丹参酚酸B镁对自由基损伤人主动脉内皮细胞的影响

目的研究丹参水溶性成分———丹参酚酸B镁对人主动脉内皮细胞生长增殖的影响和对自由基损伤内皮细胞的影响 ,以进一步了解丹参酚酸B镁的心血管药理作用机理。方法实验中使用第 3～ 6代的人主动脉内皮细胞 (humanaorticendothelialcell,HAEC) ,采用形态学和MTT法观察不同浓度药物对细胞增殖的影响 ;采用葡萄糖 -葡萄糖氧化酶造成的氧自由基损伤细胞模型观察药物的作用 ;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果丹参酚酸B镁 1 0mg/ml和 0 5mg/ml两个剂量对HACE有明显的细胞毒作用(P <0 0 1)。低于 0 2mg/ml的浓度对细胞增殖无不良影响 ;丹参酚酸B镁对自由基损伤细胞有明显的保护作用。电镜结果显示其可以保护线粒体等细胞超微结构。结论丹参酚酸B镁对HAEC细胞毒性较低 ;

丹参酚酸B减压内部沸腾法提取的动力学及相关热力学研究

以提取丹参酚酸B为例,研究了内部沸腾法提取过程的动力学及其相关的热力学。以超声波辅助法提取作为对比,采用一种简单测定提取分配系数的方法,计算了提取过程中的传质系数k,提取过程的活化能及热力学函数·H,·S和·G。实验结果表明：在提取压力为–0.084 MPa、解吸剂乙醇浓度为50%、解吸20 min、提取用水量为物料的10倍及提取温度在40~60℃,丹参酚酸B减压内部沸腾法提取过程在40 s内完成,提取速率比超声波辅助法快135倍。减压内部沸腾法提取过程的传质系数k在0.07~0.09 s-1,远远大于超声波提取的6.37×10·4 s-1;提取过程的活化能·E为7.22 kJ·mol-1。丹参酚酸B减压内部沸腾法提取过程的热力学参数·H为28.68 kJ.mol–1、·S为115.74 J·mol-1、·G为–8.73 kJ·mol-1,为自发过程。该方法是目前报道最快的提取方法之一。

丹参酚酸B在水溶液中的稳定性研究

目的考察不同因素对水溶液中丹参酚酸B稳定性的影响,为丹参酚酸B的生产应用提供实验依据。方法通过正交试验设计,采用HPLC法检测溶液中丹参酚酸B的含量变化考察丹参酚酸B溶液的质量浓度、pH值、温度和保温时间对丹参酚酸B稳定性的影响。结果丹参酚酸B在溶液质量浓度为1mg/mL、pH=2、温度为20℃和保存时间为1d时最稳定。结论为保持溶液中丹参酚酸B稳定性,应尽可能做到低溶液pH值、高丹参酚酸B质量浓度、低温,并且要尽量缩短溶液状态的存放时间。

丹参酚酸B对实验性肾间质纤维化大鼠的保护作用及其机制

目的:探讨丹参酚酸B(Salvianolic-acid B,SA-B)对单侧输尿管结扎(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)所致的肾纤维化大鼠的作用和机制。方法:雄性SD大鼠18只,随机分成3组,每组6只。单侧输尿管结扎建立肾间质纤维化动物模型。SA-B治疗2 w后,光镜、电镜下观察肾组织病理改变;Western blot和免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-cadherin,E-cad)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠光镜下观察肾间质中大量细胞浸润,部分小管扩张,同时部分小管萎缩;电镜下观察肾小管上皮细胞结构松散,混浊,肾间质显著增宽,间质细胞增多;α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.01),E-cad蛋白表达显著下降(P<0.01)。SA-B干预后,上述病理改变显著轻于模型组,α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05),E-cad蛋白表达略有上升(P>0.05)。结论:SA-B通过抑制α-SMA蛋白表达,维持上皮细胞的表型,延缓肾纤维化的发生。

