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抑制丙型肝炎病毒NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义 被引量:1
1
作者 苏秀芬 姜艳芳 +2 位作者 王峰 牛俊奇 唐彤宇 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期570-573,共4页
目的:构建抑制丙型肝炎病毒NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序... 目的:构建抑制丙型肝炎病毒NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后线性的pSilencerTM3.1-H1neo载体的H1启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒,进行电泳,将3个不同的RNAi质粒和阴性对照质粒分别与HCV NS5A真核表达质粒共转染正常肝细胞HL-7702细胞系,用Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白表达。结果:对重新构建的pSilencerTM3.1-H1neoHCV NS5A-R1、R2、R3质粒进行测序,与设计的序列完全相同;3个质粒电泳均在4 348 bp处出现特异性条带;Western blotting印迹法测得R1、R2和R3的NS5A蛋白未见明显条带,阴性对照质粒NS5A蛋白在相对分子质量5 600处出现条带。结论:设计合成的3个不同位点的63个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全正确,对HCV NS5A基因表达有特异性抑制作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns5a基因 短发夹RNA RNA干扰
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筛选与克隆丙型肝炎病毒NS5A蛋白结合蛋白的基因 被引量:23
2
作者 王琳 李克 +7 位作者 成军 陆荫英 张键 刘妍 王刚 洪源 王贺 芮莉莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-52,共3页
细胞内蛋白 蛋白的结合是丙型肝炎病毒 (HCV)与宿主肝细胞相互作用的分子生物学基础。HCV的非结构蛋白 5A(NS5A)被认为是一种HCV基因组编码的重要调节蛋白因子 ,参与HCV的复制、转录和信号传导等过程 ,但是它在HCV的致病及耐药等方面的... 细胞内蛋白 蛋白的结合是丙型肝炎病毒 (HCV)与宿主肝细胞相互作用的分子生物学基础。HCV的非结构蛋白 5A(NS5A)被认为是一种HCV基因组编码的重要调节蛋白因子 ,参与HCV的复制、转录和信号传导等过程 ,但是它在HCV的致病及耐药等方面的作用还存有争议。为了进一步阐明这个多功能蛋白质与宿主蛋白的关系 ,作者采用酵母双杂交系统 3,在酵母细胞融合蛋白表达型人肝cDNA文库中进行筛选 ,得到 35个与NS5A特异性结合的阳性克隆 ,包括载脂蛋白、线粒体单体型基因、磷脂酸酸性磷酸酶等 11种已知功能蛋白质基因和 3个未知功能基因。 展开更多
关键词 筛选 克隆 丙型肝炎病毒 ns5a蛋白 结合蛋白 基因 酵母双杂交
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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒NS5A抗原模拟表位 被引量:50
3
作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 陈新华 王刚 洪源 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第2期133-136,共4页
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A(HCVNS5A)特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,以抗-HCVNS5A的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩... 目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A(HCVNS5A)特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,以抗-HCVNS5A的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,随机挑取30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验,最后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCVNS5A抗原的模拟表位.结果:经噬菌体富集后,从随机筛选的30个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列XXXPXXXLLRXX为HCVNS5A的模拟表位.结论:用噬菌体12肽库成功筛选得到HCVNS5A的模拟表位,为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件. 展开更多
关键词 噬菌体 表面展示技术 丙型肝炎 ns5a蛋白 模拟表位
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丙型肝炎病毒NS5A抑制剂的3D-QSAR研究
4
作者 孟令鑫 刘蒙蒙 +1 位作者 王远强 林治华 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2015年第5期52-60,F0003,共10页
丙型病毒性肝炎感染是输血后肝炎的主要病因之一。NS5A蛋白的小分子抑制剂显示出很强的体外抑制病毒生长的活性,并且初步的临床评价也证实了NS5A抑制剂能很好地抑制体内丙型肝炎病毒的生长。因此,研发高效的NS5A小分子抑制剂为治疗丙型... 丙型病毒性肝炎感染是输血后肝炎的主要病因之一。NS5A蛋白的小分子抑制剂显示出很强的体外抑制病毒生长的活性,并且初步的临床评价也证实了NS5A抑制剂能很好地抑制体内丙型肝炎病毒的生长。因此,研发高效的NS5A小分子抑制剂为治疗丙型肝炎提供了新的策略。进行了daclatasvir丙型肝炎病毒NS5A复制抑制剂的三维定量构效关系(3D-QSAR)研究,通过SYBYL-X 2.1.1分子模拟软件系统搜寻方法搜寻出化合物的最低能量构象,然后在Triops力场中用共轭梯度最小化进行优化。应用比较分子力场分析(Co MFA)和比较分子相似性指数分析(Co MSIA)进行分子活性构象的选择、分子叠合、建立空间场范围以及数据统计。用22个衍生物作为训练集建立模型,用6个衍生物作为测试集来验证模型的优劣。结果表明:Co MFA模的交叉相互验证系数q2=0.578,回归系数r2=0.939,Co MSIA模型的q2=0.584,r2=0.968。这些结论为丙型肝炎病毒NS5A复合体抑制剂的药物设计和筛选提供了理论依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒ns5a抑制剂 三维定量构效关系 比较分子场方法 比较分子相似 性指数分析法
