血清γ干扰素、软骨组织糖蛋白水平对脓毒症休克不良预后的预测价值

目的分析血清γ干扰素(IFN-γ)、软骨组织糖蛋白(YKL-40)水平对脓毒症休克病人不良预后的预测价值。方法前瞻性选取2020年12月至2022年12月在延安市人民医院就诊的86例脓毒症休克病人,另选取同期脓毒症病人80例,同期体检健康者90例为对照,酶联免疫法检测血清IFN-γ、YKL-40水平,比较病人血清IFN-γ、YKL-40水平和临床资料。Pearson法对血清IFN-γ、YKL-40水平及其与血清乳酸、血清白蛋白、SOFA评分、APACHEⅡ评分相关性进行分析;Cox回归分析脓毒症休克病人死亡的影响因素;ROC曲线分析IFN-γ、YKL-40对脓毒症休克病人预后预测价值。结果脓毒症休克病人、脓毒症病人和体检健康者血清IFN-γ[(30.26±3.85)ng/L、(22.87±3.76)ng/L、(10.75±3.51)ng/L]、YKL-40[(217.58±40.03)μg/L、(178.43±39.25)μg/L、(119.02±38.76)μg/L]水平依次降低,生存组脓毒症休克病人血清IFN-γ[(28.67±3.84)ng/L比(34.38±3.88)ng/L]、YKL-40[(201.76±40.02)μg/L比(258.45±40.06)μg/L]水平显著低于死亡组病人(P<0.05)。生存组和死亡组脓毒症休克病人呼吸频率、血清白蛋白、SOFA评分、血清乳酸、APACHEⅡ评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。血清IFN-γ与YKL-40水平呈正相关(r=0.41,P<0.001),血清IFN-γ、YKL-40水平与血清乳酸、SOFA评分、APACHEⅡ评分呈正相关,与血清白蛋白呈负相关(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,IFN-γ[HR=1.03,95%CI:(1.02,1.04)]、YKL-40[HR=1.12,95%CI:(1.06,1.18)]、血清乳酸[HR=1.21,95%CI:(1.11,1.33)]、血清白蛋白[HR=0.96,95%CI:(0.94,0.98)]、SOFA评分[HR=1.30,95%CI:(1.18,1.45)]、APACHEⅡ评分[HR=1.35,95%CI:(1.16,1.58)]是脓毒症休克病人死亡的影响因素(P<0.001)。IFN-γ、YKL-40水平联合检测评估脓毒症休克病人死亡的AUC显著高于单项检测(Z_(IFN-γ-联合)=2.47,P=0.014;Z_(YKL-40-联合)=3.55,P<0.001),特异度和灵敏度为91.67%和91.94%。结论脓毒症休克病人血清IFN-γ、YKL-40水平较高,与脓毒症休克病人死亡密切相关,可能作为脓毒症休克病人不良预后的潜在标志物。