丹参酚酸B盐对内皮素诱导的人肝星状细胞收缩的抑制作用及机制研究

目的以培养的人肝星状细胞(HSC)为研究对象,观察内皮素-1(ET-1)对HSC的收缩作用及丹参酚酸B盐(SA-B)对ET-1的抑制作用,并探讨SA-B抑制HSC收缩的作用环节和可能作用机制。方法采用酶消化、Nycodenz密度梯度离心的方法分离人HSC,以胶原凝胶收缩法观察ET-1对于传代HSC的收缩作用,以及低、中、高3种剂量的SA-B对其不同的干预作用;将ET-1、SA-B直接添加于传代HSC的无血清培养液中,以激光共聚焦显微镜技术观测HSC内钙离子浓度的变化。结果胶原凝胶收缩实验显示,ET-1可诱导HSC收缩(P<0.01);3种剂量的SA-B可明显抑制ET-1诱导的HSC收缩(均P<0.01);加入ET-1后,HSC形态学改变明显,细胞数量减少,但SA-B对这些改变也有抑制。激光共聚焦显微镜下观察,ET-1可刺激细胞内钙离子短暂迅速增加,加入SA-B后,该作用被明显抑制。结论SA-B能显著抑制ET-1诱导的HSC收缩,其抑制收缩的机制与降低HSC内的钙离子浓度有关。SA-B的抑制HSC收缩作用可能是其抗肝纤维化及门脉高压的机制之一。

大鼠静脉注射丹参酚酸B后的药代动力学研究(英文)

目的:建立丹参酚酸B的反相高效液相色谱分析方法,并对其在大鼠体内的药代动力学行为特性进行全面的分析研究。方法:生物样品采用液-液萃取方法,以Hypersil C18ODS色谱柱(200 mm×4 .6 mm,5μm) ,柱温40 ℃,流动相:乙腈水=20 80(含0 .25 mol/L乙酸胺) ,用磷酸调pH至4 .0 ,流速:1 .0 mL/min;紫外检测波长:328 nm。结果:鼠尾静脉给予丹参酚酸B1 .6、3 .2、6 .4 mg/kg后,结果显示鼠α相半衰期为(3 .1±0 .1) min,β相半衰期为(31 .5±3 .2) min。大鼠尾静脉给予丹酚酸B后,组织中浓度依次为(高→低) :心、肝、肺、小肠、肾脏、脾、胃、卵巢和脑组织。丹参酚酸B在粪便和尿中24 h及胆汁中2 h的累积排泄百分数分别约为1.43 %、0.77 %及8 .03%。丹参酚酸B人血浆蛋白结合率和大鼠血浆蛋白结合率分别为89 .2 %±1 .8 %和92 .5 %±1 .5 %。结论:本法准确、稳定、灵敏度高,适合生物样品中丹参酚酸B的分析。丹参酚酸B在大鼠体内消除速度快,血浆蛋白结合率较高,胆汁为其主要排泄途径。

丹参酚酸B对转化生长因子β_1和血小板衍生生长因子-BB在肝星状细胞内信号传导的影响

目的探讨丹参酚酸B(SA-B)抗肝纤维化作用机制。方法分离大鼠肝星状细胞(HSC),于无包被塑料培养皿中原代培养7天,继以10-6mmol/L SA-B孵育,再加10ng/ml的转化生长因子β1(TGF-β1)或血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激。以Western blot法观察SA-B对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC内ERK蛋白及其磷酸化表达的影响及对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC表面TGF-β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)或PDGF受体β(PDGFR-β)表达的影响。结果SA-B可抑制原代正常培养9天的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1/2的磷酸化;对正常培养的HSC和TGF-β1刺激的HSC表面TβRⅠ和TβRⅡ的表达无明显影响。SA-B抑制原代正常培养9天的HSC和经PDGF-BB刺激的HSC中PDGFR-β的表达,但对PDGF-BB刺激的HSC中ERK1/2磷酸化没有明显作用。结论SA-B抑制TGF-β1诱导的HSC内ERK信号传导通路。这一抑制作用与HSC上TβR的表达无关,也与PDGF-BB在HSC内的ERK信号传导通路无关。SA-B对PDGF-BB在HSC内的信号传导通路的抑制作用在于抑制了HSC上PDGF受体的表达。

