β-氨基丙腈通过抑制赖氨酰氧化酶减弱低氧诱导的非小细胞肺癌转移侵袭

目的探讨β-氨基丙腈(β-APN)通过抑制赖氨酰氧化酶(LOX)减弱低氧诱导的非小细胞肺癌(NSCLC)转移侵袭的作用及其机制。方法低氧状态对NSCLC细胞LOX表达及催化活性的实验:将A549、SPCA1细胞系各分为常氧组、低氧12 h组、低氧24 h组;β-APN介导LOX失活导致NSCLC细胞迁移侵袭能力及上皮—间质转化(EMT)相关分子表达变化的实验:将A549、SPCA1细胞系分常氧组、低氧组、低氧+β-APN组。运用荧光法检测2种细胞LOX活性,采用逆转录及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、LOX、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9基因表达情况,运用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平。利用Transwell试验检测NSCLC细胞的转移侵袭能力。结果与常氧组比较,低氧12 h组和低氧24 h组A549及SPCA1细胞HIF-1α、LOX mRNA表达水平显著上调(P<0.01),HIF-1α、LOX蛋白水平显著上调(P<0.01),LOX酶活性显著增强(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组A549及SPCA1细胞系的迁移能力和侵袭能力增强;与低氧组比较,低氧+β-APN组均显著减弱(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组中E-cadherin mRNA的表达水平下降,N-cadherin、MMP-2及MMP-9 mRNA的表达水平上升;与低氧组比较,低氧+β-APN组E-cadherin mRNA的表达水平上升,N-cadherin、MMP-2及MMP-9 mRNA的表达水平下降(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组E-cadherin蛋白水平下降及N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平上升;与低氧组比较,低氧+β-APN组E-cadherin的蛋白水平上升,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平下降(P<0.01)。结论β-APN可通过抑制LOX酶减弱低氧诱导的NSCLC转移侵袭。

β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ构建胸主动脉瘤小鼠模型的研究

目的 探讨通过β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合Alzet微孔渗透泵皮下连续释放血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)构建胸主动脉瘤小鼠动物模型的方法。方法 60只3周龄雄性C57BL/6小鼠随机平均分为对照组(20只)、实验A组(20只)及实验B组(20只)。对照组、实验A组和实验B组分别采用普通饮水、0.5 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水和1 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水联合微孔渗透泵(Alzet)皮下连续释放Ang Ⅱ(1μg·kg-1·min-1)。监测各组小鼠饮水量及体质量。分别于第30天和第3天采用超声心动图测量小鼠胸主动脉血管内径并计算直径差,取胸主动脉血管组织行病理学检测,评估胸主动脉瘤小鼠动物模型的构建情况。结果 在建模过程中,实验B组中小鼠体质量增长缓慢甚至不增长;实验B组小鼠胸主动脉血管内径差值(d)为(0.519±0.054)mm,相比于对照组(0.135±0.021)mm和实验A组(0.201±0.043)mm,差异有统计学意义(P<0.05);实验A组和实验B组成瘤率分别为5%和40%。结论 本研究成功构建了胸主动脉瘤小鼠动物模型,操作简便、成本低及成功率高,为胸主动脉瘤机制及诊疗靶点的研究奠定了基础。

高脂饮食联合血管紧张素-Ⅱ和β-氨基丙腈构建小鼠主动脉夹层模型

目的探索应用高脂饮食联合血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)和β-氨基丙腈(BAPN)构建小鼠主动脉夹层模型的方法。方法24只C57BL/6J小鼠(4周龄,雄性)分为对照组[腹腔注射0.9%氯化钠注射液10 ml/(kg·d)]、Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)组和Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)+BAPN 0.33 g/(kg·d)组,每组8只;每只小鼠均给予高脂饮食,同一时间点测量小鼠体质量并按体质量标准给药,实验过程中死亡小鼠立即解剖,取出主动脉行病理切片并在显微镜下观察。给药期间采用小动物超声观察主动脉形态,对有明显夹层形成的小鼠直接处死并解剖。结果给药后,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组小鼠活动量、食欲下降最为明显,且比高脂饮食联合Ang-Ⅱ组小鼠主动脉夹层破裂病死率和建模成功率高,对照组小鼠未见明显变化。在小动物超声下,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组对比其他两组小鼠可见腹主动脉血管假腔形成,血管膨大。将实验组小鼠给药过程中死亡的小鼠立即解剖,可见腹腔及血管周围大量的血凝块;小动物超声下见主动脉夹层或主动脉瘤形成的小鼠,解剖可见血管壁与周围组织粘连严重,而对照组小鼠血管未见明显异常。HE染色结果显示,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组小鼠有血管壁假腔形成,弹力蛋白和胶原蛋白排列紊乱。统计每组血管壁厚度,分析发现两个实验组均比对照组的血管增厚,差异有统计学意义(P<0.001)。Ang-Ⅱ+BAPN联合高脂饮食组小鼠的血管壁出现了严重的弹性蛋白分解。结论通过高脂饮食联合Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)+BAPN 0.33 g/(kg·d)可以建立高效的小鼠主动脉夹层模型。

