抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY防治小鼠流感病毒感染的实验研究

目的：探讨抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY（Immunoglobulin Yolk）预防及治疗流感病毒感染小鼠的作用。方法：建立A/fm/1/47（H1N1）流感小鼠模型;分5组,观察各组小鼠死亡率,脾、肺指数及肺指数抑制率。结果：0.2%抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY于攻毒前24、6、1小时滴鼻3次显著地预防流感病毒致死率（30.0%）,而攻毒后1、6、24小时分别滴鼻3次,此后每天滴鼻1次,持续5天,致死率为20.0%,两组与阳性对照组（致死率90.0%）、非特异性IgY预防和治疗组（致死率80.0%,70.0%）比较差异显著（P〈0.01）。0.2%抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY预防组和治疗组肺指数显著低于阳性对照组（P〈0.05~0.01）,其治疗组也低于非特异性IgY预防和治疗组（P〈0.05）。结论：抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY感染前后24小时内多次滴鼻能有效地预防和治疗流感病毒感染。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗免疫黄鸡抗体水平分析

H5或H7亚型高致病性禽流感是一种高度致死性传染病,它不仅给养禽业造成了巨大的危害和损失,还威胁着人类的生命健康安全。为了分析重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+H5N1 Re-12株和H7N9 H7-Re3株)免疫抗体水平,本研究对如皋市内14个养殖场近2万只黄鸡进行重组禽流感病毒三价灭活疫苗肌肉注射,免疫三周后,随机采集420份血液样品进行HI抗体效价检测。结果表明,免疫后的鸡群均无明显不良反应,可以诱导黄鸡产生良好的抗体,检测时具有较高的抗体效价,H5亚型Re-11株平均抗体效价为7.8log2,Re-12株平均抗体效价为8.2log2,H7亚型Re-3株的平均抗体效价为6.8log2,并且免疫抗体合格率均达到70%以上,对黄鸡具有良好的安全性和免疫保护效果,研究结果为有效地控制高致病性禽流感提供参考依据。

玉林市重组禽流感病毒三价灭活疫苗的免疫效果探究

高致病性禽流感属于一类动物疫病,也是人畜共患病,其病毒毒株为H5和H7血清亚型。高致病性禽流感自2021年在欧美及亚洲国家肆虐以来,对我国乃至世界养禽业都造成了巨大损失,其中危害最严重的是H5N8亚型禽流感[1]。为降低H5N8亚型禽流感对我国家禽的危害,农业农村部经过多重评估和临床试验,对禽流感H5+H7亚型三价灭活疫苗毒株进行了调整,并于2022年将新疫苗投入使用。

重组禽流感病毒三价灭活疫苗免疫抗体监测结果与分析

为了解重组禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1Re-11+H5N1Re-12+H7N9Re-3)对家禽的免疫效果,本文对建瓯市2019-2021年春秋防集中监测采集的部分规模家禽养殖场和散养户家禽的血清进行禽流感抗体监测分析对比,可以看出建瓯市不同饲养方式、不同家禽品种的禽流感H5N1Re-11、H5N1Re-12和H7N9Re-3免疫抗体平均合格率基本相同,免疫效价水平较稳定。

甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性观察

目的:观察国产甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性。方法:将不同血凝素含量(20、30、40μg/ml)各3批甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗分别免疫小鼠,腹腔注射0.5 ml/只,每批疫苗又分为1针组、2针组,每组10只,2针间隔1周,同时设对照组。首针免疫后21天,分别采血,分离血清,检测血凝抑制抗体效价和中和抗体效价,观察疫苗的免疫原性。结果:血凝素含量为20μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组血凝抑制抗体效价均小于1∶40,中和抗体效价均小于1∶200;血凝素含量为30、40μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组的血凝抑制抗体效价均大于1∶40,中和抗体效价均大于1∶200;血凝素含量为30、40μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组和2针组的血凝抑制抗体和中和抗体效价比较,差异均无统计学意义。结论:血凝素含量为30μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗接种1针即可达到理想的免疫效果。

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫SPF鸭免疫持续期试验

试验对重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫SPF鸭后的免疫持续期进行研究。选用14日龄SPF鸭20只,其中10只腿部肌肉免疫灭活疫苗0.5 mL·只^(-1),另10只不接种作为对照组。结果表明,免疫后14 d可以产生免疫力,Re-6株的抗体效价平均值为6.0 log2,Re-7株的抗体效价平均值为6.0 log2,Re-8株的抗体效价平均增值为6.7 log2。免疫后35 d产生的HI抗体效价平均值达到高峰,Re-6株的抗体效价平均值为9.3 log2,Re-7株的抗体效价平均值为9.1 log2,Re-8株的抗体效价平增值为9.3 log2。免疫后120 d,Re-6株的抗体效价平均值为7.0 log2,Re-7株的抗体效价平均增值为7.1 log2,Re-8株的抗体效价平均值为7.5 log2。根据此数据分析,首次免疫的免疫保护期约为120 d。

