安体维康抗艾滋病毒实验研究和临床初步观察

目的:为研究安体维康(ATVC)对艾滋病毒I型(HIV-1)有无抑制作用,按国际通行方法进行了体外抗艾滋病毒实验并进行临床观察。方法:采用体外和临床试验方法对安体维康的抗HIV效果进行评价。结果:安体维康合剂在所试剂量0.039%～0.156%范围内对HIV-1有一定抑制作用,抑制率达86.95%,50%有效浓度为0.037%,治疗指数(TI)为6。临床应用安体维康胶囊治疗艾滋病3例,用药3个月时,2例HIV载量下降,1例症状明显改善。治疗HIV携带者2例,服药3个月时,1例HIVRNA有下降趋势,1例无效。结论:安体维康胶囊治疗艾滋病比治疗HIV携带疗效好。

TZM-b1细胞系检测我国HIV-1病毒表型耐药性

目的利用TZM-b1细胞系检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)对逆转录酶抑制剂(AZT、d4T、ddI、NVP)的药物敏感性,并用该方法检测中国抗病毒治疗失败者的表型耐药。方法用两种实验室适应毒株SF33和ⅢB来评价TZM-bl细胞方法的敏感性;用外周血单个核细胞(PBMC)共培养法分离扩增抗病毒治疗失败者的临床毒株;用TZM-b1法检测16例临床毒株对逆转录酶抑制剂的表型耐药。结果AZT、d4T、ddI、NVP对SF33/ⅢB毒株的抑制50%病毒复制的药物浓度(IC_(50))分别为0.009/0.005μumol/L、0.125/0.113μmol/L、0.495/1.905μmol/L、0.093/ 0.045μmol/L。16例临床分离毒株中分别有13(81.396)株、13(81.396)株对AZT和NVP耐药。其中7株(53.8%)显示对AZT高度耐药;对NVP耐药的均为高度耐药,其中8株IC_(50)升高1000倍以上。结论TZM-b1细胞系可用来快速检测HIV-1病毒表型耐药。我国抗病毒治疗失败者的表型耐药主要表现为对AZT和NVP耐药。

CRF01_AE CRF07_BC和B’亚型HIV-1 pol基因及耐药特征分析

目的研究中国部分地区新发现未经抗病毒治疗的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者的耐药情况,及不同亚型毒株pol基因的多态性对耐药突变产生的影响。方法选取2005-2006年湖南、云南、四川和新疆4省(自治区,下同)当年确认的部分样本,进行核酸扩增及测序,利用系统进化及重组分析的方法确定亚型;根据美国斯坦福大学HIV-1耐药数据库,分析不同亚型毒株蛋白酶基因和逆转录酶基因的多态性和耐药突变情况;利用荷兰乌得勒支大学Vijver等人使用的一种遗传障碍定量方法,计算并比较不同亚型间耐药突变产生的遗传障碍。结果共得到84份样本PR基因区(1-99氨基酸)和RT基因区(1-272氨基酸)的序列,亚型分析显示:84份样本中B’亚型13份,01-AE重组亚型27份,07-BC重组亚型44份,其中18份样本在蛋白酶基因区的第10位和第71位存在次要耐药突变;来自云南省和湖南省的3份样本中,存在逆转录酶抑制剂相关耐药突变,分别是A62V、V179D和G190A。三种亚型在逆转录酶基因区的2个非核苷类抑制剂相关耐药突变位点V106M和V108I的遗传障碍存在差异,有显著的统计学意义(P<0.001)。结论4个地区未冶疗感染者中耐药发生的水平较低。遗传障碍的比较,CRF01-AE、CRF07-BC与B’亚型病人经治疗后主要耐药突变的发展模式应基本一致。