β-氨基丙腈饮水联合血管紧张素Ⅱ埋泵建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)皮下埋泵建立小鼠主动脉夹层模型。方法 40只3周龄雄性C57Bl/6J小鼠随机分为两组,均每日给予0.1 g/(kg·bw)BAPN饮水,BAPN饮水后第28天给予皮下埋泵,BAPN饮水+生理盐水埋泵组持续泵入生理盐水,BAPN饮水+Ang II埋泵组持续泵入Ang II,每分钟1000 ng/(kg·bw)。采用小鼠无创血压测量计尾套法检测小鼠血压和心率。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。埋泵72 h后,未死亡小鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红染色显微镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果 BAPN饮水+Ang II埋泵组小鼠总的夹层发生率为95%,死亡率为24%(夹层动脉瘤破裂死亡),BAPN饮水+生理盐水埋泵组夹层发生率为5%,死亡率为0;镜下主动脉病理切片显示夹层主动脉有假腔形成。结论成功建立高主动脉夹层发生率的小鼠模型。

血管紧张素-Ⅱ联合β-氨基丙腈腹腔注射建立主动脉夹层小鼠模型

目的血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)联合β-氨基丙腈(BAPN)腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型。方法 80只C57BL/6J小鼠(3周龄,雄性)分为对照组和7个实验组,分别为:Ang-Ⅱ组、BAPN 0.1 g/kg组、BAPN 0.33 g/kg组、BAPN 0.67 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN 0.1 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN0.67 g/kg组。对照组每8 h给予腹腔注射0.9%氯化钠注射液0.1 ml,Ang-Ⅱ组每8 h腹腔注射4.0 mg/kg Ang-Ⅱ,3种不同剂量的BAPN组每日分别给予腹腔注射0.1、0.33、0.67 g/kg BAPN, 3个联合用药组分别在每8 h腹腔注射4.0 mg/kg Ang-Ⅱ的基础上,分别给予腹腔注射0.1、0.33、0.67 g/kg BAPN。每组均于相同时间点应用鼠尾测压器检测并记录小鼠血压,持续14 d,中途死亡小鼠直接解剖,取出主动脉。14 d后处死小鼠,取出主动脉行病理观察。结果未注射Ang-Ⅱ的3个BAPN组小鼠血压与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);注射Ang-Ⅱ的4个组血压与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组无主动脉夹层形成,HE染色显示血管壁结构完整;7个实验组HE染色显示部分小鼠血管壁弹力纤维破坏,假腔形成,炎性细胞浸润,提示主动脉夹层形成。BAPN 0.1 g/kg组、BAPN 0.33 g/kg组、BAPN 0.67 g/kg组,随着BAPN注入剂量的增加,主动脉夹层的发生率逐渐上升,分别为10%、30%、50%,部分小鼠因主动脉破裂死亡,3组分别为0、1、4只;Ang-Ⅱ组和Ang-Ⅱ+BAPN0.1 g/kg组主动脉夹层发生率较低(均为30%),死亡分别为1、0只;Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组和Ang-Ⅱ+BAPN0.67 g/kg组主动脉夹层发生率分别为70%和80%,Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组死亡2只,而Ang-Ⅱ+BAPN 0.67g/kg组8只形成主动脉夹层的小鼠均死亡。Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组主动脉夹层发生率高,死亡率不高,符合小鼠主动脉夹层模型的要求。结论 Ang-Ⅱ联合BAPN腹腔注射能成功诱导小鼠主动脉夹层模型。

