七氟烷后处理对脑缺血大鼠学习记忆功能和氧化应激反应的影响

目的观察七氟烷(Sevo)后处理对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的学习记忆功能、神经功能及氧化应激反应的影响。方法选取SPF级健康雄性老年SD大鼠40只,随机分为4组,分别为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(CIRI组)、2%Sevo后处理组(2%Sevo组)、3%Sevo后处理组(3%Sevo组),每组10只。除Sham组外余下3组采用左颈总动脉夹闭闭塞法构建CIRI大鼠模型。在模型构建后后处理组分别吸入2%、3%Sevo 30 min,Sham组、CIRI组则自主呼吸30 min。恢复灌注24 h后,使用Garcia神经功能评分评估神经功能;恢复灌注72 h后,通过Morris水迷宫实验检测学习记忆能力;随后收集血清并处死大鼠,利用酶联免疫吸附(ELISA)实验检测大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的活性;收集大鼠缺血侧脑皮质组织,通过ELISA实验检测其中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-10浓度。结果恢复灌注24 h后,CIRI组Garcia评分为(9.932±0.349)分,显著低于Sham组,Sevo后处理组Garcia评分较CIRI组升高,其中2%Sevo组效果显著(P<0.05)。恢复灌注72 h后,CIRI组各时段逃避潜伏期显著高于Sham组,穿越平台次数亦显著低于Sham组,Sevo后处理各组各时段逃避潜伏期明显降低、穿越平台次数明显升高,其中2%Sevo浓度组表现明显,差异有统计学意义(P<0.05)。CIRI组大鼠血清LDH、CK、MDA和脑组织IL-1β、IL-6、IL-10水平分别为(614.89±76.48)U/L、(1369.52±218.03)U/L、(10.68±1.25)nmol/mL和(2.91±0.48)pg/mg、(2.89±0.69)pg/mg、(11.62±1.94)pg/mg,均显著高于Sham组,血清SOD水平为(89.15±6.12)U/mL,显著低于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05),Sevo后处理组各指标水平趋势与之相反,其中2%Sevo浓度效果显著,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟烷后处理对CIRI大鼠有明显的脑部保护作用,降低氧化应激反应;并能提高大鼠的学习记忆能力,减轻神经功能损伤与脑内炎症反应,以2%Sevo浓度效果最显著。其疗效机制可能与其抗炎、抗氧化机制有关。

锌转运体Zip1在糖尿病缺血再灌注大鼠七氟烷后处理心肌保护中的作用

目的探讨糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时锌转运体Zip1的表达变化与七氟烷后处理心肌保护作用的关系。方法采用随机数字表法将SD大鼠分为4组:心肌缺血再灌注(I/R)组、七氟烷后处理组(I/R+SEV组)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DM+I/R组)、糖尿病七氟烷后处理组(DM+I/R+SEV组),每组15只。4组大鼠均采用缺血30 min再灌注120 min建立心肌缺血再灌注损伤模型。DM+I/R组和DM+I/R+SEV组采用高脂高糖饮食8周后腹腔注射35 mg/kg STZ建立糖尿病模型,然后再进行心肌缺血再灌注损伤。I/R+SEV组和DM+I/R+SEV组于再灌注开始前1 min,通过挥发罐持续吸入2.5%七氟烷10 min。采用ELISA法检测血清肌钙蛋白I(cTnI)浓度;然后处死大鼠取心脏,TTC染色法检测心肌梗死范围,免疫组化法检测心肌Zip1蛋白表达,蛋白免疫印迹法检测心肌Zip1、Drp1、PINK1、Parkin的表达水平。结果与I/R组比较,I/R+SEV组血清cTnI含量和心肌梗死体积百分比降低(P<0.05),Zip1表达差异无统计学意义(P>0.05),Drp1、PINK1、Parkin蛋白表达降低(P<0.05);与I/R组比较,DM+I/R组血清cTnI含量和心肌梗死体积百分比升高(P<0.05),Zip1表达显著降低(P<0.01),Drp1表达升高(P<0.05),PINK1、Parkin表达显著降低(P<0.01)。与I/R+SEV组比较,DM+I/R+SEV组血清cTnI含量和心肌梗死体积百分比升高(P<0.05),Zip1表达显著降低(P<0.01),Drp1表达显著升高(P<0.01),PINK1、Parkin表达降低(P<0.05)。与DM+I/R组相比,DM+I/R+SEV组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病大鼠七氟烷后处理心肌保护效应的消失可能与糖尿病大鼠心肌Zip1表达下调有关。

