超声波处理对乳糖酶水解低乳糖牛乳品质的影响

目前对牛乳的杀菌方式主要是热处理,但经过热处理后牛乳的品质会受到不同程度的破坏,而超声波处理能较好保留低乳糖牛乳中的营养成分。因此,该文对超声波处理低乳糖牛乳进行研究,以酸度和pH值为指标,考察不同超声功率(100、150、200、250 W)和超声时间(5、10、15、20 min)对低乳糖牛乳在4℃条件下贮藏21 d品质的影响。结果显示:最佳杀菌条件为超声功率150 W、超声时间10 min。由贮藏期试验可知,经超声波处理后在4℃贮藏环境下,低乳糖牛乳能保存15 d左右,而未经过超声波杀菌处理的鲜牛奶和低乳糖牛乳仅能保存6 d左右。由贮藏期稳定性试验可知,经超声波处理后低乳糖牛乳在4℃条件下可贮藏15 d以内,稳定性试验呈阴性,未发现酸败、脂肪分层现象,贮藏15 d仍保持较好品质。在一定范围内随着超声功率提高、超声时间延长,由于超声波的乳化均质作用,低乳糖牛乳的品质逐渐改善,其中低乳糖牛乳的浊度降低、乳化性质逐渐增高。

D-半乳糖通过p53调节自噬和凋亡损伤小鼠耳蜗毛细胞

目的在耳蜗基底膜离体培养模型上,观察D-半乳糖对小鼠耳蜗基底膜毛细胞的作用,并从自噬和凋亡途径进一步探讨其分子机制。方法选取SPF级3~4 d龄Wistar大鼠132只(264个耳蜗)体外培养3~4 d龄Wistar大鼠耳蜗基底膜,用100 mmol/L、300 mmol/L、500 mmol/L D-半乳糖处理24 h,将大鼠分为对照组、100 mmol/L D-半乳糖组、300 mmol/L D-半乳糖组和500 mmol/L D-半乳糖组,每组24只(48个耳蜗)。P53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)实验分为对照组、300 mmol/L D-半乳糖组、50μmol/L PFT-α组、300 mmol/L D-半乳糖+50μmol/L PFT-α组,每组9只(18个耳蜗)。采用Alexa Fluo 555-鬼笔环肽标记,进行全耳蜗毛细胞计数和定量分析。Western blot分析耳蜗基底膜自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1,细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3以及p53蛋白的表达。免疫荧光定位检测耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达变化。用p53抑制剂PFT-α抑制p53蛋白表达,检测下游蛋白LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3表达的变化。结果D-半乳糖可导致耳蜗基底膜毛细胞损伤和缺失,并随剂量增加而加重。Western blot结果显示,D-半乳糖可增加耳蜗基底膜p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平以及Bax/Bcl-2的比值,降低Beclin-1的表达,且呈一定剂量依赖性。免疫荧光结果显示,D-半乳糖可增强耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达。P53抑制剂PFT-α可以抑制D-半乳糖引起的p53、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达的增高,但可以进一步升高LC3-Ⅱ蛋白表达。结论D-半乳糖可通过p53调节自噬和凋亡诱导体外培养的耳蜗基底膜毛细胞损伤。

