二氢乳清酸脱氢酶在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤细胞高能量、高营养需求反映肿瘤代谢微环境具有其特殊性,代谢重编程可使肿瘤细胞快速增殖、侵袭、迁移,可以是肿瘤发展内驱力,并能在营养缺乏的微环境中存活。与健康细胞比较,肿瘤细胞不断分裂扩增过程中需要足够的核苷酸。二氢乳清酸脱氢酶(dihydroorotate dehydrogenase,DHODH)是从头合成嘧啶核苷酸限速酶,其抑制剂特立氟胺(Teriflunomide)、布喹那(Brequinar)和来氟米特(Leflunomide)等可抑制核苷酸生成,致细胞停滞于S期,因此DHODH可作为肿瘤治疗靶点。

羧胺三唑乳清酸盐对人胰腺癌细胞系增殖及脂肪酸合成代谢的影响

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌细胞增殖影响及对其脂肪酸合成代谢的调控作用。方法 以人胰腺癌细胞系AsPC-1、AsPC-1/GEM(简称AR)、PANC-1、MiaPaCa-2为研究对象,用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞存活率,采用qPCR检测胰腺癌细胞系中脂肪酸合成关键基因mRNA水平,用Western blot检测细胞内腺苷单磷酸依赖蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)通路蛋白表达;利用液相色谱-质谱联用代谢组学技术检测细胞内脂质代谢物质差异。结果 与对照组相比,CTO显著降低AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2 4株人胰腺癌细胞活率(P<0.05);CTO下调细胞内脂肪酸合成关键基因的mRNA水平(P<0.05);CTO下调细胞中AMPK、ACC及c-Myc蛋白表达(P<0.05),而增加p-AMPK、p-ACC蛋白表达(P<0.05);CTO减少AR细胞中脂质代谢物含量(P<0.05)。结论 CTO通过抑制癌基因c-Myc蛋白表达及AMPK/ACC通路,下调脂肪酸合成相关基因的表达活性,减弱细胞脂肪酸合成代谢能力,进而抑制人胰腺癌细胞系AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2的增殖能力。

多功能乳清酸钝化协助制备高效稳定的钙钛矿太阳能电池

空气环境中制备钙钛矿太阳能电池(PSCs)对于发展更高性价比的光伏器件具有重要意义。然而,空气环境制备的钙钛矿层存在大量的阴阳离子缺陷,严重影响器件性能。因此,采用乳清酸(OA)作为添加剂,通过添加剂工程对混合阳离子钙钛矿薄膜缺陷进行有效调控。OA中的羧基能与钙钛矿中未配位的Pb2+键合,吡啶环上的含氮基团与未配位的I-形成氢键,在降低钙钛矿薄膜缺陷态密度的同时增大钙钛矿晶粒尺寸,抑制载流子的非辐射复合。经OA钝化PSCs的光电转换效率(PCE)从19.89%提升到22.09%,在空气环境中放置1000 h还可保持93.85%的初始效率。

二氢乳清酸脱氢酶在恶性肿瘤进展中的作用机制研究进展

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是一种黄素依赖性的代谢酶,在嘧啶代谢从头合成途径中将二氢乳清酸氧化成乳清酸。同时它位于线粒体上,与细胞氧化磷酸化存在紧密联系。此外,DHODH也是铁死亡途径的一个重要抑制因子。本文主要阐述DHODH影响恶性肿瘤进展的内在作用机制,包括其在嘧啶从头合成、氧化磷酸化及铁死亡等方面的重要作用,为DHODH作为恶性肿瘤临床治疗的潜在靶点提供依据。

