建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法

目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的ABCG2核苷酸序列号NM_001032919.1及内参GAPDH核苷酸序列号NM_001195426.1,借助Primer premier 5.0软件设计PCR引物。提取猕猴新鲜肾组织的总RNA,并反转录合成cDNA。接着,利用PCR引物进行实时荧光定量PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析ABCG2的mRNA相对表达水平。结果PCR产物测序结果显示,扩增的ABCG2和GAPDH核苷酸序列与NCBI上猕猴的序列同源性分别为90.91%和91.14%。ABCG2和GAPDH的扩增效率均达到80%~120%,实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2接近1。结论本研究建立的检测猕猴ABCG2 mRNA实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2与痛风病关联的病理机制研究进展

痛风病是指与高尿酸血症、尿酸盐沉积(关节、肾脏)等尿酸代谢紊乱密切相关的进展性代谢疾病,根据其病理进展特点和临床表现,其病程可分为高尿酸血症阶段、尿酸盐沉积阶段、痛风性炎症阶段。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)是高通量的尿酸转运体,既参与了机体尿酸外排的肠-肾途径,又与痛风性炎症密切相关。通过切入ABCG2,对痛风病病理机制研究进展进行综述,以期为临床痛风病的深入研究及防治提供新的见解。

原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2变化情况及其意义研究

背景痛风不断攀升的高发病率已经成为重大的公共健康问题。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)在尿酸代谢中的重要作用已经得到广泛关注,成为近年来研究的热点。因此,针对ABCG2的研究有利于发现痛风发病的分子生物学机制,为痛风的诊断、治疗提供新的思路。目的观察原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞(PBMCs) ABCG2表达水平的变化情况,探究ABCG2在原发性痛风性关节炎中可能的作用。方法选取2016年6月—2017年2月于川北医学院附属医院风湿免疫科门诊就诊及住院的男性原发性痛风性关节炎患者(GA组)82例,其中急性期痛风(AGA亚组)和间歇期痛风(IGA亚组)患者各41例。依据患者血尿酸水平进一步分为血尿酸<420μmol/L痛风亚组(NUA亚组)31例、血尿酸≥420μmol/L痛风亚组(HUA亚组)51例。另选取同期川北医学院附属医院体检中心的男性健康体检者(HC组)46例。检测患者血尿酸水平、肌酐水平、胱抑素C(Cys-C)水平、红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;采用RT-qPCR、Western blotting法分别检测受试者PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平。结果 GA组PBMCs ABCG2 mRNA表达水平高于HC组(P<0.05)。IGA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于AGA亚组(P<0.05);HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于IGA亚组(P<0.05);AGA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HUA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于NUA亚组(P<0.05);HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于HUA亚组(P<0.05);NUA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。男性原发性痛风性关节炎患者ABCG2 mRNA表达水平与血尿酸水平呈正相关(r=0.235,P=0.033),与肌酐水平、Cys-C水平呈负相关(r值分别为-0.227、-0.229,P值分别为0.044和0.043),与ESR、hs-CRP水平无直线相关关系(r值分别为-0.181、0.027,P值分别为0.112、0.824)。结论 ABCG2在原发性痛风性关节炎患者PBMCs中高表达,并参与尿酸的转运,但未发现其与原发性痛风性关节炎的炎症过程相关;且肾功能异常的原发性痛风性关节炎患者的PBMCs ABCG2表达下调。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2转运体与尿酸代谢研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)作为一种转运蛋白定位于细胞膜,表达在肾小管上皮细胞刷状缘侧,具有转运尿酸功能。近年来对ABCG2的单核苷酸多态性分析证实,ABCG2是一个重要的尿酸转运蛋白,其功能性障碍将阻碍肾和肠道排泄尿酸,从而引起血清尿酸浓度上升,引起高尿酸血症,并引发痛风。本文将对ABCG2转运蛋白及其单核苷酸多态性与尿酸代谢功能调节的关系进行综述。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2与高尿酸血症