黄芪甲苷联合丹参酚酸B对肝细胞过氧化损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨黄芪甲苷联合丹参酚酸B对HHL-5肝细胞过氧化损伤的保护作用机理。方法:采用1640完全培养基培养HHL-5细胞株,3次传代后分为正常组、过氧化损伤模型组、黄芪甲苷组、丹参酚酸B组、黄芪甲苷联合丹参酚酸B组。采用过氧化氢诱导细胞过氧化损伤,丹参酚酸B和黄芪甲苷给药浓度均是10-5mol/L。qRT-PCR法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA的表达水平,细胞爬片免疫组化法检测TLR4、NF-κB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中TNFα和SOD的含量。结果:与正常组比较,模型组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著增加,细胞上清液中TNFα的含量明显升高,SOD的含量明显降低(P<0.001)。与模型组比较,丹参酚酸B和黄芪甲苷干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.01)。与黄芪甲苷或丹参酚酸B组比较,黄芪甲苷联合丹参酚酸B干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.05)。结论:丹参酚酸B和黄芪甲苷能保护肝细胞的过氧化损伤且二者具有协同作用,该保护作用与抑制TLR4-NF-κB-TNFα炎症损伤通路相关。

丹参酚酸B调节缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的量效时效关系研究

目的:探讨丹参酚酸B不同给药浓度和不同给药时间窗对缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的调节作用。方法:分离纯化出生1~3 d Wistar乳鼠心肌细胞、建立体外缺氧细胞模型。丹参酚酸B(Sal B)大、中、小剂量浓度分别为10^(-5)mol/L、10^(-6)mol/L和10^(-7)mol/L并按照缺氧前6 h、缺氧同时和缺氧后6 h 3种给药方式进行干预。qRT-PCR法检测心肌细胞tool样受体4 (TLR4)和核因子κB(NFκB) mRNA的表达,细胞爬片免疫组化法检测TLR4和NFκB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。结果:与正常组比较,缺氧模型组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα浓度均显著升高(P <0. 05或P <0. 01)。和缺氧模型组比较,丹参酚酸B预防给药和同时给药大、中剂量组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα的浓度均显著下降(P <0. 05或P <0. 01)。预防给药大剂量组下降最显著(P <0. 01)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路在缺氧损伤6h即明显激活。SalB预防或同时干预对缺氧损伤的心肌细胞有明显的保护作用,该作用与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎性反应损伤通路相关。SalB具有量效和时效性,以大剂量预防给药效果最佳。

丹参酚酸B上调AMPK改善糖尿病小鼠血管内皮功能

目的观察丹参酚酸B(Sal B)对db/db小鼠血管功能的影响及机制。方法 20只雄性db/db小鼠随机分为对照组及Sal B组,每组10只;另选取10只同龄雄性C57BL/Ks J小鼠作为正常对照组。Sal B组用Sal B以100 mg/(kg·d)的剂量进行灌胃;db/db对照组和C57BL/KsJ对照组给予等体积生理盐水灌胃,每周测体质量、血压、心率及空腹血糖,干预6周后取胸主动脉观察:血管舒张功能,血管内膜超氧阴离子和NO水平;e NOS,p-e NOS,AMPK,p-AMPK水平。结果 Sal B可显著降低db/db小鼠体质量,空腹血糖;对血压及心率无显著影响;可减少超氧阴离子水平,增加NO水平,改善血管内皮依赖性舒张功能;增加p-e NOS及p-AMPK的水平。结论 Sal B可降低db/db小鼠血管超氧阴离子水平,增加NO水平,从而改善血管内皮依赖性舒张功能,其机制可能与其激活AMPK通路有关。

丹参酚酸B调控PKD1-HIF-1α-VEGF通路促心肌梗死大鼠血管新生的作用

目的探讨丹参酚酸B(SAB)是否通过调控蛋白激酶D1(PKD1)、缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)的表达而促心肌梗死大鼠血管新生。方法 40只♂Wistar大鼠被随机分为假手术(Sham)、心梗模型(MI)、SAB和CID755673阻断剂(CID)组。应用HE、Masson和透射电镜染色分析心肌组织和血管的形态学变化,免疫荧光、免疫组化和免疫印迹染色分析心肌组织中PKD1、HIF-1α、VEGF和Ⅷ蛋白的表达。结果 SAB用药可以减少MI大鼠的肉芽组织和瘢痕组织,降低心肌的胶原占比,使缺血受损引发的心肌纹理模糊、闰盘断裂、线粒体萎缩、微血管管腔塌陷恢复为结构清晰完整的心肌纹理、闰盘和微血管管腔及饱满的线粒体结构;并可以上调心肌组织中PKD1、HIF-1α、VEGF和Ⅷ因子蛋白的表达。注射CID后SAB的作用被明显抑制。结论 SAB可能通过调控PKD1-HIF-1α-VEGF通路而促心肌梗死大鼠损伤后心肌组织的血管新生。