LC-MS/MS法测定人尿液中乳清酸的浓度及临床应用

目的:建立测定人尿液中乳清酸浓度的方法,并应用于临床。方法:尿液样本加水稀释100倍,经0.22μm滤膜过滤后,取滤液100μL加入甲醇400μL沉淀蛋白,以卡马西平(0.50μg·mL^(-1))2μL为内标,经涡旋1 min,13000 r·min^(-1)离心5 min,取上清液100μL采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定。色谱柱为Waters Atlantis dC18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为5 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.50 mL·min^(-1),柱温为4℃,进样量为3μL。采用电喷雾离子源以正离子及负离子模式,检测方式为Full MS,Full MS分辨率为70000,质量扫描范围m/z 130~360。乳清酸和内标卡马西平的检测离子分别为m/z(-)155.00982、(+)237.10224。结果:乳清酸尿液浓度在0.016~1.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r^(2)=0.9967),定量下限为0.016μg·mL^(-1);日内、日间精密度的RSD<15%,RE<15%;基质效应为88.70%~98.62%;提取回收率为95.93%~103.08%;乳清酸尿液样品室温放置24 h、处理后样品4℃放置24 h的稳定性良好(RE<15%)。正常人尿液乳清酸含量为(3.10±1.23)μg·mL^(-1),鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症(OTCD)患者尿液乳清酸含量为354.82~2566.57μg·mL^(-1)。结论:本研究所建方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于OTCD患者的辅助诊断。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003抗戊型肝炎病毒的研究

研究二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003对戊型肝炎病毒(HEV)复制的影响,为抗HEV治疗提供新型候选药物。用带有高斯荧光素酶的HEV复制子模型研究ASLAN003是否具有抗HEV作用,实时荧光定量PCR和间接免疫荧光检测ASLAN003对HEV RNA复制以及衣壳蛋白表达的抑制作用,细胞毒性试验和间接免疫荧光计算ASLAN003的半数毒性浓度(CC_(50))和半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明,ASLAN003在0.2~50μmol/L浓度范围内能显著抑制HEV复制子在HEK 293T和Huh7细胞内的复制;ASLAN003在1μmol/L浓度能有效抑制HEV RNA复制,使其下降50%;在0.4μmol/L的浓度能够显著抑制衣壳蛋白ORF2的表达。通过对ASLAN003的细胞毒性和抑制HEV效果进行研究发现,其CC_(50)为294μmol/L,而IC_(50)为0.231μmol/L。说明ASLAN003能够有效抑制HEV复制,提示其可作为潜在抗病毒药物。

B族维生素对大肠杆菌发酵生产乳清酸的影响

为提高大肠杆菌发酵乳清酸的产率和糖酸转化率,以大肠杆菌(Escherichia coli)Ora-6为供试菌株,在原有培养基的基础上,通过单因素试验及正交试验探究维生素B_(1)、维生素B_(3)、维生素B_(5)、维生素B_(6)、维生素B_(7)、维生素B_(12)几种关键B族维生素对菌体生长及产酸能力的影响,并确定最佳组合添加量为维生素B_(1)6.8 mg/L,维生素B_(3)4.8 mg/L,维生素B_(5)4 mg/L,维生素B_(6)3.4 mg/L,维生素B_(7)1.4 mg/L,维生素B_(12)4 mg/L。在此条件下,经5 L发酵罐验证对比,此时优化后的培养基菌体量(OD 600)、乳清酸产量、糖酸转化率分别为134.32、121.41 g/L和25.73%,较原始培养基分别增长了13.16%、15.47%、12.96%。同时研究确定了B族维生素采取从10 h持续流加的发酵优化策略,使得5 L发酵罐发酵乳清酸最终菌体量和产量分别达到148.23、138.2 g/L,为工业化发酵生产乳清酸提供了参考依据。

乳清酸/异乳清酸体系荧光法测定铕、铽、镝

对比研究了乳清酸和异乳清酸对某些稀土离子特征荧光的增敏情况 ,发现异乳清酸比乳清酸更有效地使Eu3+ 、Tb3+ 、Dy3+ 的特征荧光增敏。建立了乳清酸 异乳清酸体系荧光法测定Eu3+ 、Tb3+ 、Dy3+ 的新方法 ,在乳清酸体系中Eu3+ 、Tb3+ 的检出限分别是 0 .73、0 .0 65mg L ,在异乳清酸体系中Eu3+ 、Tb3+ 、Dy3+ 的检出限分别是 0 .88、0 .0 0 2 3、0 .5 9mg L。该方法用于混合稀土氧化物中Eu3+ 、Tb3+ 、Dy3+ 含量的测定 。