12744例新生儿半乳糖脑苷脂酶基因筛查结果分析

目的分析新生儿半乳糖脑苷脂酶(GALC)基因和酶活性检测结果,为Krabbe病的临床诊断和遗传咨询提供依据。方法收集2022年3月18日至12月31日在南京医科大学附属妇产医院出生的12744例新生儿,利用芯片捕获二代测序技术检测GALC基因致病变异位点,Sanger测序法进行家系验证,串联质谱法测定干血斑GALC酶活性。GALC基因携带者与阴性新生儿比较采用两独立样本t检验。结果12744例新生儿中共检出315例GALC基因携带者,人群携带率为1/40,携带频率最高的变异位点为c.1901T>C(269例,1/47),其次为c.1592G>A(12例,1/1062)。共计4例(P1~P4)新生儿检出2个致病性变异位点(其中2例为c.1901T>C纯合变异),家系验证提示4例新生儿的2个变异位点分别来自父母,诊断为Krabbe病。同时对P2患儿姐姐进行家系验证发现其基因型与P2相同,诊断为Krabbe病。通过200例新生儿样本初步建立串联质谱法检测GALC酶活性切值为0.42μmol/(L·h)。4例Krabbe病患儿GALC酶活性分别为0.74、0.21、0.17和0.29μmol/(L·h),P2患儿姐姐GALC酶活性为0.28μmol/(L·h)。除P1患儿外,P2~P4、P2患儿姐姐GALC酶活性均降低,呈阳性。结论GALC基因致病性变异携带率较高,热点突变为c.1901T>C,初步统计Krabbe病的患病率为1/3186。以基因检测作为一阶筛查、酶活性检测作为二阶筛查的筛查策略能有效提高诊断效率,为临床诊断与遗传咨询提供参考依据。

半乳糖凝集素-3作为脑卒中诊断及预后评估生物标志物的研究现状及进展

脑卒中是中国居民致残、致死的主要原因之一,严重影响患者的身体健康及生活质量。半乳糖凝集素(Gal)-3是Gal家族成员之一,分布广泛,参与炎症、血管生成及纤维化等病理过程,Gal-3蛋白表达失衡与多种脑血管病发生、发展及预后密切相关。血清Gal-3水平在脑血管病诊断、预后及风险分层评估方面有较强的预测潜力。本文对近年来Gal-3蛋白在脑卒中的研究进行综述,为评价Gal-3蛋白作为脑卒中诊断、治疗、预后评估的生物标志物潜力提供参考,为脑卒中治疗药物研发提供思路。

血清半乳糖凝集素13、缺氧诱导因子1a水平与过敏性鼻炎病儿视觉模拟评分法评分的相关性

目的探究血清半乳糖凝集素13(Gal-13)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)水平与过敏性鼻炎视觉模拟评分法(VAS)评分的相关性。方法选取2022年1月至2023年7月在安徽省儿童医院治疗的过敏性鼻炎病儿69例,根据VAS评分分为轻度组(n=37)及中重度组(n=32),并选取非过敏性鼻炎病儿54例作为非过敏性鼻炎组,以同期体检的49例健康志愿者为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-13、HIF-1α水平,并收集病儿临床资料进行比较。采用Pearson法分析过敏性鼻炎病儿血清Gal-13、HIF-1α水平与VAS评分的相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC曲线)检测血清Gal-13、HIF-1α水平对过敏性鼻炎病情程度的诊断价值。结果与对照组相比,非过敏性鼻炎组及过敏性鼻炎组的血清Gal-13[(39.52±4.96)ng/L、(49.62±6.29)ng/L比(31.55±4.31)ng/L]、HIF-1α水平[(0.45±0.08)μg/L、(1.06±0.15)μg/L比(0.25±0.06)μg/L]显著增加(P<0.05),与非过敏性鼻炎组相比,过敏性鼻炎组的血清Gal-13、HIF-1α水平也显著增加(P<0.05);中重度组血清Gal-13、HIF-1α水平显著大于轻度组(P<0.05);两组病儿的年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05),两组病儿的病程、免疫球蛋白(Ig)E、白细胞介素(IL)-4、IL-9、干扰素γ(IFN-γ)以及VAS评分差异有统计学意义(P<0.05);血清Gal-13、HIF-1α水平与VAS评分均呈正相关(r=0.70,P<0.05;r=0.68,P<0.05);绘制ROC曲线,血清Gal-13、HIF-1α及联合AUC分别为0.84、0.84、0.94,联合诊断显著优于Gal-13(Z=2.06,P=0.049)、HIF-1α(Z=2.50,P=0.012)单独诊断。结论过敏性鼻炎病儿血清Gal-13,HIF-1α水平与VAS评分均呈正相关,且血清Gal-13、HIF-1α对于过敏性鼻炎的临床诊断以及病情严重程度判定具有一定参考价值。

