非小细胞肺癌组织中lncRNA GAS5、LHPP表达与上皮间质化相关性及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中长链非编码核糖核酸生长抑制特异性基因5(lncRNA GAS5)、磷酸赖氨酸磷酸组氨酸无机焦磷酸盐磷酸酶(LHPP)表达与上皮间质化(EMT)相关性及临床意义。方法收集2018年6月至2020年1月在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC 90例患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测lncRNA GAS5、LHPP和EMT相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和波形蛋白(VIM)]表达。分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与临床病理特征的关系,并通过Pearson相关性分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与EMT相关蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法绘制不同lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA、E-Cad mRNA表达低于癌旁组织,N-Cad mRNA、VIM mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5与E-Cad mRNA表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),与N-Cad mRNA、VIM mRNA表达呈负相关(r=-0.699、-0.689,P<0.001);lncRNA GAS5与LHPP mRNA表达呈正相关(r=0.651,P<0.001)。不同分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移的NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,lncRNA GAS5高表达组的3年总生存率[68.18%(30/44)]高于lncRNA GAS5低表达组的3年总生存率[36.96%(17/46)];LHPP mRNA高表达组的3年总生存率[67.39%(31/46)]高于LHPP mRNA低表达组的3年总生存率[36.36%(16/44)],差异有统计学意义(χ^(2)=10.274、10.322,P<0.05)。低分化、肿瘤TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移为NSCLC患者死亡的独立危险因素,lncRNA GAS5≥1.32、LHPP mRNA≥1.12为独立保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA低表达,与EMT相关蛋白表达、分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为NSCLC诊治的新靶点。

TNF-α通过CXCL10/CXCR3信号通路促进结肠癌细胞上皮间质化的相关分子机制

目的 探讨TNF-α通过调控结肠癌SW480细胞CXCL10/CXCR3轴的表达影响上皮间质化(EMT)及其分子机制。方法 培养人结肠癌SW480细胞,分别通过TNF-α、siRNA-CXCR3处理细胞,将细胞分为对照组(NC组)、TNF-α刺激组(TNF-α组)及TNF-α刺激+siRNA-CXCR3沉默组(TNF-α+si-CXCR3组)。通过Real-time PCR检测各组细胞CXCL10、CXCR3及上皮间质化相关基因的mRNA表达量;Western Blot检测各组细胞CXCL10/CXCR3通路蛋白及上皮间质化相关蛋白表达量的影响;免疫组化检测细胞中上EMT上皮标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cad)与EMT间质标志物波形蛋白(Vimentin)的变化情况;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果 TNF-ɑ组细胞中通路基因CXCL10、CXCR3的m RNA水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞中CXCR3水平低于TNF-α组,差异有统计学意义(P<0.05);TNF-ɑ组细胞中CXCL10、CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量高于NC组,E-cad的蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义;TNF-α+si-CXCR3组细胞CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量低于TNF-ɑ组,E-cad的蛋白水平高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组中Vimentin的表达量高于NC组,E-cad的表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+siCXCR3组中Vimentin的表达量低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05),E-cad的表达量高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组迁移能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞迁移能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNF-ɑ组细胞的侵袭能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞侵袭能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够诱导结肠癌SW480细胞发生上皮间质化,并促进其迁移、侵袭水平,这一过程可能与激活CXCL10/CXCR3信号通路有关。

夏枯草抑制人胃癌细胞上皮间质化的机制

目的探讨夏枯草对胃癌细胞上皮间质化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用及其可能的作用机制。方法选取人胃癌细胞株HGC-27,将细胞随机分为对照组及夏枯草低、中、高剂量组(20、40、80μg·mL^(−1)夏枯草提取物)。用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazolium bromide,MTT]法检测细胞增殖抑制率;划痕实验检测细胞迁移率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-155、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和β连环蛋白(β-catenin)mRNA表达情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测GSK-3β、β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和锌指蛋白(Snail)表达情况。结果与对照组比较,夏枯草3组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05)。与夏枯草低剂量组比较,夏枯草中剂量组、夏枯草高剂量组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白的表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05),夏枯草高剂量组诸项指数变化尤其明显(P<0.05)。结论夏枯草对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭有一定的抑制作用,并能有效阻断胃癌细胞发生EMT,可能是通过降低miRNA-155表达水平、抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

