芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

丝氨酸/苏氨酸激酶、Wnt2通路相关蛋白及C-myc基因在肝癌中的表达及诊断价值

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。结果:Aurora-A在正常肝组织、早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率分别为0、30%、60%、76%;Aurora-A在肝癌组织中的阳性表达和肝癌是否存在淋巴结转移紧密相关,在没有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率显著低于存在淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0.05);Aurora-A在高、中、低分化肝癌中的表达率分别为40%、70%、85%,分化程度越低,则Aurora-A表达程度越高(P<0.05)。Wnt2在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织,与早期肝癌组织相比,中期、晚期肝癌组织中Wnt2明显增加(P<0.05);Wnt2阳性表达率在有淋巴结转移的肝癌组织中高于无淋巴结转移组,但两者比较差异没有统计学意义(P>0.05);低分化肝癌组织中Wnt2阳性表达率高于中、高分化肝癌组织(P<0.05)。C-myc在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织(P<0.05),但早、中、晚期肝癌组织中C-myc表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-myc在有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肝癌组织(P<0.05);C-myc在低分化、中分化肝癌组织中的阳性表达率均高于高分化的肝癌组织(P<0.05)。结论:Aurora-A、Wnt2及C-myc的过表达跟肝癌的发生、侵袭和转移、分化高度相关。通过综合检测Aurora-A、Wnt2和C-myc蛋白的表达对肝癌的早期诊断及预后判断具有重要价值。

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础。方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定。结果:获得编码人MASP-2C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆。重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2C端的cDNA序列一致。结论:成功克隆了人MASP-2C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2C端多肽片段。

调节神经元凋亡信号转导途径的关键酶:死亡相关蛋白激酶

细胞的信号转导系统控制着包括细胞凋亡在内的细胞内几乎所有的生命活动.

NDRG2和AKT2与其磷酸化蛋白在肝癌病理组织中的应用及与临床病理的相关性研究

目的:探讨N-myc下调基因2(NDRG2)和丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)及其磷酸化蛋白(p-AKT2)在肝癌病理组织中的应用及与临床病理的相关性。方法:选择肝癌患者62例作为对象,所有患者均行手术治疗,术中取病灶组织与癌旁组织(距离病灶>5 cm)。采用荧光定量PCR技术测定标本NDRG2、AKT2 mRNA水平;采用Western Blot法测定标本NDRG2、AKT2及p-AKT2水平。结果:肝癌病灶组织与癌旁组织AKT2 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);肝癌病灶组织中NDRG2 mRNA水平,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌病灶组织中NDRG2蛋白水平,低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌病灶组织中AKT2、p-AKT2蛋白水平,高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NDRG2在肝癌组织中呈低表达,而p-AKT2在肝癌组织中呈高表达,二者呈负相关性,均能参与疾病的发生、发展。

食管癌易感性与丝氨酸苏氨酸激酶15T＋91A基因多态性的关系

既往研究结果显示遗传因素在食管癌的发病过程中起重要作用。丝氨酸苏氨酸激酶15（Aurora．A／STK15，又称STK15）基因参与调节G2／M期转换，在有丝分裂的正常进行中发挥重要作用，其扩增和过表达使中心体异常扩增，导致染色体的异常分配及不稳定，最终癌基因激活，导致肿瘤产生，因此进行STK15T＋91A基因多态性与食管癌发生易感性的研究很有必要。我们应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）技术，探讨STK15单核苷酸多态性与食管癌发生危险因素的相关性。

NEK2基因rs10494938、rs10158205位点多态性与肝细胞癌家系遗传易感性的关系

目的探讨丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(NEK2)基因rs10494938、rs10158205位点多态性与肝细胞癌(简称肝癌)家系遗传易感性的关系。方法选取广西扶绥县肝癌高发地区20个肝癌家系,包括肝癌患者20例及其直系亲属59例;另选10个正常家系(健康人群)进行对照,共40例。各家系均符合Hardy-Weinberg遗传平衡,均具有人群代表性。采用质谱方法检测NEK2基因rs10494938和rs10158205位点基因型分布频率;采用非条件Logistic回归分析法分析各家系人群等位基因及基因型分布频率的差异。结果 NEK2基因rs10494938位点存在CC和CG两种基因型,其中CC基因型114例、CG基因型5例;rs10158205位点存在CC、CT和TT三种基因型,其中CC基因型69例、CT基因型45例、TT基因型5例。肝癌家系中肝癌患者及其直系亲属、正常对照家系NEK2基因rs10494938位点CC、CG基因型及等位基因G、C分布频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05),rs10158205位点CC、CT、TT基因型及等位基因T、C分布频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 NEK2基因rs10494938、rs10158205位点多态性与广西扶绥县肝癌家系遗传易感性之间无相关性。

