组织桥接整合因子1、Ⅰ型胶原蛋白基因、核转运蛋白基因2与三阴性乳腺癌术后复发关系

目的探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义。方法选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS)。结果复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织BIN1mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P<0.05),复发组组织COL1A1mRNA、KPNA2mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P<0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P<0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P<0.001),COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P<0.001);BIN1mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1mRNA、KPNA2mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P<0.05)。结论BIN1mRNA、COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息。

FKBP脯氨酰异构酶10、Ⅰ型胶原蛋白α1链在肾癌组织中的表达及预后影响因素分析

目的 探讨FKBP脯氨酰异构酶10(FKBP10)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)在肾癌组织中的表达及预后影响因素。方法 选取65例肾癌患者,采用定量聚合酶链反应(qPCR)法检测肾癌组织中FKBP10、COL1A1 mRNA表达水平,根据随访结果分为预后良好组和预后不良组,比较两组患者的FKBP10、COL1A1 mRNA表达水平;肾癌患者预后不良的影响因素采用Cox回归模型分析。结果 随访1年,65例肾癌患者中,预后不良20例,预后良好45例。预后不良组肾癌患者肾癌组织中FKBP10、COL1A1 mRNA表达水平均明显高于预后良好组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。单因素分析结果显示,肿瘤大小、TNM分期、病理类型、FKBP10表达情况、COL1A1表达情况均可能是肾癌患者预后不良的影响因素(P﹤0.05);多因素分析结果显示,FKBP10、COL1A1高表达均是肾癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 FKBP10、COL1A1高表达与肾癌患者的预后不良有关,且均是肾癌患者预后不良的独立危险因素。

枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca^(2+)及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

背景:前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用。目的:观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。方法:将20%空白血清(对照组),5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05,P<0.01);10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高(P<0.05,P<0.01)。说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症。

Ⅰ型胶原蛋白对骨矿化机制的影响

骨质疏松（OP）是以低骨量和骨组织显微结构退变为特征的一种全身性骨骼疾病,伴有骨脆性增加,易于发生骨折。骨强度的问题是引起OP骨折危险性增加重要因素之一,骨强度反映骨骼的两个主要方面是骨矿密度和骨质量。

草鱼Ⅰ型胶原蛋白α1基因cDNA全序列克隆、组织分布及其生物信息学分析

利用PCR和RACE方法首次克隆了编码草鱼肌肉Ⅰ型胶原蛋白的α1基因(COL1A1)的cDNA全长序列,为5772bp,其开放阅读框为4347bp,编码1448个氨基酸。BLAST同源性分析结果显示,草鱼COL1A1基因的氨基酸序列与斑马鱼、金鱼同源性较高,分别为93.90%和93.60%,呈现出较高的保守性。系统进化树分析表明,该基因与斑马鱼、金鱼处于同一支,亲缘性最近。生物信息学分析显示,草鱼COL1A1蛋白质的相对分子质量为137.2ku,理论等电点是5.44,为α螺旋β折叠三重螺旋结构蛋白。有18段三重螺旋重复域,22段低复杂度域,17个功能域。COL1A1蛋白有33～69,1249～1355两个绑定钙的区域和62～104一个绑定锌的区域。利用半定量RT-PCR方法检测的组织表达结果表明,COL1A1基因在草鱼肌肉、肠道、肝胰脏、鳃、皮肤、鳍条、肾脏和脾脏8个组织中均有表达,其中在皮肤、鳃、肾脏、鳍条组织中的mRNA表达量高于其他4个组织(P<0.05)。