胃肠安丸通过抑制上皮间质化抑制TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎

[目的]探讨胃肠安丸对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的抑制作用及其作用机制。[方法]建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠UC模型,灌胃给予胃肠安(WCA)1周;记录大鼠体重和结肠长度,进行疾病活动指数(DAI)评分和结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;用免疫组织化学法检测结肠病理变化。细胞水平上,考察WCA对脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞炎症因子表达的影响。通过免疫荧光法分别考察WCA对UC大鼠结肠组织和LPS刺激的THP-1细胞条件培养基(CM)处理的结肠上皮Caco-2细胞的上皮-间质化(EMT)标志物E-钙粘蛋白和波形蛋白的表达。[结果]WCA可以显著抑制UC大鼠体重的减轻和结肠长度的缩短,降低疾病相关的DAI和CMDI评分,改善结肠病理损伤;UC结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性和细胞因子表达的上升已被明显抑制。在THP-1细胞中,WCA及其活性成分可以显著抑制LPS诱导的干扰素诱导蛋白10(IP-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和NF-κB抑制剂(IkBα)mRNA水平的表达。在UC大鼠和CM刺激的Caco-2细胞中E-钙粘蛋白表达下调,波形蛋白表达上调,给予WCA治疗处理后,上述EMT现象被明显抑制。[结论]本研究表明,WCA可以通过抑制炎症诱导的结肠EMT减轻大鼠UC的发展。

逆转肿瘤上皮间质化药理研究进展

上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,是肿瘤侵袭和转移过程的重要启动步骤,与恶性肿瘤的进展和预后密切相关,EMT已经成为抗肿瘤药理研究的重要靶点。该文从药理筛选模型、靶向药物、细胞毒类药物、天然药物几个方面综述近几年来有关逆转肿瘤EMT药理方面的研究,对于研发能够逆转恶性肿瘤EMT的抗肿瘤药物具有重要指导意义。

PKM2对肝内胆管癌细胞增殖及上皮间质化的影响

目的检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)组织中的表达情况,探讨PKM2对ICC细胞增殖及上皮间质化(EMT)的影响。方法RT-PCR和免疫组化法检测ICC组织中PKM2的表达,慢病毒载体介导的RNA干扰PKM2的表达,观察其对ICC细胞增殖、侵袭能力及EMT相关生物学特性的影响。结果RT-PCR结果显示,PKM2在ICC组织中高表达(P<0.05)。体外实验显示,PKM2基因沉默在体外抑制了ICC细胞的增殖和侵袭能力,PKM2-RNAi转染组细胞克隆形成数(152±9.63)显著低于空白组(351.5±17.6)及对照组(333.1±21.3)(P<0.05)。转染组的侵袭能力明显低于空载(Mock)及对照组(Control)组,发生迁移的细胞数分别为(96.0±7.1)、(185.5±11.3)、(197.1±17.2)(P<0.05)。其具体机制是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导,进而抑制EMT相关通路。结论胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2可通过Wnt/β-catenin信号调节EMT,进而调控ICC细胞侵袭的能力。

shRNA干扰TTF-1基因对肺腺癌细胞EGFR-TKI敏感性及细胞上皮间质化的影响

目的探讨甲状腺转录因子(TTF-1)对肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)药物敏感性及细胞上皮间质化的影响。方法将培养后的肺腺癌HCC827细胞分为空载体组、阴性质粒转染(NC-sh RNA)组和阳性质粒转染(TTF-1-sh RNA)组,通过sh RNA干扰技术抑制细胞中的TTF-1基因表达,用流式细胞仪测定转染前后细胞凋亡率和细胞周期变化。不同浓度的吉非替尼(10、20、40、60μmol/ml)作用各组细胞72h,CCK-8法检测细胞生长抑制率。5ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)作用各组细胞48h,细胞出现上皮间质化,Western blot法测定TTF-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达。结果与NC-sh RNA组、空载体组比较,TTF-1-sh RNA组细胞凋亡率明显增加,G0/G1相百分比升高,S相和G2/M相百分比降低(均P<0.05);不同浓度吉非替尼作用后,每组细胞的生长抑制率均随药物浓度的增加而升高,不同浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。同一浓度时,3组细胞生长抑制率之间的差异有统计学意义(P<0.05);TTF-1-sh RNA组较NC-sh RNA组、空载体组均明显为高,差异均有统计学意义(均P<0.05);而空载体组与NC-sh RNA组比较,仅在吉非替尼20μmol/ml差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1作用前后,与空载体组和NC-sh RNA组比较,TTF-1-sh RNA组细胞TTF-1、α-SMA蛋白表达水平均为低,E-cadherin蛋白表达水平均为高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与TGF-β1作用前比较,TGF-β1作用后NC-sh RNA组和空载体组TTF-1蛋白表达水平均下降,E-cadherin蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与NC-sh RNA组、空载体组比较,TTF-1-sh RNA组TGF-β1作用前后细胞E-cadherin、α-SMA蛋白变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论sh RNA干扰TTF-1基因可增加肺腺癌HCC827细胞对EGFR-TKI药物敏感性,并部分抑制细胞上皮间质化。

