中国对虾PcABCG5基因在高碳酸盐碱度胁迫下的表达模式分析

为探究急性盐碱胁迫条件下中国对虾(Penaeus chinensis)ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)G5基因的表达特征,本研究应用RACE克隆技术获得中国对虾ABCG5基因,并将其命名为PcABCG5。该基因cDNA全长为2718 bp,开放阅读框为1923 bp,共编码640个氨基酸,预测的蛋白分子量为71.39 kDa,理论等电点为9.12,预测基因位于内质网上,为疏水性蛋白,包含1个NBD和1个TMD结构域,不包含信号肽。同源性与系统进化分析结果显示,PcABCG5转运蛋白保守性强,与斑节对虾(Penaeus monodon)ABCG5蛋白同源性最高,达98.91%。组织特异性分析结果显示,PcABCG5在各组织中均有表达,鳃中表达水平最高(P<0.05),眼柄中最低(P<0.05)。在盐碱胁迫下,PcABCG5在鳃组织中的表达量呈先升高后下降的趋势,胁迫6 h时达到最高值(P<0.05),为对照组的3.12倍;利用dsRNA干扰实验对该基因进行敲降,沉默PcABCG5基因会使盐碱胁迫下的对虾死亡率高达60%,比对照组高40%(P<0.05),说明该基因的表达量越高,对中国对虾的存活越有利。本研究中受盐碱胁迫的中国对虾PcABCG5表达量高,可能是由于鳃在直接接触盐碱水环境后,通过PcABCG5介导的物质转运启动渗透压调节来应对渗透压失衡。

中国对虾高效生态育苗技术

中国对虾又称东方对虾、中国明对虾,属甲壳纲、十足目、对虾科、对虾属,主要分布于我国渤海、黄海和东海北部,肉质鲜嫩,营养价值丰富。随着海洋环境恶化,加上海洋捕捞、渔业资源管理不善等诸多原因,导致渔业资源衰退,因此,2005年山东省开始推行《渔业资源修复行动计划》。

中国对虾与不同鱼类生态混养对比试验

为充分利用海水资源,不断提高养殖经济效益和生态效益,开展中国对虾套养红鳍东方鲀、珍珠龙胆石斑鱼多营养层级综合养殖技术试验,放养中国对虾12万尾/hm^(2),分别放养规格230 g/尾的红鳍东方鲀490~667尾/hm^(2)、规格25 g/尾的珍珠龙胆石斑鱼851尾/hm^(2)、规格170 g/尾的珍珠龙胆石斑鱼612尾/hm^(2)和800尾/hm^(2),经过5个月的养殖,中国对虾套养红鳍东方鲀,中国对虾单产达3 040.5 kg/hm^(2),红鳍东方鲀单产达546.9 kg/hm^(2);中国对虾套养珍珠龙胆石斑鱼,套养规格170 g/尾珍珠龙胆石斑鱼苗的中国对虾单产达3 474 kg/hm^(2),苗种规格170 g/尾的龙胆石斑鱼单产308.8 kg/hm^(2),套养规格25 g/尾珍珠龙胆石斑鱼苗的中国对虾单产达3 562.5kg/hm^(2),苗种规格25 g/尾的珍珠龙胆石斑鱼单产达180.2 kg/hm^(2)。

中国对虾高效生态育苗技术

中国对虾又称东方对虾、中国明对虾,属甲壳纲、十足目、对虾科、对虾属,主要分布于我国渤海、黄海和东海北部,肉质鲜嫩,营养价值丰富。随着海洋环境恶化,加上海洋捕捞、渔业资源管理不善等诸多原因,导致渔业资源衰退,因此,2005年山东省开始推行《渔业资源修复行动计划》。

红鳍东方鲀、硬壳蛤与中国对虾池塘混养时生长效果及养殖效益分析

不同的水产养殖品种混合养殖可以充分利用海水池塘内的物质资源、改善养殖水质、提高养殖效益,促进养殖水域环境健康可持续发展。本文以红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)、硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)和中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)为研究对象,研究分析了红鳍东方鲀与中国对虾、硬壳蛤与中国对虾、红鳍东方鲀和硬壳蛤与中国对虾三种养殖模式下红鳍东方鲀与硬壳蛤的生长效果,并分别计算了其养殖效益。三种养殖模式下中国对虾的放养量是固定的,均为初始规格20 000尾/kg,放养密度6 kg/hm^(2)。同时,该试验也分别选出了三种养殖模式下养殖效益最高时红鳍东方鲀与硬壳蛤的放养密度。