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate binding box transporter G2,ABCG2)在肠道和肾脏转运尿酸,介导尿酸外排。ABCG2基因单核苷酸多态性与高尿酸血症的发生密切相关,其中Q141K突变发挥着重要作用。雌激素可调控ABCG2基因的表达,可能与临床高尿酸血症的风险增加相关。目前,越来越多的研究利用不同方法检测了高尿酸血症患者ABCG2基因Q141K突变。该文概述了ABCG2基因Q141K突变及雌激素调控等因素对高尿酸血症的影响,同时比较了不同ABCG2基因Q141K突变检测方法的优缺点,以期为ABCG2基因的临床应用及Q141K突变检测提供依据。

高浓度尿酸盐对肠道细胞尿酸转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2表达及其功能的影响

目的探讨高浓度尿酸盐对肠道细胞HT-29尿酸转运功能的影响,明确高浓度尿酸盐干预下三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)表达及功能的改变并探讨可能的机制。方法实验组分别使用2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 mg/dl浓度梯度的尿酸对HT-29细胞进行干预,对照组使用0 mg/dl干预,通过细胞计数试剂盒(CCK8法)检测细胞活性,流式细胞术检测ABCG2转运功能,Western blot法和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测β-catenin/ABCG2蛋白及mRNA表达水平,免疫共沉淀(Co-IP)检测ABCG2与β-catenin的结合水平,激光共聚焦显微镜观察细胞ABCG2及β-catenin的蛋白定位。结果与对照组相比,2.5、5.0 mg/dl浓度尿酸处理24 h后,HT-29细胞的增殖活性无明显改变,而10.0、15.0、20.0 mg/dl浓度尿酸处理24 h后,细胞活性受损较为显著,细胞活性分别下降至(80.67±1.59)%、(77.85±2.41)%、(69.49±1.45)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较,低浓度尿酸(2.5、5.0 ml/dl)干预下,β-catenin/ABCG2在蛋白水平和mRNA水平表达差异均无统计学意义(均P>0.05),高浓度尿酸(7.5、10.0、15.0、20.0 mg/dl)干预下β-catenin/ABCG2在蛋白水平和mRNA水平表达均显著下降(均P<0.05)。选择对照(0 mg/dl)和高浓度(15.0 mg/dl)尿酸进行进一步相关实验,研究发现高浓度尿酸显著下调了HT-29细胞的转运功能(P<0.05)。免疫共沉淀证实ABCG2和β-catenin蛋白间存在相互结合作用,与对照组相比,高浓度尿酸干预组中ABCG2和β-catenin蛋白结合呈下降趋势但无统计学意义(均P>0.05)。激光共聚焦显微镜下观察显示,与对照组相比,高浓度尿酸组中ABCG2与β-catenin共定位减少,且定位于胞膜的ABCG2数量减少(P<0.05)。结论高浓度尿酸盐可下调肠道细胞β-catenin/ABCG2的表达及功能,进而影响细胞的转运功能,且高浓度尿酸作用下破坏了β-catenin/ABCG2的共定位。

原发性痛风性关节炎患者三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的水平研究

目的研究三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2基因(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2 gene,ABCG2)在原发性痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者中检测及临床意义。方法收集2015-08/2016-08月GA患者60例为实验组,根据发病时间长短分为原发性急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)和原发性间歇性急性痛风性关节炎(intermittent gouty arthritis,IGA)两组各30例,选择同期健康体检者20例为对照组,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)测所有标本外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中ABCG2 mRNA表达,同时测定尿酸(uric acid,UA)、尿素氮(urea nitrogen,UN)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)等指标。结果实验组中ABCG2 mRNA水平高于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);AGA组和IGA组ABCG2 mRNA水平均高于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);痛风患者中ABCG2 mRNA水平与UA水平呈正相关(r=0.28,P<0.05),而与其他生化指标无明显相关性。结论 ABCG2基因在痛风患者中有高水平表达,该基因的检测对阐明GA发病机制提供理论依据。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2与痛风／高尿酸血症

