乳康饮对裸鼠乳腺癌组织PI3K/Akt信号通路相关因子表达的影响

目的:观察中药乳康饮对移植瘤小鼠乳腺癌PI3K/AKT信号通路相关因子表达的影响,探讨其抑制乳腺癌的作用机制。方法:60只BALB/c裸鼠乳腺原位种植人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,建立乳腺癌移植瘤自发性转移模型,随机分成6组,分别为模型对照组,5-FU对照组、疏肝理气组、化痰散瘀组、益气健脾组、乳康饮组,每组10只。分别给予生理盐水、5-FU、乳康饮及各拆方(疏肝理气、化痰散瘀、益气健脾)药物灌胃,灌胃液体量均为0.4 mL/(d·只),均1次/d,连续6周后将裸鼠处死,检测裸鼠第2、3对乳腺原位肿瘤PI3K、Akt、PTEN、SHIP蛋白水平及mRNA的表达。结果:乳康饮及各拆方组药物对PI3K、Akt mRNA的表达均起到抑制作用,对PTEN、SHIP mRNA表达有促进作用,与模型对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05或P<0.01),而益气健脾组和乳康饮全方效果更具优势;裸鼠乳腺癌组织PI3K、Akt、PTEN、SHIP蛋白水平的表达的检测结果,乳康饮组及各拆方组对PI3K、Akt蛋白的表达均有不同程度的抑制作用,对抑癌因子PTEN、SHIP蛋白的表达有促进作用,各拆方组之间也存在统计学差异,乳康饮的作用明显优于各拆方组(P<0.05或0.01)。结论:乳康饮可能通过抑制PI3K、Akt的表达,促进PTEN、SHIP的表达,调控PI3K/AKT信号通路,对乳腺癌的发生发展起到抑制作用。

乳康饮对裸鼠乳腺癌自发性转移模型淋巴管生成的干预作用

目的观察复方中药乳康饮对乳腺癌移植瘤小鼠淋巴管生成和淋巴结转移的影响,探讨其抗肿瘤转移机制。方法 30只裸鼠乳腺原位种植人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,建立乳腺癌移植瘤自发性转移模型,随机分成6组,分别为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU)对照组,乳康饮小、中、大剂量组以及乳康饮加5-FU组,每组5只。模型组给予生理盐水0.4 mL/d灌胃;5-FU对照组给予30 mg/(kg.d)5-FU腹腔注射;乳康饮小、中、大剂量组分别给予乳康饮18、45、90 g/(kg.d)灌胃;乳康饮加5-FU组给予5-FU 30 mg/(kg.d)腹腔注射,同时给予乳康饮45 g/(kg.d)灌胃,均每天1次,连续6周。用药后检测肿瘤体积、抑瘤率和腋窝淋巴结转移抑制率;免疫组化法检测乳腺癌组织微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD)和血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)、血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor re-ceptor-3,VEGFR-3)的表达。结果与模型组比较,各用药组肿瘤体积明显减小,VEGF-C和VEGFR-3表达水平显著下调,LMVD明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);其中以乳康饮加5-FU组抑瘤率及腋窝淋巴结转移抑制率最高,LMVD最低,与其他用药组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论乳康饮可能通过干预VEGF-C及VEGFR-3的表达,影响淋巴管的生成,抑制乳腺癌淋巴转移。

乳康饮干预裸鼠乳腺癌组织Ang-2表达抑制淋巴转移的作用

目的观察乳康饮对移植瘤裸鼠乳腺癌组织Ang-2、Ang-2mRNA表达的影响,探讨复方中药抑制乳腺癌转移的机制。方法 BALB/c裸鼠30只,乳腺原位种植人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,建立乳腺癌移植瘤自发性转移模型后随机分成6组,分别为疾病模型组,5-FU对照组,乳康饮低、中、高剂量组,乳康饮加5-FU组,每组5只裸鼠。疾病模型组给予生理盐水灌胃;5-FU对照组给予腹腔注射;乳康饮低、中、高剂量组分别给予乳康饮不同剂量灌胃;乳康饮加5-FU组给予5-FU腹腔注射,同时给予乳康饮中剂量灌胃,均每天1次,连续6周。用药后检测肿瘤直径和腋窝淋巴结转移抑制率,免疫组化、PCR技术分别检测乳腺癌组织Ang-2的表达,分析各组的表达差异。结果裸鼠乳腺原位均有实质性肿瘤生长及腋窝淋巴结转移,各药物组肿瘤直径与疾病模型组比较明显减小(P<0.05),各药物组比较差异无统计学意义(P>0.05);乳康饮+5-FU组抑瘤率明显高于其他各药物组(P<0.05)。各药物组对淋巴结转移均有抑制作用,乳康饮各剂量组的淋巴转移抑制率与5-FU组差异无统计学意义(P>0.05),但与乳康饮加5-FU组有显著性差异(P<0.01)。免疫组化结果显示Ang-2在疾病模型组的表达与乳康饮中、低剂量组差异无统计学意义(P>0.05),与乳康饮高剂量组、5-FU对照组、乳康饮加5-FU组比差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。PCR结果显示疾病模型组裸鼠乳腺癌组织Ang-2mRNA的相对表达量均高于各药物组,差异有统计学意义,与乳康饮高、中、低剂量组比(P<0.05),与5-FU对照组、乳康饮加5-FU组(P<0.01)。结论乳康饮可能通过干预Ang-2蛋白和基因表达,干扰Ang-2/Tie2信号通路,抑制肿瘤组织的淋巴管生成,从而达到抑制乳腺癌淋巴转移的作用。

