小鼠磨牙上皮根鞘与牙骨质发育的关系

目的:研究上皮根鞘细胞(Hertwig's epithelial root sheath,HERS)的发生,非胶原基质蛋白骨桥素(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)及牙骨质发育之间的关系。方法:取出生后5d、9d、15d、19d及4个月的BALB/c小鼠共18只,光镜观察上皮根鞘的发生、牙骨质发育过程,透射电镜观察该阶段上皮根鞘细胞的超微结构。PV免疫组化两步法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、OPN、BSP在牙骨质形成过程中的表达。结果:超微结构观察发现,内、外釉上皮在融合过程中,2层细胞间包含个别具有丰富细胞器的一类细胞,其胞质中可见大量的高尔基复合体和粗面内质网,通过桥粒与内、外釉上皮连接。免疫组化显示,新形成上皮根鞘细胞呈OPN阳性表达,但未见BSP阳性表达。在牙根的发育过程中,牙本质-牙骨质交界处OPN有较高表达,伴随牙骨质基质在根面不断沉积,OPN在牙骨质中表达增强,成熟牙根表面可见厚度不同的牙骨质覆盖,OPN阳性表达。结论:上皮根鞘发生时,内、外釉上皮间可包容个别源于网状层或中间层、细胞器丰富的细胞,从而形成类似成釉器的结构。其可能在牙根发育起始阶段分泌某些蛋白和信号分子,启动根部牙本质和牙骨质的形成。

上皮根鞘细胞在牙骨质发育中的作用

目的:观察牙根发育中上皮根鞘细胞(Hertwig′s epithelial root sheath,HERS)断裂后结局和增殖凋亡相关基因的表达,探讨上皮根鞘在牙根发育特别是牙骨质形成中的可能作用。方法:用TUNEL( TdT-mediated -dUTP nick end labeling , TUNEL)法原位细胞凋亡检测牙根发育中上皮根鞘细胞凋亡的情况。以细胞角蛋白14(cytokeratin 14)标记上皮根鞘细胞,追踪其断裂后结局。SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA )和凋亡抑制基因Bcl -2在上皮根鞘细胞的表达。结果:牙形成后,内外釉上皮结合增殖形成HERS,此时呈PCNA表达阳性;牙根发育开始后,HERS呈Bcl -2阴性表达,在少量牙本质基质形成处,上皮根鞘细胞开始呈TUNEL阳性表达,之后HERS断裂,在其外侧可见成牙骨质细胞的形成,断裂的HERS细胞部分转入牙周膜形成上皮剩余(the epithelial rest of Malassez),而细胞牙骨质形成中可见部分埋入细胞呈CK14阳性表达。结论:HERS细胞的凋亡可能会为成牙骨质细胞分化提供信号,部分HERS细胞可能参与牙骨质的形成。

上皮根鞘结构对牙根发育的影响

目的:研究上皮根鞘的结构对牙根发育的影响。方法:选择出生后(postnatal,PN)8d的SD大鼠,切取第一磨牙牙胚的颈部组织,用胶原酶和dispase酶消化,1组直接离心形成细胞团,另1组加用胰酶消化后,离心形成细胞团。将细胞团体外培养4h后,种植到母鼠肾被膜下,4周后取材观察。结果:胶原酶和dispase酶消化可将上皮根鞘解离成碎片,加用胰酶消化后,上皮根鞘被解离为单个细胞。含有上皮根鞘碎片的细胞团种植后形成牙根样结构,而含有上皮根鞘离散细胞的细胞团则形成管状牙本质和骨样牙本质块。结论:上皮根鞘的结构对其引导牙根发育具有重要作用。

大鼠磨牙上皮根鞘发育的组织学观察

目的观察SD大鼠磨牙上皮根鞘的发育。方法选择出生后0、5、10、15、25 d的SD大鼠,制备大鼠下颌组织切片,抗角蛋白14免疫组化染色。结果 SD大鼠磨牙上皮根鞘在其出生后5 d时开始形成,出生后15 d时开始断裂,出生后25 d时大部分发生断裂,根尖处部分保持完整。结论大鼠磨牙上皮根鞘有序发生、生长和断裂,可作为研究人类牙根发育的动物模型。