丹参酚酸B抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症损伤通路防治心肌细胞的缺氧损伤

目的:探讨TLR4-NFκB-TNFα损伤通路和HSP70在体外缺氧培养心肌细胞中的变化规律以及丹参酚酸B的调节作用。方法:分离纯化出生1～3天Wistar乳鼠心肌细胞并复制体外缺氧培养心肌细胞模型。丹参酚酸B(SalB)大、中、小剂量浓度分别为10-5mol.L-1、10-6mol.L-1和10-7mol.L-1并在缺氧培养前6h进行干预。细胞爬片免疫组化法检测tool样受体4(TLR4)和核因子κB(NFκB)蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)和热休克蛋白70(HSP70)的浓度,分光光度计法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与正常组比较,缺氧培养6h后心肌细胞上清液中MDA、LDH、TNFα含量均显著升高(3.71±0.84)VS(1.78±0.56)(,561.41±129.31)VS(36.80±10.22)(,89.39±21.65)VS(49.42±4.16),P<0.055或P<0.051);心肌细胞TLR4和NFκB蛋白的表达量也显著升高(P<0.055或P<0.051)。与单纯缺氧培养组比较,丹参酚酸B大剂量组MDA含量显著下降(1.94±0.49)VS(3.71±0.84),P<0.051;大、中、小剂量组LDH含量均显著下降(P<0.051);大、中剂量组TNFα含量显著下降(P<0.055);丹参酚酸B大、中、小剂量组NFκB及TLR4蛋白的表达面积或强度均有明显的下降(P<0.055或P<0.051)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎症通路在缺氧培养6h后即明显激活,该通路的激活在缺氧损伤初期(6h内)是不依赖HSP70存在的。丹参酚酸B预防给药对缺氧培养的体外心肌细胞炎症损伤有明显的保护作用。该作用可能与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症通路有关。

丹参酚酸B的代谢产物研究

目的:分离鉴定大鼠灌胃丹参酚酸B后尿液中的代谢产物。方法:大鼠尿液的醋酸乙酯萃取物用聚酰胺柱色谱和制备HPLC方法分离纯化;根据谱学数据进行结构鉴定。结果:从大鼠尿液醋酸乙酯萃取物中分离鉴定了5个化合物,分别是8-羟基-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮(1),1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(2),反式-3-(3-羟基苯基)丙烯酸(3),1H-吲哚-2-羧酸(4),8-氨基喹啉-2(1H)-酮(5)。结论:化合物1,2,4和5为首次从灌胃丹参酚酸B大鼠尿液中分离得到。

丹参酚酸B通过激活过氧化体增殖物激活型受体γ抑制树突状细胞免疫成熟的作用及其机制

研究背景树突状细胞(DCs)是体内功能最强大的抗原递呈细胞,具有独特的激活初始T淋巴细胞的功能,是启动和调控特异性免疫应答的中心环节。近年来的大量基础和临床研究证实,动脉粥样硬化(As)是一种慢性炎症和免疫性疾病,DCs直接或间接参与As的发生发展。以DCs为作用靶点可能是干预As的有效方法。丹参酚酸B(Sal B)是自中药丹参中提取出的水溶性单体,是丹参的重要药理活性成份,化学结构明确,性质稳定。以往的研究证实,Sal B对心、脑、肝、肾等多个器官具有重要的保护作用。近期的研究还发现,Sal B具有抗炎症、抗免疫反应的作用,能够影响As的发生发展,但具体作用机制和靶点还不明确。目的从免疫炎症的角度探讨Sal B对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核细胞源DCs免疫功能成熟的影响,进一步研究其作用机制,为临床As的防治提供新靶点和新思路。方法培养人单核细胞源DCs,Sal B预处理后,再与ox-LDL共孵育。流式细胞术检测DCs表面分子(CD40、CD1a、CD86和HLA-DR)的表达,ELISA法检测细胞培养上清液细胞因子(IL-12和TNF-α)的浓度,Western blot法检测PPARγ和MAPKs的蛋白表达,RT-PCR法检测PPARγ的基因表达,Luciferase报告系统检测PPARγ的DNA结合活性。结果与ox-LDL组相比,Sal B预处理组DCs的表面分子CD40、CD1a、CD86和HLA-DR的表达明显下降(P<0.05),细胞因子IL-12和TNF-α的浓度明显降低(P<0.01),证明Sal B预处理明显抑制ox-LDL诱导的人单核细胞源DCs的免疫功能成熟。与ox-LDL组相比,Sal B预处理组DCs的MAPKs的蛋白表达明显下调,主要是P38蛋白表达明显降低(P<0.05),表明Sal B预处理明显抑制ox-LDL诱导的人单核细胞源DCs的MAPKs蛋白表达。进一步采用siRNA技术使PPARγ基因沉默后,Sal B预处理抑制ox-LDL诱导的人单核细胞源DCs表面分子、细胞因子和MAPKs蛋白表达的作用被明显翻转,提示Sal B通过影响PPARγ抑制DCs的免疫功能成熟。接下来采用Luciferase技术证实Sal B可以特异的上调PPARγ的DNA结合活性,是转录后的水平,而不是mRNA水平的改变。结论 Sal B通过激活PPARγ抑制ox-LDL诱导的人单核细胞源DCs免疫功能成熟,这可能是Sal B抑制As的一个机制。