“中国对虾”生态育苗技术研究

“中国对虾”是我国重要的水产出口品类,肉质鲜嫩、风味独特且富含蛋白质、脂肪与多种维生素和微量元素。“中国对虾”可作为新鲜食材直接食用,也可加工成干品,对于药用方面有助于缓解皮肤溃疡、神经功能衰退等健康问题。虽然“中国对虾”养殖技术已相当成熟,但在高效生态育苗技术方面仍有提升空间,特别是水质状况对育苗成效具有决定性影响。山东省滨州市无棣县毗邻渤海,是“中国对虾”的重要水产养殖基地,拥有众多水产养殖企业。通过对适用于无棣县“中国对虾”生态育苗技术,包括亲虾的选择与培育、产卵与孵化、幼体培育、水质管理以及病原体防治五个方面进行总结,以期为渤海湾地区的“中国对虾”育苗提供参考。

中国对虾一种杆状病毒的超微结构

应用电镜超薄切片技术 ,发现中国对虾 (Penaeuschinensis)肝胰腺上皮、肠上皮和甲壳下表皮细胞质中 1种杆状病毒粒子 ,为中国对虾杆状病毒 (CBV) .该病毒直径 4 4～ 4 5nm ,长度 170～ 2 0 0nm ,中央是高电子密度的核心 ,外裹的衣壳不明显 ,但囊膜清晰可辨 ,在囊膜与核心之间有一个中宽端窄的间隙 ,本病毒仅在胞质中增殖 ,不形成包涵体 ,但形成封入体 ,它们所造成的靶细胞病理变化不明显 .

免疫多糖对中国对虾血清溶菌酶、磷酸酶和过氧化物酶的作用

于1997年9月在青岛红岛养殖场采集中国对虾,给对虾腹腔注射不同剂量的海藻多糖和北虫草多糖后,用生化法测定其血清中的溶菌酶（LSZ）、碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）和过氧化物酶（POD）活性的动力学变化。结果表明,注射1.0％北虫草多糖及1.0％海藻多糖48h后,对虾血清中的LSZ活性由对照组的0.25U／ml分别增至0.88U／ml和0.75U／ml,POD活性由对照组的0.11U／mg分别增至2.2U／mg和1.96U／mg;注射72h后,ALP活性由对照组的1.2U／mg分别增至48U／mg和25U／mg,ACP活性由对照组的4.5U／mg增至30U／mg和17U／mg,而血清蛋白的变化较为稳定。LSZ、ALP和ACP的活性变化最为显著,说明海藻多糖和北虫草多糖作为免疫药物能够增强中国对虾的免疫功能。

中国对虾黄、渤海沿岸地理群的RAPD分析

采用随机扩增多态 ＤＮＡ（ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，简称ＲＡＰＤ）技 术，对中国对虾的黄、渤海地理群的３２个个体遗传多样性进行了检测．使用ＯＰＩ系列 的２０个 １０ ｂｐ的寡核苷酸随机引物，对每个个体的基因组 ＤＮＡ进行扩增，结果为：１７ 个引物获得了谱带清晰且重复性好的产物，扩增片段的分子量在 ２ ０００～２００ ｂｐ之间， 共检测 １０６个位点，其中多态位点数为 ３９个，占 ３６． ８ ％；平均遗传距离为 ０． ０９４１＋ ０． ０２０ ６，有 ６７个标记（占 ６３． ２％）在整个群体的 ３２个个体间表现稳定的一致性。

恩诺沙星及其代谢产物在吉富罗非鱼、中国对虾体内的残留规律研究

模拟水产养殖实际,每天以剂量为50μg/g(鱼体重)的恩诺沙星分别给吉富罗非鱼、中国对虾投喂药饵,周期为7d,研究恩诺沙星在罗非鱼和对虾体内的残留与代谢规律,制定停药期。实验结果发现,恩诺沙星在鱼、虾体内均代谢为环丙沙星。在停药的"零"时,鱼肌肉、肝脏和血液中恩诺沙星的含量分别为(3 61±1 02)μg/g、(5 96±2 12)μg/g、(1 25±0 23)μg/mL,消除半衰期分别为15 61,16 83,17 19h。鱼肌肉中代谢物环丙沙星的最高含量为(0 22±0 06)μg/g,消除半衰期67 3h;中国对虾体内恩诺沙星与环丙沙星的最高含量分别为(1 68±0 41)μg/g、(0 066±0 03)μg/g,消除半衰期分别为27 9,33 6h。在本实验条件下,建议罗非鱼的停药期为22d,中国对虾为12d。

饲料中硒含量对中国对虾生长及其体内含量的影响

饲料中硒含量对中国对虾生长及其体内含量的影响王安利，王维娜，刘存岐，王所安（河北大学生物学系，保定０７１００２）王荣端，马志强（中国水产科学研究院北戴河中心实验站，０６６１００）关键词硒，饲料，中国对虾ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＳＥＬＥＮＩＵＭＣＯＮＣＥＮＴ...