有机相酶促合成N-月桂酰-β-氨基丙腈

以月桂酸甲酯和 β 氨基丙腈为原料 ,在有机相中经脂肪酶催化合成N 月桂酰 β 氨基丙腈 (LAP) .在比较所用脂肪酶的催化活性的基础上 ,详细探讨了固定化脂肪酶Candidaantarctica(南极洲假丝酵母 )CAL 2催化该反应的影响因素 .经筛选 ,适宜的反应条件为 :70℃ ,n(β 氨基丙腈 ) ∶n (月桂酸甲酯 ) =1∶1,底物质量浓度为 35 g/L ,加酶量为 2 0 0U /g(以氨基丙腈的质量计 ) ,反应体系初始加水量为 3%腈重 .在此实验条件下反应 2 4h后 ,β 氨基丙腈的最高转化率为 96.8%

β-氨基丙腈对VEGF诱导的体外培养HUVEC血管生成的影响

目的通过β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)来研究赖氨酰氧化酶(Lysyl Oxidase,LOX)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)血管生成的影响,并对其机制进行初步探讨。方法Northern Blot分析人脐静脉内皮细胞中LOX表达,纤维蛋白凝胶体外血管生成检测试剂盒检测血管内皮细胞生长因子和LOX抑制剂BAPN对人脐静脉内皮细胞血管生成的作用,Western Blot检测BAPN处理对MAPK、Akt和PLCγ1的影响。结果人脐静脉内皮细胞中有LOX表达;血管内皮细胞生长因子可促进血管生成,而BAPN可拮抗这种促进作用;BAPN处理后的人脐静脉内皮细胞磷酸化的MAKP表达减少。结论β-氨基丙腈可抑制由血管内皮细胞生长因子诱导的血管生成,提示LOX可能对血管生成有促进作用,其机制是影响信号传导通路中磷酸化的MAKP表达。

β-氨基丙腈抑制赖氨酰氧化酶对小鼠免疫功能的影响

目的观察β-氨基丙腈（β—Aminopropionitrile，BAPN）抑制赖氨酰氧化酶（lysyloxidase，LOX）后小鼠免疫功能的变化。方法选用18～22g的正常ICR小鼠，以β-氨基丙腈100mg／ks连续灌胃10d。处死后检测小鼠胸腺重、脾重、巨噬细胞吞噬功能；采用绵羊红细胞作为抗原，检测小鼠抗体生成细胞功能；采用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞对ConA刺激的转化能力。结果以β-氨基丙腈抑制LOX活性，明显降低小鼠胸腺／体重比值；巨噬细胞吞噬率及吞噬指数均下降；小鼠抗体生成细胞数减少；ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力减弱。结论β-氨基丙腈抑制赖氨酰氧化酶可减弱小鼠免疫功能。

β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型的建立

目的探索β-氨基丙腈(β-Aminopropionitrile,BAPN)对鼠大动脉壁的影响,并对比人类夹层动脉瘤发病特点,以期进一步探索符合人类疾病特征的夹层动脉瘤动物模型。方法在实验动物饮用水中混入BAPN,配成浓度为0.2%、0.4%、0.6%的BAPN溶液,4~5周龄SPF级SD大鼠和3周龄SPF级C57BL/6小鼠饲养7周。实验结束或动物死亡后将其解剖,分离其大动脉,观察大体变化。将大动脉分为升主动脉、降主动脉、腹主动脉肾动脉上段和腹主动脉肾动脉下段4部分,截取每段血管横断面进行HE染色,并测量其血管内径、中膜面积等各项指标。同时,留取行开胸手术的A型夹层动脉瘤患者大动脉进行HE染色,观察其病理改变,与发生夹层动脉瘤的鼠大动脉进行比较。结果1)BAPN可显著影响大鼠或小鼠采水量及体重增长。2)BAPN可致大鼠或小鼠大动脉扩张,中膜增厚,弹性蛋白减少、排列紊乱,其病理改变符合人类夹层动脉瘤病理改变特征。3)浓度为0.4%的BAPN溶液模型成功率最高。结论:C57BL/6小鼠夹层动脉瘤动物模型可作为一种简便、经济、有效的动物模型进行下一步研究;SD大鼠发生肠破裂、脊柱侧弯等系统病理改变的比例高于夹层动脉瘤发生率,其作为夹层动脉瘤动物模型尚需进一步探索。