上皮根鞘细胞表面超微结构及牙根发育中上皮根鞘增殖力的变化

目的：观察体外培养的上皮根鞘细胞超微结构及牙根发育中上皮根鞘增殖力的变化。方法：体外培养大鼠上皮根鞘细胞，扫描电镜观察。制备出生后5d、7-8d和15d的SD大鼠下颌磨牙石蜡切片，增殖细胞核抗原，检测免疫染色。结果：上皮根鞘细胞表面有许多微绒毛，细胞间连接紧密。牙根发育中上皮根鞘增殖力有序变化。结论：上皮根鞘细胞具有典型的上皮细胞表面结构特性。牙根发育中上皮根鞘有序断裂与其增殖力变化有关。

上皮根鞘在无细胞牙骨质和细胞牙骨质形成中的作用研究

目的观察无细胞牙骨质和细胞牙骨质发育时上皮根鞘细胞的增殖、凋亡的表达,探讨上皮根鞘在非细胞牙骨质和细胞牙骨质形成不同作用。方法 TUNEL法检测牙根发育中上皮根鞘细胞凋亡的情况。比较非细胞和细胞牙骨质形成时上皮根鞘细胞和牙周膜细胞的凋亡阳性表达指数,取α=0.05水准。SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)。结果小鼠出生后第9天,无细胞牙骨质形成阶段,上皮根鞘细胞与牙周组织凋亡阳性表达指数未见显著性差异;出生后第19天,牙根根1/3为细胞牙骨质所覆盖,此时上皮根鞘细胞凋亡阳性表达指数高于牙周组织(P<0.05)。结论细胞凋亡调控上皮根鞘细胞的转归;上皮根鞘细胞在无细胞牙骨质和细胞牙骨质形成中的作用不尽相同。

Hertwig上皮根鞘的研究重点

牙根发育是牙齿发育的重要部分,Hertwig上皮根鞘(Hertwig′s epithelial root sheath,HERS)参与牙根发育,并起重要作用。近年有不少关于HERS生物学特性和在牙根发育中作用的研究。本文着重介绍HERS细胞的分离培养、合成釉基质蛋白和参与牙根发育方面的研究进展。

上皮根鞘在牙根发育中的作用

上皮根鞘在牙根发育,尤其是牙骨质发育中的作用已受到越来越多的关注。本文就上皮根鞘在根部牙本质和牙骨质的形成及牙周组织再生中可能的调控作用作一综述。

上皮根鞘细胞表达牙齿矿化相关蛋白mRNA的研究

目的:检测上皮根鞘(epithelial root sheath,ERS)细胞表达牙齿矿化相关蛋白mRNA的情况。方法:分离大鼠磨牙牙胚,酶消化法培养上皮根鞘细胞,通过RT-PCR检测HERS细胞表达牙齿矿化相关蛋白mRNA的情况。结果:ERS细胞表达成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)mR-NA,不表达釉原蛋白(amelogenin,AMGN)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP),骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA。结论:ERS细胞表达一些牙齿矿化相关蛋白,可能参与调控牙根形成。

Vps4b基因敲除鼠上皮根鞘中细胞角蛋白14和增殖细胞核抗原的表达

目的研究Vps4b基因突变对上皮根鞘(HERS)中细胞角蛋白14(CK14)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法取出生后(P)5、9、11、15、19d的小鼠的双侧下颌组织,石蜡包埋后获得下颌第一磨牙组织切片,通过免疫组织化学方法比较CK14和PCNA在正常小鼠与Vps4b基因敲除小鼠HERS中的表达情况。结果正常小鼠P5d开始形成HERS,PCNA在HERS细胞中强阳性表达;P9d,HERS结构连续,PCNA在HERS细胞中阳性表达;P11d,一小部分HERS开始断裂,PCNA在HERS细胞中弱阳性表达;P15d,HERS继续断裂,PCNA在牙根表面HERS细胞中弱阳性表达;P19d,牙根达到生理长度,PCNA仅在牙根末端HERS细胞中阳性表达。基因敲除小鼠与正常小鼠相比,P5d同样形成HERS结构,然而其断裂在P9d就开始出现,P19d牙根表面仅存少量HERS碎片,根尖发育不成熟,PCNA表达强度下降。结论Vps4b基因突变可能通过改变HERS中CK14和PCNA的表达,从而导致牙根发育异常。