真菌多糖对中国对虾血清及淋巴细胞免疫活性的影响

选用从北虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｍｉｌｉｔａｒｉｓ）中提取的真菌多糖作为免疫增强剂，测定真菌多糖对中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）血清及淋巴器官中淋巴细胞的免疫活性的影响。经体腔内注射真菌多糖后，检测淋巴细胞的吞噬率和吞噬指数，以及对血清免疫活性的影响。实验结果表明：注射多糖４８ｈ后，中国对虾淋巴细胞的吞噬率提高１１４％，吞噬指数提高３９７％。血清的溶血能力、溶菌能力与对照组相比有明显提高，一直维持到９６ｈ仍具较高水平。对虾血清的凝集红细胞活性也有所增加。该真菌多糖对中国对虾的非特异性免疫功能具有明显的增强作用。

中国对虾遗传多样性的RAPD分析──朝鲜半岛西海岸群体的DNA多态性

1997年4月自黄海越冬场采集中国对虾朝鲜半岛西海岸群体样品。采用RAPD技术对该群体共33个个体的基因组DNA多态性进行了检测。利用20个随机寡核苷酸引物共检测105个位点，其中多态位点41个，占39％。单个引物获得的标记为1－10个，分子量为180－2200bp。个体间的平均遗传距离为0．093，群体的平均余合度为0．2176。表明该对虾群体的遗传多样性较低。低水平的遗传多样性一方面使中国对虾的生存情况更加危险，同时其本身也可能是对虾对病害、恶劣环境等不利因素的抵抗力下降，从而导致资源衰退的原因之一。研究结果证实：在检测种群遗传变异度大小方面，RAPD具有比同工酶更高的灵敏度和分辨率。

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)人工选育群体不同世代的微卫星分析

采用微卫星DNA技术对中国对虾人工选育快速生长基础群体和4个连续世代共计100个个体进行了遗传分析。对8个基因位点进行了扩增,共得到71个等位基因。每个位点的等位基因数从6到16不等,其大小在159—600bp之间,PIC(PolymorphismInformationContent)值为0.6628—0.9051,基因型数为17—67。5个世代群体的平均杂合度分别为0.7188、0.5687、0.6188、0.6438、0.66937。从F检验的数据来看,配对比较Fst值表明5个世代群体间的遗传分化程度较弱。Fis值的计算结果表明,有5个群体位点杂合度处于过剩状态,但对整个群体而言,5个世代群体均表现为一定程度的杂合子缺失。通过计算每个位点的等位基因数(na)、有效等位基因数(αe)、基因型数目(G)、最高频率等位基因的频率(F),以及基于基因型的P值,比较了5个群体的遗传变化。另外,5个世代群体间的相似性系数以及彼此间的遗传距离,体现出人工选育群体间的遗传分化程度较低,说明5个世代群体间的遗传分化程度较低,还有较大的选育潜力,可以继续保持遗传响应。

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)基因组微卫星特征分析

对中国对虾基因组随机测序 ,获得了总长度约为 641 0 0 0个碱基的基因组DNA序列 ,从中找到 1 362个重复序列。其中 ,两碱基重复类型的重复数目最多 ( 985个 ) ,占重复序列总数目的 72 .32 % ;其次是三碱基 ( 1 49个 )和四碱基 ( 1 0 2个 ) ,分别占重复序列总数目的 1 0 .94%和7.49%。另外 ,六碱基重复 34个 ,单碱基重复 5 0个 ,五碱基重复 5个 ,分别占重复序列总数目的 2 .5 0 %、3.67%、0 .37%。在单碱基重复类型中 ,重复拷贝类别为A的重复数目最多 ;两碱基重复类型中 ,AT重复数目最多 ,其次是AC和AG ;三碱基重复类型中以AAT重复拷贝类别最多 ,其次是AAG和ATC ;四碱基重复类型中 ,AGAT重复数目最多 ;五碱基重复类型只发现了AGAGA、GAGGC、TCTTC和TTTCT四种重复拷贝类别 ;六碱基重复中以ATTATC重复数目最多。其中一些序列已经提交GeneBank注册 ,注册号为AY5 4 5 898 AY5 4 5 91 3。中国对虾基因组二碱基重复类型中以不完全 (Imperfect)形式的微卫星序列为主 ,其中GC重复拷贝类别的重复数目很少。利用 8对微卫星引物对 60个个体遗传多样性分析 ,共获得了 60个等位基因 ,因此认为微卫星技术在中国对虾基因组研究中具有较好的应用前景。