γ干扰素、白细胞介素-4在病毒性脑炎和化脓性脑膜炎的表达差异及其对神经系统并发症的诊断效能

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及IFN-γ/IL-4在不同类型脑炎脑脊液及血清中的表达差异及其对神经系统并发症的诊断效能。方法纳入2019年3月至2021年3月河北省儿童医院收治的40例病毒性脑炎病儿作为病脑组和40例化脓性脑膜炎病儿纳入化脑组,另选取40例中枢神经系统脱髓鞘疾病病儿作为对照组,分别采集三组病儿的脑脊液和血清标本备用,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)对脑脊液和血清中IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4含量进行检测,分析IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4在不同类型脑炎脑脊液及血清中的表达差异。而后根据病儿有无神经系统并发症再次将其分为有并发症组(n=21)和无并发症组(n=99),采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)曲线下面积(AUC)分别评价IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4对化脓性脑膜炎发生神经系统并发症的效能的预测价值。结果病脑组病儿脑脊液、血清IFN-γ水平分别为[(9.63±1.04)ng/L、(29.08±3.79)ng/L],均明显高于化脑组[(5.74±1.62)ng/L、(14.73±4.25)ng/L]和对照组[(3.44±0.76)ng/L、(11.13±2.05)ng/L](P<0.05),化脑组高于对照组(P<0.05),且血清中IFN-γ浓度高于脑脊液。化脑组病儿脑脊液、血清IL-4水平分别为[(42.17±5.24)ng/L、(91.05±10.91)ng/L],较病脑组[(21.36±1.73)ng/L、(53.26±8.18)ng/L]和对照组[(9.76±1.15)ng/L、(40.08±4.63)ng/L]均偏高(P<0.05),病脑组高于对照组(P<0.05),血清中IL-4含量较脑脊液偏高。病脑组脑脊液和血清中IFN-γ/IL-4最高0.51±0.05、0.49±0.12,化脑组最低0.38±0.06、0.29±0.03,三组组间对比数据差异有统计学意义(P<0.05)。有并发症组病儿脑脊液和血清中IFN-γ[(7.73±0.83)ng/L、(25.13±3.17)ng/L]、IL-4[(38.83±2.35)ng/L、(73.48±7.67)ng/L]及IFN-γ/IL-4(0.42±0.03、0.43±0.09)水平均明显高于无并发症组[(4.15±0.58)ng/L、(12.56±2.08)ng/L、(16.77±4.12)ng/L、(60.13±4.33)ng/L、0.21±0.04、0.19±0.07](均P<0.05)。ROC曲线研究结果显示,IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4及联合检测的AUC分别为0.84[95%CI:(0.72,0.96)]、0.87[95%CI:(0.76,0.97)]、0.76[95%CI:(0.62,0.90)]、0.93[95%CI:(0.85,1.00)],三项指标联合诊断的AUC显著高于各项指标单因子预测(P<0.05)。预测价值:联合检测>IL-4>IFN-γ>IFN-γ/IL-4。结论IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4在病毒性脑炎和化脓性脑膜炎病儿脑脊液和血清中的表达水平明显升高,且均为血清中水平高于脑脊液中;检测其水平可辅助临床更好地诊断神经系统并发症的发生。

猪γ干扰素单克隆抗体的制备与特性研究

为了制备高特异性的抗猪γ干扰素(IFN-γ)抗体,试验采用原核表达的携带His标签的重组猪IFN-γ(PoIFN-γ)蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞;并以携带GST标签的重组蛋白PoIFN-γ(GST-PoIFN-γ)为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌抗体的单克隆细胞株;而后通过间接ELISA方法、单克隆抗体亚型鉴定试剂盒、SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定和间接免疫荧光方法对获得的单克隆抗体的腹水效价、亚型、反应特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明:经筛选后共获得7株能稳定分泌PoIFN-γ的单克隆抗体细胞株;7株单克隆抗体的腹水效价在1∶2048000~1∶16384000之间,均为IgG1亚型,均能与原核表达及真核表达的PoIFN-γ蛋白发生特异性反应且反应性良好。说明试验成功制备了可特异性识别PoIFN-γ的单克隆抗体。

γ干扰素与脓毒性休克患者严重程度的相关性及对预后的评估价值

目的探讨γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)的表达水平和脓毒性休克(septic shock)患者病情严重程度的相关性及其对预后的评估价值。方法收集96例脓毒性休克患者的临床资料及血清,并按28 d结局分为存活组和死亡组;同时收集同期健康体检人群的30例血清作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测3组的IFN-γ的表达水平,分析组间IFN-γ的表达水平及各项临床资料。结果脓毒性休克患者血清的IFN-γ表达水平较健康体检人群低[212.80(151.11,255.79)ng/L vs.343.37(314.5,427.95)ng/L,P<0.01]。96例脓毒性休克中有54例存活组,42例死亡组,比较两组的临床资料,两组患者的性别、吸烟史、SBP、DBP、SI、Lac、IL-6、IFN-γ、PCT、SOFA评分、APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01)。logistic回归分析显示提示Lac、IFN-γ表达下降、APACHEⅡ评分是脓毒性休克患者死亡的独立危险因素[优势比(OR)和95%置信区间(95%CI)分别为6.491(1.404~30.004)、0.954(0.954~0.999)、3.476(1.210~9.984),P<0.05]。INF-γ和Lac、APACHEⅡ的Spearman相关性分析呈负相关,相关系数分别为-0.38、-0.35。绘制Lac、IFN-γ、APACHEⅡ的ROC曲线,三者的AUC分别为0.847、0.869、0.833,三者联合预测的AUC为0.978,三者联合预测的价值优于单一指标(P<0.001)。结论IFN-γ表达水平下降与脓毒性休克患者的严重程度呈正相关,对预后有较好的评估价值。

