免疫增强剂三七茎叶皂苷口服液的质量控制研究

本研究从性状、pH、相对密度、装量差异、微生物限度、鉴别、含量测定等方面对三七茎叶皂苷口服液(Oral liquid of saponins of stems and leaves of Panax notoginseng,LSPN)进行质量控制研究。利用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)法,鉴定其主要成分;利用高效液相色谱-蒸发光散射(high-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)法,建立LSPN中人参皂苷Rb1和Rb3含量的同步分析方法。HPLC-ELSD的色谱条件:色谱柱为GL,InertSustain C18柱(5μm,250×4.6 mm Column);流动相为乙腈(A)-水(B),采用梯度洗脱;进样量:10 L;人参皂苷Rb1和Rb3保留时间分别为13.264 min和15.415 min。ELSD运行参数:氮气流速为1.64 slpm,气化温度为48℃,蒸发温度为80℃。结果表明,LSPN为黄绿色的澄清液体,味苦,pH、相对密度和微生物限度均符合标准要求。人参皂苷Rb1和Rb3的检出限(limit of detection,LOD)均为10 g/mL,定量限(limit of quantitation,LOQ)均为20 g/mL,均在20~500 g/mL内线性关系良好;回归方程分别为Y=1.58X+1.72(r=0.999904)和Y=1.60X+1.64(r=0.999628)。人参皂苷Rb1和Rb3的平均加样回收率分别为101.25%和100.42%,RSD分别为2.71%和1.12%。该法准确,精密度、重现性好,可用于LSPN中人参皂苷Rb1和Rb3的含量测定。

三七茎叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响

试验旨在研究三七茎叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响。选取26日龄断奶仔猪24头随机分为3组,每组8个重复,每个重复1头仔猪。对照组饲喂基础饲粮,低剂量组、高剂量组分别在基础饲粮中添加0.2%和0.4%的三七茎叶提取物。试验期21 d。结果显示,与对照组相比,高剂量组断奶仔猪平均日增重显著升高(P<0.05),低剂量组和高剂量组血清乳酸脱氢酶活性、谷草转氨酶活性和谷草/谷丙的比值显著降低(P<0.05);高剂量组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度显著增加(P<0.05),十二指肠和回肠的绒隐比显著升高(P<0.05);低剂量组和高剂量组结肠白细胞介素-12 p35(IL-12 p35)、白细胞介素-12 p40(IL-12 p40)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)的mRNA表达量显著降低(P<0.05)。研究表明,在饲粮中添加三七茎叶提取物可以改善断奶仔猪生长性能、肠道健康,添加0.4%三七茎叶提取物较为适宜。

三七茎叶采收机仿生切割刀片设计与试验

针对传统三七茎叶采收机切割刀片在滑切减阻、刀片刃口锋利性等方面存在明显不足,以切叶蚁上颚结构特征为仿生原型,运用逆向工程技术,提取切叶蚁上颚轮廓曲线,分别基于切叶蚁的切齿齿顶尖锐端和上颚轮廓曲线设计了A、B两种不同的仿生切割刀片;开展了EDEM仿真与台架对比试验,仿真试验结果表明,仿生刀片A、B相较于传统刀片的平均最大剪切力分别降低7.74%和3.07%;台架试验结果表明,仿生刀片A、B相较于传统刀片的平均最大剪切力分别降低8.84%和2.53%,并且仿生刀片A、B在提高三七茎秆横切面平整度方面效果显著;3种刀片仿真试验与台架试验所测得的最大剪切力误差均不大于3.64%,仿真试验结果与实际试验结果基本一致。以刀型、切割倾角、切割速度为试验因素,开展正交试验,确定了较优参数组合为仿生刀片A、切割倾角0°、切割速度400 mm/min。基于较优参数组合开展田间试验,结果显示其对三七茎叶采收平均完整率为97.37%,较传统刀片提升2.01个百分点,平均漏割率为2.64%,较传统刀片降低1.46个百分点,表明以切叶蚁上颚切齿齿顶尖锐端为特征点设计的仿生刀片能够有效提升三七采收机作业性能。

