九寨沟中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群差异分析

通过16S rRNA高通量测序方法分析采自四川九寨沟国家级自然保护区的中华蟾蜍Bufo gargarizans和中国林蛙Rana chensinensis的肠道菌群结构,结果表明:中华蟾蜍和中国林蛙共有的扩增序列变体(ASV)数目为440,其中特有的ASV分别为313和539。在门级水平上,中华蟾蜍和中国林蛙肠道中疣微菌门Verrucomicrobiota、厚壁菌门Firmicutes和拟杆菌门Bacteroidota的总丰度分别为96.18%和79.00%。在属级水平上,丰富度0.1%以上的有17个属级单元,总丰度分别占中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群的69.82%和41.37%,其中阿克曼菌属Akkermansia最丰富,分别占48.35%和10.75%。在中国林蛙肠道中,拟杆菌属Bacteroides、另枝菌属Alistipes、脱硫弧菌属Desulfovibrio、丹毒杆菌属Erysipelatoclostridium、瘤胃球菌属Ruminococcus UBA1819、理研菌属Rikenella表现出更高的均匀度。研究结果为进一步深入研究中华蟾蜍和中国林蛙肠道微生物结构和功能提供了基础资料。

Cu对中国林蛙蝌蚪的急性毒性

试验测定了不同温度条件下Ｃｕ２＋对中国林蛙蝌蚪的急性毒性．结果表明，在水温为９～１３℃、１８℃和２４℃条件下，Ｃｕ２＋对１０ｄ龄中国林蛙蝌蚪９６ｈ的ＬＣ５０分别为５．０１、３．８０和２．９９ｍｇ·Ｌ－１，致死阈浓度分别为４．０、２．５和１．６ｍｇ·Ｌ－１，而在９６ｈ内的无可观察效应浓度分别为２．５、１．６和１．０ｍｇ·Ｌ－１．１８℃条件下Ｃｕ２＋对２０ｄ龄中国林蛙蝌蚪的９６ｈＬＣ５０为２．１７ｍｇ·Ｌ－１．

中国西北地区中国林蛙各居群的分类学研究(两栖纲:蛙科)

采用形态学比较和数值分类相结合 ,对中国西北部分布的中国林蛙Ranachensinensis各居群间 (包括分布于青藏高原地区的原定种或亚种 )的差异水平进行了探讨。结果认为 :分布于中国西北部高原地区的各居群其形态特征和数值分析之间非常相近 [其中包括原定名为Ranaamuren siskukunoris(Nikol′skii,1918,青海湖 ) ,R .weigoldi(Vogt,192 4 ,四川甘孜和德格 ) ,R .chensinen sishongyuanensis(Huetal.,1985,四川红原 ) ,R .c.kangdingensis (Weietal.,1991b ,四川康定 )和R .c .lanzhouensis(Weietal.,1991b ,甘肃兰州 ) ]而与中国林蛙Ranachensinensis的模式居群陕西户县标本有明显区别 ,建议将中国西北部青藏高原地区的林蛙各居群恢复为有效种 ,即高原林蛙R .kukunorisNikol′skii,1918。

温度变化对中国林蛙胚胎发育的影响

开展中国林蛙南移和人工养殖是一项很有意义的工作，而南方多变的气温是否影响其胚胎发育是一个尚未研究的课题。本文利用受精卵在不同温度的恒温培养箱间移换，研究了温度变化对中国林蛙早期胚胎发育的影响，结果表明：（１）快速升温对中国林蛙胚胎孵化率、正常率均有影响，且温差越大影响越大；缓慢升温对胚胎的影响与温差大小和升温起点有关，高起点的升温对胚胎的影响比低起点的升温更大，生产中快速升温以不超过２℃，慢速升温以不超过４℃为宜。（２）慢速降温幅度为４℃时，对胚胎发育无影响，为８℃时，有影响；快速降温幅度为４℃时，对胚胎孵化率和正常率均有影响，生产中慢速降温以不超过８℃，快速降温以不超过４℃为宜。（３）变温幅度相同时，变温速度越大，对胚胎的影响越大。（４）原肠期是中国林蛙胚胎发育的升温敏感期，神经管期为升温非敏感期，中国林蛙胚胎发育中对升温变化较降温敏感。（５）中国林蛙的胚胎发育不会因南方天气的异常而遭到严重的影响。

不同温度条件下环境水分对中国林蛙幼体存活的影响

中国林蛙（ＲａｎａｃｈｅｎｓｉｎｅｎｓｉｓＤａｖｉｄ）主要生活于东北地区的森林中。由于过量捕捉和当地生境的破坏，野生资源已逐渐枯竭，不少地区已处于灭绝的边缘［１，２］。因此，开展中国林蛙的人工养殖不仅具有重要的经济价值，而且对保护生物多样性也有积极意...