β-氨基丙腈对SGC-7901细胞增殖、迁移和黏附功能的影响

目的研究β-氨基丙腈(BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(LOX)后,对胃癌细胞SGC-7901体外增殖、迁移和黏附功能的影响。方法培养SGC-7901细胞,分别加入不同浓度的LOX抑制剂BAPN,通过MTT比色法检测对SGC-7901细胞增殖的影响,以同质黏附实验和异质黏附实验检测SGC-7901黏附能力的改变,用体外划痕实验检测SGC-7901迁移能力的变化。结果 0.1 mM、0.2 mM和0.3 mM的BAPN对SGC-7901的增殖无明显影响,0.4 mM和0.8 mM的BAPN抑制SGC-7901的增殖。0.1 mM BAPN对SGC-7901同质黏附、异质黏附和迁移能力无明显作用;0.2 mM和0.3 mM BAPN增强SGC-7901同质黏附,减弱其异质黏附,抑制其体外迁移。结论抑制赖氨酰氧化酶可通过抑制胃癌细胞的异质黏附和迁移能力,增强同质黏附,进而抑制其转移能力。

β-氨基丙腈抑制机械刮宫后大鼠子宫内膜纤维化的研究

目的研究β-氨基丙腈在抑制大鼠子宫内膜损伤后纤维化中的作用及最佳使用剂量。方法将54只8周龄Wistar大鼠随机分为正常组(6只)、对照组(12只)和实验组(36只);对照组大鼠刮宫后自然愈合,实验组大鼠刮宫后立即开始每天注射β-氨基丙腈并根据注射剂量分为100mg/kg/d、200mg/kg/d、300mg/kg/d三个剂量组;对照组和实验组的各剂量组分别于刮宫后72h和7d各处死6只大鼠。获取的大鼠子宫标本进行形态学、病理学、组织化学及胶原检测。结果实验组大鼠子宫大体形态学接近正常组;HE染色和Masson染色观察结果显示,与相同时间点对照组相比,实验组三个剂量组子宫内膜增厚且腺体数量增多,内膜基质纤维化程度低,但7d时300mg/kg/d剂量组内膜腺体数量减少,腺腔狭小。子宫搔刮损伤后72h和7d时,不可溶胶原纤维含量在对照组中均显著高于正常组(P<0.01),实验组均显著低于对照组(P<0.01),且200mg/kg/d剂量组低于100mg/kg/d剂量组(P<0.05),但与300mg/kg/d剂量组无显著差异(P>0.05);可溶性胶原含量在对照组和300mg/kg剂量组中均高于正常组(P<0.05),其他各组间无统计学差异(P>0.05)。结论β-氨基丙腈可以有效抑制Wistar大鼠子宫内膜纤维化,200mg/kg/d给药量对机械刮宫后大鼠子宫内膜纤维化的抑制效果最佳,该研究为子宫内膜纤维化的发生机制和治疗方法研究奠定基础。

β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ改良法建立小鼠主动脉夹层模型

目的探讨一种构建小鼠主动脉夹层模型的改良方法。方法β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)联合血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,Ang-Ⅱ)建立小鼠主动脉夹层模型。100只6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机取20只作为对照组,另80只用于造模,其中单纯BAPN组40只和BAPN+Ang-Ⅱ组40只。BAPN组小鼠给予0.1 g·kg^(-1)·d^(-1) BAPN饮水;BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠除给予BAPN 0.1g·kg^(-1)·d^(-1)饮水外,皮下注射Ang-Ⅱ(根据时间调整注射剂量:1~7 d Ang-Ⅱ剂量为1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1),8~14 d Ang-Ⅱ为0.75 mg·kg^(-1)·d^(-1),15~16 d Ang-Ⅱ为0.375 mg·kg^(-1)·d^(-1)),BAPN组注射等体积生理盐水。药物干预16 d后取材。记录小鼠体质量及饮水量,实验进程中小鼠如有死亡立即解剖,分析死因。实验17 d,将未死亡的小鼠颈部脱臼处死,留取组织备用;HE染色判断主动脉夹层形成情况。结果BAPN+Ang-Ⅱ组及BAPN组分别与对照组相比,动物饮水量均减少、体质量增加趋势减慢(P<0.05)。对照组夹层发生率及死亡率均为0;BAPN组夹层发生率为7.5%,死亡率为2.5%,BAPN+Ang-Ⅱ组夹层发生率为80%,死亡率为30%。BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠均死于调整Ang-Ⅱ剂量后1~3 d,83.3%小鼠死于注射药物后数分钟。结论给于C57BL/6J小鼠持续BANP饮水联合Ang-Ⅱ皮下注射成功构建主动脉夹层模型,具有周期短、模拟效果确切、死亡时间有一定规律、经济、稳定可重复等优点。