空间环境中丹参酚酸B镁对人主动脉内皮细胞的保护作用

探讨中药丹参酸B镁在空间环境下对接种低温细胞生存系统中人主动脉内皮细胞的作用,为预防空间环境对宇航员心血管功能的损伤提供依据。将人主动脉内皮细胞加入丹参酚酸B镁接种于低温细胞生存系统中,搭载于第22颗返回式卫星。经过18d空间飞行,将回收卫星返回后的细胞进行第17,24,30d光镜照相,Giemsa染色及细胞计数。结果显示:加药组的细胞在形态上及增殖数目上均优于对照组,表明丹参酚酸B镁能够改善空间环境中人主动脉内皮细胞的生存状况,减轻宇宙射线、微重力、微磁场对细胞的损伤程度。

不同品种丹参中丹参酚酸B含量比较

目的建立丹参酚酸B的HPLC含量测定方法,比较不同品种丹参中丹参酚酸B含量。方法采用RP-HPLC方法测定丹参酚酸B含量。结果标准曲线方程y=981230 x-342049（r=0.999 0）,表明丹参酚酸B在11.96~29.9 mg.mL-1线性良好,日内精密度小于1%,日间精密度小于2%,重现性试验RSD%为1.95%（n=3）,平均加样回收率为99.8%。测得不同品种丹参中丹参酚酸B含量分别为：红参3.92%（RSD=0.49%,n=3）,一窝团5.52%（RSD=0.49%,n=3）,系参7.64%（RSD=0.49%,n=3）。结论 RP-HPLC方法测定丹参酚酸B含量简便可靠,可做为微量样本丹参中丹参酚酸B含量的快速测定方法;不同品种丹参中丹参酚酸B含量差异较大,系参含量最高,比红参高了近2倍,具有较高的商业价值。