TrkB通过调控PI3K/AKT途径诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制研究

目的观察TrkB如何通过PI3K/AKT通路诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制并探讨其意义。方法分别用含0、100、500、1000 nmol/L抑制剂K252a作用于Hep-2细胞,CCK-8法检测细胞的增殖活性,划痕法检测细胞的迁移能力,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,同时用Western-blot检测Hep-2细胞中p-Akt、p-c-Src、E-cadherin蛋白的表达情况。结果100 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为17.8%、20.5%、19.7%;500 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为48.2%、46.8%、45.9%;1000 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为51.3%、83.0%、81.5%;K252a(1000 nmol/L)组迁移率及穿膜细胞数分别为21%及46,对照组迁移率及穿膜细胞数分别为69%和221,差异均具有统计学意义(t=1.235、t=3.416,P均<0.01);与对照组比较,K252a(1000 nmol/L)组Hep-2细胞中p-Akt及p-c-Src蛋白表达量显著降低,分别为0.93±0.12、0.21±0.05、0.72±0.09、0.14±0.02,差异均有统计学意义(t=3.578、2.634,P均<0.01);且对照组中E-cadherin蛋白表达量为0.14±0.02,K252a(1000 nmol/L)组Hep-2细胞中E-cadherin蛋白表达量为0.75±0.08,差异有统计学意义(t=2.852,P<0.01)。结论TrkB可能通过激活PI3K/Akt信号通路来诱导喉癌细胞EMT的发生。

三阴性乳腺癌中β-肾上腺素能受体的表达及与上皮间质化相关性研究

目的探究三阴性乳腺癌(TNBC)中β-肾上腺素能受体(β-ARs)的表达及与上皮间质化(EMT)的关系。方法72例TNBC患者组织标本选自河北工程大学附属医院。通过免疫组织化学法对肿瘤切片进行染色以评估β-ARs的表达。通过Western印迹检测EMT标记蛋白E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。分别通过χ2检验及Spearman秩相关分析确定β-ARs表达与TNBC临床病理特征的相关性以及β-ARs表达与EMT标志物的关系。结果与对照组织中的表达水平相比,TNBC组织中的β1-AR和β2-AR而非β3-AR的表达显著增加(P<0.05),且β1-AR和β2-AR的表达与TNM分期和LN转移显著相关(P<0.05)。在TNBC组织中,E-钙黏蛋白表达显著降低,而波形蛋白表达显著升高(P<0.05)。高β2-AR组织中E-钙黏蛋白的表达明显低于低β2-AR组织(P<0.05)。高表达β1-AR和β2-AR的组织中,波形蛋白的表达显著增加(P<0.05)。TNBC组织中β2-AR和E-钙黏蛋白之间呈显著负相关,而β1-AR和β2-AR表达与波形蛋白水平呈正相关。结论β1-AR和β2-AR在TNBC中过表达,可能通过调节EMT过程促进TNBC的发生和发展。