非小细胞肺癌晚期患者白细胞介素-2、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α和γ干扰素对生存情况的预测价值

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)晚期患者血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)变化与生存率的相关性。方法回顾性分析2021年10月至2022年9月在抚州市第一人民医院肿瘤内科确诊的60例NSCLC晚期患者临床资料,作为观察组,根据患者入院6个月后的预后情况将患者分为生存组(n=41)和死亡组(n=19),同期选择入院体检的66例健康人群为健康组。记录患者入院24 h内和治疗2个周期后的IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,比较治疗2个周期后的生存组和死亡组患者的IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,以患者的预后情况作为最终变量绘制NSCLC患者预后的ROC曲线图。结果健康组的IL-6水平低于观察组,IL-2、TNF-α和IFN-γ水平均高于观察组,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者入院24 h内,死亡组IL-6水平高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者入院治疗2个周期后,患者的IL-2水平较入院24 h内低,IL-6、TNF-α和IFN-γ水平较24 h内的指标水平高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗2个周期后,生存组的IL-6较死亡组低,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC结果显示,IL-6水平鉴别诊断NSCLC患者的预后的ROC曲线下面积为0.738,敏感度为89.47%,特异性为65.85%,此时IL-6水平的截断值为60.731 pg/ml(P<0.05)。结论NSCLC晚期患者的IL-6水平对其预后具有一定的预测效能,可以为临床NSCLC患者的治疗方案提供指导作用。

结核病γ干扰素释放试验刺激抗原研究进展

结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结核菌素(purified protein derivative,PPD)为主,然而PPD抗原成分复杂,诊断特异性和敏感性有待提高,因此寻找可以代替PPD的特异性刺激抗原成为了研究热点。论文系统综述了近年来报道用于γ干扰素释放试验的刺激抗原,重点概述了刺激抗原的免疫特性、刺激效果以及各类刺激抗原的优势、局限性和应用前景,以期为人和动物结核病的诊断及防控提供参考。

潜伏性结核分枝杆菌感染的γ干扰素释放试验、单核细胞表达水平及临床诊断价值研究

目的:探讨潜伏性结核分枝杆菌感染的γ干扰素释放试验(IGRA)、单核细胞表达水平及临床诊断价值。方法:选取潜伏性结核分枝杆菌感染患者72例(潜伏组),活动性肺结核患者106例(活动组),同时选取健康体检者132例作为对照组,比较各组IGRA、单核细胞表达水平以及IGRA、单核细胞表达水平鉴别诊断价值。结果:潜伏组IGRA测定值为540.50(325.51,1085.56),高于对照组但低于活动组(均P<0.05)。各组外周血淋巴细胞、中性粒细胞值比较差异无统计学意义(均P>0.05)。潜伏组外周血单核细胞值为0.61(0.38,0.85),高于对照组但低于活动组(均P<0.05)。IGRA测定值与单核细胞呈正相关(r=0.685,P<0.05)。IGRA测定值、单核细胞值及联合鉴别潜伏性结核分枝杆菌和健康者的ROC曲线下面积分别为0.653、0.832和0.814(均P<0.05);IGRA测定值和单核细胞值及联合鉴别活动性肺结核和潜伏性结核分枝杆菌的ROC曲线下面积分别为0.638、0.831和0.686(均P<0.05)。结论:潜伏性结核分枝杆菌感染的IGRA、单核细胞表达水平低于活动性肺结核,但高于健康者,IGRA及单核细胞在鉴别诊断中有一定价值。