野生和人工养殖辽宁中国林蛙肥满度和重/长指标的初步研究

对野生和养殖中国林蛙肥满度和重／长指标的研究表明，辽宁野生中国林蛙肥满度（Ｋ）在雌性中无年龄差异，在雄性则亚成年和成年蛙组间有显著差异；性别差异只在成年蛙组间出现．重／长指标（Ｋｗｌ）均随年龄的增加而显著提高，且在不同年龄组间均有性别差异．１龄家养中国林蛙Ｋ无性别差异，Ｋｗｌ有性别差异．养殖蛙Ｋｗｌ显著高于同性同龄野生蛙，Ｋ无显著差异．Ｋｗｌ比Ｋ更灵敏，二者结合对两栖类肥满度进行研究较合理．

中国林蛙幼体适宜生存环境的探讨

本文通过人为设置六种不同的环境条件，研究了中国林蛙幼体对不同环境的适应性。结果表明：适宜的生存环境是水深低于蛙体长并设有栖息陆地，或者保持泥土湿润。水深高于蛙体长或环境干燥均对蛙不利。在适宜的环境条件下，幼蛙平均能存活达５３６６ｈ，最长可达２５ｄ。

中国林蛙蝌蚪对盐度和pH的耐受性

分别在正常盐度不同 pH值、正常 pH值不同盐度和相同水温 18 3～ 2 0 7℃的条件下 ,进行中国林蛙蝌蚪对盐度和 pH值的耐受性实验。结果表明 ,在pH值为 6 8～ 7 0时 ,盐度在 2 0～ 3 0g·L-1对蝌蚪 96h存活率没有明显影响 ;随着盐度的增加 ,蝌蚪存活率下降 ;盐度对蝌蚪 2 4、4 8、72和 96h的TLm 值分别为 8 79,7 12 ,5 6 4和 3 83g·L-1,安全浓度为 1 73g·L-1。在盐度为 0 18g·L-1时 ,pH值在 4 3～ 9 7范围内对蝌蚪 96h存活率没有明显影响 ;pH值对蝌蚪的 2 4 ,4 8,72和 96h的TLm 值分别为 10 33,10 18,10 0 8和 10 0 2。生产上中国林蛙蝌蚪生存的适宜 pH值为 6 0～ 9 0 ,适宜盐度为 1 0～ 2 0g·L-1。

中国林蛙卵油的抗焦虑作用

目的研究中国林蛙卵油 (eggoilofRanatemporariachensinensisDavid ,EORTCD)的抗焦虑作用。方法应用高架十字迷路和小鼠爬梯实验评价中国林蛙卵油的抗焦虑活性及其量效、时效关系。结果与对照组比较 ,EORTCD 2 0、4 0 g·kg-1能显著延长大鼠在十字迷路开放通路连续停留时间 ,增加大鼠进入开放通路次数 ,而对封闭通路连续停留时间和进入封闭通路次数无明显影响 ;小鼠爬梯实验中 ,EORTCD 1 4～5 6g·kg-1组小鼠站立数明显减少而爬梯数无显著差异 ;EORTCD抗焦虑时效实验表明在给药后 3 0、60min抗焦虑活性较强 ;γ 氨基丁酸 (γ aminobutyricacid ,GABA) 5 0、1 0 0mg·kg-1分别与EORTCD 1 2 g·kg-1联合给药组的小鼠站立数显著降低而爬梯数无显著减少 ,且比单独给予EORTCD组小鼠站立数少。结论中国林蛙卵油有明显抗焦虑作用。

中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的最适温度、逃避温度及致死温度

报道了中国林蛙蝌蚪 (Ranachensinensis)和大蟾蜍蝌蚪 (Bufogargarizans)在不同驯化温度下的最适温度、逃避温度和致死温度的研究结果。将中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪分别在 5、1 5和 2 5℃ 3个不同温度下驯养 3周 ,利用温度梯度装置观察记录 2种蝌蚪的最适温度、逃避温度和最高致死温度。结果表明 ,经过在 5、1 5和 2 5℃ 3个温度下的驯化 ,中国林蛙蝌蚪的最适温度范围分别为 1 3 . 5～ 1 8℃、2 0. 5～2 5℃和 2 3～ 2 7. 5℃ ;大蟾蜍蝌蚪的最适温度范围分别为 1 2～ 1 6 .5℃、2 1～ 2 5. 5℃和 2 2～ 2 6. 5℃。中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的最高致死温均在 3 7～ 3 8℃之间 ,最低致死温均为 0℃。驯化温度对最适温度影响显著 (P <0 .0 1 ) ,对致死温度则没有显著影响。驯化温度对中国林蛙蝌蚪和大蟾蜍蝌蚪的逃避温度产生的影响比最适温度的大。