一种新型广谱流感病毒亚单位疫苗的表达与纯化

通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区M2蛋白和HA多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的45%左右。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白。Westernblot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础。

流感病毒亚单位疫苗不良反应1例

通过对因注射流感病毒亚单位疫苗后逐渐出现颜面、眼睑、耳后、掌心、会阴等部位肿胀伴瘙痒症状1例患者的回顾总结提示,流感病毒亚单位疫苗尽管技术先进,疗效确定,仍存在较低发生率的不良反应。为了确保用药安全,在使用流感病毒亚单位疫苗时,应做好不良反应的监测及治疗处理的准备。

一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法

目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除了血凝素的糖基化对电泳迁移率的影响,从而实现了血凝素亚基和杂质的电泳分离。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析,较之常规的还原型SDS-PAGE方法具有更高的分辨力。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗对麻鸭和番鸭免疫效果观察

为评价重组禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1 Re-11+Re-12株、H7N9 Re-2株)对麻鸭和番鸭的免疫特性,优化商品麻鸭和番鸭养殖场禽流感免疫程序,开展了麻鸭、番鸭现场免疫试验。以推荐的免疫程序和剂量分组免疫21日龄麻鸭和番鸭,免疫后定期采血测定抗体效价。结果显示:一免组麻鸭在35、49、63日龄产生的H5N1(Re-11、Re-12株)和H7N9 Re-2株HI抗体效价均低于5.70log2,抗体合格率为73%~89%;二免组麻鸭针对三种抗原的抗体滴度均大于6.00log2,抗体合格率均大于86%。一免组番鸭在35日龄的H5N1(Re-11、Re-12株)和H7N9 Re-2株HI抗体效价和合格率分别为5.54log2和90%,5.61log2和90%,5.63log2和90%;49日龄分别上升至6.01log2和100%,6.07log2和100%,6.15log2和100%;63日龄分别为5.66log2和100%,5.79log2和100%,5.81log2和100%;二免组番鸭在35~63日龄时,各毒株抗体滴度都较高,抗体效价均高于6.40log2,抗体合格率均为100%。对照组麻鸭与番鸭在35、49、63日龄抗体合格率均较低。结果表明,二次免疫可增强免疫保护效果。本研究为广大养殖户制定水禽高致病性禽流感免疫程序提供了数据支撑。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的樱桃谷肉鸭免疫优化试验

为探究重组禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7-Re2株)对樱桃谷肉鸭的免疫特性,同时优化免疫方案以使其尽早产生免疫保护,将300只1日龄樱桃谷肉鸭随机分成3组,每组100只:一免组于7日龄免疫1次,剂量为0.5 mL/只;二免组于1日龄、7日龄各免疫1次,剂量分别为0.2、0.4 mL/只;对照组不免疫。采用血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)进行抗体检测。结果显示:一免组肉鸭在21日龄Re-11、Re-12和H7-Re2平均抗体水平和抗体合格率均较低,分别为2.8log2和33%,2.6log2和31%,2.5log2和30%;28日龄分别上升至4.5log2和87%,4.1log2和83%,4.0log2和80%;38日龄分别为4.4log2和90%,4.2log2和87%,4.1log2和83%。二免组肉鸭在21日龄各毒株平均抗体水平和抗体合格率分别达到4.5log2和80%,4.3log2和77%,4.1log2和73%;28日龄分别为6.0log2和97%,5.6log2和93%,5.2log2和93%;38日龄分别为6.1log2和100%,5.4log2和97%,5.0 log2和97%。对照组肉鸭在21日龄母源抗体已很低,各毒株平均抗体水平和抗体合格率分别为1.2log2和3%,1.3log2和3%,1.6log2和7%;28日龄、38日龄抗体水平均为0。结果表明:该疫苗能够有效刺激肉鸭产生免疫保护抗体,适用于禽流感免疫;在1日龄、7日龄各免疫1次的效果更佳,因此在发病日龄较早的高风险区域,建议采用该方案加以防控。

