乙酰唑胺对万古霉素耐药肠球菌体内外抗菌活性作用和机制

目的探讨乙酰唑胺对万古霉素耐药肠球菌(VRE)体内外抗菌活性作用和可能的作用机制。方法实验菌株为医院临床分离的肠球菌菌株,经鉴定为VRE菌株,分别进行体外和体内抗菌活性研究。采用琼脂平板稀释法测定乙酰唑胺对VRE的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),杀菌曲线实验测定待测菌株的时间杀菌变化曲线,检测胞外碱性磷酸酶(AKP)含量评估对细胞壁的破坏作用,计算相对电导率测定评估细胞膜渗透性。使用临床分离的VRE菌株建立腹膜炎小鼠模型,分为对照组(正常小鼠),模型组(腹膜炎小鼠)和乙酰唑胺组(30 mg/kg/5 h干预),每组10只。干预30 h后统计各组小鼠死亡情况,进行腹膜液、脾脏、肝脏菌落计数,HE染色观察脾脏、肝脏病理改变。结果乙酰唑胺对VRE的抑菌活性检测显示,MIC和MBC分别为1.45 mg/L和4.62 mg/L。Time-Kill曲线分析乙酰唑胺杀菌动力学显示,乙酰唑胺杀菌活性与时间和浓度呈正相关,乙酰唑胺浓度越大,细菌死亡率越高,时间越长,杀死的细菌越多。当乙酰唑胺浓度达到16×MIC,作用时间达到12 h时,VRE细菌生长被完全抑制。干预30 h后,对照组小鼠均存活,存活率100%;模型组小鼠7只陆续死亡,存活率30%;乙酰唑胺组小鼠2只出现死亡,存活率80%,存活率明显高于模型组(P<0.05)。相较于对照组,模型组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显提高(P<0.05);相较于模型组,乙酰唑胺组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,1×MIC组和4×MIC组AKP含量显著升高(P<0.05);与1×MIC组比较,4×MIC组AKP含量显著升高(P<0.05),乙酰唑胺对VRE细胞壁的破坏作用呈现剂量依赖。与对照组比较,1×MIC组和4×MIC组电导率显著升高(P<0.05);与1×MIC组比较,4×MIC组相对电导率显著升高(P<0.05),乙酰唑胺对VRE细胞渗透性的提高作用呈剂量依赖。结论乙酰唑胺对VRE具有较好的体内、体外抗菌活性,其作用机制可能与破坏细胞完整性有关。

万古霉素耐药肠球菌的同源性及耐药机制分析

目的探讨万古霉素耐药肠球菌(VRE)的同源性及主要耐药机制。方法收集我院临床分离的9株VRE,采用E-test法检测其对万古霉素等10种抗菌药物的最低抑菌浓度值,脉冲场凝胶电泳技术进行同源性分析,多重PCR技术扩增万古霉素耐药基因并测序。结果9株VRE均为屎肠球菌,共分为6个克隆,耐药表型和基因型均为vanA型。结论本院VRE为vanA基因型,VRE的增加与局部克隆传播、耐药基因的水平转移以及抗菌药物的选择压力有关。

万古霉素耐药肠球菌基因及水平转移研究

目的研究我国临床分离万古霉素耐药肠球菌中万古霉素耐药基因及其水平转移情况。方法用多重PCR法检测vanA、vanB及粪肠球菌和屎肠球菌特异的ddl基因；用质粒酶切图谱分析耐药菌同源性，用液体转移和滤膜转移法研究万古霉素耐药基因水平转移情况。结果在12株万古霉素耐药肠球菌中，有11株VanA型屎肠球菌vanA基因阳性，有1株VanB型粪肠球菌vanB基因阳性。ZB18和ZB22菌株的万古霉素耐药性可在液体环境中于肠球菌间转移，转移频率分别为3．1×10^-4和1．9×10^-5。在其余屎肠球菌中，万古霉素耐药性可通过滤膜转移试验在肠球菌间水平转移，转移频率为1．4×10^-3～1．6×10^-6；有1株VanB型粪肠球菌的万古霉素耐药性在肠球菌间不能水平转移。结论VanA型万古霉素耐药肠球菌中均为屎肠球菌，其万古霉素耐药基因可在肠球菌间水平转移。