SIRT1/Nrf2/HO-1通路在七氟烷后处理改善失血性休克复苏小鼠空间学习与记忆障碍中的作用

目的探究沉默信息调节因子1(silent information regulation 1,SIRT1)/核因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)通路在七氟烷后处理减轻脑缺血/再灌注小鼠认知功能损伤中的作用。方法将♂C57BL/6J小鼠随机分为:假手术组、失血性休克复苏组、七氟烷后处理组、七氟烷后处理+SIRT1抑制剂组、七氟烷后处理+Nrf2抑制剂组,建立脑缺血/再灌注模型。水迷宫检验小鼠学习记忆能力;检测海马组织ATP、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧、丙二醛含量;Western blot检测海马SIRT1、Nrf2和HO-1蛋白表达。结果再灌注后小鼠学习记忆能力降低,海马SOD、ATP含量降低,丙二醛、活性氧含量升高,SIRT1、Nrf2和HO-1蛋白表达降低;七氟烷处理后减轻了再灌注后小鼠记忆障碍和氧化应激;加用SIRT1和Nrf2抑制剂后,减弱了七氟烷对小鼠认知障碍和氧化损伤的保护作用。结论七氟烷后处理可能通过SIRT1/Nrf2/HO-1通路对失血性休克复苏引起的小鼠学习记忆障碍起到保护作用,机制与其抑制氧化应激反应相关。

七氟烷后处理联合七氟烷预处理对急性心肌缺血-再灌注大鼠血浆SOD及MDA的影响

目的探讨七氟烷后处理联合预处理是否能减轻再灌注损伤,其作用是否较单一作用更强及其机制,为临床应用提供实验依据。方法健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组,假手术组(S组):大鼠冠脉只穿线不结扎;缺血再灌注组(I/R组):大鼠造模,缺血30 min,再灌注120 min;七氟烷预处理组(sevopre组):缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注120 min;七氟烷后处理组(sevopo组):大鼠再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min;七氟烷后处理+七氟烷预处理组(pre+po组):缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min。实验结束时取颈动脉血及心肌组织分别测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌梗死面积。结果再灌注120 min后,pre+po组与sevopre组、sevopo组比较心肌梗死面积显著减少(P<0.05),显著升高了SOD活性,降低了丙二醛含量(P<0.05)。结论七氟烷后处理联合预处理能减少心肌梗死面积,提高再灌注后SOD活性,降低MDA含量,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。

七氟烷后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤PI3K/Akt通道的影响

目的探讨七氟烷后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤PI3K/Akt通道的影响。方法 SD雄性大鼠40只随机分为5组(n=8):假手术对照组(C组)、缺血再灌注损伤组(IR组)、2.5%七氟烷后处理组(S组)、2.5%七氟烷+磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B抑制剂LY294002组(S+LY组)和溶剂对照组(DMSO组)。采用双侧颈总动脉阻断联合低血压法制备脑缺血再灌注模型。于再灌注结束后处死大鼠取海马,光镜下观察海马病理学变化,采用免疫组化法检测Caspase-3及p-Akt的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与C组相比,其余4组AI、Caspase-3及p-Akt表达均增加(P<0.05)。与IR组相比,S组AI及Caspase-3表达显著降低(P<0.05),p-Akt表达明显增加(P<0.05),S+LY组及DMSO组各指标表达无明显差异(P>0.05)。结论七氟烷后处理可能通过激活PI3K/Akt通道,抑制Caspase-3表达,减少大鼠脑缺血再灌注损伤时神经元细胞凋亡,发挥脑保护作用。

七氟烷后处理对海马HO-1表达的影响及其抗炎作用

目的探讨七氟烷后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及血红素氧合酶-(1HO-1)的抗炎作用。方法清洁级雄性SD大鼠40只,体重230～270g,随机分为5组,假手术组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟烷组(S组)、抑制剂组(S+Z组)和溶剂对照组(S+D组)。采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压方法制备脑缺血再灌注损伤模型。将所有大鼠再灌注24h后处死,取海马。光镜下观察各组海马病理学变化,检测海马肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL-1β)和HO-1表达。结果七氟烷组HO-1(0.466±0.041)较缺血再灌注组(0.338±0.023)显著升高(P<0.05),TNF-α和IL-1β较缺血再灌注组显著降低(P<0.05);抑制剂组HO-1较七氟烷组显著降低(P<0.05),TNF-α和IL-1β较缺血再灌注组显著升高(P<0.05);七氟烷组海马病理学损伤较缺血再灌注组和抑制剂组减轻。结论七氟烷后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与七氟烷上调脑组织中HO-1表达,从而抑制炎症反应有关。