三七茎叶-滇黄精速溶粉提取工艺及抗氧化活性分析

为探索三七茎叶-滇黄精复合产品的开发工艺,该研究分析了三七茎叶-滇黄精速溶粉中可溶性总糖、皂苷、多酚化合物的组成及含量,并测定其抗氧化活性。以单因素-响应面实验考察三七茎叶-滇黄精在乙醇添加量、料液比(g∶mL)、浸提时间3种变量条件下的最佳浸提条件,进一步以喷雾干燥的方法获取三七茎叶-滇黄精速溶粉,以蒽酮比色法测定速溶粉中可溶性总糖的含量,高效液相色谱法测定速溶粉中皂苷、多酚含量,进一步测定其抗氧化活性,并进行感官审评。喷雾干燥优化出三七茎叶与滇黄精的最佳质量比为6∶4,最佳浸提工艺为三七茎叶-滇黄精的料液比(g∶mL)为1∶21,29%(体积分数)乙醇,浸提37 h,重复浸提2次,每1 kg复合物可得到速溶粉374.23 g,得粉率37.42%,该速溶粉溶解性好,香甜回甘。速溶粉中可溶性总糖含量为(55.44±3.21)mg/g,活性成分以三七皂苷Fa、Fd、Fc、人参皂苷Rb1等7种皂苷及咖啡酸(caffeic acid,CA)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin-3-gallate,ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocahechin-3-gallate,EGCG)等5种酚类化合物为主。抗氧化活性结果表明,三七茎叶-滇黄精速溶粉对ABTS阳离子自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基具有较好的清除能力,其IC 50值分别为0.30、0.63、0.49、1.67 mg/mL。该研究优化了三七茎叶-滇黄精浸提工艺,所得速溶粉富含皂苷、多酚、可溶性糖等成分,为三七茎叶和滇黄精在食品开发领域提供基础研究数据,为云南特色食品及药食同源产品的开发利用提供科学支撑。

饲粮中添加三七茎叶对西畴乌骨鸡血清生化指标、免疫功能以及肌肉品质的影响

试验旨在研究在饲粮中添加三七茎叶对西畴乌骨鸡血清生化指标、免疫功能以及肌肉品质的影响。选择42日龄的西畴乌骨鸡270只随机分为3组,每组3个重复,每个重复30只。对照组乌骨鸡饲喂基础饲粮,Ⅰ组、Ⅱ组分别在基础饲粮中添加4%、8%三七茎叶。试验期90 d。结果显示,Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡血清球蛋白含量、法氏囊指数、脾脏指数以及肌肉中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、棕榈油酸、油酸、γ-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸以及必需氨基酸的含量显著提高(P<0.05),血清中碱性磷酸酶、尿素氮含量以及肌肉中豆蔻酸、硬脂酸含量显著降低(P<0.05)。研究表明,在饲粮中添加三七茎叶饲喂西畴乌骨鸡可改善其血清生化指标,调节机体代谢功能,提升免疫力,改善西畴乌骨鸡的肌肉品质,添加4%三七茎叶较为适宜。

三七茎叶总皂苷抑制七氟醚诱导的海马神经元凋亡机制研究

目的探讨三七茎叶总皂苷(PNSLS)调节七氟醚诱导海马神经元凋亡的作用机制。方法以不同剂量七氟醚(0,4.1%,8%)干预小鼠海马神经元细胞系HT22,使用不同质量浓度的PNSLS(1.5,3.0,6.0,12.0μg/mL)预处理神经元。将HT22细胞分为对照组、暴露于4.1%七氟醚的细胞组(4.1%Sev组)、使用6μg/mL PNSLS对细胞进行预处理1 h后将细胞暴露于4.1%七氟醚组(4.1%Sev+PNSLS组)、在PNSLS处理前1 h加入丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活剂anisomycin(An)再暴露于七氟醚和PNSLS的共培养组(4.1%Sev+PNSLS+An组)。通过CCK-8法检测神经元活力,流式细胞术及免疫印迹(Western blot)法检测海马神经元凋亡,比色活性测定试剂盒测定胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性,Western blot法测定内质网应激相关蛋白及p38 MAPK/核转录因子-κB p65(p38 MAPK/NF-κB p65)信号通路相关蛋白的表达水平。结果4.1%七氟醚显著抑制海马神经元活力(P<0.05),6μg/mL PNSLS显著升高神经元活力并抑制海马神经元凋亡(P<0.05)。与Sev组比较,Sev+PNSLS组细胞中凋亡蛋白Bax表达水平显著降低(P<0.05),B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl-2)表达水平显著升高(P<0.05),caspase-3活性显著降低(P<0.05);Sev+PNSLS组内质网应激诱导的凋亡信号通路相关蛋白78000葡糖调节蛋白(GRP78)、内质网应激相关蛋白(CHOP)表达水平均显著降低(P<0.01),p38和IκBα的磷酸化水平均显著降低(P<0.01),细胞质中NF-κB p65水平显著升高(P<0.01),细胞核中NF-κB p65水平显著降低(P<0.01)。与Sev+PNSLS组比较,Sev+PNSLS+An组p38和IκBα的磷酸化水平均显著升高(P<0.01),细胞质中NF-κB p65水平显著降低(P<0.01),细胞核中NF-κB p65水平显著升高(P<0.01),海马神经元活力显著降低(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01)。结论PNSLS通过激活p38 MAPK/NF-κB p65信号通路抑制七氟醚诱导的神经元凋亡。