AMPK信号通路相关蛋白在β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型中的表达分析

目的通过建立β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型,探讨了腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)信号通路在夹层动脉瘤发生中的作用及机制。方法48只无特定病原体级SD雄性大鼠按随机数字表法分为对照组与模型组,各24只。模型组建立β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物,对照组不建立模型,同等条件下给予0.9%氯化钠溶液处理。记录2组第0周、2周与4周所有大鼠的体重情况,直至动脉瘤破裂死亡或实验结束。记录模型组的动脉瘤发生情况。实验第4周记录2组大鼠升主动脉和主动脉相关参数。采用免疫印迹法检测2组大鼠肾组织中AMPK、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)的表达。结果模型组在第2周与第4周的动脉瘤发生率为33.%和62.5%。2组大鼠第0周的体重比较,差异无统计学意义(P>0.05),模型组第2周与第4周的体重分别为(83.09±8.29)、(125.98±12.88)g,均低于对照组[(92.87±10.88)、(166.09±14.01)g],差异有统计学意义(P<0.05)。模型组第4周的升主动脉中膜外轮廓内径、最大中膜厚度、中膜面积为(0.94±0.02)mm、(0.20±0.03)mm 2、(0.27±0.03)mm,显著高于对照组[(0.85±0.03)mm、(0.10±0.02)mm 2、(0.19±0.02)mm],差异有统计学意义(P<0.05);主动脉的最大拉伸长度、极限应力、极限应变、弹性模量为(9.13±0.22)mm、(9.00±0.13)N、(31.93±5.24)Mpa、(35.98±2.10)Mpa,均显著少于对照组[(12.76±1.11)mm、(14.67±1.04)N、(104.87±15.78)Mpa、(83.89±3.77)Mpa],差异有统计学意义(P<0.05)。模型组第4周的主动脉AMPK与Keap-1蛋白相对表达水平为5.20±0.33、3.28±0.44,显著高于对照组(1.03±0.24、1.89±0.22),差异有统计学意义(P<0.05)。结论β-氨基丙腈可诱导鼠夹层动脉瘤动物模型的建立,伴随有AMPK/KEAP-1信号途径的激活,导致大鼠体重降低与主动脉形态结构异常。

hsa_circ_0091894/FLNA轴在β-氨基丙腈致小鼠主动脉损伤中的作用及机制研究

目的 探究hsa_circ_0091894/细丝蛋白A(filamin A, FLNA)轴在β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile, BAPN)致小鼠主动脉损伤中的作用及机制。方法 将小鼠随机分为对照组、BAPN组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组,对小鼠饲喂BAPN,尾静脉注射hsa_circ_0091894过表达的慢病毒载体。采用苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠主动脉组织形态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测主动脉组织hsa_circ_0091894、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测主动脉组织FLNA、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和α-1抗胰蛋白酶(α1-AT)蛋白表达水平,采用免疫荧光染色检测主动脉组织FLNA蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)染色检测主动脉组织细胞凋亡水平。结果 对照组、BAPN组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组主动脉组织hsa_circ_0091894水平依次为1.00±0.00、0.29±0.05、0.34±0.07和0.83±0.11,FLNA蛋白水平依次为0.71±0.12、0.27±0.05、0.23±0.04和0.52±0.09。与对照组比较,BAPN组小鼠主动脉组织TUNEL阳性率,Bax/Bcl-2比值,cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,TNF-α、IFN-γ和IL-6表达水平明显增加(F=138.073,F=294.376,F=56.247,F=80.415,F=71.782,F=57.438,F=84.94,F=51.028,P<0.05);hsa_circ_0091894表达水平,FLNA和α1-AT蛋白表达水平明显降低(F=231.2,F=68.605,F=69.386,P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组小鼠主动脉组织TUNEL阳性率,Bax/Bcl-2比值,cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,TNF-α、IFN-γ和IL-6表达水平明显降低;hsa_circ_0091894表达水平、FLNA和α1-AT蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。结论 hsa_circ_0091894可减轻主动脉损伤,其机制可能与hsa_circ_0091894促进FLNA表达、降低细胞凋亡、炎症反应和基质金属蛋白酶水平有关。