Mfn2基因沉默对HepG_2细胞葡萄糖代谢和胰岛素信号通路的影响

目的研究线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)沉默对人肝癌细胞株(HepG2)葡萄糖代谢和胰岛素信号通路分子丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt1)的影响。方法构建Mfn2短发夹双链RNA(Mfn2shRNA)和阴性对照短发夹双链RNA(HK),将HepG2细胞株分为空白对照组(NC)、阴性对照组(HK)、Mfn2shRNA质粒转染组(Mfn2)。HK和Mfn2组细胞应用lipo-fectamine2000转染HepG2细胞株;采用葡萄糖氧化酶的方法和氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)放射性核素示踪法检测细胞葡萄糖消耗量和摄取率;Western blotting检测Mfn2和Akt1蛋白表达。结果与HK组比较,Mfn2组细胞Mfn2蛋白表达明显下降(0.23±0.05 vs 0.51±0.14,P=0.034),Akt1表达差异无统计学意义(0.13±0.00 vs 0.14±0.01,P=0.055);Mfn2组细胞葡萄糖消耗量明显下降(8.72±0.62 vs 9.75±0.35,P=0.001),葡萄糖摄取率亦显著下降(7.94±0.04 vs 9.64±0.13,P=0.002)。结论抑制Mfn2基因表达导致HepG2细胞葡萄糖代谢下降;Mfn2表达对葡萄糖代谢的影响是否通过PI3K/Akt信号通路介导还需要进一步研究。

Slit2基因转染对人视网膜色素上皮细胞VEGF表达的影响及其作用机制

目的:研究Slit2基因对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,并探讨丝裂原激活(mitogen-activated,MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)这2条信号通路在此过程中的作用。方法:(1)体外培养人RPE细胞株RPE-19;(2)将腺病毒介导的Slit2(adenovirus-mediated Slit2,Ad-Slit2)转染RPE细胞,培养12、24 h及48 h;(3)转染前将MEK信号通路阻断剂PD98059、PI3K信号通路阻断剂LY294002预处理RPE细胞1 h;(4)用real-time PCR及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测VEGF的表达水平,用Western blot检测磷酸化ERK、磷酸化AKT的表达情况。结果:Slit2转染的RPE细胞后,real-time PCR结果显示不同时间之间VEGF m RNA表达有差别(F=12.789,P=0.018),组别和时间之间存在交互作用(F=13.375,P=0.017),不同组别有差别(F=16.855,P=0.015),在24 h与48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P24 h=0.002,P48 h=0.018)。ELISA结果显示不同时间之间VEGF蛋白表达有差别(F=24.886,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=23.524,P=0.000),不同组别有差别(F=28.250,P=0.006),在48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P=0.003)。Western blot结果可见p-ERK及p-AKT的蛋白表达水平增加,阻断剂PD98059及LY294002分别能降低ERK、AKT的磷酸化水平,并与Ad-Slit2组相比较,real-time PCR结果显示VEGF m RNA表达水平在不同时间有差别(F=32.202,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=8.372,P=0.006);不同组别存在差别(F=15.062,P=0.001),ELISA结果显示VEGF蛋白表达水平在不同时间之间有差别(F=90.703,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=4.968,P=0.005),不同组别存在差别(F=69.636,P=0.000)。结论:PI3K/AKT以及MEK/ERK这两条信号通路参与了Slit2所诱导的RPE细胞中VEGF表达水平增加。

存在LRRK2和Parkin基因罕见位点突变的早发性帕金森病一例

患者女性,32岁。因右下肢不自主运动1年余、渐进性加重1个月,于2018年3月26日入院。患者1年前无明显诱因出现右下肢震颤,尤以情绪激动时明显;6个月前出现左下肢运动受限,表现为左下肢拖曳步态,以快走、转弯、遇障碍物、人多等情况下运动速度减慢明显并易跌倒。