外周血中γ干扰素和白细胞介素-23表达与复发性流产的相关性研究

目的探讨外周血中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-23(IL-23)表达与复发性流产(RPL)的相关性研究。方法选取2022年1—12月佛山市妇幼保健院接收的50例RPL病人为研究对象,同期健康体检者50例为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清IFN-γ、IL-23水平;采用多因素logistic回归分析探索RPL发生的影响因素;采用Pearson法分析血清IFN-γ、IL-23水平与临床资料的相关性;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价血清IFN-γ、IL-23及其联合对RPL发生的预测效能。结果相较于对照组,RPL组年龄、血红蛋白、CD4^(+)/CD8^(+)、蛋白C、抗心磷脂抗体(ACA)IgA、IFN-γ[(25.95±7.44)ng/L比(17.72±4.57)ng/L]、IL-23[(4.32±1.37)μg/L比(2.99±0.81)μg/L]水平显著升高(P<0.05),CD8^(+)、ACA IgG水平显著降低(P<0.05)。logistic分析发现,年龄、CD4^(+)/CD8^(+)、IFN-γ、IL-23均是RPL发生的独立危险因素(P<0.05);CD8^(+)是RPL发生的独立保护因素(P<0.05)。RPL病人血清IFN-γ与IL-23、年龄、CD4^(+)/CD8^(+)呈正相关(r=0.61、0.59、0.52,P<0.05),与CD8^(+)呈负相关(r=−0.57,P<0.05)。血清IL-23与年龄、CD4^(+)/CD8^(+)正相关(r=0.55、0.56,P<0.05),与CD8^(+)负相关(r=−0.52,P<0.05)。ROC结果显示血清中IFN-γ、IL-23水平及二者联合预测RPL发生的AUC分别为0.79、0.77、0.88,其中联合预测AUC显著高于二者单独预测AUC(P<0.05)。结论RPL病人血清中IFN-γ、IL-23水平升高,与机体的免疫功能关系密切,均有望成为RPL发生的预测因子。

γ干扰素基因DNA甲基化水平与儿童乙型肝炎疫苗无/低免疫的关系

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)基因DNA甲基化水平与儿童乙型肝炎疫苗无/低免疫的关系。方法选取214名8~9月龄儿童,均完成0、1、6月乙型肝炎疫苗接种。根据HBsAb水平分为无/低应答组、正常/高应答组,比较两组IFN-γ基因10个CpG位点DNA甲基化水平,并分析其与乙型肝炎疫苗无/低免疫反应的关系。结果214例儿童中无应答6例、低应答81例、正常应答52例、高应答75例。无/低应答组IFN-γ基因44和93位点甲基化水平高于正常/高应答组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,IFN-γ基因44位点[OR=1.320(1.031,1.934)]和93位点[OR=1.480(1.146,2.374)]高甲基化水平是儿童乙型肝炎疫苗无/低应答的危险因素(P<0.05)。结论IFN-γ基因44和93位点的DNA甲基化水平是儿童乙型肝炎疫苗无/低免疫反应的危险因素。