联合应用β-氨基丙腈和血管紧张素Ⅱ建立SD大鼠主动脉夹层模型

目的 联合应用 β-氨基丙腈(BAPN)和血管紧张素(Ang)Ⅱ两种药物来建立SD大鼠主动脉夹层动物模型,研究主动脉夹层的发病机理.方法 实验分为3组:对照组、灌胃组和空白灌胃组.每组30只3周龄雄性SD大鼠.对照组自由饮食饮水;灌胃组自由饮食饮水,将BAPN按每天 1 g/kg灌入大鼠胃内;空白灌胃组向胃内灌入等体积量的生理盐水.4周后停止灌药,在腹部皮下置入药物缓释泵.对照组和空白灌胃组药物缓释泵内装入生理盐水;灌胃组的药物缓释泵内装入AngⅡ,走速为 1μg·kg-1·min-1.1周后取大鼠主动脉血管进行病理检查,判断主动脉夹层形成与否.结果 对照组无主动脉夹层形成,无死亡;灌胃组15只产生主动脉夹层,夹层形成50％;空白灌胃组无主动脉夹层形成,无死亡.结论 联合BAPN及AngⅡ两种药物建立大鼠主动脉夹层模型简单易行,其发病机理类似人主动脉夹层的发病机理,能为主动脉夹层发病机制的研究提供理想的动物模型.

β-氨基丙腈对兔胆管良性狭窄的作用

目的观察β-氨基丙腈(BAPN)对兔胆管良性狭窄形成的影响。方法通过钳夹法建立兔胆管狭窄模型,并给予BAPN腹腔内注射处理,半月后行胆管造影,测量胆管直径;行血清总胆红素和直接胆红素含量测定;取钳夹段胆总管组织进行病理学检查,测量胆管壁厚度、镜下观察病理改变及高倍镜下成纤维细胞单位面积密度计数。结果造影显示对照组钳夹部位见狭窄环,以上胆管明显扩张,实验组胆管扩张不明显。实验组血清总胆红素和直接胆红素无明显升高。病理示对照组成纤维细胞增生活跃,胆管壁显著纤维化增厚,炎性细胞广泛浸润,VanGieson染色见胆管黏膜下大量胶原纤维增生,排列致密紊乱,实验组胆管壁增厚不明显,成纤维细胞增生少,VanGieson染色见胆管黏膜下胶原纤维增生不明显,排列较为整齐。结论良性胆管狭窄主要病理变化是胆管壁成纤维细胞增殖旺盛并胶原纤维过度增生;BAPN可以抑制胆管成纤维细胞的过度增殖和胶原纤维的交联,对胆管良性狭窄起到一定预防作用。

β-氨基丙腈诱导构建大鼠主动脉夹层模型

目的:构建β-氨基丙腈(BAPN)诱导的大鼠主动脉夹层模型,并探索最佳剂量和给药方式。方法:选用75只3周龄幼年SD大鼠,均购自中国科学院上海动物中心。采用随机数字表法将其平均分为A^E 5组进行实验,A组给予正常饲料,饮食量不限;B组正常饮食,给予生理盐水皮下注射;C组和D组分别给予混合了浓度分别为0.25%和0.40%的BAPN饲料喂养;E组正常饲料喂养,给予BAPN+生理盐水混合液皮下注射。实验为期6周,通过尸检的方法获取各组大鼠的主动脉标本,针对其中主动脉夹层标本进行形态学分析和病理学检测,并使用材料拉力仪分析标本的应力、应变及弹性模量等力学参数,采用 t检验比较各组间差异。 结果:C组中共11例出现主动脉夹层;D组中共3例出现主动脉夹层;E组中仅1例出现主动脉夹层。对照组(A组和B组)未发现主动脉夹层形成。E组大鼠的胸主动脉中膜厚度[(0.054±0.004) mm比(0.048±0.008) mm, t=2.598, P<0.05]和管壁面积[(0.620±0.074) mm 2比(0.557±0.030) mm 2, t=3.056, P<0.05]均明显高于对照组。 结论:口服低浓度(0.25%)BAPN能够高效构建大鼠AD模型,有助于主动脉夹层形成的力学机制研究。