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式调节基因2不同剪切体调节靶基因的比较 被引量:3
5
作者 成军 杨倩 +2 位作者 刘妍 王建军 纪冬 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期198-201,共4页
目的:利用基因表达谱芯片技术筛选、比较丙型肝炎病毒NS5A反式调节基因2不同剪切体对HepG2细胞基因表达的调控作用及差异性.方法:利用分子生物学技术和生物信息学技术相结合,克隆人NS5ATP2的不同剪切体蛋白的编码基因,常规分子生物学技... 目的:利用基因表达谱芯片技术筛选、比较丙型肝炎病毒NS5A反式调节基因2不同剪切体对HepG2细胞基因表达的调控作用及差异性.方法:利用分子生物学技术和生物信息学技术相结合,克隆人NS5ATP2的不同剪切体蛋白的编码基因,常规分子生物学技术构建相应的真核细胞表达载体pcDNA3.1-NS5ATP2(615)和pcDNA3.1-NS5ATP2(216).脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2利用基因表达谱芯片技术筛选转染细胞的差异表达cDNA的类型.结果:对于2个基因剪切体转染细胞系差异表达基因谱的分析,NS5ATP2(615)和NSSATP2(216)共同上调的基因43条;NS5ATP2(615)和NSSATP2(216)共同下调的基因13条;NS5ATP2(615)上调,而NS5ATP2(216)下调的基因类型3条;未发现NS5ATP2(615)下调;NS5ATP2(216)上调的基因类型;还有一些靶基因,或只受到NS5ATP2(615)的调节,或只受到NS5ATP2(216)的调节.结论:不同剪切体的作用之间有共同的靶基因,也有不同的靶基因,甚至对于同一基因有相反的调节功能. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a蛋白 反式调节基因2 靶基因 基因芯片
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白上调NS3TP6基因启动子表达活性的研究 被引量:2
6
作者 洪源 杨倩 +2 位作者 成军 刘妍 王建军 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第4期813-816,共4页
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用. 方法:以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(RCR) 扩增... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用. 方法:以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(RCR) 扩增NS3TP6-P,克隆至真核报告载体pCAT3中,构建pCAT3-NS3TP6-P报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS5A共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性. 结果:限制性内切酶消化和序列分析结果表明,构建的NS3TP6-p指导的报告基因表达载体pCAT3-NS3TP6-p正确无误.pCAT3-NS3TP6-p在HepG2细胞中能够启动CAT 的表达;共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p+pcDNA3.1(-)- NS5A组CAT的表达活性是pCAT3-NS3TP6-P单独转染试验的1.87倍. 结论:我室克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性;HCV的NS5A蛋白具有对NS3TP6基因启动子的转录具有反式激活作用.本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究HCV NS5A蛋白反式激活作用的结果,为进一步阐明丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a蛋白 ns3TP6基因 基因表达 免疫调节机制
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丙型肝炎病毒NS5A基因变异与干扰素疗效的关系 被引量:2
7
作者 张琳 赵桂珍 +1 位作者 石理兰 曹丽 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第8期1135-1138,共4页
目的:探讨HCV1b型慢性丙型肝炎患者HCV NS5A基因变异与干扰素(IFN)疗效的关系,NS5A_(2209-2248)片断是否存在干扰素敏感决定区(ISDR)。方法:留取慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前血清,应用RT-PCR法扩增NS5A基因片段,用直接测序法进行核苷... 目的:探讨HCV1b型慢性丙型肝炎患者HCV NS5A基因变异与干扰素(IFN)疗效的关系,NS5A_(2209-2248)片断是否存在干扰素敏感决定区(ISDR)。方法:留取慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前血清,应用RT-PCR法扩增NS5A基因片段,用直接测序法进行核苷酸及氨基酸序列测定。结果:11例HCV1b型患者中1例为中间型,其余为野生型。2例表现为完全应答,均为野生型,9例为无应答。两组之间核苷酸及氨基酸序列无显著差异。对1例患者的动态观察发现,干扰素治疗后其核苷酸及氨基酸序列均有所变化,改变了其在基因树中的位置。结论:HCV1b型NS5A基因变异与干扰素疗效无关,NS5A_(2209-2248)区高度保守。未证实存在ISDR。干扰素治疗可引起HCV准种改变。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 基因变异 干扰素 疗效 HCV ns5a 序列测定