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2（ABCG2）是ABC转运蛋白超家族成员之一，编码基因位于4号染色体上，为定位于细胞膜的转运蛋白，在肝、肾、肠等组织广泛表达，具有转运尿酸的功能，其功能异常会导致尿酸排泄减少。目前已经发现，多种单基因多态性影响ABCG2的尿酸转运功能，从而引起高尿酸血症和痛风。所以研究ABCG2靶点药物意义重大，但仍需进一步研究。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2 rs2231142(C>A)多态性在川东北汉族痛风人群的研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)基因rs2231142(C>A)多态性与川东北汉族人群的痛风发病的相关性。方法收集川北医学院附属医院风湿免疫科2015年11月至2017年4月就诊患者中诊断明确的原发性痛风性关节炎患者169例为研究对象,同时收集193例同期健康体检者作为对照组,TaqMan?探针法实时荧光定量PCR检测受试者的基因型。将痛风组样本按照有无痛风石分为有痛风石痛风组与无痛风石痛风组;按照痛风发病早晚,分为早发性痛风组(<40岁)和晚发性痛风组(≥40岁)进行亚组分析。结果 (1)rs2231142(C>A)位点在两组研究对象中存在AA、CA、CC基因型。3种基因型及A、C等位基因在两组的分布频率差异有统计学意义(P<0.01)。与CC基因型比较,AA与CA基因型发生痛风的OR值分别为20.622和4.486。A等位基因发生痛风的风险是C等位基因的5.008倍。(2)119例痛风患者中,有痛风石患者14例。AA基因型及A等位基因在有痛风石痛风组分布频率显著高于无痛风石痛风组(P<0.01)。携带A等位基因发生痛风石的风险是携带C等位基因的4.500倍。(3)119例痛风患者中,早发性痛风组患者52例。AA基因型在早发性痛风组分布频率显著高于晚发性痛风组,CA基因型低于晚发性痛风组(P<0.05)。A等位基因与C等位基因在两组的分布差异有统计学意义(P<0.05)。携带A等位基因在40岁之前发生痛风的相对风险是携带C等位基因的1.698倍。结论 ABCG2 rs2231142(C>A)的多态性可能与我国川东北地区汉族人群原发性痛风的发病相关。AA基因型、A等位基因更易诱发痛风,发生痛风石并增加早发性痛风的发病风险。

肝细胞癌组织中三磷酸腺苷结合盒转运体G2和CD133蛋白的表达

目的:检测人肝细胞癌(HCC)组织中干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和CD133蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学法检测48例HCC及癌旁正常肝组织中ABCG2和CD133蛋白的表达,并分析其表达情况与临床病理特征的关系。结果:ABCG2蛋白阳性表达率在HCC和癌旁肝组织中分别为47.9%(23/48)和22.9%(11/48),差异有统计学意义(χ2=10.083,P<0.001);ABCG2蛋白表达与HCC分化程度(χ2=5.298,P=0.021)、包膜是否受侵(χ2=15.068,P<0.001)和有无门静脉癌栓(χ2=17.146,P<0.001)有关。CD133蛋白阳性表达率在HCC和癌旁肝组织中分别为27.1%(13/48)和0%,差异有统计学意义(χ2=11.077,P<0.001);CD133蛋白表达与HCC分化程度(χ2=6.553,P=0.010)、包膜是否受侵(χ2=24.382,P<0.001)和有无门静脉癌栓(χ2=16.032,P<0.001)有关。结论:HCC组织中ABCG2和CD133蛋白异常表达可能与HCC的发生发展及浸润转移有关。