IGF-1促进大鼠上皮根鞘HERS细胞成牙骨质分化的研究

目的:研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞增殖和分化的影响。方法:取出生后8 d的SD大鼠,分离纯化HERS上皮细胞,分为对照组和IGF-1干预组;CCK8检测细胞生长曲线;免疫荧光染色检测上皮细胞标记物细胞角蛋白14(CK14)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和间充质细胞标记物波形蛋白(Vimentin)的表达;实时定量RTPCR检测上皮细胞标记物E-cadherin,间充质细胞标记物Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1),成牙骨质分化相关基因骨涎蛋白(Bsp)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(Alp)等基因表达水平;茜素红染色检测细胞矿化情况。结果:HERS细胞能够同时表达上皮及间充质细胞标记物;IGF-1干预后,免疫荧光染色及实时定量RT-PCR结果显示HERS细胞上皮细胞标记物表达显著下降,间充质细胞标记物表达显著上调,并且明显促进细胞增殖(P<0.05)。矿化诱导环境下,IGF-1干预组7、14 d均显示成牙骨质分化相关基因表达显著上调,促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:IGF-1诱导促进HERS细胞增殖、上皮-间充质转化和成牙骨质细胞向分化。

牙囊和上皮根鞘细胞成无细胞牙骨质的机制

无细胞牙骨质是锚定牙周纤维和牙根的重要组织结构,牙囊细胞(DFC)通过自身分化和上皮根鞘(ERS)通过上皮-间质转化(EMT)形成的成牙骨质细胞参与无细胞牙骨质形成。牙囊细胞体外移植后可形成纤维样和牙骨质样组织,而牙乳头和上皮根鞘可以诱导牙囊细胞从基因及其蛋白质水平高表达碱性磷酸酶、骨涎蛋白等无细胞牙骨质相关标志物。其中钙离子、骨形态发生蛋白、Wnt/β-连环蛋白通路等目前被认为是介导牙囊细胞成牙骨质分化的信号转导通路。目前发现,调控无机磷酸盐胞内外浓度的转运蛋白对无细胞牙骨质形成调节的敏感性更高。ERS亦可通过EMT形成间质细胞来参与牙周组织的发生。钙结合蛋白D28k、末端较小的同源异形盒-2等在无细胞牙骨质、ERS以及牙囊细胞表达差异都说明了ERS具有成牙骨质细胞特性。在此过程中,TGFβ激活下游蜗牛蛋白后,通过磷脂酰肌醇-3-激酶和蛋白激酶B信号转导通路来介导ERS的无细胞牙骨质分化过程。

上皮-间充质转化相关蛋白在小鼠磨牙Hertwig’s上皮根鞘的表达

目的观察小鼠下颌第一磨牙牙根发育过程中,上皮间充质转化(EMT)相关蛋白在上皮根鞘(HERS)中表达情况,深入探讨HERS的生物学性质。方法取新生第5、7、10、15天的ICR小鼠下颌骨标本,利用Masson染色显示其组织学形态,免疫荧光双染、免疫组织化学及阳性表达定量分析观察EMT相关标志物(CK14、波形蛋白、E-cadherin、N-cadherin、Snail)在下颌第一磨牙HERS中的表达情况,并进行统计学分析。结果在牙根发育过程中HERS持续表达上皮细胞标志物CK14,不表达间充质细胞骨架蛋白波形蛋白,在第7天至第15天间,HERS同时表达上皮(CK14、E-cadherin)、间充质特性(N-cadherin)及Snail。HERS各标志物阳性定量分析结果显示,E-cadherin在PN7持续高表达,N-cadherin在PN7表达最高,Snail在PN7、PN10表达升高。结论在牙根发育过程中HERS发生EMT,且处于EMT中间态,这种EMT中间态可能在HERS调控牙根发育中具有重要作用。

赫特维希上皮根鞘在生物性牙根构建中的作用研究进展

牙根发育是以一系列外胚层及相关神经源性间充质之间的上皮间质相互作用为特征的,赫特维希上皮根鞘(Hertwig’s Epithelial Root Sheath,HERS)参与牙根的发育,并发挥重要作用,尤其在牙骨质发育过程中的作用越来越受到关注,近年来有不少关于HERS生物学特性和在牙根发育中作用的研究。本文就HERS的组织结构特点、其在根部牙骨质形成中的作用,以及它的转归种的作用作一综述。

赫特维希上皮根鞘细胞的研究进展

赫特维希上皮根鞘(Hertwig’s epithelial root sheath,HERS)细胞是一群在牙根发育以及牙周组织形成过程中发挥重要作用的特殊细胞。就HERS细胞起源、形态结构,以及近年来关于其生物学行为特点、参与牙发育调控过程、应用于组织修复再生潜力的研究作一综述,为后续HERS细胞及其衍生物在牙周组织再生中的应用策略和机制探究提供参考。