2型猪链球菌stk/stp1基因敲除株的构建及特性研究

目的丝/苏氨酸激酶(STK)与丝/苏氨酸磷酸酶(STP)通过对蛋白质的可逆磷酸化调控原核生物的各项生理活动。文中旨在研究2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33中、stk/stp1同时缺失对其生物学特性及致病性的影响。方法运用同源重组的方法构建2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33的stk/stp1基因敲除突变株Δstk/stp1,比较分析野毒株05ZYH33与突变株Δstk/stp1的生物学特性;通过细胞黏附实验、抗吞噬实验以及小鼠感染模型分析stk/stp1缺失对细菌毒力的影响。将30只SPF级BALB/c小鼠,用随机数字表法分成05ZYH33组(注射1 m L野毒株菌液)、Δstk/stp1组(注射1 m L突变株菌液)和THB组(注射1 m L的新鲜THB液体培养基),每组10只。结果 PCR结果显示,stk/stp1基因被壮观霉素抗性基因Spcr替换,突变株构建成功;生物学特性实验表明,05ZYH33和Δstk/stp1在接种2 h后开始缓慢增殖,在7 h时都到达平台期。突变株进入对数生长期(A600≈0.4)的时间比野毒株推迟1 h左右,到达平台期后的菌体密度比野毒株低(0.8 vs 1.0)。05ZYH33和Δstk/stp1在血平板上均长出灰白色、圆形半透明、湿润、表面光滑的细小菌落。菌落周围有明显的β-溶血环,菌落形态和溶血活性无明显变化。小鼠致病性实验显示,05ZYH33组小鼠在12 h内全部死亡,Δstk/stp1组小鼠在12 h内死亡9只,24 h内全部死亡,THB组无发病和死亡症状。结论 stk/stp1同时缺失可能主要影响细菌增殖、分裂相关蛋白的调控。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

针灸预处理对胃溃疡大鼠胃黏膜状态及Gli 1/Gli 2/Sufu信号通路的影响研究

目的:研究针灸预处理对胃溃疡大鼠胃黏膜状态及胶质瘤相关癌基因同源物1(Glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)/胶质瘤相关癌基因同源物2(Glioma-associated oncogene homolog 2,Gli2)/丝氨酸/苏氨酸激酶Fused抑制物(Sufu)信号通路的影响,探究针灸预防胃黏膜损伤的作用机制,为针灸在临床治疗胃溃疡疾病提供实验依据和理论支撑。方法:52只大鼠随机分为正常组、模型组、灸预处理组、针刺预处理组,每组13只。正常组、模型组只做固定;对灸预处理组和针刺预处理组艾灸中脘、足三里穴,每穴20min,1次/d,连续灸8d。之后对灸预处理组和针刺预处理组大鼠进行无水乙醇+阿司匹林混悬液灌胃造模。观察大鼠一般情况及胃黏膜组织病理学变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)浓度,蛋白质印迹法(Western blot)分析大鼠胃黏膜组织Gli 1、Gli 2、Sufu蛋白表达。结果:模型组可见上皮细胞结构破坏不完整,胃黏膜组织损伤明显,UI指数评分显著高于正常组(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清MDA、GPX浓度升高(P<0.05),SOD浓度降低(P<0.05);与模型组相比,针灸预处理组MDA、GPX浓度降低(P<0.05),SOD浓度增加(P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠Gli1、Gli2、Sufu蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,针灸预处理组大鼠Gli1、Gli2、Sufu蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:针灸预处理能改变胃溃疡大鼠胃黏膜状态,其机制可能与Gli 1/Gli 2/Sufu信号通路活化有关。

TOP2a、Nek2及RRM1在胃癌癌组织中表达及临床意义

目的探讨拓扑异构酶2a(TOP2a)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(Nek2)、核苷酸还原酶亚基1(RRM1)在胃癌癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性研究,通过免疫组化法测定60例胃癌癌组织(观察组)、30例正常组织(对照组) Top2A、NEK2、RRM1表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组Top2A、NEK2、RRM1阳性率分别为66. 67%、65. 00%、83. 33%,均显著高于对照组的10. 00%、13. 33%、16. 67%,差异有统计学意义(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与患者TNM分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移显著相关(P <0. 05),NEK2表达与患者分化程度、淋巴结转移显著相关(P <0. 05),RRM1表达与患者分化程度、浸润深度显著相关(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与NEK2、RRM1均呈正相关(P <0. 05)。结论胃癌癌组织中TOP2a、Nek2及RRM1高表达,且三者正相关,与肿瘤分化程度、浸润深度或淋巴结转移密切相关,检测TOP2a、Nek2及RRM1有利于肿瘤发生、进展评估,指导临床治疗。

非小细胞肺癌中AKT活化及与抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表达的关系

目的:探讨AKT的功能活化状态p-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相关性。方法:应用免疫组化的方法,检测80例NSCLC组织及35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT、Survivin、Bcl-2的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:p-AKT、Survivin、Bcl-2在NSCLC中高表达,阳性率分别为78.8%、61.3%、50.0%,显著高于在非肿瘤性肺组织中阳性表达0、0、11.4%(P<0.05)。p-AKT、Bcl-2在不同年龄、性别、TNM分期、组织分化组以及有无淋巴结转移组均高表达,组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin表达与TNM分期、组织的分化程度有关(P<0.05)。p-AKT阳性表达与Survivin、Bcl-2呈正相关;Survivin与Bcl-2二者也呈正相关。结论:在NSCLC中存在AKT的活化,Survivin、Bcl-2的高表达可能与AKT的活化有关。在NSCLC中可能存在p-AKT对Survivin、Bcl-2的正向调控。