一款四价流感病毒亚单位疫苗在≥65岁健康人群中安全性和免疫原性的非劣效Ⅲ期临床试验

目的评价一款四价流感病毒亚单位疫苗在≥65岁健康人群中的安全性和免疫原性。方法采用随机、盲法、阳性对照的非劣效Ⅲ期临床试验,在河南省两个区县招募≥65岁健康人群,随机接种1剂次试验疫苗(试验组)或已上市的四价流感病毒裂解疫苗(对照组),观察免疫后0-30 d不良反应和6月内严重不良事件,分析发生率;检测免疫前后血清A(H1N1)、A(H3N2)、BV和BY流感病毒血凝抑制抗体,分析抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)增长倍数。结果试验组和对照组受试者不良反应发生率分别为7.00%(28/400,95%CI:4.70%-9.96%)、5.25%(21/400,95%CI:3.28%-7.91%),所有不良反应均发生在免疫后0-7 d,无4级和严重不良反应。试验组免疫后A(H1N1)、A(H3N2)、BV、BY流感病毒抗体阳转率分别为78.99%(312/395)、87.85%(347/395)、82.03%(324/395)、79.24%(313/395),与对照组阳转率的率差(95%CI)分别为5.69(-0.24-11.61)、2.46(-2.28-7.20)、5.70(0.06-11.34)、5.94(0.03-11.85)。试验组免疫后各型流感病毒抗体GMT(1:)分别为314.43、331.43、134.96、305.19,与对照组GMT的比值(95%CI)分别为1.10(0.93-1.31)、1.21(1.03-1.43)、1.14(0.97-1.35)、1.28(1.06-1.53),分别是免疫前GMT的13.88倍、13.98倍、10.19倍、7.62倍。结论试验流感疫苗在≥65岁健康人群中具有较好的安全性和免疫原性,非劣于对照流感疫苗。

三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗抗体检测实验探讨

为进一步了解三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活苗的免疫效果。随机选取了4个三黄鸡养殖培育场开展了三价灭活疫苗以及血清保护作用的抗体蛋白质检测实验。通过实验不仅能够进一步了解三黄鸡养殖培育场的H5及H7亚型禽流感的抗体水平,还能够根据检测结果,进一步认知抗体消长规律,从而指导养殖场制定合理的免疫程序,为有效地防控禽流感的发生以及流行提供参考。

流感亚单位疫苗裂解剂残留量检测及安全性试验

目的检测流感亚单位疫苗的裂解剂残留量，并观察其安全性。方法制备3批流感亚单位疫苗，采用比色法检测其裂解剂Tween-80和CTAB的残留量，通过动物实验观察其安全性。结果制备的3批疫苗样品，Tween-80的残留量平均在68．3-72．μg／ml之间，CTAB残留量平均在36．3-38．7μg／ml之间。在安全性试验中，豚鼠未出现过敏反应，小鼠和豚鼠未出现异常毒性反应。结论制备的流感亚单位疫苗的裂解剂残留量符合拟定规程要求，安全性良好。

流感病毒亚单位疫苗中间体中沙门菌快速检测方法的建立

目的:建立一种能够快速、准确地检测流感病毒亚单位疫苗中间体样品中沙门菌污染的方法。方法:首先利用选择性增菌培养基对样品进行增菌培养,然后提取样品中的细菌基因组DNA,通过沙门菌特异性引物对基因组DNA进行PCR扩增,以琼脂糖凝胶电泳实现对目的片段的检测。结果:该PCR反应体系的扩增检测灵敏度可达1 pg的沙门菌DNA,利用选择性增菌培养配合该PCR体系可在最快24 h内实现对沙门菌的准确检测,测定结果与传统方法相符。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的沙门菌检查,较之传统的培养法结合生化鉴定的方法,大大缩短了检测周期,降低了结果判读的难度,在实际生产中有很好的应用前景。

重组禽流感病毒三价灭活疫苗对鹅的免疫效果评估试验

为提高重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的免疫效果,本试验采用三种不同注射用矿物白油佐剂制成的三批(试2020004批、试2020005批和试2020006批,分别编组为A、B和C)重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗,并对鹅进行腿部肌肉注射、胸部肌肉注射、颈部皮下注射。在免疫前、免疫后21 d、免疫后28 d、免疫后35 d对鹅分别进行采血,用血凝抑制试验方法测定HI抗体效价。并对免疫鹅的注射部位进行解剖,观察药物吸收、残留情况。试验结果表明B组(试2020005批)疫苗(即使用100%道达尔EOLANE150:D3901F29白油佐剂制备的重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗)对肉鹅的安全性和免疫效果最好,且最优的免疫途径为颈部皮下注射。

禽流感H5亚型基因工程亚单位疫苗对哺乳动物的免疫保护

该研究以本课题组克隆构建并于昆虫/杆状病毒表达系统中表达的禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)H5HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIVH5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100%的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡。

H5亚型禽流感Re-6株+Re-7株+Re-8株三价灭活苗免疫效果的评估与分析

为评价重组禽流感(AI)H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫效果,应用血清学方法对常州市金坛区8个乡镇2016年秋防集中免疫鸡群进行了禽流感病毒(AIV)H5亚型Re-6、Re-7和Re-8株抗体水平的检测。结果显示,被检鸡群总体AI免疫抗体水平和合格率较高,达到农业部规定标准。初步推断该三价灭活苗免疫效果良好,可以推广应用。