阿尔茨海默病患者血清三磷酸腺苷结合盒转运蛋白7、基质金属蛋白酶9、脂联素水平与认知功能相关性分析

目的:探究阿尔茨海默病(AD)患者血清三磷酸腺苷结合盒转运蛋白7(ABCA7)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、脂联素(ADPN)水平与认知功能的相关性。方法:将120例AD患者纳入AD组,另选取80例认知功能正常者纳入正常组,比较两组受试者一般资料;并根据临床痴呆评定量表(CDR)将AD组分为轻度组(47例)和中重度组(73例),比较两组患者血清指标(ABCA7、MMP-9、ADPN)水平及认知功能[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)及简易精神状态量表(MMSE)];采用Pearson相关分析法分析AD患者血清ABCA7、MMP-9、ADPN水平与MoCA、MMSE评分的相关性。结果:AD组ABCA7、MMP-9水平高于正常组,ADPN水平低于正常组(均P<0.05);轻度组ABCA7、MMP-9水平低于中重度组,ADPN水平、MoCA评分及MMSE评分均高于中重度组(均P<0.05);AD患者MoCA评分、MMSE评分分别与血清ABCA7、MMP-9水平呈负相关,与ADPN水平呈正相关(均P<0.05)。结论:AD患者血清ABCA7、MMP-9水平升高,ADPN水平下降,且血清ABCA7、MMP-9水平与AD患者认知功能呈负相关,ADPN水平与AD患者认知功能呈正相关。

癫痫132例外周血三磷酸腺苷结合盒转运子A7、髓样细胞触发受体2的水平及临床意义

目的探究癫痫病人外周血中三磷酸腺苷结合盒转运子A7(ABCA7)、髓样细胞触发受体2(TREM2)的表达水平及与认知功能的关系。方法选取商丘市中心医院2017年6月至2021年7月收治的132例癫痫病人为研究对象,根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)得分将癫痫病人分为两组,认知功能正常组(MoCA≥26分,60例)和认知功能障碍组(MoCA 0~25分,72例)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清ABCA7、TREM2水平;Spearman法分析相关性、logistic回归分析影响因素、受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估预测价值。结果相较于认知功能正常组,认知功能障碍组血清ABCA7[(1.17±0.26)μg/L比(1.53±0.37)μg/L]水平升高,TREM2[(25.14±3.47)ng/L比(20.58±2.52)ng/L]水平降低(t=6.34、8.73,P<0.05)。认知功能障碍病人血清ABCA7水平与MoCA评分呈负相关(r=−0.55,P<0.001),血清TREM2水平与MoCA评分呈正相关(r=0.56,P<0.001)。TREM2、发作持续时间、病程、ABCA7是癫痫病人发生认知功能障碍的影响因素。血清ABCA7、TREM2水平单独及联合预测癫痫病人认知功能障碍的曲线下面积分别为0.79、0.84、0.93,血清ABCA7、TREM2水平联合预测的曲线下面积明显高于二者单独预测(P<0.05)。结论癫痫病人血清中ABCA7的表达水平显著升高,TREM2表达水平显著降低,均为癫痫病人发生认知功能障碍的影响因素,与癫痫病人的认知功能密切相关。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。

高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究

目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期。流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异。RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bcl-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异。MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异。结果ABCG2High和ABCG2Low细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%。FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1/M0期细胞占63.9%。FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为75%,在后者升高至20%。RT-PCR显示,ABCG2mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2Low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异。生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢。耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究。

苹果酸舒尼替尼诱导高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体

目的:探讨苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate,SU11248)对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member2,ABCG2)耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP(ABCG2highCNE2/DDP)表达NKG2D配体的诱导作用。方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2highCNE2/DDP细胞及同种异体反应性自然杀伤细胞(allo-reactive natural kill cell,Allo-NK),流式细胞技术检测分离后细胞的纯度及苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测苹果酸舒尼替尼处理前后ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果:ABCG2highCNE2/DDP细胞分离后ABCG2的表达率为(91.40±2.32)%,Allo-NK细胞分选后CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上。经苹果酸舒尼替尼处理后,ABCG2highCNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达率由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(89.12±4.56)%、(66.10±2.22)%、(67.56±4.19)%、(69.37±8.83)%、(63.28±3.31)%。在效靶比为10∶1、20∶1时,苹果酸舒尼替尼处理前后Allo-NK细胞对ABCG2highCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(41.12±4.12)%、(57.25±2.37)%,处理后的杀伤率有明显的提高(F=15.58,P=0.000)。结论:苹果酸舒尼替尼通过诱导高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使ABCG2highCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性明显增强。