万古霉素耐药折点调整对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌筛选方法的影响

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)对万古霉素耐药的折点调整后,对异质性万古霉素中介金葡菌(h VISA)的平皿筛选方法选择的影响,寻求一种敏感、有效的平皿筛选方法。方法收集临床MRSA菌株215株,分别用浓度为6 mg/L、4 mg/L、2 mg/L万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIV6、BHIV4、BHIV2)及浓度为5 mg/L替考拉宁脑心浸液琼脂(BHIT5)进行h VISA筛选,同时应用菌群分析/曲线下面积(PAP/AUC)法检测h VISA,以PAP/AUC法作为金标准,对比上述4种平皿筛选方法的敏感度及特异度。结果 PAP/AUC检测h VISA的阳性菌株分别为12株,BHIV6、BHIV4、BHIV2、BHIT5筛选阳性菌株分别为6、18、54、20株;以PAP/AUC法作为金标准,上述4种平皿筛选方法灵敏度分别为41.7%、83.3%、91.7%、83.3%,特异度分别为99.0%、95.9%、77.8%、94.8%。结论 MRSA对万古霉素耐药折点调整后,BHIV6筛选法灵敏度较低、BHIV2筛选法特异度较低,不应作为h VISA的筛选方法,BHIV4和BHIT5平皿筛选法灵敏度和特异度均较高,可作为万古霉素耐药折点调整后对h VISA的常规筛选方法。

急诊科分离的万古霉素耐药肠球菌的耐药性与同源性研究

目的研究急诊科患者临床分离万古霉素耐药肠球菌(VRE)的耐药性及同源性。方法收集2005年11月至2008年12月急诊科临床分离的VRE,用琼脂二倍稀释法,测定不同抗菌药物的MIC,用多重PCR法,鉴定细菌万古霉素耐药基因型,用SmaI酶切染色体脉冲场凝胶电泳(PFGE),研究菌株的同源性。结果共从7位患者分离出8株万古霉素耐药肠球菌,均为vanA型屎肠球菌且均为多重耐药。PFGE结果显示8株vanA型屎肠球菌间差异性很大。结论该急诊科中VRE均为vanA型屎肠球菌;但未发现急诊室内同克隆VRE传播。

多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌

目的检测2005～2007年澳大利亚墨尔本地区万古霉素耐药的肠球菌基因。方法用多重PCR检测肠球菌4种耐药基因(vanA,vanB,vanC1和vanC2),鉴定4种肠球菌E.faecalis(粪肠球菌),E.faecium(屎肠球菌),E.gallinarum(母鸡肠球菌)和E.casseliflavus(产黄肠球菌)。结果vanA基因扩增阳性可见732bp条带;vanB基因为635bp条带;vanC1基因为822bp条带;vanC2/3基因为439bp条带。粪肠球菌基因扩增见941bpDNA条带,屎肠球菌为550bpDNA条带。3年回顾性研究中,最常见的万古霉素耐药基因是vanB型(84.9%),菌种是屎肠球菌(76.3%)。2007年还出现2株同时含有vanA和vanB耐药基因的屎肠球菌菌株。结论万古霉素耐药的肠球菌菌株逐年增多,多重PCR检测万古霉素耐药的肠球菌,简便迅速,有利于准确及时地发出报告。

万古霉素耐药性肠球菌分子生物学研究进展

近年来肠球菌逐渐成为院内感染的重要病原菌,尤其引人关注的是万古霉素耐药性肠球菌(VRE)有不断增多的趋势。了解VRE的耐药机制对有效控制其扩散传播具有重要意义。我们就VRE基因组学及蛋白质组学的研究进展情况进行简要概述。

体外诱导的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌耐药基因检测

目的用PCR检测体外诱导的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)的耐药基因vanA,探讨体外诱导VRSA对万古霉素耐药机制。方法用万古霉素体外诱导将1株异质性VRSA逐步诱导为VRSA;检测金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和万古霉素耐药基因vanA。结果基因检测发现VRSA菌株均不含vanA基因。结论 VRSA不含vanA基因,故细胞壁增厚是导致金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药的主要机制。

万古霉素耐药的屎肠球菌感染一例

肠球菌属于人体正常菌群,当抵抗力低下时可侵入机体,引起泌尿系感染、菌血症、腹腔感染及感染性心内膜等多部位感染,是临床常见的条件性致病菌。近年来,由于广谱抗菌药物广泛使用,肠球菌对抗菌药物的耐药现象日趋严重,多重耐药的肠球菌感染不断增加,给临床控制感染带来了很大困难。