超声评价血管紧张素Ⅱ联合β-氨基丙腈诱导小鼠主动脉夹层模型主动脉形态与血流动力学变化特点

目的:应用彩色多普勒超声(CDUS)观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合β-氨基丙腈(BAPN)诱导小鼠主动脉夹层模型主动脉各段形态及血流动力学指标的变化特点。方法:选取20只健康状况良好的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为2组:模型组(n=10),AngⅡ联合BAPN腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型;对照组(n=10),腹腔注射生理盐水。常规记录小鼠体重、收缩压和舒张压,第42 d应用CDUS测量2组小鼠升主动脉、胸降主动脉和肾上主动脉的横截面内径,以及收缩期最高流速(PSV)、舒张期末期流速(EDV)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、时间平均流速(TAMV)、心率、血流最大剪切率(SR)等。将主动脉自根部至肾动脉分叉部分取出,行HE染色观察主动脉壁病理变化。结果:①模型组与对照组体重、收缩压、舒张压、心率差异有统计学意义(均P<0.05);与对照组比较(0/10),模型组升主动脉夹层发生率(8/10)明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);而胸降主动脉夹层发生率(4/10)、肾上主动脉夹层发生率(3/10)略增高,差异无统计学意义(均P>0.05)。②模型组升主动脉内径、PSV、EDV、TAMV、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);两组间RI差异无统计学意义(P>0.05)。模型组胸降主动脉PSV、EDV、TAMV、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);两组间内径、RI差异无统计学意义(均P>0.05)。模型组肾上主动脉PSV、TAMV、RI、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);两组间内径、EDV差异无统计学意义(均P>0.05)。③模型组主动脉组织HE染色显示,主动脉明显扩张、不规则,管壁不均匀增厚;内皮细胞核染浅淡,部分内膜及中层断裂向外凸出形成夹层动脉瘤;外膜炎症细胞明显浸润。结论:超声可初步评价高血压合并主动脉夹层血流动力学改变,主动脉PSV、TAMV、PI和SR可能是早期预测高血压发生主动脉夹层的重要指标。