在肌腱损伤动物模型修复过程中BFGF和Ⅰ型胶原蛋白表达的特征

【目的】研究证实肌腱损伤修复过程中病灶区病理学变化及BFGF和Ⅰ型胶原蛋白在肌腱损伤修复过程中的作用。【方法】构建Leghorn鸡屈趾肌腱损伤修复模型,借助体视学、生物力学以及免疫组化进行探察和评价,实验数据利用SPSS10.0软件统计处理。【结果】①肌腱粘连程度和抗张力强度分别随损伤修复时间的延长逐渐增加,第6周组明显高于其它时间组(P<0.001),而且各时间组均与对照组之间存在显著统计学差异(P<0.001);②组织病理学检测显示病灶区出现大量炎症细胞和肌腱细胞,除第6周组外,其它时间组肌腱细胞和巨噬细胞的数量均高于对照组(P<0.05),同时显示肌腱细胞数量的峰值出现于第2周(P<0.001),而巨噬细胞数量在各时间组之间无统计学差异(P>0.05)。③免疫组化探测显示BFGF阳性细胞数量及Ⅰ型胶原蛋白的表达在各时间组均高于对照组(P<0.05);而且在第2周组显著高于其它时间组(P<0.001)。【结论】肌腱损伤修复过程中肌腱粘连程度和抗张力强度的变化与损伤修复时间正相关,病灶区组织病理学变化、BFGF和Ⅰ型胶原蛋白表达的高峰出现于第2周,提示BFGF和Ⅰ型胶原蛋白牵涉到损伤肌腱的修复过程。

Ⅰ型胶原蛋白基因在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌中的表达

目的探讨反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌黏膜组织中Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)基因mRNA的表达水平及意义。方法经胃镜取材,采用荧光定量PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌组织中COL1A1基因mRNA的表达水平。结果 COL1A1mRNA在正常组和反流性食管炎阴性组食管黏膜中呈低表达(0.154±0.119,0.152±0.105),在Barrett食管与食管腺癌食管黏膜中呈明显的高表达(0.396±0.170,0.726±0.561)。并且在从正常→反流性食管炎→Barrett食管→食管腺癌的发生、发展过程中,COL1A1mRNA的表达呈现渐进性增强,并与病期有关。结论 COL1A1基因的异常表达与反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌的发生、发展密切相关;COL1A1mRNA的表达水平可用作监测Barrett食管和食管腺癌早期发生及干预治疗效果的有用指标。

去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性研究

背景:Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性主要分布在分子链的端肽区域,可在胶原蛋白提取过程中通过水解或是去除而使其失活,制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,降低其免疫原性。目的:评价去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:采用酶切、盐析、透析工艺制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白染色极限的分析,鉴定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度,依据YY/T 0606.25-2014中规定的方法,利用Quant-IT PicoGreendsDNA Reagent and Kits试剂盒测定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的DNA残留量,利用ELISA试剂盒分析去端肽Ⅰ型胶原蛋白的端肽去除效果,依据YY/T 1561-2017标准检测去端肽Ⅰ型胶原蛋白的α-Gal抗原含量。结果与结论:去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度可达99.8%,DNA残留量为4μg/g,C、N末端肽浓度低于试剂盒检测限,α-Gal抗原含量低于检测限。通过酶切、盐析、透析工艺制备的去端肽Ⅰ型胶原蛋白,可显著去除天然胶原蛋白的免疫原性根源,有效控制胶原蛋白临床应用的免疫原性风险。

京尼平交联Ⅰ型胶原蛋白材料与人脂肪间充质干细胞的生物相容性

背景:京尼平的低毒性具有一定的种属和细胞特异性,人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架材料的生物相容性对于应用两者构建组织工程脂肪至关重要。目的:评估人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架材料的生物相容性。方法:分离培养人脂肪间充质干细胞,传代培养至第3代,接种于京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架材料上。MTT法评估人脂肪间充质干细胞在支架材料上的黏附和增殖情况,支架材料对细胞的毒性作用;光镜和电镜分别观察人脂肪间充质干细胞在支架材料上的黏附和生长过程,以及细胞形态学变化。结果与结论:人脂肪间充质干细胞接种于支架材料后,能够迅速在材料上黏附、增殖,其黏附率平均为86.5%;光镜和扫描电镜显示人脂肪间充质干细胞在支架材料上黏附性良好,随着时间的推移,细胞逐渐增多,可以迁移进入支架内部并均匀分布。结果表明京尼平对细胞的毒性低,交联后的支架材料与人脂肪间充质干细胞具有良好的体外生物相容性。

积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达

目的:研究外源性TGF-β对肝星状细胞系(HSC-T6)的激活作用,以及积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的药理作用.方法:用LDH和MTT实验测定积雪草酸对HSC-T6细胞的细胞毒性和细胞增殖的影响.检测HSC-T6细胞受不同剂量和不同时间TGF-β刺激后表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量和时间.以不同剂量的积雪草酸作用于TGF-β活化的HSC-T6细胞,提取细胞总蛋白,以Western Blot方法检测积雪草酸对TGF-β活化的HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.结果:TGF-β刺激HSC-T6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白的最佳剂量为1ng/mL,最佳时间24h.10～30μmol/L积雪草酸可以抑制TGF-β诱导的HSC细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.结论:外源性TGF-β可激活HSC-T6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白;积雪草酸抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达.

