基于“三因致毒”假说的中药免疫特异质肝损伤成因机制解析

特异质药物性肝损伤(Idiosyncratic Drug-induced Liver Injury, IDILI)具有不可预测性和发病率低等特点,一直是新药撤市遇到的瓶颈问题。IDILI发生与机体、环境和药物密切相关,而机体免疫是IDILI发生的主要诱因,故免疫IDILI备受关注。囿于中草药组成和临床用药的复杂性,中药相关特异质肝损伤物质基础和机制的阐释成为研究的难点和热点。课题组前期针对何首乌肝损伤特点,提出了“三因致毒”机制假说,为中药免疫特异质肝损伤的评价和机制研究提供新的思路和方法。因此,本文基于“三因致毒”假说科学内涵,以仙灵骨葆为例,通过文献报道、临床回顾性分析及实验室研究,明确免疫应激可能是其特异质肝损伤的重要诱因;借助免疫应激模型,明确了其肝损伤的物质基础,并区分了成分类型;利用代谢组学技术初步探讨了其机制。结果表明,该假说能够解析其免疫特异质肝损伤的成因机制,具有一定的普适性,可为科学评价中药免疫特异质肝损伤风险防控提供研究思路和科学依据。

特异质型药物性肝损伤体内评价模型研究进展

目的总结特异质型药物性肝损伤(idiosyncratic drug-induced liver injury,IDILI)的评价研究进展,以期为IDILI评价和临床风险防控提供依据。方法从动物模型、数理模型、细胞模型等多方面论述IDILI模型的研究进展。结果与结论目前关于IDILI机制研究取得了长足进展,并形成了线粒体损伤、免疫炎症、免疫稳态失衡、基因多态性等多种机制假说,并且针对部分假说建立了病证模型用于多种药物IDILI的评价研究。本课题组基于新发现“有毒”中药特异质肝损伤特点,提出了中药“病证毒理学”评价模式和方法,在此基础上证实了何首乌等中药的特异质肝损伤问题,并提出了中药特异质肝损伤免疫应激“三因致毒”机制假说,较好地阐释了中药IDILI发病特点和机制。

中药清肝排毒饮对刀豆蛋白A所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:探讨中药清肝排毒饮对刀豆蛋白A(ConA)所致免疫性肝损伤的保护作用.方法:40只NIH小鼠随机分为5组,分别为正常对照组,模型组、清肝排毒饮大剂量组、小剂量组和联苯双酯治疗组、除正常对照组外,其他组于实验首日ivConA20mg/kg后,清肝排毒饮大剂量组、小剂量组和联苯双酯组均灌胃口服,每天1次,连续3d,末次给药后4h,再次ivConA20mg/kg,8h后检测血浆ALT活性、IFN-γ和TNF-α含量,观察肝组织病理学变化.结果:清肝排毒饮大剂量组小鼠ALT活性、IFN-γ和TNF-α含量均明显低于模型组(ALT:1314.8±831.3vs2373.3±957.9nkat/L,t=2.36,P=0.03;IFN-γ:34.0±14.4vs49.6±19.0ng/L,t=2.20,P=0.04;TNF-α:56.3±6.0vs114.5±8.4ng/L,t=15.90,P=0.00,但与联苯双酯组比较,差异无显著性意义(P均>0.05);清肝排毒饮大剂量组肝脏病理改变明显减轻.结论:清肝排毒饮对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制T淋巴细胞活化和IFN-γ,TNF-α的释放是其主要的作用机制.

单味中药对免疫性肝损伤保护作用实验研究进展

机体的免疫应答反应所介导的肝组织及细胞损伤已成为当前众多肝脏疾病发病的重要原因之一,单味中药及其提取物对免疫性肝损伤有一定的保护作用。文章就近5年来单味中药及其提取物对免疫性肝损伤保护作用的实验研究进行了综述。