Mdm2和pAkt在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中鼠双微体基因2(Mdm2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学EliVision法测定70例HCC样本和40例癌旁组织样本中Mdm2和pAkt的表达,分析它们与临床病理特征之间的关系。结果:Mdm2在HCC中阳性率为34.3%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤>5 cm和有淋巴结转移患者的HCC样本中显著增高(P<0.05)。pAkt在HCC中表达率为37.1%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移等临床病理参数上差异有统计学意义(P<0.05)。Mdm2与pAkt表达在HCC组织中呈正相关关系(r's=0.441,P<0.01)。结论:Mdm2和pAkt与HCC进展有关,有可能作为评价HCC预后的指标。

食管鳞状细胞癌KIF4A、NEK2和CDC20的表达及临床意义

目的探究食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)驱动蛋白超家族成员4A(KIF4A)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(NEK2)、细胞分裂周期蛋白20(CDC20)的表达及临床意义。方法选取2016年3月至2018年5月于邯郸市第一医院进行根治性手术治疗的91例食管鳞癌患者,术中取癌组织和癌旁组织(距癌组织3 cm),采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测不同组织中KIF4A、NEK2和CDC20的表达,分析三者表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果癌组织中KIF4A、NEK2和CDC20mRNA水平及蛋白表达评分均高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期和淋巴结转移情况的KIF4A表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同临床分期、分化程度和淋巴结转移情况的NEK2和CDC20表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随访3年,Kaplan-Meier生存曲线结果表明,KIF4A、NEK2和CDC20阳性表达者生存时间分别短于KIF4A、NEK2和CDC20阴性表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,低分化程度、存在淋巴结转移及CDC20阳性表达是影响食管鳞癌患者预后存活的独立危险因素(P<0.05)。结论食管鳞癌患者癌组织中KIF4A、NEK2和CDC20阳性表达率异常升高,可为食管鳞癌病理状态和预后判定提供参考。

胆管癌病人死亡相关蛋白激酶基因启动子区甲基化的分析

死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase，DAPK）基因是一种钙调蛋白调节的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其编码的死亡相关蛋白激酶参与γ-干扰素、Fas、p53、肿瘤坏死因子等多条凋亡途径，是细胞凋亡的正性调节因子之一，其5′端启动子区域的CpG岛甲基化已在多种肿瘤组织中被发现，并可致凋亡途径异常，导致细胞恶变。

NEK2在胃癌中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系

目的:研究丝/苏氨酸蛋白激酶NIMA相关激酶2(NEK2)在胃癌组织中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系。方法:免疫组织化学及蛋白印迹法检测胃癌组织中NEK2的表达情况,体外原代培养胃癌细胞,MTT法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,分析NEK2的表达与药物敏感性之间的关系。结果:NEK2在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。NEK2在胃癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿物大小比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与分化程度、TNM分期和淋巴结转移比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NEK2与5-FU的药物敏感性无显著关系(P>0.05),而顺铂耐药组NEK2蛋白的表达量显著增高(P<0.05)。结论:NEK2在胃癌组织中表达上调,与肿瘤的进展程度及顺铂耐药有关。

LncRNA SNHG1通过miR-377-3p/AKT2轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡和迁移的调控机制。方法体外培养人CC细胞系SiHa、Hela、CaSki和人正常宫颈上皮细胞HUCEC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中SNHG1、微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和丝氨酸/苏氨酸激酶2(AKT2)mRNA的表达水平。将SNHG1小分子干扰RNA(si-SNHG1)转染Hela细胞构建SNHG1敲低细胞,并在SNHG1敲低细胞系中下调miR-377-3p表达进行验证。实验分为对照组(NC组)、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor阴性对照组(inhibitor-NC)、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor组。转染48 h后,RT-qPCR检测转染效果;Western Blot检测细胞AKT2蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因检测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)分析Hela细胞中SNHG1、miR-377-3p和AKT2的调控作用。裸鼠异种移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低SNHG1对CC细胞体内生长的影响。结果与HUCEC细胞相比,不同CC细胞系中SNHG1和AKT2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-377-3p表达水平显著降低(P<0.05);敲低SNHG1表达可显著上调miR-377-3p的表达水平,下调AKT2的mRNA和蛋白水平,降低Hela细胞的增殖活性、迁移与侵袭能力,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测和RIP实验证实SNHG1可靶向负调控miR-377-3p的表达,AKT2是miR-377-3p的靶标。裸鼠异种移植瘤实验结果显示,敲低SNHG1可显著抑制体内移植瘤生长(P<0.05);下调miR-377-3p可显著减弱敲低SNHG1对Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力并可抑制体内移植瘤生长(P<0.05)。结论SNHG1可能通过海绵miR-377-3p调节AKT2表达,参与CC进展。