河南省HIV流行毒株env膜蛋白基因C_2-V_3区序列特征和亚型研究

目的 了解河南省内艾滋病病毒Ⅰ型 (HIV 1)流行株的亚型及序列变异特征。方法 用套式聚合酶链反应 (nested PCR) ,对河南省内 2 8份HIV 1感染者外周血单个核细胞 (PBMc)中前病毒脱氧核糖核酸 (DNA)的膜蛋白基因进行扩增 ,并对C2 V3 及其邻区 35 0～ 4 5 0个核苷酸序列进行测定和分析。结果 2 8份样品间的基因离散率为 5 72 % ,与流行于云南省的 (泰国B)毒株基因距离为 5 80 % ,与欧美B亚型基因距离为 18 0 5 % ,而与其它A、C、D、F、G、H、J、O等亚型的基因距离均在 2 4 %以上。系统树分析显示 ,2 8份样本与泰国B亚型聚在一起而远离其它国际亚型。对于其V3 环四肽序列的分析表明 ,具有泰国B亚型基因型GPGQ的 8例 ,占 2 8 5 7% ;具有欧美B亚型基因型GPGR的 13例 ,占 4 6 4 %。结论 河南省流行的HIV株属B′亚型 ,其毒株来自与泰国接壤的云南省 ,在河南省流行的时间约在 6～ 10年 ,其V3 环顶端四肽序列特征以GPGR为主。

广州市2004-2005年HIV-1感染者亚型分析

目的了解广州市艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况。方法从2004-2005年采集的92份HIV-1抗体阳性者抗凝全血中,提取前病毒DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增gag和env区基因并测定序列,与国际标准参考序列比较确定亚型。结果经系统进化树分析,92份样本中34份为CRF01-AE,40份为CRF07-BC,7份为CRF08-BC,3份为欧美B,6份为泰国B(B’),2份为C。结论广州市HIV-1流行株以CRF01-AE和CRF07-BC为主,也存在CRF08-BC、B、B’及C亚型。

不同病期HIV-1感染者的病毒学和免疫学研究

目的了解不同疾病阶段艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者体内的病毒载量和免疫学变化,探讨其在疾病发展过程中的作用。方法应用核酸序列扩增技术(NASBA)、流式细胞仪和定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例正常人、38例HIV无症状感染者、24例HIV有症状感染者和21例艾滋病(AIDS)病人的外周血浆病毒载量、T淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞因子浓度,并结合临床情况进行分析。结果处于不同疾病阶段的HIV无症状感染者、HIV有症状感染者和AIDS病人的血浆病毒载量不同,3组之间有显著性差异(P<0.01),艾滋病组的病毒载量为HIV-RNA 6.04±0.28 log/ml,远远高于HIV无症状组的3.84±0.26 log/ml。3组的CD4+细胞、CD4/CD8比值及IL-2浓度不断下降且明显低于正常人群(P<0.01),Th2细胞因子IL-4和IL-10则明显高于正常人群,且各组之间均有显著性差异(P<0.01)。各因素的相关性分析显示:HIV-RNA与CD4+、CD4/CD8、IL-2,IL-2与IL-4、IL-10,IL-4与IFN-γ、CD4+细胞之间有高度直线负相关关系(P<0.001);HIV-RNA与IL-4、IL-10,CD4+与CD8+、CD4/CD8、IL-2,IL-2与IFN-γ,IL-4与IL-10之间有高度直线正相关关系(P<0.001)。结论不同病期的HIV-1感染者其病毒载量水平、免疫学状况有明显不同。当HIV-RNA升高,CD4+细胞、CD4/CD8比值下降和细胞因子由Th1型为主转变为以Th2型为主时,提示疾病处于进展中。因此,检测这些指标变化可为HIV的临床分期、判断预后和治疗提供依据。