基于免疫应激的补骨脂特异质肝毒性作用

目的探究补骨脂水提取物对脂多糖诱导SD大鼠免疫应激状态的肝毒性作用及其机制。方法将SD大鼠分为空白对照(CON)、LPS、WEFP、LPS+WEFP组。LPS组和LPS+WEFP组尾静脉注射4 mg·kg^(-1)LPS;2 h后WEFP组和LPS+WEFP组ig 1.1 g·kg^(-1)·d^(-1)WEFP,连续7 d。检测各组大鼠体质量、肝脏指数、胆汁流速、血清生化、组织病理学变化、炎症因子、蛋白及mRNA表达水平,阐明WEFP的肝脏毒性作用及机制。结果与CON组相比,LPS组大鼠体质量、肝脏系数、血清ALT、AST、ALP肝损伤指标无明显性变化;WEFP组大鼠肝脏出现轻度脂肪变性,但未引起明显肝脏损伤;LPS+WEFP组大鼠体质量、胆汁排出量明显降低,肝脏系数、血清ALT、AST、ALP、TBA水平明显增加,肝脏中IL-1、TNF-α分泌增加;同时肝脏出现炎性反应、胆汁淤积、脂肪变性等病理性改变,RhoA mRNA及蛋白表达增加,TLR4和ICAM-1促炎基因表达增加,导致急性肝损伤。结论非肝毒性剂量的LPS可引起同等剂量补骨脂表现出更为明显的肝毒性。补骨脂可激活免疫应激状态大鼠体内RhoA等促炎基因的表达,进一步加剧炎症因子释放,促使肝细胞及肝内胆管组织发生炎症反应,导致胆汁酸外排受阻,引起特异质肝损伤。

中药复方FZQX对免疫性肝损伤小鼠Th1/Th2细胞的调节作用

目的观察中药复方FZQX对免疫性肝损伤小鼠的外周血Th1/Th2细胞的平衡调节作用,研究中药复方FZQX对免疫性肝损伤小鼠肝组织的保护作用,为进一步探讨中药复方FZQX防治病毒性肝炎的药理学机制和临床应用提供实验依据。方法应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6小时后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Thl/Th2比例;另外经刀豆蛋白A(ConA)刺激培养72小时后,收集培养上清,ELISA法检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平。结果在模型组,小鼠外周血PBMC中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平升高,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平降低,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05);Th1细胞的百分率升高,Th2细胞的百分率降低,Th1/Th2的比值增大。FZQX能够抑制Th1型细胞因子的分泌,降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P<0.05)。结论Th1/Th2细胞失衡是造成小鼠免疫性肝损伤的原因之一,Th1应答占主导地位,FZQX能够调节Th1/Th2细胞平衡,对肝组织损害具有保护和改善作用,可能是其免疫药理机制之一。

免疫组织化学法在中药肝损伤检测中的应用概况

近年来中药的安全性越来越引起人们的重视,而药物是否会引起肝损伤是药物安全性研究的重点,对中药的开发及使用具有重要意义。免疫组织化学法可对抗原进行定位、定性及定量研究,在药物肝毒性的研究中起到不可忽视的作用。通过查阅历年来有关中药引起肝毒性的报道及其发生机制,总结归纳了免疫组织化学法在中药肝毒性研究中的应用,为免疫组织化学法在中药安全性评价中的应用提供参考。

中药和西药致急性药物性肝损伤临床和肝组织病理学特征对比分析

目的比较中药和西药致急性药物性肝损伤(ADILI)的临床特点和肝组织病理学改变。方法回顾性分析中药致ADILI患者96例和西药致ADILI患者113例,比较两类药物致ADILI的临床表现、生化学指标、免疫学指标及肝组织病理学改变的异同。结果两组患者临床表现和生化学指标相似,但中药组患者血清自身抗体阳性率为27.1%,显著高于西药组(14.2%,P<0.05);中药组肝组织点状或灶状坏死(93.8%)与西药组(94.7%)表现相似,但中药组中融合性坏死(51.0%)、界面炎(65.6%)和纤维间隔形成(54.2%)显著高于西药组(33.6%、50.4%和37.2%,P<0.05),且汇管区淋巴细胞-浆细胞浸润(26.0%)较西药组(19.5%,P>0.05)显著。结论中药和西药致ADILI的临床表现与生化学指标与西药所致者相似,但前者自身免疫反应和病理学改变更趋于严重。