自拟乳康饮治疗乳痈乳疽60例

目的:观察乳康饮治疗乳痈、乳疽的疗效。方法:全部患者均采用乳康饮加减治疗。结果:治疗效果显著,且不影响产妇哺乳。结论:乳康饮配方合理,是治疗乳痈、乳疽的有效方法。

乳康饮及拆方对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的研究乳康饮及拆方对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法采用乳康饮及拆方含药血清处理人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别在24、48、72h时间点,用cell counting kit-8(CCK-8法)检测乳康饮及拆方在不同时间点对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,FCM法(流式细胞术)检测乳康饮及拆方诱导MDAMB-231细胞凋亡。结果各组中药处理48h后,细胞增殖出现明显抑制,抑制率分别为46.05%、31.85%、41.24%,相对氟尿嘧啶组抑制作用时间有明显延迟,乳康饮组在48h与氟尿嘧啶组抑制率之间差异无统计学意义(P=0.076)。各处理组48h凋亡率分别为40.7%、16.3%、23.2%、57.5%,比空白对照组凋亡率显著增加(P<0.05),乳康饮组与氟尿嘧啶组凋亡率差异无统计学意义,但高于拆方2组(P=0.000)。结论乳康饮及其拆方能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。

乳康饮含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的作用

目的探讨乳康饮及拆方各组含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的抑制作用。方法乳康饮拆方为疏肝理气组和益气健脾组并制作动物含药血清,以各组含药血清处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系,培养48h后,应用划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分别测定乳康饮及拆方组含药血清对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果乳康饮及及拆方含药血清能够显著抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭,与空白血清对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),乳康饮全方组效果明显优于疏肝理气和益气健脾拆方组(P均<0.05)。结论乳康饮及拆方含药血清能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。

乳康饮对乳腺癌患者αβT和γδT细胞的调控及生活质量的影响

目的观察乳康饮对乳腺癌化疗患者αβT、γδT细胞和生活质量的影响,探讨中药调控细胞免疫提高生活质量的作用。方法选取2019年1月—2019年12月期间山东第一医科大学第二附属医院乳腺外科收治的乳腺癌化疗患者128例,抽签法随机分为观察组86例,对照组42例,所有患者采用AC-T方案化疗8个周期。观察组化疗同步给予乳康饮冲服,1剂/d,连服10 d。检测化疗前、后外周血αβT、γδT细胞,Karnofsky评分及PSQI指数的变化。结果两组患者化疗前后αβT、γδT细胞均有不同程度的改变,但观察组化疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05),对照组化疗后CD3^(+)、CD4^(+)、γδT细胞较化疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后对照组CD3^(+)、γδT细胞较观察组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后两组患者karnofasky(卡式,KPS)评分及匹兹堡睡眠质量指数(Pittsbuigh Sleep Quality Indes,PSQI)的7个维度化疗前后均出现变化,观察组化疗后PSQI的睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍3个维度评分较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);对照组化疗后睡眠质量、睡眠时间、入睡时间、睡眠效率、催眠药物、睡眠障碍、日间功能7个维度评分较治疗前升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);化疗后对照组与观察组比较,睡眠时间、入睡时间、睡眠效率、催眠药物、睡眠障碍5个维度的评分升高,差异有统计学意义(P<0.01),睡眠质量、日间功能2个维度的评分升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组化疗前后KPS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),对照组化疗后KPS评分较化疗前下降,差异有统计学意义(P<0.01),对照组化疗后KPS评分较观察组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳康饮显著拮抗化疗对乳腺癌患者部分αβT细胞和γδΤ细胞的损害,改善患者体质和睡眠,提高患者的生活质量。