七氟烷后处理对大鼠在体心肌抗氧化的影响

目的:探讨七氟烷后处理对大鼠在体心肌抗氧化的作用及最佳浓度。方法:将40只健康雄性SD大鼠分为5组,即假手术组(C组)、缺血再灌注组(IP组)、1%、2%、3%七氟烷后处理组(S1、S2、S3组),每组各8只,建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型。测定再灌注3 h后血浆MDA、SOD和CK-MB含量和心肌梗死面积。结果:与IP组相比,各S组心肌梗死面积、MDA、CK-MB均显著降低(P<0.05),SOD含量均显著升高(P<0.05)。S1组与S3组各指标间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与S1、S3组相比,S2组心肌梗死面积(28.5±1.35)%、MDA(8.205±2.874)nmol/ml、CK-MB(22.935±2.064)U/L均显著降低(P<0.05),SOD含量显著升高(P<0.05)。结论:七氟烷后处理可通过调节MDA与SOD的表达,发挥心肌保护作用,且中剂量组(2%七氟烷)效果更明显。

七氟烷后处理对单肺通气下行食管癌根治术患者肺损伤的影响

目的探讨单肺通气(OLV)下行食管癌根治术中七氟烷后处理对患者肺损伤的影响。方法选择2018年8月至2019年8月于新乡医学院第一附属医院择期行食管癌根治术的患者60例为研究对象,按随机数字表法分为对照组和七氟烷组,每组30例。2组患者均采用双腔支气管插管全身麻醉,OLV下行食管癌根治术;七氟烷组患者于OLV结束后给予体积分数10%七氟烷吸入30 min作七氟烷后处理。2组患者麻醉诱导用药相同,术中输注丙泊酚与瑞芬太尼静脉麻醉维持至术毕。分别于麻醉诱导前(T 0)、OLV结束后30 min(T 1)、OLV结束后4 h(T 2)、OLV结束后24 h(T 3)采集桡动脉血标本,采用酶联免疫吸附测定法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。于T 0、T 1、T 2、T 3时采集桡动脉血行血气分析,记录动脉血氧分压(PaO 2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO 2)、吸入气氧浓度(FiO 2),计算氧合指数(PaO 2/FiO 2)。结果T 0时,2组患者的血清IL-8、TNF-α、MDA水平及SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与T 0时比较,2组患者T 1、T 2、T 3时的血清IL-8、TNF-α、MDA水平均显著增高(P<0.05),SOD活性均显著降低(P<0.05)。2组患者T 1、T 2时的血清IL-8、TNF-α、MDA水平显著高于T 3时(P<0.05),对照组患者T 1、T 2时的血清SOD活性显著低于T 3时(P<0.05),七氟烷组患者T 1时的血清SOD活性显著低于T 3时(P<0.05)。T 1、T 2、T 3时七氟烷组患者的血清IL-8、TNF-α、MDA水平显著低于对照组(P<0.05),SOD活性显著高于对照组(P<0.05)。2组患者T 0、T 3时的PaO 2比较差异无统计学意义(P>0.05);T 1、T 2时七氟烷组患者的PaO 2高于对照组(P<0.05)。T 0、T 1、T 2、T 3时,2组患者的PaCO 2比较差异均无统计学意义(P>0.05)。T 0、T 3时,2组患者的氧合指数比较差异无统计学意义(P>0.05);T 1、T 2时,七氟烷组患者的氧合指数高于对照组(P<0.05)。与T 0时比较,2组患者T 1、T 2、T 3时的PaCO 2均显著增高(P<0.05),氧合指数均显著降低(P<0.05)。与T 3时比较,对照组患者T 2时的PaCO 2显著增高(P<0.05),2组患者T 1、T 2时的氧合指数显著降低(P<0.05)。结论七氟烷后处理能抑制OLV下行食管癌根治术患者炎症细胞因子的产生,改善氧合指数,对肺损伤有一定的保护作用。