灵芝三萜类成分在体内外对小鼠免疫性肝损伤的影响

目的 观察灵芝三萜类成分TG和TG2 在体内外对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法 制备BCG +LPS引起的小鼠免疫性肝损伤模型 ,并采用小鼠肝细胞原代培养方法 ,取血清和细胞上清测定其中ALT ,NO和肝脏TG水平并进行肝脏病理组织检查。结果 体内实验表明GT 80mg·kg-1和GT2 10 ,2 0 ,40mg·kg-1均明显降低模型动物的血清ALT ,NO和肝脏TG含量 ,并不同程度地减轻动物肝损伤程度。小鼠免疫性肝损伤后原代培养肝细胞的实验中 ,正常小鼠肝细胞上清ALT和NO基本未见改变 ,BCG +LPS损伤后小鼠肝细胞上清ALT和NO在 12 ,2 4h较正常小鼠明显升高 ,并随时间的延长明显增高。而GT 0 .5 ,5 ,5 0 ,10 0 μg·ml-1和GT2 0 .5 ,2 ,10 ,5 0 μg·ml-1均程度不同地使升高的ALT和NO明显下降。灵芝三萜类 (GT ,GT2 )的以上作用与阳性对照药马洛替酯 (MaI)相似。结论 灵芝三萜类成分GT和GT2 对小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用。

荣肝合剂对ConA诱导慢性免疫性肝损伤小鼠细胞凋亡功能的影响

目的观察刀豆蛋白(ConA)诱导转基因小鼠慢性免疫性肝损伤肝组织淋巴细胞中Fasl和Bcl-2蛋白表达情况,探讨荣肝合剂对细胞凋亡的影响。方法选用转基因小鼠74只,随机分为模型组、正常组、联苯双酯(DDB)组、茵陈组、茵陈蒿汤组、荣肝合剂组,分别灌胃给药4周。末次药后24 h,取肝组织光镜下观察其病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡数,流式细胞仪检测肝组织T淋巴细胞中Fasl和Bcl-2蛋白表达。结果病理组织学变化:与模型组比较,荣肝合剂组及茵陈蒿汤组肝组织纤维增生及细胞坏死较轻(P<0.05);凋亡指数及相关基因蛋白的表达:与正常组比较,模型组的凋亡指数及凋亡基因Fasl蛋白表达显著增高(P<0.05),而凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达无显著变化(P>0.05);与模型组比较,荣肝合剂组及茵陈蒿汤组凋亡指数减少(P<0.01),并且两组的Fasl表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2表达水平明显升高(P<0.01);与茵陈蒿汤组比较,荣肝合剂组在凋亡指数及Fasl和Bcl-2蛋白表达方面差异无统计学意义(P>0.05),而与茵陈组和联苯双酯组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论中药复方(荣肝合剂和茵陈蒿汤)不仅可减轻肝组织的病理损害,还可能通过对Fasl和Bcl-2表达的调节,减少慢性免疫性肝损伤小鼠细胞凋亡。

中药复方保肝作用的组织化学、免疫组织化学研究

目的 为观察活血化瘀类保肝中药复方对肝损伤的保肝作用 ,并探讨其抗肝纤维化作用机制。方法 采用组织化学酶显示法和免疫组织化学方法 ,经图像分析系统定量测定对照组、模型组、预防组、治疗组和自然恢复组各组动物标本中琥珀酸脱氢酶 ,5 核苷酸酶及热休克蛋白70 活性与表达程度。结果 琥珀酸脱氢酶、 5 核苷酸酶活性和热休克蛋白70 的表达模型组与对照组比P <0 0 1;自然恢复组、预防组与模型组比P <0 0 1;治疗组与自然恢复组比P >0 0 5。结论活血化瘀类中药复方具有一定的保肝功效。肝星形细胞热休克蛋白70 的表达是否提示细胞凋亡的发生 ,将有待进一步研究。

玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:探讨玉竹提取物A对小鼠免疫性肝损伤的保护作用,探讨其发挥此作用的可能的机制。方法:①实验于2004-06/10在锦州医学院免疫实验室完成。选用健康雄性昆明小鼠50只,普通级。将50只健康雄性昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、玉竹提取物A0.5g/kg组、玉竹提取物A1g/kg组、玉竹提取物A2g/kg组,每组10只。②玉竹提取物A是玉竹的干燥根茎经水醇法提取而得。③正常对照组和模型对照组小鼠腹腔注射生理盐水,玉竹提取物A0.5,1,2g/kg组小鼠分别腹腔注射相应浓度的玉竹提取物A,每次每只0.5mL,3次/d,连续注射4d。最后一次注射后8h,除正常对照组注射生理盐水外,其余各组均尾静脉注射20mg/kg的刀豆蛋白A0.5mL,制备免疫性肝损伤模型。④注射刀豆蛋白A8h后摘眼球取血低温保存,取肝待行光镜检查,以观察肝脏组织病理学改变(常规苏木精-伊红染色),取脾待行淋巴细胞增殖实验(采用四甲基偶氮唑盐法)和流式细胞术以检测T淋巴细胞亚群。各组小鼠血清谷丙转氨酶活性检测按购自南京建成生物研究所的谷丙转氨酶试剂盒说明进行。⑤组间计量资料差异比较采用方差分析。结果:昆明小鼠50只均进入结果分析。①肝脏组织病理学改变:模型对照组可见明显免疫性肝损伤病理改变。玉竹提取物A3个实验组小鼠肝损伤病理改变均不同程度的好于模型对照组。②玉竹提取物A对血清谷丙转氨酶活性的影响:模型对照组血清谷丙转氨酶活性明显高于正常对照组(t=13.8,P<0.01),玉竹提取物A3个实验组血清谷丙转氨酶活性低于模型对照组,尤以玉竹提取物A2g/kg组与模型对照组差异最明显(t=5.62,P<0.01),且存在剂量依赖关系。③玉竹提取物A对T淋巴细胞转化增值的影响:刀豆蛋白A刺激体外培养的各组脾淋巴细胞,模型对照组的刺激指数明显高于正常对照组(t=9.02,P<0.01),玉竹提取物A3个实验组的刺激指数明显低于模型对照组(t=6.99～11.06,P<0.01),且存在剂量依赖关系。④玉竹提取物A对脾组织T淋巴细胞亚群的影响:各组,CD4+T,CD8+T淋巴细胞的数量和比例差异不明显(P>0.05)。结论:①玉竹提取物A具有抑制肝细胞破坏及改善肝脏微循环的作用。②玉竹提取物A可以显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,并呈剂量依赖关系,玉竹提取物A发挥肝保护作用的一个机制可能就是显著抑制T淋巴细胞的转化增殖,减少肝损伤细胞因子的释放,抑制活化增殖的T淋巴细胞对肝细胞的直接细胞毒作用。③在肝损伤的早期可能只是大量免疫细胞聚集于肝脏并且各种分泌及破坏功能增强,而非其数量明显增加。

海珠益肝胶囊对小鼠免疫性肝损伤的影响

目的:进一步证实海珠益肝胶囊对肝损伤小鼠的保肝降酶作用。方法:来用卡介苗+脂多糖(BCG+LPS)造成免疫性肝损伤模型小鼠,观察本品对血清中ALT、AST活力单位、肝脾脏器系数和肝脏病理组织学损伤程度的影响。结果:药物能降低血清中ALT、AST活力单位(P<0.01);减小肝脾肿大及脏器系数(P<0.01);减轻肝组织病理损伤程度。结论:海珠益肝胶囊对BCG+LPS所致肝损伤小鼠有明显保肝降酶作用。

调肝颗粒剂抗免疫性肝损伤的实验研究

目的观察调肝颗粒剂对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法BCG(1×104个活菌)静脉注射致敏小鼠,12 d后静脉给LPS(6μg/只)攻击造成小鼠免疫性肝损伤,4 h后取血和肝脏,测血清AST和ALT并观察肝脏病理变化;乙酰氨基酚腹腔注射(500 mg/kg)致肝损伤,2.5 h后处死小鼠测血清GSH和肝脏MDA。结果给BCG的同时给调肝颗粒剂(20 g/kg)能显著的减轻BCG和LPS所造成的免疫性肝损伤小鼠ALT,AST的升高,减轻肝细胞坏死,促进枯否氏细胞增生,促进肝细胞增生;并能显著减轻对乙酰氨基酚致肝损伤引起的GSH降低,同时减少肝脂质过氧化物生成。结论调肝颗粒剂对BCG加LPS致小鼠免疫性肝损伤有显著的保护作用,这可能与它增加机体的抗氧化能力有关。