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丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7的重组表达及生物信息学分析 被引量:2
8
作者 李晓光 成军 +3 位作者 洪源 张延峰 郑铁龙 王慧芬 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1028-1030,共3页
目的构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及... 目的构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以获得NS5ATP7融合蛋白的表达,SDS-PAGE、Western blot免疫印迹分析和证实该融合蛋白表达的特异性,并应用生物信息学方法对该融合蛋白的结构和功能进行预测。结果利用RT-PCR扩增获得大小为891bp的NS5ATP7基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,成功获得了大小为48kD的目的蛋白,Western blot进一步证实了该蛋白具有特异性免疫反应识别。生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽。结论利用大肠埃希菌BL21成功表达了NS5ATP7融合蛋白,结合生物信息学分析结果,为研究NS5ATP7蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 ns5a 反式激活 原核表达 计算生物学
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丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:2
9
作者 郑铁龙 成军 +2 位作者 洪源 李晓光 张延峰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期59-61,共3页
目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,... 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体。方法从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达。亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价。结果以pET32a(+)-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高。Western blot证实其具有良好的抗原性。用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价>1∶512000。结论成功构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 ns5aTP1基因 原核表达
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丙型肝炎病毒NS5ab区的B细胞模拟表位的确认 被引量:2
10
作者 侯利华 杜桂鑫 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期265-268,273,共5页
目的 用噬菌体展示随机肽库研究丙型肝炎病毒 (HCV)NS5ab区的B细胞表位。方法 在原核系统中表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,亲和层析纯化血清中抗HCVNS5ab的特异多抗 ,用此多抗来筛选噬菌体递呈随机 12肽库 ,获得HCVNS5ab区的B细胞表位。结... 目的 用噬菌体展示随机肽库研究丙型肝炎病毒 (HCV)NS5ab区的B细胞表位。方法 在原核系统中表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,亲和层析纯化血清中抗HCVNS5ab的特异多抗 ,用此多抗来筛选噬菌体递呈随机 12肽库 ,获得HCVNS5ab区的B细胞表位。结果 成功地表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,用此蛋白检验了 130份HCV阳性血清 ,阳性率为 36 %。在筛选的噬菌体展示随机肽库后 ,挑取 13个阳性克隆测序 ,有 9个序列不同 ,最终通过噬菌体表位表达的方法确认了 3个表位。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5ab区 B细胞模拟表位 噬菌体展示随机肽库
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白的反式激活作用研究 被引量:1
11
作者 王建军 刘妍 +2 位作者 成军 杨倩 杨艳杰 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第7期1018-1020,共3页
0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺... 0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺乳动物细胞表达的NS5A蛋白以两种形式存在,分子量分别为56 kD和58 kD.HCV NS5A是HCV基因组编码的一种最为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质[3-5],是HCV基因组编码的一种具有反式激活作用等多种生物学活性的非结构蛋白质.其基因序列的变异,决定部分HCV病毒株对于IFN-α治疗的疗效应答.HCV NS5A蛋白还具有结合双链RNA激酶(PKR)的生物学活性,对于HCV感染的靶细胞的细胞周期与细胞凋亡的分子生物学调节机制密切相关[6]. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a蛋白 反式激活 非结构蛋白质 细胞凋亡
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丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建 被引量:1
12
作者 苏秀芬 牛俊奇 +1 位作者 姜艳芳 胡玉琳 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期44-46,共3页