乳清酸蛋白(WAP)基因调控序列的鉴定及在小鼠乳腺细胞表达LacZ基因的研究

乳清酸蛋白（ＷＡＰ）是小鼠乳中的主要蛋白质．在亚克隆该基因的基础上，对其进行了酶切鉴定，并对该基因５′区进行克隆和序列分析，在核实序列正确后，构建了以其为调控序列，指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒，采用直接注射质粒的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性，从而证实基因调控序列的功能正确性，可以用于转基因动物乳腺表达研究，同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．

乳清酸的硝化工艺优化

由乳清酸与98%硫酸和65%硝酸作用,直接硝化制备硝基乳清酸,用扫描电镜和FT-IR鉴定其结构,用HPLC鉴定其纯度。考察了浓硫酸与浓硝酸的物质的量比、反应温度、反应时间等条件对硝化作用的影响。结果表明,混酸中浓硫酸与浓硝酸的最优物质的量比为2.5∶1,温度控制在15℃以下反应12h,获得产物的收率可达到80%以上,检验产物的纯度为90%以上。

摄食鱿鱼对乳清酸诱导大鼠脂肪肝的影响

目的:研究摄食鱿鱼对脂肪肝大鼠脂肪代谢的影响。方法:24只大鼠分成3组,对照组喂食AIN76标准饲料,模型组饲料中添加1%乳清酸,鱿鱼组添加1%乳清酸和10%鱿鱼。饲喂10d后,分别测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,以及肝脏TC、TG、磷脂含量。同时测定肝脏中脂肪酸合成酶(FAS)、苹果酸酶(ME)、葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)、肉碱棕榈酰转移酶(CPT-1)和过氧化物酶体β-氧化酶系活性。结果:乳清酸可显著升高大鼠肝脏以及血清TC、TG含量,升高FAS、ME和G6PDH活性,并降低CPT-1的活性。添加鱿鱼后,显著降低了乳清酸诱导的脂肪肝模型大鼠的肝脏以及血清TC、TG水平,降低了FAS、ME、G6PDH活性并升高了过氧化物酶体β-氧化酶系活性。摄食乳清酸降低了大鼠总脂和中性固醇的排泄,摄食鱿鱼后对大鼠总脂排泄无显著影响,但降低了中性固醇的排泄。结论:摄食鱿鱼可以通过降低乳清酸诱导的脂肪肝模型大鼠的脂肪酸合成酶活性和升高过氧化物酶体β-氧化酶系活性来抑制脂肪肝大鼠肝脏脂质蓄积。

乳清酸磷酸核糖转移酶和结直肠癌化疗毒性的相关性

目的研究结直肠癌患者乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT)的表达及其同化疗毒性的相关性。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测58例结直肠癌组织及癌旁正常组织OPRT的表达,同时观察患者接受FOLFOX6方案化疗的毒性,分析二者的相关性。结果结直肠癌组织OPRT的表达高于相应正常肠粘膜组织,差异具有显著性(P=0.001)。结直肠癌组织OPRT的表达状况和化疗反应无明显相关性(P>0.05)。正常组织OPRT水平和腹泻的发生呈正相关,并具有统计学意义(P=0.013)。结论结直肠癌组织OPRT的表达和结直肠患者的化疗毒性无相关;而癌旁正常组织OPRT的表达可以预测5-FU相关毒性的发生情况。

超临界流体色谱测定牛奶中乳清酸的含量

使用超临界流体色谱测定牛奶中乳清酸含量,在二氧化碳流动相中添加20%的甲醇及0.25%三氟乙酸作改性剂,于填充柱上分离,检测波长为280nm,在测定范围内,对照品浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991)。以峰面积和保留时间计算精密度分别为2.33%和0.47%。回收率为101.9%±1.92%,3min即可完成色谱分析,样品前处理简单,可用于牛奶中乳清酸的快速测定。

乳清酸的2.5次微分示波极谱法测定

拟定了乳清酸的2.5次微分示波极谱测定新方法。结果表明:在0.8mol/LHCl介质中,乳清酸产生一灵敏的极谱还原波,峰电位Ep=-0.77V(vs.SCE);其2.5次微分极谱峰峰电流ep″与乳清酸浓度在4.0×10-8～4.0×10-5mol/L范围内呈良好线性关系(r=0.9996,n=9),检测限为1.0×10-8mol/L;13次平行测量4.0×10-7mol/L乳清酸的峰电流,所得RSD为1.8%。该方法可直接用于测定牛奶中乳清酸的含量。

乳清酸分析方法的研究进展

综述了近年来乳清酸分析方法的研究进展,内容包括紫外-可见分光光度法、荧光分析法、电化学分析法、色谱分析法、色谱-质谱联用法和量热法等几个方面,展望了乳清酸分析方法的发展方向.