百草枯中毒患者外周血对氧磷酯酶1、程序性死亡因子-1、γ干扰素诱导蛋白-10水平检测的意义

目的探讨百草枯中毒患者外周血对氧磷酯酶1(PON1)、程序性死亡因子-1(PD-1)、γ干扰素诱导蛋白-10(IP-10)水平对预后的价值。方法对2017年5月—2023年4月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院120例百草枯中毒患者进行前瞻性研究,统计百草枯中毒患者30 d内死亡与生存情况,比较不同预后患者临床资料及外周血PON1、PD-1、IP-10水平。采用Pearson相关性分析探讨外周血PON1、PD-1、IP-10水平与中毒剂量、序贯器官衰竭估计(SOFA)评分、急性生理与慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价外周血PON1、PD-1、IP-10水平预测百草枯中毒患者预后的价值。结果随访期间共35例患者死亡(29.17%)。死亡患者中毒剂量、SOFA评分、APACHEⅡ评分及外周血IP-10、PD-1水平均高于生存患者,外周血PON1水平低于生存患者,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,百草枯中毒患者外周血PON1水平与中毒剂量、APACHEⅡ评分及SOFA评分均呈负相关,PD-1、IP-10水平与中毒剂量、APACHEⅡ评分及SOFA评分均呈正相关(P<0.05);PON1、PD-1、IP-10预测百草枯中毒的曲线下面积(AUC)分别为0.738、0.774、0.770,三者联合预测的AUC为0.922,三者联合预测效能高于各指标单独预测。结论百草枯中毒患者外周血PON1、PD-1、IP-10联合检测对判断患者预后具有较高价值。

结核感染T细胞γ干扰素释放试验及结核杆菌抗体在肺结核患者诊断中的应用

目的:探讨对结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)及结核杆菌抗体(TB-Ab)在肺结核患者诊断中的应用价值。方法:选择2022年1—12月荆州市第三人民医院收治的216例疑似肺结核患者,将病理学诊断作为“金标准”,依据是否存在结核病进行分组,分为肺结核组(n=151)和非肺结核组(n=65),采集患者清晨空腹静脉血分别检测TB-IGRA、TB-Ab水平,观察两项指标检测肺结核阳性结果,观察不同检查方式诊断效能。结果:肺结核组中TB-IGRA阳性检出率、TB-Ab阳性检出率均高于非肺结核组,差异有统计学意义(P<0.05)。TB-IGRA、TB-Ab诊断肺结核的阳性预测值、特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05),TB-IGRA诊断肺结核的敏感度、阴性预测值高于TB-Ab,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄>60岁肺结核患者TB-IGRA阳性检出率、TB-Ab阳性检出率高于≤60岁肺结核患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:临床肺结核诊断中应用TB-IGRA、TB-Ab检查均有较高诊断效能,但相对而言TB-IGRA检查方式更优,且该检查方式阳性率易受年龄因素影响。

白细胞介素-6、白细胞介素-8、γ干扰素、肿瘤坏死因子-α联合检测对腹腔镜下胃癌根治术后并发肺炎的预测价值

目的分析白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)联合检测对腹腔镜下胃癌根治术后并发肺炎的预测价值。方法将72例胃癌患者按术后是否并发肺炎分为观察组(并发肺炎)30例和对照组(未并发肺炎)42例。比较两组患者血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α单独及联合检测对腹腔镜下胃癌根治术后并发肺炎的预测价值。结果观察组患者血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α联合检测预测腹腔镜下胃癌根治术后并发肺炎的灵敏度(94.85%)高于各指标单独检测(75.12%、71.86%、69.82%、72.84%)。结论腹腔镜下胃癌根治术后并发肺炎患者血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α水平异常升高,联合检测可提高对肺炎的预测灵敏度,具有一定参考价值。

γ干扰素诱导蛋白-10对早期结核性脑膜炎的临床诊断价值

目的探讨γ干扰素诱导蛋白-10（IP-10）对于结核性脑膜炎的早期临床诊断价值。方法选取45例结核性脑膜炎患者和30例非结核性脑膜炎患者，分别检测脑脊液中IP-10、γ-干扰素（IFN-γ）及结核抗体等指标。同时绘制受试者工作曲线（ROC曲线）评价IP-10和IFN-γ的特异性、敏感性及诊断价值。结果结核性脑膜炎组IP-10和IFN-γ的水平分别为（1066．78±268．38）ng／L和（441．88±119．44）ng／L，均显著高于非结核性脑膜炎组[（227．54±90．30）ng／L和（78．72±25．02）ng／L]，差异有统计学意义（P〈0．01）。IP-10诊断临界值为465．67ng／L时，敏感度为95．6％，特异度为100．0％；IFN-γ诊断结核性脑膜脑炎的ROC曲线下面积为0．999[95％可信区间（CI）：0．949—1．000]，诊断临界值为121．20ng／L时，敏感性为97．8％，特异性为100．0％。结论脑脊液中IP-10的含量对于早期结核性脑膜炎具有一定的临床诊断价值。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞γ干扰素和白细胞介素4的水平变化