丹参酚酸B灌胃的免疫性自然流产模型小鼠流产情况、胎盘和脾脏组织淋巴细胞及炎症因子表达观察

目的观察丹参酚酸B (Salvianolic acid B, Sal B)灌胃免疫性自然流产模型小鼠的流产情况、胎盘和脾脏组织淋巴细胞及胎盘组织炎症因子的表达情况。方法 取动情期CBA/J (H-2k)雌鼠与CBA/J (H-2k)雄鼠交配获得妊娠CBA/J (H-2k)雌鼠10只为CBA/J (H-2k)×CBA/J (H-2k)正常免疫耐受妊娠组(正常妊娠组);动情期雌鼠CBA/J (H-2k)与DBA/2(H-2d)雄鼠交配制作免疫性自然流产小鼠模型,最终获得免疫性自然流产模型小鼠妊娠鼠52只,将免疫性自然流产模型小鼠妊娠鼠随机分为模型组、治疗组各26只。从妊娠第0.5天每日早9点,正常妊娠组、模型组蒸馏水0.5 mL灌胃,治疗组100 mg/kg的Sal B灌胃,1 d/次至妊娠第12.5天。妊娠第 12.5 天观察三组雌鼠流产情况。妊娠第12.5天处死三组雌鼠,取脾脏组织流式细胞仪检测T细胞、B细胞、巨噬细胞、NK细胞,取胎盘组织检测CD3 +T细胞、NK细胞、巨噬细胞、B细胞、CD4 +T细胞、CD8 +T细胞,RT-PCR法检测胎盘组织NF-κ B、中TNF -α、Toll样受体2(TLR-2)、TLR-4、TLR-7 mRNA。结果 治疗组、模型组、正常妊娠组流产率分别为6.00%±11.16%、21.00%±13.37%、14.00%±9.43%,与正常妊娠组比较,模型组流产率升高,与模型组比较,治疗组流产率降低( P 均<0.05)。三组脾脏组织T细胞、B细胞、巨噬细胞、NK细胞表达比例间差异均无统计学意义( P 均>0.05)。与模型组比较,治疗组胎盘组织Nk细胞、CD8 +T细胞比例降低( P 均<0.05)。与正常妊娠组比较,模型组胎盘组织TLR-2、TLR-4、TLR-7 mRNA相对表达量均升高( P 均<0.05);与模型组比较,治疗组胎盘组织NF-κB 、TNF -α、TLR-2、TLR-4、TLR-7 mRNA相对表达量均降低( P 均<0.05)。结论 Sal B灌胃的免疫性自然流产模型小鼠流产率降低。Sal B灌胃的免疫性自然流产模型小鼠胎盘组织Nk细胞、CD8 +T细胞比例降低,NF-κB 、TNF -α、TLR-2、TLR-4、TLR-7 mRNA相对表达量均降低。Sal B可能通过减轻的胎盘炎症反应进一步发挥免疫调节作用来减轻免疫性自然流产模型小鼠的流产。

丹参酚酸B和姜黄素抑制大鼠肝星状细胞细胞外信号调节激酶的磷酸化

目的研究丹参酚酸B(SAB)和姜黄素(Cur)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、活化和细胞外信号调节激酶(ERK)的作用。方法培养大鼠HSC-T6,使用SAB和Cur处理细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响。收集裂解细胞并抽提细胞总蛋白,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,采用Western blot法检测药物对细胞表达α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原、ERK和磷酸化ERK的影响。结果Cur剂量依赖性地抑制大鼠HSC的增殖和活化,SAB和Cur显著降低α-SMA的表达水平(P<0.01);SAB对I型胶原的分泌无影响(P>0.05)而Cur显著减少I型胶原的分泌(P<0.05)。SAB和Cur对ERK表达水平都没有显著影响(P>0.05),但是显著降低了磷酸化ERK的表达水平(P<0.01 vs.P<0.05)。结论SAB和Cur能够抑制HSC的增殖、活化和ERK的磷酸化。

丹参酚酸B水提取动力学研究进展

论述了丹参中丹参酚酸B水提取过程的动力学因素,着重分析了提取温度、提取时间、药材粒度等因素对丹参酚酸提取过程的影响,并借助现有模型来进行描述.

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内细胞外信号调节激酶信号转导通路的抑制作用(英文)

目的:探讨丹参酚酸B盐(salvianolic acid B,SA-B)对转化生长因子β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)内细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号转导通路的影响。方法:采用原位灌流酶消化及Nycodenz密度梯度离心的方法分离正常大鼠HSC,将TGF-β1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中。蛋白印记法检测HSC内磷酸化和总ERK,以及有丝分裂原激活蛋白激酶激酶MEK、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶Raf、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:SA-B可抑制正常原代HSC及TGF-β1刺激的HSC内ERK上游激酶MEK的磷酸化;而对正常原代HSC及TGF-β1刺激的HSC内MEK上游激酶Raf-1的磷酸化无明显抑制。SA-B对TGF-β1刺激的HSC内α-SMA表达有明显的抑制作用,SA-B与ERK阻断剂联用,几乎接近完全阻断α-SMA的表达。SA-B对正常培养的HSC和经TGF-β1刺激的HSCⅠ型胶原蛋白的合成都有明显的抑制作用。结论:SA-B抑制TGF-β1刺激的HSC内ERK信号转导通路的作用环节在于抑制了MEK的磷酸化。SA-B通过抑制TGF-β1的ERK信号转导通路,减少了因HSC活化导致的α-SMA表达和Ⅰ型胶原蛋白合成增加。