Sox5促进胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化

目的:探讨Sox5对胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化的影响。方法:人正常胰腺细胞HPDE6-C7(HPDE6-C7组)、胰腺癌细胞PANC-1(PANC-1组)和AsPC-1(AsPC-1组)正常培养至对数生长期,采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中Sox5mRNA和蛋白水平。将shSox5、shControl、pcDNA 3.1-Sox5和载体pcDNA 3.1以脂质体法转染胰腺癌细胞PANC-1,分别标记为shSox5组、shControl组、pcDNA 3.1-Sox5组和Scrambled组,采用qRT-PCR法检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA表达;Western blot检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的蛋白表达;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭。结果:与HPDE6-C7组相比,PANC-1组和AsPC-1组中Sox5mRNA和蛋白水平均升高(P<0.01);与shControl组比较,shSox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著降低(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01);与Scrambled组比较,pcDNA-3.1-Sox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著升高(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.01)。结论:Sox5可促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,将为胰腺癌的靶点治疗提供新靶标。

肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞与上皮间质化“对话”的研究进展

肿瘤微环境决定了许多癌症的发生和发展。肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中协调炎症和癌症之间的关键因子。上皮间质化的激活通常需要肿瘤细胞与局部肿瘤微环境组分(包括肿瘤相关巨噬细胞)之间的"对话"。在本篇综述中,临床和实验证据证明肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤侵袭和转移以及它在肿瘤转移级联反应中与上皮间质化的相互作用。此外,本文总结了以介入肿瘤相关巨噬细胞和上皮间质化的肿瘤细胞"对话"的信号通路作为肿瘤转移治疗的潜在靶点的治疗策略。

狼毒大戟提取物对人肝癌细胞上皮间质化的影响

目的探讨不同提取部位的狼毒大戟对人肝癌细胞MHCC97H上皮间质化(EMT)的影响。方法采用乙醇回流提取法对狼毒大戟进行萃取,获得乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、氯仿等4个提取部位。采用四甲基偶氮唑盐法筛选抗肿瘤有效部位。利用划痕试验和Transwell小室试验检测有效提取部位对人高转移肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的影响。利用蛋白质印迹法检测狼毒大戟提取物对MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的影响。结果狼毒大戟乙酸乙酯、正丁醇提取部位对MHCC97H均有抑制作用,且呈现一定的时间和剂量依赖性。乙酸乙酯提取部位对细胞的抑制作用强于正丁醇。而石油醚和氯仿提取部位对MHCC97H无明显的抑制作用。划痕试验和Transwell小室试验显示,狼毒大戟乙酸乙酯和正丁醇提取部位能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭能力;两者的抑制能力随着浓度升高而逐渐增强;两者能提高MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin蛋白的表达,抑制细胞中Vimentin蛋白的表达。结论狼毒大戟乙酸乙酯提取部位是抗肝癌增殖和侵袭转移作用的主要活性部位,其作用可能与调节E-cadherin和Vimentin表达有关。

Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究

【目的】构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装。成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2-Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕、Tanswell实验对细胞的迁移侵袭能力进行研究。【结果】成功构建Snail基因慢病毒载体并经测序证实。在转染Snail的细胞株中有明显的Snail基因及蛋白表达,其上皮标记E-cadherin的表达比转染空载体的对照组细胞明显下调,且其迁移侵袭能力要强于对照组细胞。【结论】Snail基因慢病毒载体在宿主细胞中表达稳定可靠,可以作为研究上皮间质化很好的工具,Snail基因有明显促进结肠癌细胞上皮间质化的作用。

结直肠癌中上皮间质化相关转录调控和信号通路研究进展

上皮间质化(EMT)在结直肠癌的转移、侵袭中起重要作用。EMT可通过核心转录因子、Brachyury蛋白、叉头转录因子等转录因子调节E-钙蛋白和波形蛋白的表达来调控结直肠癌的转移和侵袭;也可通过转化生长因子β信号通路、Wnt信号回路、RAS/ERK1/2信号环路、PI3K/AKT信号环路等信号通路调控结直肠癌的转移和侵袭。

肿瘤微环境和上皮间质化相关机制及中医药治疗的研究进展

目前,肿瘤的发病率和病死率逐年增高,随着医学技术的不断发展和人们对肿瘤微观结构的深入研究,发现肿瘤的发生是一个非常复杂的过程,特别是肿瘤细胞的侵袭及转移一直是研究者亟待解决的问题。肿瘤的微环境对肿瘤的发展起着举足轻重的作用,很多研究发现肿瘤微环境与上皮间质化具有复杂的交互作用,参与肿瘤细胞进展。随着人们对肿瘤疾病的重视,传统中医药作为中医的一个重要组成部分,在肿瘤防治中的作用也逐渐凸显出来。