消栓通络片中三七茎叶及重金属检查

目的建立消栓通络片中三七茎叶的检查方法,同时考察该制剂中重金属残留水平。方法采用薄层鉴别法对消栓通络片中三七茎叶进行筛查;运用电感耦合等离子体质谱法对样品中5种重金属有害元素残留量进行测定,并进行安全风险评估。结果置日光和紫外光(365 nm)下检视,样品色谱中在与三七茎叶皂苷对照提取物色谱相应的位置上未出现相同颜色的斑点;所有样品中有2批砷超标、1批汞超标,而安全风险评估结果显示该制剂整体上所含5种重金属的量对人体所构成的非致癌风险较低。结论所建薄层鉴别法可有效甄别消栓通络片中是否存在三七茎叶冒充三七投料现象,对重金属有害残留量的考察有助于控制该制剂的整体质量。

三七茎叶皂苷对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究三七茎叶皂苷对大鼠离体心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及其作用机制。方法 SD大鼠36只,随机分为6组(n=6),分别是空白对照组、模型组、阳性给药组(地奥心血康70 mg.kg-1)、三七茎叶皂苷低、中、高剂量组(20、40、80 mg.kg-1)。阳性给药组和三七茎叶皂苷给药组大鼠每日灌胃给药1次,连续给药7 d,空白对照组和模型组同时给予同体积生理盐水。末次给药60 min后,分离心脏置于Langendorff离体灌流装置上,平衡15 min后,全心停灌25 min,再灌注60 min,造成心肌缺血/再灌注损伤模型。于大鼠左心房插入水囊导管,记录三七茎叶皂苷对血流动力学指标的影响,测定再灌注60 min后灌流液中乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)的活性及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、LDH、CK活性及丙二醛(MDA)的含量。HE染色观察组织形态学改变。结果三七茎叶皂苷不同剂量组(20、40、80 mg.L-1),可明显改善缺血/再灌注所致大鼠的心功能损伤,减少灌流液中LDH、CK释放和组织中MDA的产生,增加SOD、GSH-Px的活性。HE染色结果显示,阳性给药组与三七茎叶皂苷高、中、低剂量组均不同程度的减轻了I/R造成的心肌损伤。结论三七茎叶皂苷对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与改善心肌舒缩功能,清除氧自由基,减少脂质过氧化反应有关。

三七茎叶黄酮类成分的研究

目的对三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]茎叶的黄酮类成分进行分离鉴定。方法利用水煎煮提取、大孔吸附树脂吸附、硅胶柱色谱、ODS柱色谱等方法分离提纯,通过理化性质及IR,UV,MS,1H-NMR,13C-NMR等光谱数据鉴定其结构。结果分离得到6个黄酮类单体化合物,分别鉴定为:山柰酚(kaempferol,Ⅰ)、槲皮素(quercetin,Ⅱ)、山柰酚-7-O--αL-鼠李糖苷(kaempferol 7-O--αL-rhamnoside,Ⅲ)、山柰酚-3-O--βD-半乳糖苷(kaempferol 3-O--βD-galactoside,Ⅳ)、山柰酚-3-O--βD-半乳糖(2→1)葡萄糖苷[kaempferol 3-O-(2″--βD-glucopyranosyl)--βD-galactopyranoside,Ⅴ]、槲皮素-3-O--βD-半乳糖(2→1)葡萄糖苷[quercetin3-O-(2″--βD-glucopyranosyl)--βD-galactopyranoside,Ⅵ]。结论除山柰酚(kaempferol,Ⅰ)、槲皮素(quercetin,Ⅱ)之外,其余4个化合物皆为首次从该植物中分离得到,Ⅲ与Ⅵ为首次从该属植物中分离得到。

三七茎叶皂苷对麻醉犬急性心肌缺血的保护作用

目的:研究三七茎叶皂苷(PNSSL)对麻醉犬急性心肌缺血的保护作用。方法:采用结扎冠状动脉前降支的方法,造成犬急性实验性心肌缺血模型;超声多普勒方法测定心肌血流量;用心外膜电图描记和硝基蓝四唑(N-BT)组织化学染色方法计算心肌缺血程度及梗死面积;放射免疫法测定血浆内皮素(ET)和血栓烷素B2(TXB2)的含量。结果:PNSSL能明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度;缩小经N-BT染色所显示的梗死区;显著增加缺血心脏的心肌血流量;对心肌缺血及心肌梗死引起的血浆ET和TXB2的含量有明显抑制作用。结论:PNSSL对犬急性心肌缺血和心肌梗死有明显的保护作用,可能与抑制ET,TXA2的释放,增加心肌血流量,从而改善受损心脏的功能等机制有关。

