫草野生品与栽培品的质量比较研究

目的:对新疆紫草野生品与栽培品的质量进行比较研究,包括性状对比和结合化学计量学分析新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分。方法:分别采集新疆紫草野生品与栽培品,对其性状进行对比;采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.05%甲酸水为流动相,检测波长275 nm,流速0.2 mL·min^(-1),对48批野生品和栽培品中的右旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素6个成分进行含量测定,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)分析野生品和栽培品中的差异性成分。结果:新疆紫草野生品与栽培品在性状上存在较大差异,建立的含量测定方法线性关系良好,r>0.999,平均加样回收率93.4%~102.9%,RSD<3.0%,不同批次新疆紫草中6个成分含量差异较大,其中野生品中右旋紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量均明显高于栽培品,说明野生品与栽培品还存在一定的差异;建立的PCA模型可区分野生品和栽培品,且通过OPLS-DA确定了异丁酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁是野生品和栽培品中的2个差异性成分。结论:通过对比野生品和栽培品的木心大小、栓皮卷曲程度以及特异性气味,可对二者进行初步鉴别;建立的含量测定方法重复性好,专属性强,稳定可行;确定了新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分,为新疆紫草的质量控制提供依据,为扩大紫草药源提供了思路。

LC-MS/MS测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分的含量

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~3 min,5%~95%A;3~7 min,95%A;7~7.01 min,95%~5%A;7.01~8.50 min,5%A);流速0.2 mL·min^-1,柱温35℃,进样量5μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量。结果:左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10.12~1012μg·L^-1(r=0.9981),10.88~1088μg·L^-1(r=0.9912),10.08~806.4μg·L^-1(r=0.9976),20.32~1016μg·L^-1(r=0.9966),10.37~1037μg·L^-1(r=0.9996),10.26~1026μg·L^-1(r=0.9978)均有良好线性关系(r≥0.9912);平均加样回收率分别为95.8%(RSD 3.2%),103.5%(RSD 2.3%),105.3%(RSD 2.1%),96.1%(RSD 3.3%),98.9%(RSD 2.7%),100.8%(RSD 3.4%)。13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异。结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据。

新疆紫草HPLC特征图谱和紫草类药材6种萘醌类成分含量测定

目的:采用高效液相色谱法建立新疆紫草药材的特征图谱,并同时测定5种紫草类药材(软紫草属新疆紫草、内蒙紫草、滇紫草属长花滇紫草、滇紫草属滇紫草、硬紫草属硬紫草)6个主要羟基萘醌色素类成分的含量,比较不同基原紫草的化学成分差异。方法:以紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素为对照品,采用YMC Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30)为流动相,流速1 m L·min^(-1),检测波长275 nm,柱温30℃;采用CHEMPATTERN化学计量学软件对结果进行处理分析。结果:建立新疆紫草特征图谱,标定10个特征峰,30 min内紫草的主要色谱峰能够达到完全分离,对5种紫草类药材6个特征峰成分进行含量测定。紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素质量浓度分别在2.13~1 065μg·m L^(-1)(r=0.999 3,n=6)、2.01~1 004μg·m L^(-1)(r=0.999 8,n=6)、2.05~1 026μg·m L^(-1)(r=0.999 7,n=6)、1.92~960μg·m L^(-1)(r=0.999 9,n=6)、2.00~1 001μg·m L^(-1)(r=0.999 8,n=6)和1.87~937μg·m L^(-1)(r=0.999 9,n=6)范围内线性关系良好,方法的平均回收率(n=6)分别为97.6%(RSD=1.9%)、96.6%(RSD=2.2%)、97.9%(RSD=1.1%)、98.4%(RSD=1.2%)、96.2%(RSD=1.1%)和97.3%(RSD=1.7%);19批新疆紫草中上述6个羟基萘醌类成分含量分别为0.01%~0.37%、0.02%~2.42%、0.02%~1.42%、0.02%~0.98%、0.05%~1.66%和0.09%~3.15%,2批内蒙紫草中均未检出β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁。结论:所建立新疆紫草特征图谱专属性强,结合6个主要羟基萘醌类成分含量测定能够区分各基原紫草,有助于全面评价紫草的质量,为规范紫草药材的使用提供科学依据。