七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及与NCX1的相关性研究

目的研究七氟烷后处理(SevoPoC)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及与钠钙交换体1(NCX1)的相关性。方法取36只SD大鼠,构建离体心脏灌注模型,待血流动力学稳定0.5h后,缺血0.5h复灌1h构建大鼠MIRI模型,随机分为对照组(离体心脏灌注KH液2h)、模型组(离体心脏灌注KH液0.5h,停止灌注0.5h,接着恢复灌注1h)和实验组(复灌即刻用3%的七氟烷持续灌注15min,其他同模型组),三组各12只。比较三组大鼠平衡灌注期(T0)、再灌注0.5h(T1)和再灌注1h(T2)各项心功能指标的变化情况,采用免疫印迹法检测三组大鼠NCX1、兰尼碱受体2(RyR2)及L型钙通道(LTCCs)蛋白的表达水平,并用实时荧光定量PCR法检测大鼠NCX1、RyR2及LTCCsmRNA的相对表达量。结果相比T0,模型组再灌注0.5h(T1)和再灌注1h(T2)左心室舒张末期压力(LVEDP)显著增高(P<0.05),而最大左心室发展压下降速率(-dp/dt)、最大左心室发展压上升速率(+p/dt)、心率与左心室发展压的乘积(RPP)显著下降(P<0.05);相比对照组,模型组T1和T2时LVEDP显著增高(P<0.05),而-dp/dt、+dp/dt和RPP显著下降(P<0.05);相比T0,实验组T1和T2时LVEDP显著增高(P<0.05),T1和T2时LVEDP较对照组明显增高,而较模型组显著下降(P<0.05);实验组T1时-dp/dt较模型组显著增高(P<0.05),T2时-dp/dt较T0显著下降,亦较对照组显著下降(P<0.05);实验组T1和T2时+dp/dt和RPP较模型组显著增高(P<0.05)。三组大鼠RyR2和LTCCs蛋白表达水平的比较,无显著差异(P>0.05);模型组大鼠NCX1蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而实验组大鼠NCX1蛋白表达水平较模型组明显下降(P<0.05)。三组大鼠NCX1、RyR2及LTCCsmRNA相对表达量的比较,无显著差异(P>0.05)。结论SevoPoC可促进MIRI大鼠心功能恢复,其具有保护MIRI的作用,而这一保护作用可能与其具有抑制NCX1表达的作用密切相关。

叉头框蛋白O1对糖尿病心肌七氟烷后处理敏感性的调节作用

目的:探究叉头框蛋白(Fox)O1在糖尿病心肌缺血再灌注(DM-MIR)损伤中的作用,并分析FoxO1对糖尿病心肌七氟烷后处理敏感性的调节作用。方法:采用链脲佐菌素(STZ)联合冠状动脉左前降支(LAD)结扎法建立DM-MIR大鼠模型,随机分为DM-MIR模型组(DM-MIR组)、DM-MIR模型+七氟烷后处理组(DM-MIR+Sevo-PostC组)、DM-MIR模型+七氟烷后处理+沉默对照组[DM-MIR+Sevo-PostC+绿色荧光蛋白标记的腺相关病毒9(AAV9-GFP)组]、DM-MIR模型+七氟烷后处理+FoxO1沉默组[DM-MIR+Sevo-PostC+AAV9-FoxO1小干扰RNA(siRNA)组],另设正常-假手术组(N-S组)和糖尿病假手术组(DM-S组),每组18只。采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死比例;采用苏木素-伊红染色、TUNEL染色和透射电镜观察心肌损伤情况;检测各组大鼠的血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;采用蛋白免疫印迹法检测心肌中信号传导及转录激活因子3(STAT3)/FoxO1通路及下游蛋白的表达情况。结果:N-S组和DM-S组大鼠心肌无明显损伤和梗死;DM-MIR组、DM-MIR+Sevo-PostC组、DM-MIR+Sevo-PostC+AAV9-GFP组大鼠心肌呈现纤维断裂、细胞凋亡、核变形等损伤;DM-MIR+Sevo-PostC+AAV9-FoxO1 siRNA组心肌损伤减轻。与N-S组相比,DM-S组大鼠血糖、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、FoxO1蛋白水平均升高,磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值降低(P均<0.05)。与DM-S组相比,DM-MIR组cTnI、CK-MB水平及凋亡相关蛋白(Fas)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、FoxO1蛋白水平均升高,p-STAT3/STAT3比值降低(P均<0.05);与DM-MIR组相比,DM-MIR+Sevo-PostC组、DMMIR+Sevo-PostC+AAV9-GFP组cTnI、CK-MB、血糖水平、心肌梗死比例、Fas、cleaved-caspase3、PCK1、G6Pase、FoxO1蛋白水平差异均无统计学意义(P均>0.05),而DM-MIR+Sevo-PostC+AAV9-FoxO1 siRNA组上述指标均降低(P均<0.05)。结论:FoxO1在DM-MIR大鼠心肌中高表达,当其被抑制后可恢复糖尿病心肌对七氟烷后处理的敏感性,减轻DM-MIR损伤。