百春肝泰灵对小鼠免疫性肝损伤及免疫功能的影响

了解百春肝泰灵对小鼠免疫性肝损伤及免疫功能的影响。方法采用丙酸杆菌（ＣＰ）加脂多糖（ＬＰＳ）诱导小鼠免疫性肝损伤模型和环磷酰胺（Ｃｙ）所致小鼠ＤＴＨ反应增高模型进行观察。结果百春肝泰灵（３、９、２７ｇ·ｋｇ－１，ｑｄ×１０ｄ，ｉｇ）可使免疫性肝损伤小鼠升高的血清ＡＬＴ、ＡＳＴ和肝脏指数降低（Ｐ＜０．０１），并使小鼠肝脏损伤性病理变化减轻；同时能使Ｃｙ所致小鼠增高的ＤＴＨ反应及Ｔ淋巴细胞增殖反应降低（Ｐ＜０．０１）。

沙棘籽油对肝损伤小鼠免疫功能的影响

目的 :研究沙棘籽油的对肝损伤小鼠免疫功能的影响。方法 :采用D 半乳糖胺造成小鼠肝损伤模型 ,观察沙棘籽油对正常及肝损伤小鼠免疫功能的影响。结果 :沙棘籽油能使正常和D GaIN致肝损伤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶菌酶活性、脾淋巴细胞转化和IL 2活性增强。结论 :沙棘籽油能增强小鼠的免疫功能。

乙肝Ⅱ号对小鼠免疫性慢性肝损伤的抗自由基损伤作用

目的:研究乙肝Ⅱ号对免疫性肝损伤小鼠抗自由基的作用及其机理。方法:取异种动物的肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠产生抗肝抗体,形成慢性实验性免疫性肝损伤,观察小鼠血清丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的变化以及乙肝Ⅱ号对MDA、SOD和GSH-PX变化的影响。结果:乙肝Ⅱ号组与模型组相比,小鼠血清MDA含量下降,SOD活力上升,GSH-PX活力上升,变化的程度与用药量呈量效关系,且抗自由基作用优于阳性对照乙肝宁颗粒剂组。结论:乙肝Ⅱ号对免疫性肝损伤小鼠具有抗自由基损伤的作用。

软肝冲剂抗免疫损伤性肝纤维化的实验研究(1)

目的:探讨软肝冲剂治疗肝纤维化的作用机理。方法:制备免疫损伤性肝纤维化模型,以软肝冲剂作治疗组,促肝细胞生长素及秋水仙碱作对照组,观测血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及电镜下肝脏组织的形态学变化。结果:软肝冲剂具有明显降低血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和改善电镜下肝脏组织的形态学作用,且与剂量呈正相关。结论:软肝冲剂具有明显的抗肝纤维化作用。

关于冬虫夏草对乙型肝炎疗效及对免疫性肝损伤保护作用的研究

根据近10多年的研究报导及课题组的研究结果,综述了冬虫夏草(CS)对乙型肝炎的治疗效果及对免疫性肝损伤的保护作用。试验证明,乙型肝炎患者经CS治疗后,HbeAg有较高的阴转率,ALT、AST等肝功能指标明显改善,乏力、纳差等症状也大为好转,患者外周血中的CD3、CD4、CD4/CD8均明显提高。即便发生肝硬化者,经一定疗程CS治疗后,硬化症状减轻,肝纤维化可得到有效控制和减轻。对免疫性肝损伤有很好的保护作用。

丙肝宁颗粒对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察丙肝宁颗粒对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤模型的肝保护作用,并初步探讨其机制。方法:小鼠尾iv BCG 2.5mg/只,对照组给予等量NS。给药自造模之日开始,每日1次,持续10d。末次给药后再次尾iv LPS10μg/只进行攻击,16h后小鼠眶后静脉取血,进行指标检测。结果:丙肝宁1.25、2.5、5.0g/kg3个剂量组均可不同程度地抑制BCG和LPS诱导的小鼠肝、脾指数及血清ALT、AST水平的升高,抑制ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖反应降低和T细胞亚群CD4+/CD8+比值升高,阻止小鼠肝脏病变的发生,且有显著性差异。结论:丙肝宁颗粒对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,且可调节免疫功能的变化。