保存时间对血浆样本HIV-1病毒载量测定值的影响研究

目的观察保存时间对血浆样本艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒载量测定值的影响。方法应用HIV-1核酸序列扩增系统技术(NASBA)对87份-20℃保存的HIV-1抗体阳性血浆样本分组,分别在第0、3、6、11、12、13、14个月进行HIV-1病毒载量检测。结果-20℃保存3个月的样本病毒载量无明显降低,平均下降0.210Log值(P>0.05),6个月以后的样本病毒载量明显降低,平均下降0.256Log值(P<0.05),11、12、13个月以后的样本病毒载量明显降低,平均下降大于0.428Log值(P<0.05),但病毒载量下降幅度与原始病毒载量无关(P>0.05)。结论血浆样本在-20℃条件下保存6个月以上HIV-1 RNA病毒载量水平降低明显,已不能真实反映原始样本病毒载量水平,用于病毒载量检测的血浆样本在-20℃冰柜中不宜超过3个月。

一种唾液快速检测HIV-1/2型抗体试剂的现场评价

目的对一种唾液快速检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体试剂进行现场评价,考核其现场使用的敏感性和特异性,以及与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性。方法采集247例已知HIV感染者、1 090例正常献血人员、60例患有其它疾病的患者(包括孕妇、肿瘤患者、一般疾病患者),以及109例HCV感染者和119例未知HIV感染状况的吸毒人员的唾液标本,现场使用Vanguard OMTTM唾液HIV-1/2抗体快速检测试剂盒(CalypteBiomedical生产)进行检测,同时平行采集上述人群的血液标本,使用Vironostika HIV Uni-FormⅡplus O(BioMerieux生产)进行对比测试。结果247例已知HIV感染者中,247例唾液标本HIV-1/2型抗体检测均为阳性。1 259例血液酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗体阴性人群中,1 257例唾液检测为阴性,2例为阳性。119例吸毒人员中,28例血液标本HIV阳性中,唾液标本检出27例。91例HIV阴性中检出阴性90例。该唾液HIV抗体快速检测试剂,敏感性为99.64%,特异性为99.78%。与ELISA检测的一致性为99.75%。结论唾液HIV-1/2型抗体检测试剂与现行的血液ELISA检测结果相近。唾液标本的采集方便而且危险性小,推荐在采血较困难的人群、基层医疗机构、VCT门诊等,可考虑使用唾液HIV-1/2型抗体快速检测试剂进行HIV抗体初筛检测。

HIV-1耐药性表型检测方法研究进展

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性产生机制及检测方法,是HIV/艾滋病(AIDS)研究领域的热点之一。HIV耐药性检测是指导抗HIV临床管理和治疗失败后选择新治疗方案的主要技术手段。目前国际上发展较为成熟并且应用于临床的有基因型和表型耐药检测两种实验方法。该文主要就HIV耐药性的表型测定法的相关进展以及耐药性检测中的新理念作一综述。

口腔黏膜渗出液检测HIV1/2型抗体的方法评价

目的评价口腔黏膜渗出液检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体的敏感性和特异性,及其与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性。方法分别取已知HIV感染者及未感染者餐前及餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后,牙周疾病患者、健康志愿者的口腔黏膜渗出液标本,检测HIV-1/2抗体。同时平行采集上述人群的血清标本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV-1/2抗体。并进一步通过ELISA方法检测标准血清转换盘,同时用此试剂检测该感染者的口腔黏膜渗出液标本中的HIV-1/2抗体。结果15例已知HIV感染者(餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后)口腔黏膜渗出液标本为阳性,其余口腔黏膜渗出液标本均为阴性;15例已知HIV感染者血清标本均为阳性,1例健康志愿者血清标本呈阳性(后经Western Blot试验确认为阴性),余血清HIV抗体均为阴性。该口腔黏膜渗出液HIV抗体检测试剂的敏感性为100%,特异性为100%,与ELISA检测的一致性为99.85%。血清转换盘实验结果显示,血清标本于感染后的33天检出阳性,口腔黏膜渗出液于感染后的28天检出阳性。结论利用口腔黏膜渗出液检测HIV-1/2型抗体与现行的血液ELISA检测结果相近。口腔黏膜渗出液标本采集方便而且危险性小,在采血较困难的人群、基层医疗机构、艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊等,可考虑使用口腔黏膜渗出液进行HIV抗体的初筛检测。