三磷酸腺苷结合盒转运体G2与CD_(24)在贲门腺癌中的表达及临床意义研究

目的检测肿瘤干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和CD24在贲门腺癌中的表达情况,探讨两者与腺癌临床病理特征间的关系。方法采用免疫组化法检测140例贲门腺癌组织和15例癌旁组织中AB-CG2和CD24的表达情况。将所收集的病例依据不同的分化程度、年龄、性别、肿瘤浸润深度、TNM分期及病理学形态进行分组,观察二者的阳性表达率,采用χ2检验分析两者与临床及病理特征间的相关性,进一步探讨ABCG2和CD24与贲门腺癌恶性程度的关系。结果免疫组化结果显示ABCG2和CD24在腺癌组织中的阳性表达率分别为54.3%(76/140)和45.0%(63/140),均高于癌旁组织〔13.3%(2/15)和6.7%(1/15)〕,差异有统计学意义(P<0.05)。ABCG2的阳性表达率与肿瘤分化程度及Lauren分型有相关性(P<0.05);与患者的年龄、性别、浸润程度、淋巴结转移、临床分期无相关性(P>0.05)。CD24的阳性表达率不仅随分化程度升高表达下调,还与浸润程度、淋巴结转移、临床分期及Lauren分型有相关性(P<0.05),但与患者的年龄、性别无相关性(P>0.05)。结论 ABCG2、CD24与肿瘤干细胞存在密切相关性。ABCG2只与肿瘤的分化程度及病理形态学分型关系密切。CD24与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期及Lauren分型关系密切,提示两者可能参与贲门腺癌的恶性过程,其表达越高患者的预后可能越差。

索拉非尼对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的鼻咽癌细胞杀伤敏感性的影响的研究

目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2High CNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2High CNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞)。流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率。乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率。结果分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CD16+CD56+(Allo-NK)细胞纯度大于90%。未处理组的ABCG2High CNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15%、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P<0.05)。在效靶比为10∶1、20∶1时,Allo-NK细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论索拉非尼通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体,使其对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

舒心饮对冠心病患者脂代谢及三磷酸腺苷结合盒转运体蛋白A1／G1表达的影响

目的 探讨舒心饮对冠心病患者脂代谢及巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体蛋白A1/G1（ABCA1/ABCG1）表达的影响.方法 选取浙江嘉兴市中医医院2013年10月至2015年10月心内科门诊和住院的冠心病患者60例,按随机数字表法分为观察组及对照组,每组30例.两组均给予西药常规治疗,观察组在西药常规治疗基础上服用舒心饮（药物组成：黄芪30 g、党参15 g、麦冬15 g、生地黄9 g、熟地黄9 g、枸杞15g、桑寄生15g、葛根9 g）,对照组仅给予西药常规治疗,两组均连用14d.检测两组患者治疗前后总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的变化及巨噬细胞ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平.结果 治疗后观察组TC、LDL-C水平均明显低于对照组[TC （mmol/L）：3.72±0.58比3.38±0.66,LDL-C（mmol/L）：2.39±0.68比2.05±0.59,均P＜0.05],HDL-C明显高于对照组（mmol/L：1.30±0.15比1.15±0.35,P＜0.05）.反转录-聚合酶链反应（RT-PCT）显示,观察组治疗后ABCA1和ABCG2的mRNA表达均高于对照组[ABCA1 mRNA （2-ΔΔCt）：1.05±0.12比0.92±0.16,ABCG1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.95±0.11比0.89±0.08,均P＜0.05].蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）显示,观察组治疗后ABCA1和ABCG1的蛋白表达高于对照组[ABCA1（灰度值）：0.48±0.09比0.64±0.17,ABCG1（灰度值）：0.37±0.21比0.61±0.12,均P＜0.05].结论 舒心饮可以影响冠心病患者的脂代谢,其机制可能与上调巨噬细胞ABCA1和ABCG1的表达有关.

苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达

目的前期工作发现苦瓜蛋白（MD28）可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚。文章拟从转录后水平分析其作用机制。方法首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的micro RNA（miRNA）,并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系。qRT-PCR检测ABCA1 m RNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积。结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因。MD28剂量（0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L）和时间（0 h、6 h、12h、24 h、48 h）依赖性地上调ABCA1 m RNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h最为显著。ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用。结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用。