中国林蛙卵油的中枢抑制作用

目的揭示CO2 超临界萃取的中国林蛙卵油 (eggoilofRanatemporariachensinensisDavid ,EORTCD)的镇静和抗惊厥作用。方法通过自主活动监测、协同巴比妥催眠和士的宁诱发惊厥等实验 ,探索中国林蛙卵油的药效和最大效能 ,并与安定、佳静安定进行比较。结果EORTCD对小鼠自主活动有明显的抑制作用 ,对戊巴比妥钠诱导的睡眠有协同效果 ,显著对抗士的宁引起的小鼠惊厥反应 ,通过最大效能比较EORTCD的抗惊厥潜伏期长于安定和佳静安定 ,最大效能三者在同一水平。结论EORTCD具有显著的中枢抑制作用 ,对惊厥动物产生保护作用。

中国林蛙消化道4种内分泌细胞的免疫组织化学定位

目的:研究中国林蛙(Rana chensinensis)消化道内5-羟色胺(5-HT)、生长抑素(SS)、胃泌素(GAS)和P物质(SP)4种内分泌细胞免疫组织化学的定位。方法:用免疫组织化学ABC法。结果:5-HT细胞在中国林蛙消化道内均有分布,其中以胃贲门部分布密度为最高,胃体次之,空肠为最低;SS细胞从食管到回肠可见其分布,直肠部未见,其中胃体分布密度为最高,回肠部最低;GAS细胞只在十二指肠和空肠两个部位检测到;而SP细胞在整个消化道内未见其分布。结论:中国林蛙消化道这4种内分泌细胞的分布有其自身的特点,不仅与哺乳类和爬行类动物不同,而且在两栖类各品种间也表现出了某种程度的差异性。

碳酸盐碱度和pH对中国林蛙蝌蚪的毒性作用

为了解中国林蛙(Ranachensinensis)蝌蚪对水环境中碳酸盐碱度和pH的适应能力,采用单因子静态急性毒性实验法进行研究。结果表明,在pH7 0～8 5、盐度0 18g/L时,碳酸盐碱度对中国林蛙蝌蚪的24h、48h、72h和96hLC50值分别为14 36、11 83、10 35和7 68mmol/L,安全值(SC)为2 41mmol/L。在相同盐度下,碳酸盐碱度为1 41mmol/L时,中国林蛙蝌蚪的pH为24、48、72和96hLC50值,碱性范围分别为10 33、10 18、10 08和10 02,酸性范围分别为3 92、4 07、4 11和4 16。建议野外蝌蚪养殖水体的pH应控制在6 0～8 0,碳酸盐碱度保持在1 5～3 5mmol/L。

中国林蛙和中华蟾蜍皮肤抗菌肽的分离纯化及其抗菌活性

分别以中国林蛙长白山亚种Rana chensinensis changbaishansis和中华蟾蜍Bufo gargarizans的鲜皮为原料,通过酸化乙醇法提取抗菌肽粗提液,再经葡聚糖凝胶层析进一步分离纯化获得抗菌肽纯品,采用滤纸片法进行抑菌活性研究。结果表明,经Sephadex G-50和Sephadex G-100分离纯化后获得3种多肽,中国林蛙与中华蟾蜍皮肤中的活性多肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌都具有一定的抗菌作用,其中多肽Ⅲ具有最佳的抑菌效果。抗菌肽相对含量比较的结果表明,蟾蜍皮肤中抗菌活性肽的含量较高,是理想的抗菌肽提出和纯化的源材料。

中国林蛙皮多糖类天然保湿因子的提取与鉴定

采用复合酶解法从中国林蛙皮中分离提取出天然保湿因子,并采用红外吸收光谱法对天然保湿因子进行了定性测试,采用咔唑(cabazole)法和Elson-Morgan法对天然保湿因子的含量及纯度进行了测定。结果表明:采用本研究方法分离、提纯的天然保湿因子为透明质酸(Hyaluronic acid,HA),其外观呈白色粉末状,葡糖醛酸含量43.2％,氨基葡糖含量39.7％,无臭、无味、无毒,具有强保湿性,可应用于保健食品、化妆品及眼科药物。