Hertwig's上皮根鞘与牙囊共培养细胞膜片的构建及初步研究

目的:模拟牙周膜/牙骨质发育微环境,构建一种新型的赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞-牙囊细胞(DFC)直接混合共培养细胞膜片,为上皮参与牙周膜/牙骨质再生的调控提供一种新策略。方法:将处于同一牙胚、同一牙根发育期的HERS细胞与DFC,直接混合共培养后制备成细胞膜片,观察其形态学的特点,免疫组化染色检测共培养细胞膜片与DFC膜片之间成牙周膜/牙骨质能力的差异。结果:成功构建出牙源性上皮-间充质共培养细胞膜片,共培养细胞膜片层数较多,能分泌较多的细胞外基质。免疫组化染色结果显示,共培养细胞膜片骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLI)表达阳性,而DFC膜片的OCN、COLI表达则为阴性,共培养细胞膜片碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达较DFC膜片更强。结论:共培养细胞膜片成牙周膜/牙骨质能力更强,HERS细胞在牙周膜/牙骨质发育过程中的调控作用不可忽视。

从拔取的无上皮根鞘的人发判定性别

引言对犯罪现埸发现的头发进行性别判定,有助于弄清案情,这肯定是有理由的。现在已有好几种方法用于判定拔取的头发的性别。例如,检验性染色质的福依耳根(Fewlgen)氏反应法,醋酸苔红素染色法,或甲酚紫染色法,以及检验Y染色质的阿的平染色法。而在这些实验中,头发的上皮根鞘被看做是性别判定中必不可少的成分。但在犯罪现埸发现的头发,尤其是附着在凶器上的头发,常常缺少上皮根鞘。

从上皮根鞘发育异常解析牙根内陷

上皮根鞘在引导牙根发育过程中起着关键作用, 其生长期间出现任何问题均可导致各种形式的牙根发育缺陷或异常。当上皮根鞘向牙乳头内过度增殖、卷叠时可发生牙根内陷。牙根内陷在组织来源和发生机制上与成釉器增殖、内卷所致牙冠内陷相似, 但该类发育异常的名称、分类, 以及牙内陷、牙根内陷和畸形根面沟三者间的关系尚无共识。本文以上皮根鞘在牙根发育过程中所起作用为切入点, 探究牙根发育缺陷和异常的表现, 重点梳理牙根内陷的发生、分类及其与牙内陷的关系, 探讨牙根内陷的临床特点及对治疗的影响, 以使临床医师对因上皮根鞘发育异常引发的牙齿疾病加深认识。

大鼠Hertwig's上皮根鞘细胞的分离培养

目的:建立大鼠Hertwig's上皮根鞘细胞分离、培养和纯化的方法。方法:分离出生后7dSD大鼠上下颌第一、二磨牙牙胚,切取牙冠颈部组织,酶消化法原代培养,利用差速传代纯化上皮细胞。用角蛋白14和波形丝蛋白染色确定细胞来源。结果:原代培养细胞为上皮和间充质混合细胞,经2～3次差速传代后可获得纯化的上皮根鞘细胞。免疫组化染色角蛋白14阳性,波形丝蛋白阴性。结论:利用酶消化法及差速传代法培养并获得纯化的上皮根鞘细胞。

建期上皮剩余的形态学和细胞活性研究

目的追踪观察上皮剩余在牙齿萌出和建!过程中的形态分布和细胞活性改变。方法细胞角蛋白14(CK14)标记小鼠上皮剩余细胞,光镜观察其分布和细胞形态,透射电镜观察上皮剩余细胞的超微结构。PV免疫组化两步法检测CK14和增殖细胞核抗原(PCNA)在上皮剩余细胞中的表达。结果自牙齿萌出前到建后期上皮剩余的外形和分布改变明显,建后期上皮细胞簇更为规则,分布由牙根表面的较广泛分布向根分叉和牙颈等部位局限,与成熟期上皮剩余相似。建阶段,上皮剩余沿牙根表面呈现类网格样布局,细胞数量较萌出前期明显增加,细胞增殖活性检测显示此时上皮剩余特别是根分叉水平细胞增殖活跃。建后期上皮剩余细胞数量开始减少,透射电镜结果显示簇内出现细胞凋亡征象。结论上皮剩余不是仅仅作为无功能的剩余物,其可能是上皮根鞘功能的延伸或持续,在建过程中发挥积极作用,从而完成牙周组织的发育和维持牙周内环境的稳定。