七氟烷后处理对40例患者体外循环下肺静脉炎症因子的影响

目的观察七氟烷后处理对患者体外循环下肺静脉炎症因子的影响。方法选择40位体外循环下冠状动脉搭桥患者,将其随机分为七氟烷后处理组(A组)和对照组(C组)两组,每组20例。于开胸后即刻(T1),主动脉开放后5min(T2)和心脏复跳后30min(T3)分别抽取肺静脉血标本,以ELISA法测定血清白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果两组患者T3时IL-6和TNF-α的含量均较T2时增加(P<0.05),但A组的上升幅度要明显小于C组(P<0.01)。结论七氟烷后处理对体外循环导致的肺损伤具有一定的保护作用。

钙调节蛋白在七氟烷后处理心脏保护中的机制探讨

目的探讨钙调节蛋白在七氟烷后处理(SevoPoC)心脏保护中的机制。方法选取30只SD大鼠建立离体心脏模型,血流动力学稳定30 min后,缺血30 min复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型,完全随机分入以下3组,每组10只:①时间对照组(TC组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液120 min;②缺血再灌注组(I/RI组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液30 min后,停止灌注30 min,随后恢复灌注60 min;③七氟烷后处理组(SevoPoC组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液30 min后,停止灌注30 min,在复灌即刻使用含3%的七氟烷持续灌注10 min,然后使用氧合的KH液灌注50 min。各实验组均持续监测左心室舒张末期压力(LVEDP)、心率、左心室发展压(LVDP)、最大LVDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率。检测心肌梗死面积和冠状动脉流出液中心肌肌钙蛋白I(cTnl)水平。分别用蛋白印迹法和荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测L型钙通道(LTCCs)、兰尼碱受体2(RyR2)以及钠钙交换体1(NCXI)的蛋白和基因转录水平。结果 SevoPoC能明显加快LVEDP、RPP(心率与LVDP的乘积)和+dp/dt向基线水平恢复,SevoPoC组LVEDP水平低于,RPP及+dp/dt高于I/RI组(均P<0.05)。同时,SevoPoC可以降低心肌缺血再灌注损伤后cTnI的释放,SevoPoC组cTnI水平低于I/RI组[(0.060±0.003)mg/L比(0.110±0.004)mg/L](P<0.01)。NCX1相对表达水平I/RI组高于TC组[(0.59±0.09)比(0.35±0.05)],SevoPoC组(0.32±0.06)低于I/RI组(均P<0.01)。LTCCs和RyR2的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SevoPoC可以提供心肌保护作用,表现在心功能恢复的增强、冠状动脉流出液cTnI释放以及心肌梗死面积的减少。其作用可能与其对NCXl的抑制有关。

七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的探讨七氟烷后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(S组);缺血再灌注组(IR组);1%、2%、3%七氟烷后处理组(SP1、SP2、SP3组),建立心肌缺血再灌注模型,再灌注结束时测定血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达水平和细胞凋亡。结果与S组比较,各组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05);与IR组比较,各SP组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡降低(P<0.05);与SP2组比较,SP1组和SP3组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05)。结论七氟烷后处理可通过下调p53蛋白表达抑制细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,2%七氟烷后处理的效果更显著。