海参和海星皂苷对乳清酸诱导大鼠脂肪肝影响的比较研究

目的:研究并比较海参皂苷和海星皂苷对乳清酸诱导的长期大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的干预作用。方法:将雄性Wistar大鼠喂食1%乳清酸建立NAFLD模型,连续喂养6周后,将大鼠分为乳清酸模型组(orotic acid group,OA)、海参皂苷组(sea cucumber saponins group,Scs)和海星皂苷组(starfish saponins group,Sfs),以未喂食OA的大鼠为正常对照组(control group,Con)继续喂养8周后,分别测定大鼠肝脏甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、磷脂(phospholipid,PL)水平和血清TG、TC水平以及肝脏脂质合成、分解相关酶的酶活性和基因表达量。结果:海参皂苷和海星皂苷组肝脂及血脂水平均有明显下降,此外,二者均能抑制脂肪酸合成酶活性,下调脂肪酸合成基因表达水平,增强脂肪酸β-氧化相关酶活性。结论:海参皂苷和海星皂苷均能明显改善乳清酸长期诱导大鼠NAFLD,并具有类似的调控机制,其中海参皂苷和海星皂苷的改善效果相当。

乳清酸对急性心肌梗塞非梗塞区心肌线粒体的有益作用

结扎大鼠冠状动脉前降支造成急性心肌梗塞（ＡＭＩ），分成乳清酸治疗组（ＡＭＩＯＡ），生理盐水治疗组（ＡＭＩＮＳ）和假手术组（ＳＯＮＳ）。观察非梗塞区心肌线粒体功能、结构及心肌纤维的改变。在ＡＭＩ后２４，７２ｈ，ＡＭＩＮＳ组Ｒ３，ＲＣＲ，ＯＰＲ有意义降低，ＡＭＩＯＡ组则明显增加（Ｐ＜０．０１），且与ＳＯＮＳ组相似（Ｐ＞０．０５）。ＡＭＩＮＳ组非梗塞区心肌超微结构，特别是边缘区表现为线粒体基质减少，外膜崩解，嵴模糊；肌纤维Ⅰ带增宽，Ｚ线突出，扭曲或断裂，收缩带形成。在ＡＭＩＯＡ组上述结构基本正常。结果提示：乳清酸保护了非梗塞区心肌功能和结构。其可能机制是乳清酸增加蛋白质和磷脂的合成，修复了线粒体结构。

香菇乳清酸核苷-5’-单磷酸脱羧酶编码基因le-pyrG的克隆

通过巢式简并PCR和基因组步行技术从香菇(Lentinula edodes)单核体中克隆到乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶(orotidine-5’-monophosphate decarboxylase,OMPDC)的编码基因le-pyrG,长度为946bp。经生物信息学分析,香菇le-pyrG基因含有2个长度分别为67bp和51bp的内含子,该基因可以编码1个含有275个氨基酸残基的蛋白质序列,该序列经比对分析显示与裂褶菌(Schizophyllum commne)和灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)OMPDC序列的相同性分别为73%和70%,相似性分别为84%和83%。这是首次报道从栽培食用真菌中克隆出乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶编码基因的全序列。

虎杖中二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的虚拟筛选

目的:从中药虎杖中筛选二氢乳清酸脱氢酶的抑制剂。方法:利用Autodock Tool软件,将二氢乳清酸脱氢酶与虎杖中48个化合物进行对接。结果:虎杖中的大黄素-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷、2,3,5,4'-四羟基芪-2-O-β-D-葡萄糖苷等6个成分对二氢乳清酸脱氢酶具有较强的抑制作用。结论:虎杖可能通过抑制二氢乳清酸脱氢酶发挥抗肿瘤和抗免疫作用。

柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。