尿液中检测HIV-1抗体进行男同性恋HIV病毒感染筛查的研究

目的:用酶联免疫吸附试验(ELASA)进行男同性恋者尿液中艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)抗体检测,并与血清学检测结果进行比较,探讨采用尿液检测HIV抗体进行特殊人群HIV感染筛查的可行性。方法:平行采集受检男同性恋者的外周静脉血及尿液标本,分别用血液和尿液ELISA法检测HIV抗体,阳性血清标本采用WB法确认。结果:检测109人,血清学检测结果3人阳性,并经WB实验确认为HIV病毒感染,尿液检测3人为阳性,与血清学实验对照,准确性为100%。结论:尿液检测HIV-1抗体结果可靠,可作HIV病毒感染的筛查。

重组痘苗病毒嵌合巨蛋白的免疫学研究

目的 pSFJ1 6与pSFJ38均是以牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和分别串联的 1 6个和 38个p7 5突变型早期启动子为基本构件组成的复合型启动子 (ATI-p7 5)、痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼的痘苗病毒表达载体。分别插入编码艾滋病病毒 (HIV - 1 )外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα - 2b)基因 ,观察其表达产物诱导的机体内产生抗体效价的变化规律。方法 利用分子克隆技术构建重组质粒 ,经脂质体转染与野生型痘苗病毒在Cos- 7细胞内同源重组 ,筛选、纯化、获得重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα - 2b。免疫小鼠后 ,经间接ELISA分折免疫小鼠血清抗体的OD4 90 值变化。结果 免疫小鼠后体内抗体的OD4 90 值 ,实验组与阴性对照组平均数有显著性差异 (P <0 0 5) ,实验组与阳性对照组之间无显著性差异 (P >0 0 5)。结论 重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα- 2b免疫小鼠后可诱导机体产生高滴度的抗HIV - 1env、gag与IFNα - 2b巨蛋白抗原的抗体 ,蛋白稀释度与血清抗体OD4 90

河南和新疆地区HIV-1毒株gp120和gag基因的变异分析

目的分析中国河南和新疆地区艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)毒株gp120和gag基因全长序列的变异特征。方法PCR扩增河南和新疆HIV-1确认阳性样本前病毒DNA gp120和gag全长基因,测序得到40份gp120和41份gag基因序列,用GCG软件包等软件进行分析。结果河南省HIV-1毒株为B′亚型,新疆维吾尔自治区HIV-1毒株为CRF07 BC亚型。B′亚型毒株gp120基因中变异程度最大的区段是V5区段,最小的是C1区段;CRF07BC亚型毒株中变异最大的是V1区段,最小的是C4区段。两种亚型毒株gp120和gag基因的Ks/Ka值<1(P<0.05)。结论对于病毒基因全长序列的分析可以更多地反映病毒的特性。gp120基因各个区段在B′和CRF07BC亚型毒株中的变异程度不一致。B′和CRF07 BC亚型毒株的gp120基因和gag基因都受到正向选择压力的作用。