钙调节蛋白对七氟烷处理再灌注心律失常的影响

目的:七氟烷对离体大鼠心脏再灌注心律失常的影响的探究。方法:在血流动力学稳定30min后,缺血20min,再灌注60min,建立缺血再灌注损伤模型。参考相关发表大鼠动物模型文献[1-2]将50只大鼠随机分成以下5组,每组10只:时间对照组(TC):用95%氧合KH液恒流在离体心脏内灌流110 min;缺血/再灌注组(I/RI):连续灌流95%氧合KH液30min后停止20min,恢复灌流60min;七氟烷预处理组(sevofluranepreconditioning,Sevo PC):离体心脏用95%氧合KH液灌流20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,停止20 min,恢复灌流60 min;七氟烷后处理组(sevofluranepostconditioning,Sevo Po C):离体心脏用95%氧合KH液灌流30 min,停止20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,恢复灌流50 min;七氟烷联合处理组(sevofluranepreconditioning and postconditioning,PCPO):离体心脏用95%氧合KH液灌流20min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,停止20 min,使95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,恢复灌流50 min。持续监测各组HR,左心室发展压力(left ventricular developed pressure,LVDP),最大LVDP上升率(+dp/dt),最大LVDP下降率(-dp/dt)。监测并统计再灌注心律失常发生率。LTCC、RyR2和NCX1的蛋白和转录水平分别通过Westernblot和RT-PCR进行检测。用荧光分光光度计检测并比较每组细胞中的钙离子水平。结果:七氟烷干预的三组大鼠在再灌注30min、60min后的心功能均有改善,表现为LVDP、+dp/dt、-dp/dt和HR的改善(P<0.05),LVEDP下降(P<0.01)。再灌注心律失常的发生可由SevoPC和SevoPoC改善,表现为室性期前收缩(ventricular premature beat,VPB)总数下降。室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)、心室颤动(ventricular fibrillation,VF)发作时程缩短,VF发生率下降,心律失常再灌注评分下降等。SevoPC组RyR2在转录水平的表达明显减少;在SevoPoC组中,转录水平的LTCC、RyR2、NCX1的表达和RyR2、NCX1的翻译水平均有较大幅度的下降。与TC组相比,I/RI、SevoPC、SevoPoC和PCPo组的细胞内钙水平分别增加了145%、88%、79%和65%(P<0.05)。结论:SevoPC和SevoPoc可以改善离体大鼠心脏再灌注心律失常的发生,机制可能与其对RyR2和NCX1表达的抑制作用有关。

七氟烷预处理与后处理对大鼠离体心脏再灌注心律失常的影响

目的 探讨七氟烷预处理（SevoPC）与七氟烷后处理（SevoPoC）对大鼠离体心脏再灌注心律失常的影响。 方法 建立SD大鼠离体心脏灌注模型，将50只SD大鼠离体心脏 完全随机分为5组，每组10只：①时间对照组：离体心脏恒流灌注充分预氧合的KH液110 min；②I/RI组：离体心脏平衡30 min后，KH液停止灌注20 min，恢复恒流灌注预氧合的KH 液60 min，建立缺血再灌注（I/RI）损伤模型;③SevoPC组：离体心脏平衡15 min后，使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，建立I/RI损伤模型；④SevoPoC组：离体心脏平衡 30 min后，停止灌注20 min，在复灌即刻使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注 15 min，然后使用预氧合的KH液灌注45 min;⑤七氟烷联合处理组（PCPo组）：离体心脏平衡15 min 后，使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，停止灌注20 min，在复灌即刻使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，然后使用预氧合的KH液灌注45 min。各组均持续监 测心率、左心室发展压（LVDP）、最大LVDP上升速率（＋dp/dt）、最大LVDP下降速率（-dp/dt）及左心室舒张末期压力（LVEDP）。检测心肌梗死面积和冠状动脉流出液中心肌肌钙蛋 白I（cTnI）水平并监测记录再灌注心律失常。分别用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测L型钙通道（LTCCs）、兰尼碱受体2（RyR2）以及钠钙交换体1（NCX1）的蛋白和基因转 录水平。 结果 与I/RI组比较，SevoPC组、SevoPoC组、PCPo组的离体心脏在再灌注30 min及60 min的LVDP、＋dp/dt、-dp/dt以及心率均升高，LVEDP均降低（均P＜0.05）。 SevoPC和SevoPoC均能减少由I/RI造成的心肌梗死面积［（17.9±2.1）%、（17.2±2.3）%比（23.8±2.1）%，P＜0.05］并减少cTnI的释放［（0.061 2±0.002 0）、（0.059 2±0.003 1）mg/L比（0.113 4±0.004 3）mg/L，P＜0.05］。与I/RI组相比，SevoPC和SevoPoC能够明显减少室性期前收缩的次数，缩短室性心动过速和心室颤动的发作时间，降低心室颤动 的发生率，并且能够降低再灌注心律失常评分（均P＜0.05）。SevoPC组RyR2的蛋白相对表达量明显低于I/RI组，SevoPoC组LTCCs、RyR2及NCX1的蛋白相对表达量均明显低于I/RI组 ，RyR2及NCX1的基因相对表达水平明显低于I/RI组（均P＜0.05）。 结论 SevoPC及SevoPoC均能够改善I/RI损伤后的心功能并能改善离体大鼠心脏的再灌注心律失常发生情况 ，其作用可能与其对LTCCs、RyR2及NCX1的抑制有关。