肠球菌esp基因与万古霉素耐药的相关性研究

目的了解医院重症监护病房来源的肠球菌的esp基因的分布及其与万古霉素耐药的相关性。方法菌落杂交法检测肠球菌esp基因的分布,微量稀释法测定细菌对万古霉素和替考拉林的MIC。结果 94株肠球菌(其中粪肠球菌63株,屎肠球菌31株)中esp基因阳性72株(72/94)占76.60%,esp基因阳性者万古霉素和替考拉林的耐药率明显高于esp基因阴性者。结论重症监护病房来源的肠球菌esp基因阳性率较高,与肠球菌耐万古霉素密切相关,值得重视。

万古霉素耐药肠球菌的检测和分子流行病学分析

目的为了解本院万古霉素耐药肠球菌(VRE)的流行情况,对VRE株进行实验室检测和分子流行病学检测分析。方法采用多重PCR及测序检测万古霉素耐药基因van,Etest法测定VRE株对万古霉素、替考拉宁的耐药表型;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株VRE进行检测流行病学分析。结果检出1株VanA、4株VanB、5株VanC1,1株VanC2,对万古霉素、替考拉宁的药敏表型与基因型一致;11株VRE中2号vanB株与5号vanB株显示出相同片段,其他VRE株则分别有多于5个区带不同。结论实验室准确检测VRE对防止VRE感染和流行是非常重要的;PFGE电泳分析结果表明了本院11株VRE医院感染为散发。

万古霉素耐药肠球菌接合型转座子、I类整合子遗传标记研究

目的了解万古霉素耐药肠球菌（Vancomycin—Resistant Enterococci，VRE）接合型转座子遗传标记、I类整合子遗传标记存在状况。方法对7株VRE菌进行接合型转座子遗传标记（intTn916／Tnl545转座酶基因）、I类整合子遗传标记（intI1基因检测）。结果7株VRE中3株intTn916/Tnl545阳性，无int I 1基因检出。结论VRE可携带接合型转座子。

一株抗万古霉素耐药菌的抗生素产生菌AR1148的鉴定

从土壤中分离得到一株放线菌AR1148,其代谢产物对万古霉素耐药肠球菌有较明显的抑菌活性。该菌株的基内菌丝无横隔,气生菌丝丰茂,分枝较好,孢子椭圆形,表面光滑。菌丝细胞壁Ⅰ型,含有L-2,6-二氨基庚二酸(LL-DAP)和甘氨酸。菌株AR1148归属于链霉菌属金色类群。根据16SrDNA序列分析,该菌株与现有种差异明显,聚类在不同的分支。定名为Streptomy-cessp.AR1148。

鹑鸡肠球菌对万古霉素耐药性监测及耐药基因研究

目的调查临床分离鹑鸡肠球菌对万古霉素的耐药情况及耐药机制。方法采用VITEK 2系统GP67卡对2019年1-12月南京大学医学院附属鼓楼医院临床分离15株鹑鸡肠球菌进行药敏试验,采用E-test法复核菌株对万古霉素最低抑菌浓度(MIC);采用PCR及测序技术分析万古霉素耐药决定基因vanA、vanB、vanC1及vanC2/3;采用Illumina HiSeq 2000测序技术对菌株基因组DNA进行双端测序(PE),利用生物信息学对菌株全基因组序列分析及耐药基因、毒力基因分析。结果15株鹑鸡肠球菌对万古霉素的MIC值集中在4 mg/L和8 mg/L,所占比例分别为40%和33.3%,检出1株(6%)万古霉素高水平耐药株EG17906(MIC为256 mg/L),该菌株除对万古霉素和替考拉宁耐药外,对其余常用抗生素均敏感;15株菌株均检出vanC1基因,EG17906菌株同时检出vanA基因;EG17906菌株经全基因组测序分析,基因组大小为3765197 bp,鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)所占的比率GC含量为40.4%,总基因数为3754,基因组含有3592个编码序列,60个tRNA编码基因以及10个完整的rRNA基因编码操纵子。耐药基因预测分析该菌株携带VanC1XY、VanHAX、erm(A)、erm(A)、tet(O)、cat(pC221)。全基因序列提交至美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,GeneBank号为JABMDB000000000。结论鹑鸡肠球菌携带vanC1对万古霉素呈低水平耐药,而同时携带vanA基因可造成菌株高水平耐药,需引起重视。

