东海乌参活性肽的制备及其抑制细胞迁移活性的研究

为促进海参主要活性成分多糖和多肽的协同开发利用,选取浙江的东海乌参工业酶解生产的超滤截留部分的蛋白聚糖为原料,进行进一步酶解和纯化制备多肽,采用化学和波谱分析等方法对其进行结构解析,细胞划痕法等方法研究多肽对肿瘤细胞迁移的抑制作用,并且通过转录组学分析活性多肽抑制细胞迁移作用的可能途径并利用Western Blot进行验证。结果表明,以蛋白聚糖为原料酶解获得的多肽属于胶原蛋白肽的范畴,具有细胞迁移抑制活性的多肽GT2-0主要集中在8-10肽。转录组学分析表明乌参活性肽GT2-0在抑制HCT116结肠癌细胞增殖及迁移时与ERBB以及NF-κB多条通路相关。利用Western Blot检测总β-catenin,P-β-catenin,Cyclin-D1,C-myc蛋白的表达,来探究GT2-0在Wnt/β-catenin信号通路中蛋白的表达情况,结果表明GT2-0通过上调P-β-catenin和下调β-catenin蛋白表达,并激活的下游双转录因子引起的Cyclin-D1,Cmyc蛋白表达从而发挥细胞迁移抑制作用最终起到良好抗肿瘤效果。本研究对乌参活性肽的结构和抗肿瘤活性做了系统的研究和讨论,为浙江优势海参资源东海乌参生物活性成分的研究和发展提供了重要基础和参考。

东海乌参肽对小鼠酒精性肝损伤及肠道菌群的调节作用

目的:探讨东海乌参肽(Acaudina leucoprocta peptides,ALPs)对小鼠酒精性肝损伤和肠道菌群的调节作用。方法:将45只C57BL/6N雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(80 mg/(kg m_(b)·d)水飞蓟宾)、ALPs低剂量组(200 mg/(kg m_(b)·d)ALPs)和ALPs高剂量组(400 mg/(kg m_(b)·d)ALPs)。采用慢性酒精干预3周后进行急性酒精灌胃建立小鼠肝损伤模型,检测小鼠血清和肝脏组织相关生化指标、观察肝脏和结肠组织形态学变化;取小鼠粪便进行16S rRNA测序,分析肠道菌群多样性。结果:ALPs可以显著改善小鼠的肝脏和结肠组织损伤,降低酒精性肝损伤血清标志物丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶的活力,提升乙醇代谢相关酶的活力,抑制酒精性肝损伤小鼠肝脏中的脂肪蓄积,减少肿瘤坏死因子-α、白介素(interleukin,IL)-1β、干扰素-γ和IL-6的分泌及氧化应激标志物丙二醛的含量。ALPs显著改善小鼠肠道菌群的α-多样性和β-多样性,调节多种门、纲、科细菌的相对丰度,改善乙醇诱导的小鼠肠道菌群紊乱并使其趋于正常。结论:ALPs对乙醇诱导的小鼠肝损伤具有明显的保护作用,其机制与ALPs抗氧化、抗炎和改善肠道菌群紊乱相关。

东海乌参皂苷对DSS诱导结肠炎小鼠肠道屏障的保护作用研究

建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎模型,探究东海乌参皂苷对结肠炎小鼠肠道屏障功能的影响。监测疾病活动指数(DAI)评分;切片观察肠道黏膜;酶联免疫法检测血清二胺氧化酶(DAO)和脂多糖(LPS)水平;实时荧光定量PCR检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和黏蛋白2(mucin-2)的mRNA表达水平;16S rDNA检测肠道菌群的多样性与丰度。结果表明,东海乌参皂苷显著改善小鼠DAI评分,减少结肠黏膜损伤,增加肠道黏液层厚度;显著降低血清DAO和LPS水平;显著提高了结肠组织中ZO-1、Occludin和mucin-2的mRNA表达水平;显著增加了肠道菌群的α多样性与产SCFA菌丰度。东海乌参皂苷缓解了DSS诱导的结肠炎小鼠黏膜屏障损伤,并对小鼠肠道菌群发挥调控作用,有效保护了肠道屏障功能,缓解肠道炎症。

东海乌参重金属脱除工艺的研究

东海乌参是众多海参品种中的重要一类,资源丰富,营养价值高,但其体壁重金属含量高,不能被充分开发利用。为探索东海乌参体表重金属的脱除方法,研究了各种重金属在东海乌参体壁上的分布状况,并分别采用化学法和酶-化学法脱除东海乌参体表重金属,对浸泡试剂和温度、酶类型和用量、处理时间等工艺条件进行优化,结果发现,采用酶-化学法脱除重金属,从外观品质和脱除效果上,都优于化学法。最优的脱除条件是采用0.10%(w/w)的木瓜蛋白酶,在37℃酶解1h,再用2.0%(w/v)食品级柠檬酸浸泡48h。经过酶-化学法处理后的东海乌参重金属脱除率可达90%以上。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法测定东海乌参样品中的二价汞、甲基汞、乙基汞和苯基汞

目的：建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法（high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spectrometry, HPLC-ICP-MS）测定东海乌参样品中的二价汞、甲基汞、乙基汞和苯基汞4种汞形态的含量。方法样品经25%KOH微波萃取1 h,采用Agilent Zorbax Plus C18色谱柱分离,以10 mmol/L醋酸铵＋0.12%L-半胱氨酸缓冲盐及2%甲醇作为流动相进行梯度洗脱,采用ICP-MS进行检测。结果二价汞、甲基汞、乙基汞和苯基汞在10 min内完成分离,检出限分别为0.8、0.2、0.2和0.8 ng/mL；在0.10、0.20和0.40 mg/kg 3个加标水平下,4种汞化合物的回收率为78.1%~105.8%,相对标准偏差为5.3%~8.2%。结论本方法简便、快速、准确,可适用于汞形态的分析。

东海乌参多糖制备及其抗氧化活性研究

[目的]研究不同浓度东海乌参粗多糖的体外抗氧化活性。[方法]利用碱解辅以木瓜蛋白酶解法提取东海乌参粗多糖,再用大孔树脂对其脱色后,对不同浓度的东海乌参粗多糖进行体外抗氧化活性研究。[结果]用AB-8型号的大孔树脂脱色后的东海乌参多糖,在0.5~2.0 mg/mL,随着东海乌参多糖浓度的增加其对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除能力以及还原力逐渐增强,且呈现浓度依赖性。[结论]东海乌参多糖体外抗氧化活性呈现明显的量效关系,在0.5~2.0 mg/mL,2.0 mg/mL的东海乌参多糖体外抗氧化活性最强。

东海乌参皂苷提取工艺优化与抗氧化研究

优化了东海乌参皂苷的提取工艺,同时对总皂苷的抗氧化能力进行探究。分别采用单因素和正交试验对乙醇浓度、提取温度、提取时间和料液比4个因素进行优化,确定皂苷提取的最佳工艺条件,并通过测定总皂苷清除超氧阴离子(O_(2)^(-)·)、羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)的能力,分析总皂苷的抗氧化活性。结果表明东海乌参皂苷的提取最佳工艺条件为乙醇浓度60%、提取温度60℃、提取时间3 h和料液比1:13,抗氧化结果显示东海乌参总皂苷有良好的O_(2)^(-)·和DPPH·清除能力。