目的:构建HCV NS5A/pCI-neo真核表达载体,转染Huh-7细胞系,为体外高效表达NS5A蛋白奠定基础。方法:用PCR方法从带有丙型肝炎病毒NS5A基因的pC DNA 3.1(+)/HCV NS345质粒中扩增出HCV NS5A基因,然后TA克隆于pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM10... 目的:构建HCV NS5A/pCI-neo真核表达载体,转染Huh-7细胞系,为体外高效表达NS5A蛋白奠定基础。方法:用PCR方法从带有丙型肝炎病毒NS5A基因的pC DNA 3.1(+)/HCV NS345质粒中扩增出HCV NS5A基因,然后TA克隆于pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109。阳性克隆经测序鉴定,再经双酶切消化后插入真核表达载体pCI-neo上,经酶切鉴定与测序证实。结果:用PCR方法扩增出HCV NS5A基因全序列,因其cDNA的G+C含量高直接测序未成功,后经TA克隆,筛选得到的阳性克隆经测序鉴定,与设计的HCV NS5A基因序列完全一致。经酶切连接并成功插入pCI-neo上。结论:成功构建了高效表达丙型肝炎病毒NS5A基因的pCI-neo真核表达载体。 展开更多
关键词 真核表达载体 ns5a基因 肝炎病毒 丙型
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酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用 被引量:1
13
作者 屠红 DeborahTaylor +1 位作者 闻玉梅 MichaelM-C-Lai 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期289-295,共7页
酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白- 蛋白相互作用的新技术。应用该技术,以丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白5A(NS5A) 为“诱饵”,筛检了人肝癌细胞HepG2 来源的cDNA文库,获得了7 个NS5A 结合蛋白的基... 酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白- 蛋白相互作用的新技术。应用该技术,以丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白5A(NS5A) 为“诱饵”,筛检了人肝癌细胞HepG2 来源的cDNA文库,获得了7 个NS5A 结合蛋白的基因克隆。报道了其中两个阳性克隆( # 2 、# 16) 的结果,并对“人核小体组装蛋白相关蛋白”(Human nucleosomeassembly protein -related protein ,hNRP) 和“载脂蛋白A-I”(Apolipoprotein A- I) 与NS5A结合的生物学意义进行了讨论。 展开更多
关键词 母双杂合系统 丙型肝炎病毒 ns5a 生物学功能
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丙型肝炎病毒NS5a区血清型特异性多肽的选择及应用 被引量:1
14
作者 窦晓光 韩晓霜 +1 位作者 李智伟 冯国和 《诊断学理论与实践》 2007年第3期213-217,共5页
目的:从HCV非结构5a区(NS5a)选出基因型特异性多肽,并应用酶免疫法(EIA)进行HCV血清分型。方法:根据HCV NS5a高免疫源区(2182~2343)的氨基酸序列,设计并合成305个特异性多肽,应用已知基因1~6型的抗-HCV阳性血清,通过EIA法检测每个多... 目的:从HCV非结构5a区(NS5a)选出基因型特异性多肽,并应用酶免疫法(EIA)进行HCV血清分型。方法:根据HCV NS5a高免疫源区(2182~2343)的氨基酸序列,设计并合成305个特异性多肽,应用已知基因1~6型的抗-HCV阳性血清,通过EIA法检测每个多肽的抗原性,并用基因型特异性多肽进行血清分型,同时将其与序列分析法基因分型结果进行比较。结果:不同基因型间NS5a区氨基酸的同源性较低,相同基因型不同区段氨基酸的同源性也很低。对305个特异性多肽抗原性检测结果表明,主要线性抗原区位于氨基酸残基R3、R7和R9区。18个来自保守区的多肽可与不同基因型抗-HCV阳性血清反应;12个多肽具基因型特异性。血清基因分型结果与基因分型的结果高度一致。结论:HCV NS5a高免疫源区存在主要的线性抗原;来自高度保守区的多肽抗原无基因型特异性,可用于HCV抗体检测;基因型特异性多肽可用于HCV基因分型,特别适用于HCV RNA阴性患者。 展开更多
关键词 合成多肽 基因型特异性 丙型肝炎病毒 非结构5a
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丙型肝炎病毒NS5A分子及其干扰素敏感决定区的研究进展 被引量:1
15
作者 代志琰 李刚 《中山大学研究生学刊(自然科学与医学版)》 2002年第4期75-80,共6页
丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肚炎的主要病因之一,其基因组为单股正链RNA,NSA是划HCV编码的一种非结构蛋白。位于HCV NS5A区的干扰素敏感决定区(ISDR),与肝细胞中RNA依赖性蛋白激酶(PKR)之间的相互作用,可能决定着HCV对干扰素(IFN-α)的敏... 丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肚炎的主要病因之一,其基因组为单股正链RNA,NSA是划HCV编码的一种非结构蛋白。位于HCV NS5A区的干扰素敏感决定区(ISDR),与肝细胞中RNA依赖性蛋白激酶(PKR)之间的相互作用,可能决定着HCV对干扰素(IFN-α)的敏感性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a 干扰素敏感决定区 慢性肝炎 研究进展 单股正链RNA 基因组
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白对Huh7细胞周期的影响
16
作者 杨小骏 叶林柏 +6 位作者 郜金荣 刘静 郑义 廖庆姣 佘应龙 吴正辉 叶力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期349-352,共4页