万古霉素耐药B组链球菌

至少已发现13株携带 vanA基因的万古霉素耐药肠球菌，该基因被认为来自金黄色葡萄球菌。现在，又发现携带v anG基因的B组链球菌。1例82岁女性患者因骨关节感染继发了无乳链球菌（B组链球菌）脓毒血症，万古霉素对该菌的最低抑菌浓度（MIC）为4mg／L（青霉素G的MIC为0．（16mg／L），但该患者近期无万古霉素暴露史。在其伤口里还发现了甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA），先后予以达托霉素和利奈畔胺治疗痊愈出院。

万古霉素耐药肠球菌的筛选及基因型检测

目的了解我院耐万古霉素肠球菌的耐药表型、基因型及流行情况。方法药敏试验采用K-B纸片扩散法,Etest法检测万古霉素耐药肠球菌对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC)。聚合酶链反应(PCR)检测vanA、vanB、vanC1和vanC2-3基因型,PFGE分析万古霉素耐药肠球菌同源性。结果 219株肠球菌中检出3株万古霉素耐药屎肠球菌,检出率为1.3%;该菌株对万古霉素和替考拉宁均耐药,但对利奈唑胺敏感;基因型检测显示3株屎肠球菌均为vanA型,PFGE结果显示该3株万古霉素耐药肠球菌不属于同一型别。结论我院住院患者中已出现万古霉素耐药菌株,医院应加强感染控制措施,以阻止这些VRE菌株在院内的传播和流行。

利奈唑胺治疗万古霉素耐药的细菌性颅内感染患者疗效分析

目的探讨利奈唑胺治疗万古霉素耐药的细菌性颅内感染患者的疗效及其影响因素。方法选取2014-01-2019-01漯河市中医院万古霉素耐药的细菌性颅内感染患者60例为研究对象,以随机数字表法分为研究组和基础组,每组30例,基础组采取头孢曲松静滴,研究组采用利奈唑胺治疗,治疗时间为2周,比较2组患者疗效及影响因素。结果研究组治疗疗效优于基础组(Z=2.131,P=0.031),且研究组治疗总有效率为93.77%,高于基础组的73.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组不良反应发生率为3.33%,低于基础组的13.33%,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后2组蛋白质含量、白细胞计数均降低,且研究组低于基础组,治疗后2组葡萄糖含量均升高,且研究组高于基础组,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者的性别、年龄、BMI对疗效无影响,差异均无统计学意义(P>0.05),手术时间≥4 h的治疗总有效率明显高于手术时间≥4 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利奈唑胺治疗万古霉素耐药的细菌性颅内感染患者,可改善患者脑脊液指标水平,减少不良反应,提高治疗效果。

“一珠一化合物”组合化学方法筛选抗万古霉素耐药菌活性化合物

目的寻找新的抗万古霉素耐药菌活性化合物。方法首次采用固相法合成了分别用生物素 (Biotin)和12 5I标记的D Ala D Lactate和D Ala D Ala探针化合物以及 18个结构限定性的多肽和多肽衍生物化学库 ,并建立了“一珠一化合物”组合正交筛选实验方法。结果发现了一个新的体外抑制低水平万古霉素耐药菌的化合物 (Enterococcusfaecalis,ATCC 5 12 99,MIC值为 17 5mg/L)。该化合物对万古霉素敏感菌菌株的抑制活性为MIC 6 2 5mg/L (Staphylococcusaurreus ,ATCC 2 5 92 3)。结论“一珠一化合物”

利奈唑胺对万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的抗菌活性

目的评价利奈唑胺对临床分离万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的体外抗菌活性。方法多重PCR法鉴定屎肠球菌万古霉素耐药基因类型，平皿二倍稀释法测定利奈唑胺等11种抗菌药物MIC值。结果75株临床分离万古霉索耐药屎肠球菌均携带vanA基因。万古霉素敏感及耐药屎肠球菌对利奈唑胺均敏感，MIC范围1-2mg／L。与红霉素、氨苄西林、左氧氟沙星和利福平相比，万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的耐药率均在80％以上。万古霉素敏感屎肠球菌对高浓度庆大霉素、高浓度链霉素、四环素和氯霉素的耐药率分别为80．2％、13．9％、38．6％和37．6％；万古霉素耐药屎肠球菌对上述4种药物的耐药率分别为64．5％、8．0％、18．5％和5．3％。结论利奈唑胺对我国临床分离万古霉素敏感和耐药屎肠球菌均具有很好的体外抗菌活性。