乳糖不耐受及其相关性的研究

很多人在饮用牛奶后出现腹部不适诸如腹胀、腹痛、甚至腹泻等症状,这种现象在医学上称为乳糖不耐受。低乳糖奶在生产过程中采用乳糖酶以一定的生产工艺降低乳糖的含量,因此低乳糖奶既能满足有乳糖不耐症人群的营养需要,又可解除他们喝奶后的烦恼。

一种高耐热乳糖酶的异源表达、固定化及酶学性质研究

乳糖酶在乳制品生产中具有重要作用,但是目前商用的乳糖酶耐热性低,可重复利用率差。为了解决以上问题,该实验用枯草芽孢杆菌WB800异源表达了激烈热球菌(Pyrococcus furiosus)来源的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,BgaS)。该酶最适温度为90℃,最适pH值为7,具有良好的应用潜力。为了提高该乳糖酶的重复利用率,该实验用壳聚糖微球为载体,采用交联法实现了BgaS的固定化并对交联条件进行优化,确定最适交联条件为:戊二醛26.50 g/L,交联温度35℃,交联时间2.5 h,酶添加量5.94 U/mL,优化后酶活力回收率达55.11%。固定化酶相较游离酶,最适pH与最适温度相同,且在非最适pH条件下,固定化酶的相对酶活力较游离酶普遍提升了18.23%以上,并且固定化酶在95℃条件下孵育90 min仍保有80%以上的相对活性,较游离酶提升了11.31%。并且固定化酶回收利用率高,操作稳定性好,最适条件下处理3 h即可使牛乳中乳糖含量降低至0.5%以下,达到无乳糖水平,为工业化应用提供了技术支撑。

低乳糖牛乳粉品质分析及蛋白特性研究

为获得品质优良的低乳糖牛乳粉,该试验以生牛乳为原料,分别使用3种不同乳糖酶水解牛乳,对水解后的牛乳进行喷雾干燥得到了低乳糖牛乳粉-乳糖酶A(low lactose milk powder-enzyme A,LLMP-EA)、低乳糖牛乳粉-乳糖酶B(low lactose milk powder-enzyme B,LLMP-EB)、低乳糖牛乳粉-乳糖酶C(low lactose milk powder-enzyme c,LLMP-EC),测定其理化指标和游离巯基等蛋白特性。结果表明,LLMP-EA、LLMP-EB和LLMP-EC的外观及组织状态相近、色泽偏白,LLMP-EA的水分活度比LLMP-EB、LLMP-EC分别低6.29%、4.07%(P<0.05);LLMP-EA的水分含量比LLMP-EB、LLMP-EC分别低6.13%、3.32%(P<0.05);LLMP-EA多分散性指数(polydispersity index,PDI)值为0.13,LLMP-EA、LLMP-EB和LLMP-EC的Zeta电位无显著性差异(P>0.05);通过扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察发现,LLMP-EA乳粉颗粒较为饱满、表面光滑、有轻微凹陷、颗粒聚集程度较低;LLMP-EA的游离巯基含量比LLMP-EB、LLMP-EC分别低19.90%、12.15%(P<0.05),而LLMP-EA表面疏水性比LLMP-EB低12.29%(P<0.05);LLMP-EA的α-螺旋结构分别比LLMP-EB、LLMP-EC高1.35%、1.94%(P<0.05)。因此,LLMP-EA的水分含量和水分活度低、PDI值仅为0.13,品质最佳;游离巯基含量和溴酚蓝结合量低、α-螺旋含量高,蛋白特性较好。