ADAMTS-1对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1)表达的影响及可能的机制。方法应用细胞培养技术进行小鼠肺成纤维细胞培养,利用ADAMTS-1为刺激因子,将培养的细胞分为空白组、低、中、高浓度组,应用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察COL1 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在各组中的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blotting)观察各组细胞COL1、TGF-β1的变化。结果与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组的COL1、TGF-β1表达水平下降,其中高浓度组表达水平最低(P<0.05)。结论 ADAMTS-1能降低COL1的表达,抑制TGF-β1是其抗纤维化作用的可能潜在机制。

青光安有效组份对兔眼滤过术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的:观察青光安4种有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响,探讨青光安有效组份抗青光眼术后滤过道瘢痕化的效果及作用机制。方法:将青光安有效组份作用于滤过性手术后兔眼(D,E,F,G组),通过与空白组(A组)、模型组(B组)、MMC组(C组)的比较,观察青光安4种有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响。结果:术后MMC组及有效组份2组(E组)眼压回升缓慢,第4wk时眼压仍为最小,该两组眼压值与其他组眼压值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。成纤维细胞个数组间比较,除组份1组与组份3组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ型胶原蛋白的表达除C组与E组、B组与G组、F组与G组间胶原表达差异无统计学意义(P>0.05),其他组间两两比较结果,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:青光眼术后滤过道瘢痕化,是导致术后眼压异常回升、滤过性手术失败的重要原因。青光安有效组份2和MMC都可通过抑制成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少瘢痕组织增生,具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。

电针对膝骨关节炎MIA模型大鼠软骨组织中Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响

目的观察抑制Ⅰ型胶原蛋白基因表达是否为电针改善膝骨关节炎的作用机制之一。方法将40只成年SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和电针组,每组10只。采用注射单体碘乙酸钠(MIA)并驱赶大鼠运动来建立膝骨关节炎MIA模型,药物组造模后采用塞来昔布溶入到10%DMSO中进行灌胃,电针组采用电针足三里、阳陵泉治疗。比较各组大鼠治疗前后痛阈及软骨组织内Ⅰ型胶原蛋白m RNA表达水平的变化情况。结果模型组、药物组及电针组大鼠造模后痛阈与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组和电针组大鼠处死前痛阈与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组大鼠处死前痛阈与电针组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、药物组及电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。药物组和电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与药物组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针与药物对治疗膝骨关节炎的作用机制可能与抑制Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达有关。

动脉损伤后Ⅰ型胶原蛋白基因表达在再狭窄形成中的时相性变化

目的 :探讨细胞外基质在再狭窄形成过程中的演变及其作用。方法 :应用 Northern blots,原位杂交及组织形态学方法检测细胞外基质主要成分 型胶原蛋白基因在动脉损伤前及损伤后 1、2、4周的表达 ,并通过组织形态学方法观察新生内膜中胶原成分的沉积。结果 : 型胶原蛋白基因表达在损伤后 1周即有明显增高 ,2周时达到高峰 ,4周仍维持在较高水平 ,且新生内膜中有相当高比例的胶原成分。 结论

圆二色和拉曼光谱法分析Ⅰ型胶原蛋白二级结构及热变性

选用圆二色和拉曼光谱对一种Ⅰ型胶原蛋白的溶液态和固态进行二级结构分析,并分别观察二级结构随温度所发生的改变(即热变性)。结果表明,圆二色光谱法测试Ⅰ型胶原蛋白溶液态的变性温度约为40℃。在温度低于40℃时,胶原特有的P2结构随温度升高而降低,三螺旋结构被逐步破坏;拉曼光谱法测试固态即胶原蛋白海绵的变性温度约为200℃,与样品的差热分析结果基本一致。该工作可作为胶原蛋白相关研究的实验提供参考。