中国对虾慢性亚硝酸盐和氨中毒的组织病理学研究

采用投喂鲜蛤肉、吸底、换入适量的沙滤水等常规饲养方法，使试验水体的亚硝酸盐含量逐渐上升，氨浓度也高出洁净海水数倍，从而造成对虾中毒．结果表明：高浓度的亚硝酸盐和氨使得试验虾肝胰腺、胃、中肠和鳃等组织产生异常变化，出现从细胞肿胀到空泡化。

不同密度的石莼与中国对虾的混养实验

在 10个水族箱 ( 5 3cm× 2 4cm× 2 3cm)中各放养中国对虾 (Penaeuschinensis) 4尾 ,混养孔石莼 (Ulvapertusavar) 0、4g、6g、8g和 10g ,采用投饲精养。结果表明 ,孔石莼能有效吸收N、P营养盐 ,提高对虾对饲料中氮的利用率 ( 42 .7%～ 2 12 .9% ) ,水质状况也优于单养对虾。混养的综合养殖指数高于单养对虾。对虾密度为32 0～ 480g·m-3 ,石莼密度为 40 0～ 6 0 0g·m-3 时 。

中国对虾一种C型杆状病毒随机扩增多态性DNA分析

于1994和1995两年的7月从青岛崂山上马镇养虾场中染病的中国对虾中分离纯化出一种C型杆状病毒。为建立中国对虾病毒的鉴别和检测技术，利用随机扩增多态性DNA技术对电泳纯化的病毒DNA进行分析和研究。将病虾匀浆、经差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得完整病毒粒子；从病毒中提取DNA后再进行电泳纯化，收集长度完整、均一的病毒DNA；在其他参数保持不变的情况下，对Operon生产的10碱基随机引物K试剂盒进行扩增试验。结果显示：1．病毒DNA有两种存在形式；2．K试剂盒中有2个引物能将病毒DNA扩增出长度不同的产物，其中编号为OPK—01的随机引物可产生多态性DNA片段；3．1995年中国对虾杆状病毒的RAPD分析结果与1994年相同，证实1994和1995两年度引起中国对虾疾病的病原是同一种杆状病毒。由此可以认为：随机扩增多态性DNA技术能将中国对虾C型杆状病毒扩增出多态性DNA片段而达到病毒鉴别和诊断的目的。

中国对虾快速生长新品种“黄海1号”的人工选育

中国对虾经过连续6代的群体选育,表现出生长快、抗逆性强等优良的经济性状。选育群体的体长比对照平均增长8.40%,体重增长26.86%。抗逆性强,发病率不足10%,而未经选育的对照池发病率在40%以上。对不同世代进行了遗传结构分析,(1)同工酶:在13个基因位点中,MDH 2、GPI、MPI、PGM 2和PGM 3五个位点呈多态。PGM 3位点上的变异程度最高,其等位基因频率呈递减趋势,选育群体在MPI位点上发现c基因,其等位基因频率呈递增趋势,其平均观察杂合度呈依次递减趋势。(2)RAPD:对5个世代进行了RAPD分析,各世代间多态性比例呈下降趋势,F6代保持了F5水平。遗传分化指数Gst除F3与F4之间遗传分化弱之外,其他世代间已发生了中等程度的分化。(3)SSR:对5个世代进行了8个基因位点分析,共产生108个等位基因,群体间的杂合度呈下降趋势,F6保持了F5水平。遗传分化指数Gst值均小于0.05,说明中国对虾人工选育群体之间存在一定程度的分化,但分化较弱。

暴发性流行病病原对中国对虾亲虾人工感染及对子代影响的PCR检测

1997年4月在山东海阳市近海捕获10尾中国对虾，采用患暴发性流行病的虾池中的病虾为毒种，进行人工感染试验。采用两次聚合酶链反应（PCR）检测方法，对感染亲虾的胃、腮、卵巢，以及卵和各期幼体进行跟踪检测。对经人工感染的10尾亲虾组织的PCR检测结果表明，6尾虾的胃样呈阳性，其中4尾为第1次检测出阳性；1尾虾的腮样呈阳性；2尾虾的卵巢样呈阳性，且其所产的卵子也呈阳性；每尾亲虾产卵所孵化出来的各期幼体，经两次PCR检测均呈阴性。随着实验水温的上升，人工感染病毒的亲虾存活的时间缩短；卵子的孵化率随着对亲虾感染时间的增长而有大幅度降低的趋势。