β-半乳糖苷酶的固定化及其合成低聚半乳糖研究

选用壳聚糖、海藻酸钠、海藻酸钠/明胶、海藻酸钠/羧甲基纤维素为固定化载体材料,探究β-半乳糖苷酶的固定化方法,并将获得的适宜固定化酶应用于合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS)。结果表明,较优固定化载体为壳聚糖,β-半乳糖苷酶的优化固定化条件为壳聚糖质量浓度0.03 g/mL,静置时间2 h,戊二醛体积分数2%,交联时间3 h,吸附时间12 h,固定化温度60℃,加酶量0.4 mg/g(以壳聚糖微球质量计)。与游离酶相比,固定化酶的耐酸、碱、热的稳定性显著提升。进一步利用壳聚糖固定化β-半乳糖苷酶合成GOS,确定了优化反应条件:加酶量为2 U/mL,pH值为6.0,反应温度为50℃,初始乳糖质量浓度为500 g/L,反应时间为14 h。此条件下GOS产率可达到52.61%,高于已报道的GOS产率(25.1%~46.0%),且产物中聚合度大于等于3的GOS含量为37.07%。固定化酶重复使用5次后,产GOS活性仍保留了97.21%,研究获得的壳聚糖固定化β-半乳糖苷酶在GOS合成领域具有良好的应用前景。

Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖的制备方法和结构表征的研究进展

Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-Ⅱ)是果胶结构域中的一种,其结构在不同物种之间具有高度的保守性。RG-Ⅱ的主链由约9个半乳糖醛酸经α-1,4糖苷键连接而成,并被6个(A–F)明确定义的侧链取代。其中二糖侧链C、D和单糖侧链E、F的结构在不同来源的RG-Ⅱ中基本保持相同。寡糖侧链A和B则存在轻微的变异性。通过相对分子质量、单糖组成和质谱分析等手段可实现RG-Ⅱ的结构表征。中药中含有RG-Ⅱ结构域的多糖具有很高的药用价值,使用内切多聚半乳糖醛酸酶(Endo-PG)和草酸青霉可将RG-Ⅱ从中药中分离并对其在多糖中的含量进行测定。从葡萄酒中可快速制备大量RG-Ⅱ标准品用于新定量方法的开发,实现对中药活性多糖的质量控制,推动中药多糖的研究进程。

适冷β-半乳糖苷酶及其在食品工业中的应用

β-半乳糖苷酶,又称乳糖酶,广泛存在于细菌、真菌、酵母菌等微生物中,主要功能是乳糖水解和合成低聚半乳糖。利用β-半乳糖苷酶生产低乳糖牛奶等乳制品成为解决乳糖不耐受问题最有效的途径,然而常用的商业化β-半乳糖苷酶的最适反应温度大多较高,对pH的要求比较严格,存在生产成本较高、消耗能量高等问题。适冷β-半乳糖苷酶在低温下也具有较高的酶活性,广泛应用于食品行业中,尤其在乳品工业。在低温下水解乳糖,生产低乳糖或无乳糖乳制品,供乳糖不耐受者食用,可降低成本、节约能源,具有重要意义。该文综述了β-半乳糖苷酶的微生物来源、特性、催化特性的研究现状,对适冷β-半乳糖苷酶的来源、特性、耐冷机制及工业化应用进行了系统阐述,并对其前景进行了展望。

苦参总黄酮对D-半乳糖致神经细胞衰老的改善作用及相关机制

目的探讨苦参总黄酮对D-半乳糖致神经细胞衰老的改善作用及相关机制。方法D-半乳糖处理PC12神经元细胞建立细胞衰老模型,分为模型组,10、20、40μg/ml苦参总黄酮组,同时设置空白对照组。检测各组细胞存活率、衰老细胞情况、凋亡率、细胞周期分布情况;测定细胞中抗氧化指标:超氧化物歧化酶、丙二醛、乳酸脱氢酶浓度;Western印迹检测细胞中B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素(Cyt)-C、Bcl-2、人核因子E2相关因子(Nrf)2、血红素氧合酶1蛋白表达水平。结论模型组细胞存活率明显低于空白对照组,β-半乳糖苷酶阳性染色率、细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组细胞存活率明显高于模型组,β-半乳糖苷酶阳性染色率、细胞凋亡率明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显(P<0.05)。各组G0/G1期、S期细胞比例差异有统计学意义(P<0.01);模型组G0/G1期细胞比例明显高于空白对照组,S期细胞比例明显低于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组G0/G1期细胞比例明显低于模型组,S期细胞比例明显高于模型组(P<0.05)。模型组超氧化物歧化酶浓度明显低于空白对照组,丙二醛、乳酸脱氢酶浓度明显高于空白对照组(P<0.01);苦参总黄酮组超氧化物歧化酶浓度明显高于模型组,丙二醛、乳酸脱氢酶浓度明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),Cyt-C、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01);苦参总黄酮组Bax蛋白表达水平明显低于模型组,Cyt-C、Bcl-2蛋白表达水平明显高于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组Nrf2、血红素氧合酶1蛋白表达明显升高(P<0.01);苦参总黄酮组Nrf2、血红素氧合酶1蛋白表达水平明显低于模型组,且随着苦参总黄酮给药浓度的增加变化逐渐明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苦参总黄酮可改善D半乳糖诱导的神经细胞衰老,且呈剂量依赖性,可能与激活Nrf2抗氧化信号途径、抑制氧化应激反应、降低细胞凋亡有关。