盐度、碱度对中国林蛙蝌蚪及变态幼蛙的毒性影响

在水温 16～ 18℃的野外条件下 ,采用单因子静态急性毒性实验法 ,研究水环境中盐度、碱度对中国林蛙(Ranachensinensis)蝌蚪及变态幼蛙的毒性效应。在pH为 7 0～ 8 5、总碱度为 1 4 1mmol L时 ,盐度对中国林蛙蝌蚪及变态幼蛙的 2 4、4 8、72、96h半致死值 (LC50 )分别为 8 2 1、7 2 5、5 17和 3 70g L及 8 84、7 17、6 6 2、6 2 9g L ;零致死值(LC0 )分别为 7 14、6 0 0、2 6 7、2 2 0g L及 6 34、6 16、5 78、5 4 5g L ;全致死值 (LC1 0 0 )分别为 9 98、9 0 0、7 6 7、5 2 0g L及11 34、9 6 7、7 4 5、5 4 5g L ;安全值 (SC)为 1 70g L和 1 4 2g L。在相同pH下 ,盐度为 0 18g L时 ,碱度对中国林蛙蝌蚪及变态幼蛙的 2 4、4 8、72、96hLC50 值分别为 14 36、11 83、10 35和 7 6 8mmol L及 15 0 7、13 72、11 2 3、8 6 5mmol L ;LC0 值分别为 8 76、8 5 1、4 6 5、3 88mmol L及 9 11、7 0 3、6 85、5 17mmol L ;LC1 0 0 值分别为 19 96、15 14、16 0 5、11 4 8mmol L及2 1 0 2、2 0 4 1、15 6 0、12 0 2m mol L ;SC值为 2 4 1mmol L和 3 4 1mmol L。综合我国淡水养殖水质标准 ,建议养殖中国林蛙蝌蚪及变态幼蛙长期生存的盐度上限分别为 2 0g L和 1 5g L ,碱度上限分别为 2

中国林蛙变态蝌蚪对pH、盐度和碱度的适应性

在水温 16～ 18℃的野外条件下 ,采用单因子急性毒性实验法 ,研究了水环境中pH、盐度和碱度对中国林蛙 (Ranachensinensis)变态蝌蚪的毒性效应 .结果表明 ,中国林蛙变态蝌蚪对 pH的适应范围为4 3～ 9 7,最低耐受限 3 6 ,最高耐受限 10 7;对盐度的最高耐受限为 9 98g·L-1,适应盐度上限 7 14 g·L-1,安全盐度上限 1 70g·L-1;对碱度的最高耐受限为 19 96mmol·L-1,适应碱度上限 8 76mmol·L-1,安全碱度上限 2 4 1mmol·L-1.野外变态蝌蚪饲养池水体 pH应控制在 6 5～ 8 5 ,盐度控制在 2 0 g·L-1以下 ,碱度不超过 4 0mmol·L-1.中国林蛙变态蝌蚪是一种狭酸碱、低耐盐、低耐碱生物 .

中国林蛙肉的营养成分分析与评价

中国林蛙（Rana chinensis）俗称田鸡、蛤什蟆、雪蛤等，属两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属，主要分布在我国东北地区山麓，其肉质细嫩、清白、味道鲜美，属高蛋白低脂肪肉类，营养价值高。它集药用、食用、保健于一体，与猴头、熊掌、飞龙并称“四大山珍”。近几年，对雌性林蛙的输卵管（即蛤士蟆油）作了较为全面的研究，结果表明它是一种重要的中药材；而对林蛙肉的研究国内外报道较少。

Cu^(2+)和Cr^(6+)对中国林蛙蝌蚪的急性毒性

采用中国林蛙(Rana chensinensis)出膜后一周的蝌蚪为实验对象,研究了Cu2+和Cr6+对中国林蛙蝌蚪的急性毒性.实验结果表明,在水温22℃~24℃条件下,Cu2+对中国林蛙蝌蚪24 h,48 h,72 h的半致死浓度(LC50)分别为0.131,0.105,0.038 mg/L;Cu2+对蝌蚪的安全浓度为0.02 mg/L.Cr6+对中国林蛙蝌蚪24 h,48 h,72 h的半致死浓度(LC50)分别为4.16,4.48,4.57 mg/L;Cr6+对蝌蚪的安全浓度为1.55 mg/L.同时讨论了中国林蛙与其他两栖类蝌蚪相比对Cu2+和Cr6+耐受性的差异.

中国林蛙新亚种研究

本文根据采集于陕西户县、甘肃榆中,四川康定和吉林白河产中国林蛙Rana chensinensis 371号标本,对其形态、染色体组型、C带、银带及血清LDH同工酶电泳酶带进行了比较研究,发现榆中、康定和白河的标本与中国林蛙模式产地户县的标本两两之间均存在显著差异,因此确定榆中、康定和白河产中国林蛙为三个新亚种。