Ⅰ型胶原蛋白生物膜在损伤肌腱内源性愈合过程中的作用

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白生物膜材料在损伤肌腱内源性愈合过程中的作用。方法选取16只健康SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组8只。通过手术切割缝合方法建立大鼠损伤肌腱模型,采用改良Kessler法修复损伤的肌腱。实验组在损伤肌腱修复后使用Ⅰ型胶原蛋白生物膜包裹处理后关闭伤口,对照组在损伤肌腱修复后直接关闭伤口,分别于治疗后第1、2、3、4周取材,HE染色观察肌腱愈合情况,免疫荧光(IF法)检测肌腱愈合过程中Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果随着治疗时间推移,肉眼观察到实验组肌腱光滑,与周围组织极少有粘连;对照组肌腱损伤处与周围组织粘连明显。HE染色发现,实验组肌腱细胞及胶原纤维沉积呈线性排列,较为整齐;对照组肌腱组织周围可见大量成纤维细胞及毛细血管向肌腱细胞浸润,与肌腱细胞融合,胶原排列紊乱,实验组肌腱愈合质量明显优于对照组。免疫荧光检测发现,2组成熟新生肌腱细胞多表达Ⅰ型胶原,核被染成蓝色荧光,显微镜下观察可见荧光足够亮,并能稳定较长时间;通过染色细胞计数,治疗后1~4周实验组Ⅰ型胶原蛋白表达高于对照组(P<0.05),胶原纤维排列更加有序(P<0.05)。2组表达Ⅰ型胶原蛋白特性的细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ⅰ型胶原蛋白生物膜材料在损伤肌腱内源性愈合过程中有促进作用。

Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达

[目的]应用荧光差异显示技术筛选胃癌中特异表达的基因,并验证其在胃癌、食管癌中的表达,为进一步了解胃癌、食管癌发生、发展的分子机制提供帮助。[方法]应用荧光差异显示技术(DD-PCR)分析胃癌及其相对应的正常胃黏膜组织,获得差异表达的基因片段,这些片段经过二次PCR再扩增后进行克隆和测序,通过在GenBank中同源性检索,查找与差异片段相对应的同源基因。应用半定量PCR,荧光定量PCR等方法进一步验证该基因在胃癌及食管癌中的表达差异。[结果]通过DD-PCR得到的差异片段中的一个片段对应于人Ⅰ型胶原蛋白基因。该基因的读码框长4395bp,编码1464个氨基酸,编码蛋白分子量约139.01kD。该基因在胃癌及食管癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织,并且在食管癌组织中的表达差异较胃癌中更明显。[结论]人Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌及食管癌中均呈高表达,推测其可能在胃癌及食管癌的发生发展中起作用。

SPARC对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达的影响

目的观察富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法用不同浓度重组人SPARC作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(实验组),并与空白组作对照。用实时荧光定量RT-PCR法检测其Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达情况。结果与空白对照组相比,实验组Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显增高(P<0.05)。结论SPARC能显著促进增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白基因的表达。

重组类人Ⅰ型胶原蛋白分离与纯化

目的研究重组类人Ⅰ型胶原蛋白基因工程的下游工艺。方法工程菌株Escherichia coliBL21 3.1在B ioengineering L1 523型12.8 L自控发酵罐中经24 h发酵,细胞干重达到77.3 g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4%。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经DEAE52,Sephadex G-100柱层析分离纯化。结果最终产物纯度达到98%,回收率为80.5%。结论纯化的类人Ⅰ型胶原蛋白经SDS-PAGE电泳测定为电泳纯,分子质量为90ku,N端序列为NH2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G,与基因序列设计一致。

河鲀Ⅰ型胶原蛋白提取物防治环磷酰胺、顺铂或阿糖胞苷诱发小鼠骨髓抑制的研究

目的:观察河鲀Ⅰ型胶原蛋白提取物(Puff-erfishtypeⅠcollagen extract,PTICE)对环磷酰胺(CTX)、顺铂(DDP)或阿糖胞苷(Ara-c)诱发的小鼠骨髓抑制的影响。方法:分别用CTX、DDP、Ara-c腹腔注射(i.p.)诱发小鼠骨髓抑制、免疫抑制等毒副反应,PTICE灌胃(i.g.)预防治疗,观察小鼠的一般状况,测定外周血细胞分类、脾脏指数和骨髓DNA含量。结果:PTICE可改善应用上述化疗药物小鼠的一般状况,保护小鼠毛发,升高外周血中的白细胞、血小板、中性粒细胞、淋巴细胞数,增加脾脏指数和骨髓DNA含量;PTICE显著降低DDP导致的小鼠死亡率。结论:PTICE可降低化疗药物引起的小鼠骨髓抑制等毒副作用。