一测多评法结合特征图谱的新疆紫草质量控制研究

目的:采用一测多评(QAMS)与特征图谱结合的方法测定紫草中8个羟基萘醌(紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素)的含量,并验证方法的准确性。方法:采用HPLC特征图谱进行色谱峰定位,并以乙酰紫草素为参照物,建立其对紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素的相对校正因子,用该校正因子进行相应成分的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定新疆紫草中8个羟基萘醌的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。色谱条件:采用Agilent ZOBAX XDB-Eclipse色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长275 nm,进样量10μL。结果:建立新疆紫草的特征图谱,标定了8个特征峰;12批样品色谱图的相似度均大于0.90。紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素进样量分别在1.032~412.8μg·mL^-1(r=0.9999)、1.002~400.8μg·mL^-1(r=0.9998)、1.032~412.8μg·mL^-1(r=0.9999)、1.053~421.2μg·mL^-1(r=0.9999)、1.016~406.4μg·mL^-1(r=0.9998)、1.045~418.0μg·mL^-1(r=0.9999)、1.030~412.0μg·mL^-1(r=0.9999)和1.007~402.8μg·mL^-1(r=0.9999)范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.4%(RSD=1.8%)、97.9%(RSD=1.9%)、98.6%(RSD=1.2%)、99.3%(RSD=1.6%)、101.1%(RSD=1.9%)、98.6%(RSD=1.3%)、99.0%(RSD=1.2%)和100.4%(RSD=1.4%)。紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素相对于乙酰紫草素的相对校正因子分别为1.263、1.161、0.938、1.840、1.039、1.138和0.932;且在不同实验条件下重现性良好(RSD<3.0%);一测多评法的计算结果与外标法实测值之间无显著差异。12批新疆紫草中紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素的含量范围分别为0.063%~0.222%、0.011%~0.053%、0.571%~1.621%、0.105%~0.364%、0.011%~0.059%、0.349%~0.727%、0.578%~1.353%和0.720%~1.761%。结论:建立的一测多评法结合特征图谱可用于新疆紫草中8个羟基萘醌类化学成分的含量测定,有效控制新疆紫草质量。

HPLC测定新疆紫草不同部位中8种羟基萘醌的含量

建立同时测定新疆紫草Arnebia euchroma不同部位中左旋紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素等8种羟基萘醌含量的高效液相色谱法。采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30),检测波长275 nm,流速1mL·min^(-1),柱温30℃。定量结果显示,新疆紫草各部位中主要成分含量差异较大,根皮含量最高,其次是根,再次是茎残基,根木质部和地上部分含量较低。本研究为确定紫草药用部位提供科学依据。

三裂蟛蜞菊化学成分的研究

目的研究三裂蟛蜞菊Wedelia trilobata的化学成分。方法利用硅胶柱色谱技术分离成分,根据理化性质和光谱分析鉴定结构。结果从三裂蟛蜞菊地上部分分离得到11个化合物,分别鉴定为大花蟛蜞菊烯酸(grandiflorenic acid,4α-kaur-9(11),16-dien-19-oic acid,1)、1α-acetoxy-6α,9β-dihydroxy-4,10α-di methyl-5αH,7αH,8αH-endesm-3-en-8,12-olide(2)、1β-乙酰氧基-4α-羟基-6β-异丁酰氧基-9α-异戊酰氧基卤地菊内酯(1β-acetoxy-4α-hydroxy-6β-isobutyryloxy-9α-isovaleryloxyprostatolide,3)、16α-羟基对映贝壳杉烷-19-羧酸(16α-hydroxy-ent-kau-ran-19-oic acid,4)、(3R,4R,6S)-3,4-二羟基薄荷烯[(3R,4R,6S)-3,4-dihydroxy-1-menthene,5]、6-异丁酰基三裂蟛蜞菊内酯(trilobolide-6-O-isobutyrate,6)、1β-acetoxy-4α,9α-dihydroxy-6β-isobutyroxyprostatolide(7)、16β,17-二羟基对映贝壳杉烷-19-羧酸(16β,17-dihydroxy-ent-kauran-19-oic acid,8)、胡萝卜苷(daucosterol,9)、原儿茶醛(proto-catechualdehyde,10)、咖啡酸(caffeic acid,11)。结论除化合物6,7外,其他9个化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物2和3均为新的倍半萜内酯类化合物,分别命名为三裂蟛蜞菊内酯A(trilobolide A)和1β-乙酰氧基-4α-羟基-6β-异丁酰氧基-9α-异戊酰氧基卤地菊内酯。

HPLC法同时测定紫草凡士林中5种萘醌类化合物的含量

目的：建立同时测定紫草凡士林中紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β，β’-二甲基丙烯酰紫草素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentEclipseXDB．C18（250mm×4．6mm，5um），流动相为甲醇．乙腈-0．2％甲酸溶液（48：32：20，V／V／V），流速为1．0ml／min，柱温为24℃，检测波长为516nln。结果：紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β，β’-二甲基丙烯酰紫草素的质量浓度分别在7．12～71．20μg／ml（r=O．9994）、11．92～119．20μg／ml（r=0．9996）、4．07~40．70μg／ml（r=0．9997）、3．65～36．50μg／ml（r=0．9996）、5．11～51．10ug／m1（r=0．9995）范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为100．82％、101．49％、97．99％、100．29％、101．74％，RSD分别为3．03％、1．25％、1．75％、2．25％、2．31％（”均为6）。结论：该方法简单易行、结果准确、重复性好，适用于紫草凡士林的质量控制。

中低压制备型色谱制备紫草萘醌成分的研究

目的建立新的色谱技术,分离纯化紫草萘醌成分。方法采用中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用理化性质和核磁共振谱、红外、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术分析单体的纯度。结果分离鉴定了6个化合物。分别为去氧紫草素,紫草素,异丁酰紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,纯度分别是99.62%,99.02%,99.5%,99.31%,99.3%,99.2%。结论首次建立中低压色谱技术,快速、准确分离紫草药材的单体成分。

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。