植物凝集素、唑来膦酸及乳康饮扩增γδT细胞对三阴性乳腺癌细胞的杀伤

目的观察乳康饮(Ru Kang Yin,RKY)刺激γδT细胞增殖对乳腺癌细胞MDA-MB-231的杀伤作用,为中医药治疗乳腺癌提供依据。方法实验分为以下4组,Ⅰ组:外周血单个核细胞(PBMC)对照组;Ⅱ组:PBMC+植物凝集素(PHA)组;Ⅲ组:PBMC+唑来膦酸(ZOL)组;Ⅳ组:PBMC+RKY组。在各组培养0 d和14 d时,用流式细胞术检测各组γδT细胞占PBMC的百分比。将用免疫磁珠分选的γδT细胞与荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的乳腺癌MDA-MB-231细胞以10∶1的比例共培养,测定γδT细胞对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤力。结果培养0 d时,Ⅰ组~Ⅳ组γδT细胞占PBMC百分比分别为(3.81±0.27)%、(4.19±0.41)%、(3.94±0.13)%、(4.16±0.11)%,各组间差异无统计学意义(F=1.462,P=0.296)。培养14 d时,Ⅰ组~Ⅳ组γδT细胞占PBMC百分比分别为(4.70±0.29)%、(31.09±1.95)%、(25.91±3.77)%、(28.84±2.54)%,各组间差异有统计学意义(F=71.985,P=0.000)。Ⅰ组~Ⅳ组对MDA-MB-231细胞的杀伤率分别为(1.17±0.86)%、(1.56±0.13)%、(1.47±0.09)%、(2.01±0.16)%,各组间差异有统计学意义(F=24.649,P=0.000)。结论RKY可以刺激γδT细胞增殖,提高对MDA-MB-231细胞的杀伤力,为乳腺癌的中医药治疗提供实验依据。

乳康饮对乳腺癌术后化疗患者免疫功能的影响

目的观察乳康饮对乳腺癌术后化疗患者免疫功能影响情况。方法选取120例乳腺癌术后化疗患者,按照就诊顺序,依次利用随机序列软件生成的随机序列数将所选患者分为观察组(60例)和对照组(60例)。对照组采取吡柔比星、环磷酰胺序贯多西他赛(4AC→4T)方案治疗,观察组在此化疗方案基础上联合乳康饮治疗,在完成8个治疗周期后对比两组患者外周血淋巴细胞亚群、免疫球蛋白变化及不良反应发生情况。结果疗程结束后,观察组CD3+、CD4^+、NK细胞和CD4^+/CD8^+比值水平高于对照组,CD8^+细胞水平较对照组低(P<0.05)。对照组CD8^+细胞和CD4^+/CD8^+比值水平低于治疗前(P<0.05),但CD3+、CD4^+、NK细胞水平化疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组IgA、IgM、IgG水平均低于治疗前(P<0.05)。但治疗后观察组IgA、IgM、IgG水平高于对照组水平(P<0.05)。治疗后观察组出现不良反应及骨髓抑制情况总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳康饮可明显改善乳腺癌术后经4AC→4T方案化疗患者的免疫功能。

乳康饮大鼠含药血清中主要药源性成分的初步分析

目的:分析乳康饮含药血清中药源性成分,以探讨乳康饮发挥药效的物质基础。方法:大鼠灌胃给予乳康饮后制备含药血清,以橙皮苷、莪术醇及柴胡皂苷D 3种物质作为对照品,采用高效液相法比较乳康饮制剂、含药血清及对照品的色谱图,分析判断移行入血的成分,并建立大鼠含药血清3种物质的含量测定方法。结果:在不同的色谱分离条件下,乳康饮含药血清中具有与橙皮苷、莪术醇及柴胡皂苷D 3种对照品相同保留时间的色谱峰,提示这3种物质成分为入血成分。血清中橙皮苷皮、莪术醇、柴胡皂苷D的平均含量分别为18.766、5.952、7.922 mg/L。结论:橙皮苷、莪术醇、柴胡皂苷D可能为乳康饮重要的药效成分。