目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血T细胞表达细胞因子的调节作用。方法 60例慢性HBV感染者分为免疫耐受期组、免疫清除期组和非活动期组,20例健康人群作为对照组。另收集21例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性的慢性乙型肝炎患者,进行恩替卡韦治疗6个月。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,PCR法检测HBV DNA载量,流式细胞术检测T细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。结果慢性HBV感染者的外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的IFN-γ水平与HBV DNA载量呈反比,IFN-γ/IL-4比率与HBV DNA载量和血清ALT水平均呈反比。此外,从免疫耐受期到非活动病毒携带期,T细胞的IFN-γ水平逐渐增加、IL-4水平逐渐降低,且与对照组相比,免疫耐受期患者的T细胞表达IL-4增加且IFN-γ减少,到非活动携带期其细胞因子表达逐渐恢复。慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,血清HBV DNA载量和ALT水平均明显降低,同时其外周血CD8^+T细胞的IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比率均明显增加。结论慢性HBV感染过程中,外周血T细胞的IFN-γ和IL-4发挥双向调节作用,与恩替卡韦抗病毒疗效相关。

猪γ干扰素的基因克隆、改造、表达及活性测定

提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC ,并实现在大肠杆菌中的高效表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及 0 5mol·L-1盐酸胍复性液复性处理 ,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化。细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪IFN -γ具有较高的干扰素活性 ,约为 4 5× 10 6U·mg-1。

猪γ干扰素基因的克隆、表达及其纯化

以RT PCR方法 ,从经丝裂原诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出编码猪IFNγ的基因。经测序证实后插入载体pJLA 5 0 3 ,并实现在大肠杆菌中的高表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol/L盐酸胍变性及精氨酸存在的情况下复性。再经DEAE Sepharose离子交换柱、Sephdex 2 0 0凝胶过滤柱分离获得电泳单一纯猪IFN γ蛋白 ,细胞病变抑制实验检测纯化产物有干扰素活性。

平喘方对哮喘模型小鼠肺组织炎症及γ干扰素和白细胞介素4的影响

目的:研究1型辅助性T细胞(T helper1)/Th2(Th1/Th2)相关因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)在哮喘模型小鼠气道炎症进展过程中的改变以及中药平喘方对其的影响,探讨平喘方对支气管哮喘防治作用的机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组及平喘方组,20只/组。除空白对照组外,其余大鼠采用卵清白蛋白致敏、激发诱导支气管哮喘,并均于致敏2周后开始灌胃,1次/d,共4周。于激发7d后和激发后2周分批处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveo larlavage fluid,BALF)和肺组织。经苏木精和伊红染色、胶原染色检测肺组织病理学改变,并进行胶原染色图像分析;酶联免疫吸附测定法检测BALF中IFN-γ及IL-4水平。结果:激发7d后:与空白对照组比较,模型组BALF中IFN-γ水平明显降低,IL-4水平明显升高;与模型组比较,两治疗组IL-4水平均明显降低,IFN-γ/IL-4比值均明显升高;两治疗组间IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值比较,差异均无统计学意义。激发后2周:与空白对照组比较,模型组IFN-γ水平明显降低,而IL-4水平明显升高,IFN-γ/IL-4比值明显降低;与模型组比较,两治疗组的IL-4水平明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显升高,且平喘方组IFN-γ水平明显升高;两治疗组间IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值比较,差异均无统计学意义。哮喘激发7d后及激发后2周,模型组肺组织胶原染色面积、面积与光密度乘积均较空白对照组明显增加;两治疗组细支气管壁上胶原纤维沉积较模型组明显减少,胶原染色面积与光密度乘积亦较模型组明显降低;两治疗组间胶原染色面积、面积与光密度乘积比较,差异均无统计学意义。结论:平喘方可调节哮喘模型小鼠IFN-γ、IL-4水平,改善气道炎症,抑制气道重建,疗效与地塞米松相近。