食管癌耐阿霉素EC9706中干细胞富集及上皮间质化

目的:建立耐阿霉素(ADM)食管癌细胞株,命名为EC9706/ADM,探讨该细胞株的上皮间质化(EMT)及肿瘤干细胞富集现象。方法:用中等浓度间歇法建立食管癌耐阿霉素细胞株,MTT法测定细胞株对ADM、5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数。流式细胞仪检测EC9706/ADM及EC9706中CD44^+CD24^-细胞比例,MTT法、Transwell、平板克隆形成和球囊培养实验分别检测耐药对细胞增殖、迁移与转移、体外成瘤和克隆形成能力的影响;荧光定量PCR检测EC9706/ADM干细胞标志ALDH1、CD133及Oct4及EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白及间质细胞分子标记N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白的表达。结果:EC9706/ADM的耐药指数为17.8,对5-FU、顺铂、环磷酰胺产生了交叉耐药性。与EC9706细胞相比,EC9706/ADM耐药细胞转移能力明显增强,表现出更高的微球体形成能力,E-cadherin表达降低而Fibronectin表达显著增高。结论:食管癌耐阿霉素细胞EC9706/ADM发生了EMT现象,转移迁移能力增强,细胞表现出更高的干细胞特性,化疗药物有助于肿瘤干细胞的富集。

芪术抗癌方对肝癌细胞上皮间质化的影响

【目的】探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞上皮间质化的影响。【方法】将HepG2细胞分为空白对照组,转化生长因子β1(TGF-β1)组,TGF-β1+芪术抗癌方1 mg/mL组,TGF-β1+芪术抗癌方2 mg/mL组等4组,显微镜下观察处理24 h后细胞的形态变化,划痕实验观察24 h细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测细胞上皮间质化相关蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、Vimentin、Snail、纤黏蛋白(Fibronectin)的表达情况。【结果】HepG2细胞加入TGF-β1后出现上皮间质化样多形改变,而芪术抗癌方2个治疗组均能抑制这一细胞形态改变。划痕实验结果显示,TGF-β1组划痕愈合百分比较空白对照组显著增加(P<0.05),而芪术抗癌方2个治疗组划痕愈合百分比较TGF-β1组显著减小(P<0.05)。蛋白免疫印迹法结果显示:TGF-β1组E-cadherin表达水平较空白对照组降低,N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和Snail表达水平较空白对照组均升高,其中2组的Fibronectin表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);与TGF-β1组比较,芪术抗癌方2个治疗组E-cadherin表达水平均升高,N-cadherin、Vimentin、Snail和Fibronectin表达水平均降低,其中,芪术抗癌方1 mg/mL组Vimentin、Snail表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义(均P<0.05),芪术抗癌方2 mg/mL组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Fibronectin表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】芪术抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质化具有抑制作用。

大蒜素对TGF?β_1诱导人胆管癌细胞上皮间质化的影响及机制

目的胆管癌的转移机制可能与上皮间质化(EMT)有关。文章旨在探讨大蒜素对TGF?β_1诱导的人胆管癌细胞上皮间质化的影响及其作用机制,为大蒜素应用于胆管癌的治疗提供理论依据。方法采用MTT法检测不同浓度大蒜素对人胆管癌RBE细胞的增殖抑制作用,以24h的IC50确定为大蒜素给药浓度,将其分为空白对照组、大蒜素组(130.7μmol/L)、TGF?β_1组(10ng/mL)及大蒜素+TGF?β_1组(130.7μmol/L+10ng/mL);采用划痕实验和Transwell小室试验分别检测24h后RBE细胞的迁移及侵袭能力;Western blot分别检测各组EMT相关蛋白E?钙黏蛋白(E?Cadherin)、N?钙黏蛋白(N?Cadherin)、Vimentin、Snail及核因子?κB(NF?κB)信号通路表达情况。结果与空白对照组及TGF?β_1组迁移率(28.19%±0.66%、49.22%±0.27%)比较,大蒜素组及大蒜素+TGF?β_1组(9.25%±0.36%、13.91%±0.75%)均下降(P<0.05);与空白对照组及TGF?β_1组侵袭率(33.48%±0.04%、40.21%±0.12%)比较,大蒜素组及大蒜素+TGF?β_1组(6.59%±0.06%、9.40%±0.05%)亦均明显下降(P<0.05);与空白对照组相比,大蒜组的E?Cadherin蛋白表达上调(P<0.05),而N?Cadherin、Vimentin、Snail、NF?κB及p?NF?κB蛋白表达下调(P<0.05);与TGF?β_1组相比,大蒜素+TGF?β_1组的E?Cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N?Cadherin、Vimentin、Snail、NF?κB及p?NF?κB蛋白表达下调(P<0.05)。结论大蒜素可抑制TGF?β_1诱导的人胆管癌细胞发生上皮间质化,其机制可能与阻断NF?κB信号通路有关。