Fusarium sacchari对三七茎叶中有效成分生物转化条件的优化

利用从种植人参的土壤中分离、筛选的稀有菌种Fusarium sacchari,对三七茎叶中的主要有效成分三七叶苷进行生物转化,以3种抗肿瘤活性成分20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C-K)、20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃木糖苷(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(C-Mx)和20(S)-原人参二醇-20-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(G-Mc)的总生成量为考查指标,通过因子转化实验确定最佳转化条件为:培养基初始pH值6、底物加入量40 mg、装液量30 ml,30℃、160 r.min-1转化6 d.该方法可提高三七茎叶的利用率和经济效益.

微波—碱水法提取三七茎叶总黄酮的工艺研究

利用微波效应,以碱水为溶剂来提取三七茎叶中的总黄酮。以总黄酮的提取率为指标,采用4因素3水平正交设计法筛选碱水的pH值,微波功率,液料比,微波处理时间四个因素的3个水平的最佳组合,得出微波—碱水法提取的最佳工艺:pH值8,微波功率中档,料液比1g∶40ml,微波作用时间10 min。提取2次。在此条件下,总黄酮的得率为22.484(mg/g DW)。

甘蔗镰孢霉与工业用酶制剂对三七茎叶有效成分转化作用的比较

采用生物技术对三七的种植废弃物——三七茎叶中的抗肿瘤成分人参皂苷化合物K(C-K)进行转化。比较β-葡聚糖苷酶、纤维素酶和甘蔗镰孢霉(Fusarium sacchari)对三七茎叶废弃物中总皂苷的转化作用,以C-K为检测目标,优选转化活性强、C-K生成量高的转化方法。结果表明,三七茎叶经甘蔗镰孢霉转化后,C-K的产量是原皂苷中含量的215倍,是经β-葡聚糖苷酶转化的2.3倍、纤维素酶转化的3倍。

从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷C-Mx1和Rb3

利用两步硅胶柱层析法,从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷Rb3和C-Mx1单体。30g三七茎叶皂苷,经分离得到纯度为50%~60%的粗品C-Mx1 4.66g和Rb3 8.58g;将C-Mx1和Rb3粗品皂苷进行二次硅胶柱分离,得到纯度为95%的C-Mx1单体0.92g和Rb3单体3.1g。以核磁共振法证明了分离产物为C-Mx1和Rb3皂苷。

三七茎叶和花的食用考证

三七茎叶系五加科人参属植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥茎叶。三七茎叶性温、味辛，主要用于止血，消肿，定痛，治吐血，衄血，便血，外伤出血，

正交试验法优选三七茎叶中总黄酮的提取工艺

目的：从三七茎叶中提取总黄酮。方法：采用正交试验法研究三七茎叶总黄酮的提取工艺,考察了浸提用水的pH值、浸提温度、浸提时间、浸提次数、液料比五个因素对三七茎叶总黄酮提取率的影响。结果：确立了三七茎叶总黄酮最佳提取条件为：用pH10的稀碱水作溶剂,液料比30：1,浸提温度为80℃,回流提取2次,提取时间为每次40min。

三七茎叶皂甙提取与纯化的微型实验研究

本文研究了用微型仪器提取与纯化三七茎叶皂甙的实验技术 。

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb_1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法。方法：色谱柱为BDSHYPERSUL C18（150 mm×2.1 mm,5μm）柱;流动相：乙腈-水（梯度洗脱）;柱温：30℃;质谱条件：采用负离子多反应监测方法（MRM）测试;用于定量分析的对照品离子对为：人参皂苷Rb1m/z1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z852.5→525.3。结果：人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159~16.0μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求。结论：该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测。

三七茎叶中叶苷及黄酮的同步分离工艺研究

目的探索分离三七茎叶中的叶苷和总黄酮的工艺条件及参数。方法以静态饱和吸附量、动态比吸附量、比洗脱量为考察指标,比较不同大孔树脂富集纯化三七茎叶叶苷和总黄酮的性能,并对最佳树脂纯化工艺进行筛选。结果 AB-8树脂综合性能最佳,其吸附分离工艺条件为:上样液浓度为叶苷1.8060mg/ml,总黄酮0.7852mg/ml,上样液以1.0BV/h吸附流速上样,纯水冲洗,60%乙醇洗脱后,再用95%乙醇洗脱。结论经大孔树脂纯化后的三七茎叶有效部位中,总黄酮加叶苷的质量分数达90%,说明该纯化工艺是可行的。