结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验在脊柱结核辅助诊断中的应用研究

目的:探讨结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)在脊柱结核辅助诊断中的应用价值。方法:本研究应用T-SPOT.TB试剂盒检测脊柱结核感染组34例患者和非脊柱结核疾病组31例患者外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞的数量。所有患者同时接受PPD皮肤试验、血清抗结核抗体检测,以临床明确诊断为标准,比较分析评价不同检测方法的灵敏度、特异度。结果:脊柱结核组中,T-SPOT.TB试验的阳性率85.3%,PPD试验的阳性率61.8%,血清抗结核抗体的阳性率58.8%;非脊柱结核疾病组中,T-SPOT.TB试验的阳性率22.6%,PPD试验的阳性率41.9%,血清抗结核抗体的阳性率29.0%。脊柱结核组中SFC的数目显著高于非脊柱结核疾病组。结论:T-SPOT.TB试验在脊柱结核的诊断中有着较高的灵敏度,可能成为脊柱结核感染早期诊断的一项重要的筛查工具,并辅助脊柱结核病的诊断。

肺结核患者全血γ干扰素释放试验影响因素的探讨

目的探讨菌量负荷、疾病活动性、影像学累及范围、外周血淋巴细胞计数等因素对全血γ干扰素释放试验结果的影响。方法选取肺结核患者106例(包括44例菌阳肺结核患者、47例菌阴肺结核患者和15例陈旧性肺结核患者)和健康对照组35名,所有患者(健康对照者)抽取外周血并以肝素抗凝分别与结核分枝杆菌特异抗原分泌抗原靶-6(ESAT-6)、ESAT-6/培养滤过蛋白-10(CFP-10)融合抗原、PPD共同孵育,并用ELISA的方法检测血浆中IFN-γ的含量,各组间差异的比较应用Mann-Whitney U检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和菌阴组之间差异无统计学意义[ESAT-6(114.7 pg/ml vs 82 pg/ml,Z=-0.500,P>0.05),ESAT-6/CFP-10(3488 pg/ml vs 2350 pg/ml,Z=-0.949,P>0.05),PPD(4514 pg/ml vs4326 pg/ml,Z=-0.822,P>0.05)];ESAT-6和ESAT-6/CFP-10抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阴组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义[ESAT-6(82 pg/ml vs 137 pg/ml,Z=-0.781,P>0.05),ESAT-6/CFP-10(2350 pg/ml vs 1784 pg/ml,Z=-1.685,P>0.05)],ESAT-6抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义(114.7 pg/ml vs 137 pg/ml,Z=-0.757,P>0.05),但ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异有统计学意义(3488 pg/ml vs 1784 pg/ml,Z=-0.242,P<0.05);ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在肺部病变累及少和肺部病变累及多之间差异有统计学意义[ESAT-6(117 pg/ml vs 42 pg/ml,Z=-2.341,P<0.05),ESAT-6/CFP-10(3055pg/ml vs 1562.5 pg/ml,Z=-2.850,P<0.05)];ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原、PPD抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在外周血淋巴细胞≥1.0×109/L和<1.0×109/L之间差异有统计学意义[ESAT-6(97.5 pg/ml vs 48 pg/ml,Z=-2.745,P<0.05),ESAT-6/CFP-10(3082 pg/ml vs 1190 pg/ml,Z=-2.911,P<0.05),PPD(4322 pg/ml vs 3200 pg/ml,Z=-2.216,P<0.05)]。结论基于RD1区的抗原刺激后外周血分泌IFN-γ的量不受菌量负荷的影响,但可能受到外周血淋巴细胞绝对值和病变累及范围的影响。

γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用

γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophage-activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用。目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究。文章就IFN-γ的基本特征、生物学活性及其在动物疾病防控中的应用做一综述。