前列腺癌中HMBOX1的表达水平及其对细胞上皮间质化的影响

目的探究HMBOX1在前列腺癌中的表达水平及其对前列腺癌上皮间质化的影响。方法选取2015年10月-2017年10月在浙江省立同德医院确诊并行根治性前列腺切除术的68例前列腺癌患者作为研究对象(PC组),选取同期收治的70例良性前列腺增生患者作为对照(BPH组),采用免疫组织化学法检测HMBOX1在两组的表达;构建HMBOX1过表达(实验组)和对照组稳定细胞系,采用Western blotting检测HMBOX1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达;采用划痕实验检测HMBOX1过表达对细胞迁移的影响;采用Transwell检测HMBOX1过表达对细胞迁移能力的影响。结果 PC组HMBOX1蛋白的阳性表达率(19.12%)比BPH组(55.71%)下降(P<0.05);实验组细胞中E-cadherin的表达水平高于对照组细胞(P<0.05),Vimentin的表达水平较对照组细胞下降(P<0.05);与对照组细胞比较,实验组细胞24 h后的划痕创口愈合面积较小,迁移速度降低(P<0.05)。与对照组侵袭细胞数(421.88±45.70)个比较,实验组侵袭细胞数(172.06±19.25)降低(P<0.05)。结论 HMBOX1在前列腺癌组织中表达降低,过表达HMBOX1可抑制前列腺癌的上皮间质化及肿瘤侵袭迁移能力。

环巴胺阻断Hedgehog信号通路对食管癌EC109细胞上皮间质化逆转的影响及机制

目的:探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对食管癌EC109细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其可能机制。方法:实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h。通过real-time PCR检测Gli1的表达变化,观察细胞形态变化,通过血管拟态实验检测血管形成能力变化,Transwell小室侵袭和迁移实验、黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移和黏附能力变化,real-time PCR及Western印迹方法检测EMT相关标志物E钙粘蛋白(E-cadherin)、β连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)及EMT调控因子Snail、Twist1等的表达变化。结果:环巴胺阻断EC109细胞Hedgehog信号通路Gli1的m RMA表达明显减少为(41.819±20.150)%,形态发生明显变化,血管拟态个数较对照组[(2.780±0.424)vs.(5.080±0.634)]明显减少(t=-16.919,P=0.000),侵袭实验较对照组[(24.800±2.588)vs.(55.400±4.879)]和迁移实验较对照组[(23.200±1.924)vs.(65.400±4.775)]均明显减少(t=-12.390,P=0.000;t=-18.331,P=0.000),同种细胞间黏附增强(F=9.327,P=0.009),上皮表型标志物E-cadherin表达较对照组[(0.388±0.565)vs.(0.228±0.582)]明显上调(t=3.421,P=0.027),而间质表型Vimentin、β-catenin的表达水平较对照组[(0.588±0.109)vs.(0.507±0.051);(0.998±0.128)vs.(0.756±0.038)]明显下调(t=4.221,P=0.013;t=6.781,P=0.002);与对照组相比,实验组细胞中转录因子Snail的表达较对照组[(0.401±0.021)vs.(0.756±0.038)]下调(t=6.774,P=0.002),Twist1的m RNA表达量相对于对照组也明显下调为(74.987±9.031)%。结论:环巴胺阻断Hh信号通路能明显逆转EC109细胞EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Twist1表达有关。