乳康饮治疗妇女乳腺增生188例

运用自拟乳康饮,以疏肝理气,调理冲任,活血行滞,消癖散结,治疗妇女乳腺增生188例,总有效率为100％。

乳康饮对裸鼠乳腺癌组织VEGF-C/D、VEGFR-3 mRNA表达的影响

目的:观察中药乳康饮对移植瘤小鼠乳腺癌血管内皮生长因子C/D(VEGF-C/D)、血管内皮生长因子受体(VEGFR-3)mRNA表达的影响,探讨其抑制乳腺癌转移的机制。方法:30只BALB/c裸鼠乳腺原位种植人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,建立乳腺癌自发性转移模型,随机分为模型对照组,5-FU对照组,乳康饮小、中、大剂量组,乳康饮+5-FU组,每组5只。模型对照组给予0.9%氯化钠溶液0.4mL/d灌胃;5-FU对照组给予5-FU 30mg·kg-1·d-1腹腔注射;乳康饮小、中、大剂量组分别给予乳康饮18、45、90g·kg-1·d-1灌胃;乳康饮+5-FU组给予5-FU注射液30mg·kg-1·d-1腹腔注射,同时给予乳康饮45g·kg-1·d-1灌胃,均每天1次,连续6周。用药后检测肿瘤质量和腋窝淋巴结转移抑制率,肿瘤组织VEGF-C/D、VEGFR-3基因的表达。结果:乳康饮各剂量组及乳康饮+5-FU组肿瘤质量与模型对照组比较明显减小(P<0.01),乳康饮+5-FU组抑瘤率及腋窝淋巴结转移抑制率明显高于其他药物组(P<0.05)。乳康饮各剂量组VEGF-D mRNA表达显著下调,与模型对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。乳康饮大剂量组和乳康饮+5-FU组VEGF-C mRNA、VEGFR-3 mRNA表达量下调,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:乳康饮可能通过干预VEGF-C/D、VEGFR-3 mRNA的表达,影响淋巴管的生成,抑制乳腺癌淋巴转移。

乳康饮抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

目的探讨复方中药乳康饮对体外培养的人乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法乳康饮不同浓度(1.125、2.25、4.5、9.0和18.0mg/ml)处理MDA-MB-435S细胞至对数生长期。MTT法筛选最佳药物处理浓度和时间的组合,计算抑制率。流式细胞技术检测MDA-MB-435S细胞的凋亡。结果乳康饮对MDA-MB-435S细胞增殖的抑制率随浓度的增加而增高(P<0.01),同时可以阻滞细胞周期于G2～M期,而且随剂量的增大,作用时间的延长,阻滞作用也增强。乳康饮诱导MDA-MB-435S细胞凋亡率较对照组显著增加(P<0.01)。结论乳康饮可抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖,促进细胞凋亡。

乳康饮及拆方含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞Hippo信号通路的作用

目的:探讨乳康饮及拆方含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞Hippo信号通路效应分子YAP/TAZ的作用。方法:乳康饮及拆方为疏肝理气组、益气健脾组含药血清分别与MDA-MB-231细胞共培养,Western Blot法检测各组细胞中Hippo通路关键蛋白YAP、p-YAP、TAZ、p-TAZ的表达,细胞免疫荧光分析乳康饮及拆方对YAP/TAZ蛋白细胞内核定位的影响。YAP抑制剂维替泊芬(VP)处理MDA-MB-231细胞,TUNEL实验检测细胞凋亡,Western Blot法检测VP对MDA-MB-231细胞中YAP/TAZ靶基因以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,乳康饮组及疏肝理气组可下调YAP、TAZ蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),上调p-YAP127S、p-YAP397P、p-TAZ的表达(P<0.05)。免疫荧光检测乳康饮组及疏肝理气组能抑制MDA-MB-231细胞中YAP蛋白在细胞核内的聚集。VP 12μmol/L能够诱导MDA-MB-231细胞凋亡,下调Hippo通路YAP、TAZ、AXL、TEAD的表达(P<0.01),上调Cleaved PARP蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:乳康饮含药血清能显著抑制乳腺癌MDAMB-231细胞Hippo通路关键蛋白YAP、TAZ表达,促进YAP、TAZ的磷酸化,并抑制YAP蛋白在细胞核内的聚集。VP能够通过下调YAP/TAZ及其下游与细胞增殖、凋亡相关靶基因的表达,诱导MDA-MB-231细胞凋亡,Hippo/YAP可能是乳康饮治疗乳腺癌的重要靶点之一。

乳康饮活化γδT细胞对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤作用

有研究结果显示乳康饮(Ru Kang Yin, RKY。由青皮、柴胡、莪术、薏苡仁、茯苓、黄芪组成。)能够抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、诱导其凋亡[1]。本研究以合适浓度的RKY作用于外周血单个核细胞(peripheral blood mononclear cells, PBMC), 收集诱导、增殖后的γδT细胞为效应细胞, 以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231作为靶细胞, 观察增殖的γδT细胞对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的杀伤效应。

自拟消核康乳饮加味治疗乳腺小叶增生病84例临床观察

目的:观察观察自拟消核康乳饮加味治疗乳腺小叶增生病的临床疗效。方法:将126例乳腺小叶增生患者随机分成治疗组纪对照组进行观察。结果:治疗组总有效率100%,对照组总有效率76.2%。治疗组有效率明显高于对照组(P<0.01)。结论:自拟消核康乳饮加味治疗乳腺小叶增生病疗效快,痊愈率高,效果显著,值得推广。