前列地尔注射液对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉夹层的作用及其机制探讨

目的探讨前列地尔注射液对β-氨基丙腈(BAPN)诱导的主动脉夹层的作用及其机制。方法选取3周龄雄性C57BL/6小鼠26只随机分成对照组(普通饮水,n=13)和模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水,n=13),14 d时提取主动脉组织RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹检测对照组和模型组主动脉炎症相关基因、EP基因mRNA(每组各6只)和前列地尔受体4(EP4)蛋白(每组各7只)表达。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠88只,按随机区组设计法分为3组:对照组(普通饮水+生理盐水80μg·kg^-1·d^-1,n=22)、模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水80μg·kg-1·d-1,n=33)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=33)。BAPN饮水前1 d开始每日腹腔注射给药,连续给药28 d。记录每组小鼠体重、血压变化及因主动脉夹层破裂死亡情况。28 d时,大体解剖观察主动脉夹层发生情况;取主动脉组织进行固定、包埋和切片,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色观察主动脉的形态结构变化,同时,免疫组化染色观察对照组(6只)和模型组(6只)EP4蛋白的表达分布情况。并对模型组(3只)和治疗组(4只)血浆PGE1进行ELISA检测。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠13只,随机分为模型组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+生理盐水,n=7)和治疗组(1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水+80μg·kg^-1·d^-1前列地尔注射液,n=6),14 d时对主动脉EP4蛋白表达进行定量分析。结果模型组小鼠BAPN诱导14 d时主动脉单核细胞趋化因子1[(2.74±1.55)比(1.00±0.49)]和基质金属蛋白酶2[(1.38±0.42)比(1.00±0.27)]的mRNA表达及EP4蛋白(1.48±0.51比1.00±0.19)表达高于对照组(P均<0.05)。免疫组化结果显示EP4可在模型组的内皮细胞、炎症细胞中表达。小鼠主动脉解剖观察可见模型组和治疗组均有明显的夹层,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色显示模型组和治疗组主动脉夹层血管可见弹力板断裂、充满红细胞的假腔形成和炎症细胞浸润。对照组无主动脉夹层和死亡发生,与对照组相比,模型组主动脉夹层发生率(60.6%,20/33)、破裂死亡率(30.3%,10/33),以及治疗组的主动脉夹层发生率(72.7%,24/33)、死亡率(24.2%,8/33)均明显升高,体重明显降低(P均<0.05),但模型组与治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组间血压无明显差异(P>0.05)。相较于模型组,治疗组在给药后血药浓度高[(0.540±0.041)μmol/L比(0.436±0.012)μmol/L,t=4.10,P<0.05],EP4蛋白表达低[(0.60±0.30)比(1.00±0.20),P<0.05]。结论在BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型中EP4表达增高,但使用前列地尔注射液腹腔给药对该模型中主动脉夹层的破裂无保护作用,其可能原因是前列地尔反馈抑制了EP4的表达。

microRNA-31在β-氨基丙腈诱导的主动脉瘤/夹层小鼠主动脉中的表达

目的研究发现,microRNA-31(miR-31)可能在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的主动脉瘤/夹层小鼠的发病中起重要作用。本文探究了β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile monofumarate,BAPN)诱导的主动脉瘤/夹层小鼠中miR-31的表达水平。方法选取3周龄的C57BL/6野生型雄性小鼠(n=40),随机分为BAPN组(n=20)和对照组(n=20),BAPN组小鼠饮用0.4%浓度BAPN的饮用水,对照组小鼠饮用普通饮用水,实验周期为28天。造模结束后测量小鼠的主动脉直径和血压,统计小鼠生存率和主动脉瘤/夹层发生率。分离两组小鼠主动脉组织并提取总RNA,应用加尾法、茎环法逆转录和实时定量PCR对比分析两组小鼠主动脉组织miR-31的表达水平。结果存活曲线显示BAPN组小鼠生存率显著降低(45%∶100%,P<0.01)。BAPN组小鼠主动脉瘤/夹层的发生率为75%,主动脉瘤/夹层破裂死亡率为55%。与对照组相比,BAPN组小鼠升主动脉最大直径[(1.86±0.51)mm比(1.18±0.11)mm,P<0.01]和主动脉弓最大直径[(1.95±0.50)mm比(1.16±0.17)mm,P<0.01)]显著大于对照组;两组之间收缩压[(101.20±5.26)mm Hg比(100.60±7.56)mmHg,P=0.891)]和舒张压[(59.40±9.94)mmHg比(62.00±5.76)mmHg,P=0.600)]差异无统计学意义。使用加尾法逆转录和实时定量PCR检测BAPN诱导的小鼠主动脉瘤/夹层主动脉组织中miR-31的表达水平,主动脉瘤/夹层主动脉组织中miR-31的表达水平对比对照组有升高趋势,但差异无统计学意义(1.11±1.41比1.00±1.26,P=0.686)。扩大样本量,使用茎环法逆转录和实时定量PCR检测小鼠主动脉组织miR-31的表达水平,BAPN诱导的主动脉瘤/夹层小鼠主动脉组织中miR-31表达水平对比对照组有升高趋势,但差异依旧无统计学意义(1.73±1.69比1.00±2.65,P=0.328)。结论BAPN诱导的主动脉瘤/夹层小鼠对比对照组小鼠主动脉组织中miR-31的表达水平有升高趋势,但无显著差异。基于miR-31在AngⅡ诱导产生的小鼠主动脉瘤/夹层中可能起到的重要作用,需要扩大样本量进一步探讨BAPN诱导对比AngⅡ诱导产生的小鼠主动脉瘤/夹层组织中miR-31表达水平的差异及意义。