HIV-1早期感染婴儿病毒亚型及env区V3环氨基酸特征分析

目的分析中国I型艾滋病病毒(HIV-1)感染婴儿基因亚型的分布情况,以及env区V3环氨基酸序列特征。方法利用巢式聚合酶链反应(nPCR)扩增HIV-1前病毒脱氧核糖核酸(DNA)env区和pol区的基因序列,使用ChromasPro、MEGA 4.0、BioEdit软件进行HIV-1基因分型以及env区V3环氨基酸序列的特征分析。结果对65名HIV-1感染婴儿的100份干血斑样本(DBS)分别进行HIV-1 env区和pol区扩增,最终扩增成功的样本为63份和84份;其中45名感染婴儿的59份DBS两基因区均扩增成功。依据两基因区域均扩增成功的45名感染婴儿样本进行基因分型,结果为:CRF_BC亚型占73.3%(33/45,包括CRF_07-BC 21份,CRF_BC-08 11份),CRF01-AE亚型占20.0%(9/45),B′亚型占4.4%(2/45),G亚型占2.2%(1/45)。对env区扩增成功的63份样本的V3环顶端四肽特征序列进行分析,结果显示存在5种类型,分别为GPGQ、GPGR、GPGS、GLGR和GQGR,以GPGQ为主。53份样本可能使用CCR5作为辅助受体,3份样本可能使用CXCR4作为辅助受体,7份样本不能做出预测。结论婴儿感染的HIV-1亚型呈现多样性分布;HIV-1V3环顶端氨基酸序列以GPGQ为主;大部分婴儿样本可能使用CCR5作为辅助受体。

广西艾滋病疫情严重地区壮族和汉族普通人群CCR5 CCR2 SDF1等位基因检测及其意义

目的调查艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染相关的CCR5、CCR2及SDF1等位基因,在广西壮族和汉族普通人群中的多态性及其流行病学意义。方法在广西天等县和南宁市,选取150名壮族和90名汉族健康人作为研究对象,采集外周血,提取基因组DNA,用聚合酶链反应(PCR)扩增CCR5、CCR2及SDF1基因的特定片段。直接根据PCR扩增结果分析CCR5基因多态性,运用限制性片段长度多态性(RFLP)技术分析CCR2及SDF1的多态性。结果全部研究对象的CCR5基因均为野生型,未发现CCR5Δ32突变;CCR2-64I等位基因频率在壮、汉族普通人群中分别为25.7%、26.1%;SDF1-3′A等位基因频率分别为27.7%和27.2%。结论广西壮、汉族普通人群缺乏艾滋病抗性的CCR5Δ32等位基因,而CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因频率较高。该研究为深入研究广西壮、汉族普通人群对于HIV-1感染的遗传易感性,以及对艾滋病疫情和病程的影响提供了比较全面、可靠的数据。

滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的建立

目的探索用滤纸片作血液样本的载体,建立一种简单、经济、敏感的滤纸片干血斑艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)DNA检测方法。解决HIV-1感染者全血样本采集、运输和储存过程中存在的实际困难。方法首先用滤纸片FTA卡收集血液制成滤纸片干血斑,处理提取DNA后,针对HIV的env、gag、pol区,设计三对高度保守引物,套式PCR扩增HIV-1 DNA。进一步用HIV-1质粒DNA检测该方法的最低检测限。结果摸索出扩增滤纸片干血斑HIV-1 DNA的最佳扩增条件;滤纸片干血斑样本pol区最低检测限是6拷贝/μl,env区8拷贝/μl,gag区10拷贝/μl。结论可以用滤纸片FTA卡收集HIV-1感染者的血液,制成滤纸片干血斑后检测HIV-1 DNA。该方法操作简便、经济、敏感,建议作为HIV-1抗体检测的辅助诊断方法。

BED-CEIA HIV-1发病捕获酶联法应用的现状和发展趋势

流行病学的队列研究和一些实验室方法都可用于对目标人群艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新近感染状况的估计,但各种方法在偏倚的控制、价格、技术等方面存在制约其被广泛应用的因素。BED HIV-1发病捕获酶联法(BED HIV-1 Incidence Capture EIA,简称BED-CEIA方法)作为一种可以估计目标人群HIV-1新近感染状况的实验室方法,已在各个国家得到了一定的规模应用。该文主要综述了BED-CEIA方法目前在国内外的应用状况。

HIV-1/2抗体唾液快速检测试剂在贵阳市MSM人群中的应用及评价

自1981年在美国旧金山的男男性接触人群（men who have sex with men,MSM）中发现5例艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）病人以来[1],全世界每天有超过7000例新感染病例并且遍布世界各地[2]。其中MSM是感染人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）的高危人群。