应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1~3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中.通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中.再利用... 应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1~3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中.通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中.再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达.在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化.G0/G1期由60.6%下降到49.7%,S期由23.9%上升到32.7%,而转染pcDNA3.1(-)细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大.从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a蛋白 细胞周期
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丙型肝炎病毒NS5A基因的克隆以及在原核和昆虫细胞中表达的研究
17
作者 梁昌镛 He Bin +2 位作者 胡志红 王汉中 陈新文 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期236-241,共6页
克隆了丙型肝炎病毒的NS5A基因,并在细菌和昆虫两种不同的系统中成功地进行了该基因的表达.利用PCR方法获得了NS5A完整的编码区并克隆到原核表达载体pGEX-KG上,在大肠杆菌中诱导表达了78kDa的NS5A与GST的融合蛋白.同时发现,融合蛋白被... 克隆了丙型肝炎病毒的NS5A基因,并在细菌和昆虫两种不同的系统中成功地进行了该基因的表达.利用PCR方法获得了NS5A完整的编码区并克隆到原核表达载体pGEX-KG上,在大肠杆菌中诱导表达了78kDa的NS5A与GST的融合蛋白.同时发现,融合蛋白被部分切割为50kDa的NS5A和28kDa的GST.在原核细胞中表达的78kDa和50kDa两种蛋白均具有较高的免疫原性,通过免疫家兔获得了高特异性的兔抗血清.另外,利用两种昆虫表达系统,即AcMN-PV和HaSNPV的Bac-to-Bac系统对NS5A进行了表达,表达产物为58kDa. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a基因 基因克隆 原核细胞 昆虫细胞 基因表达 免疫原性
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丙型肝炎病毒NS5A区插入序列因子的初步研究
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作者 孙南雄 范晓峰 +2 位作者 张永祥 韩亚萍 刘婷 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期327-329,共3页
研究丙型肝炎病毒NS5A区插入序列(IS) 因子及其来源。以RT-PCR法扩增HCV NS5A区第6871至7121 区段, 对扩增产物进行核苷酸测序并与HCV-J株相应区段序列相比较。结果发现HCV NS5A 区插入一个... 研究丙型肝炎病毒NS5A区插入序列(IS) 因子及其来源。以RT-PCR法扩增HCV NS5A区第6871至7121 区段, 对扩增产物进行核苷酸测序并与HCV-J株相应区段序列相比较。结果发现HCV NS5A 区插入一个48 bp 的IS因子, 将IS因子与HCV-J株全核苷酸序列进行同源性对照, 发现该片段来源于HCV E1区。该研究首次报告了HCV NS5A区有来自E1区的漂移基因片段, 并对其临床和生物学意义进行了初步讨论。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a 插入序列因子
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丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建及其在HL-7702细胞中的高效表达
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作者 苏秀芬 姜艳芳 +1 位作者 王峰 牛俊奇 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1092-1095,共4页
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达,为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法:从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1(+)/NS345中扩增出HCV NS5A基因片段,构建pCI-neo/NS5... 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞株(HL-7702细胞)中进行表达,为今后研究HCV NS5A蛋白功能奠定基础。方法:从含HCV NS345序列的重组质粒pCDNA3.1(+)/NS345中扩增出HCV NS5A基因片段,构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒。用脂质体将其转染HL-7702细胞,通过Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白。结果:用PCR方法扩增的HCV NS5A基因全长1344bp,与PGEM-T重组,测序证实所克隆的NS5A基因片段大小正确;成功地构建pCI-neo/NS5A重组表达质粒,瞬时转染HL-7702细胞表达NS5A蛋白,Western blotting印迹法显示其相对分子质量约为56000。结论:HCV NS5A的真核表达载体pCI-neo/NS5A在HL-7702细胞中能有效表达NS5A蛋白,NS5A蛋白可导致病毒复制、肝细胞癌发生,且NS5A区为IFN敏感性决定区。 展开更多
关键词 肝炎病毒 ns5a蛋白 真核细胞表达
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白功能的研究进展
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作者 周友乾 尹凤鸣 冯经华 《临床肝胆病杂志》 CAS 2009年第2期148-151,共4页
关键词 丙型肝炎病毒ns5a 蛋白功能 非结构蛋白 包膜蛋白E1 开放阅读框 HCV 肝脏疾病 感染人数
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