低乳糖发酵马乳的制备工艺研究及其对乳糖不耐受模型小鼠的影响

通过单因素实验和响应面实验筛选出低乳糖发酵马乳的处方组成及制备工艺。以琼脂添加量、甜菜纤维添加量、乳糖酶添加量、乳酸菌粉添加量为考察因素,分别以葡萄糖含量、酸度、pH和感官评分为评价指标,通过单因素及响应面法设计Box-Behnken响应面实验,筛选并优化低乳糖发酵马乳的最佳制备工艺参数;进一步对乳糖不耐受模型小鼠用低乳糖发酵马乳干预,ELISA试剂盒分别检测肝脏组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、DAO、D-乳酸、SOD、MDA等含量,进行动物试验考察。当琼脂添加量为0.4%、甜菜纤维0.3%、乳糖酶0.06%、菌粉1.5%时,产品各项指标最理想,筛选出的制备工艺参数稳定、可靠。使用低乳糖发酵马乳对乳糖不耐受小鼠未见加重症状的趋势,适宜乳糖不耐受人群使用。

基于超高效液相色谱-串联质谱同时测定婴幼儿配方乳粉中2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-新四糖

建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定婴幼儿配方乳粉中2′-岩藻糖基乳糖(2′-fucosyllactose,2′-FL)和乳糖-N-新四糖(lacto-N-neotetraose,LNnT)。样品经水提取,沉淀法除蛋白、针式水系滤膜净化,以乙腈和10 mmol/L甲酸铵水溶液(含0.1%甲酸,体积分数)为流动相,采用酰胺柱进行梯度洗脱,采用选择反应检测扫描模式(selective reaction monitoring,SRM)测定,外标法定量,稀释法评估溶剂效应、提取后添加法评估基质效应。结果表明,正离子模式下2′-FL和LNnT分别采用加合离子峰[M+NH^(+)_(4)]和[M+H^(+)]较好,梯度条件、流速优化后使得2′-FL和LNnT均能在8 min内完成洗脱,溶剂效应考察发现2′-FL和LNnT存在严重的溶剂效应,但在消除试验中发现在稀释20倍的情形下,50%乙腈甲酸铵水溶液作为净化样液的稀释溶剂可消除影响,线性范围考察发现2′-FL和LNnT线性范围分别为5.0~150.0 ng/mL和2.5~75.0 ng/mL,基质效应考察发现2′-FL和LNnT均不存在基质效应。方法验证表明,2′-FL和LNnT各项精密度正确度参数均满足国标要求,该方法适用于婴幼儿配方乳粉中2′-FL和LNnT的同时测定。

益生菌和益生元缓解乳糖不耐受的研究进展

文章阐述了乳糖不耐受及其治疗方法等相关问题,具体介绍了益生菌和益生元在缓解乳糖不耐受症状中的主要作用机制和临床治疗效果,并基于益生菌和益生元的作用优势,为研发缓解乳糖不耐受的健康替代品提出合理建议。旨在探讨益生菌和益生元在缓解乳糖不耐受症状中的作用及应用,为研发相关产品提供理论依据和方向指引。

微生物合成2′-岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖的代谢工程策略研究进展

人乳寡糖(human milk oligosaccharide,HMOs)是母乳的关键成分,它对婴幼儿健康成长发挥着重要的作用。2′-岩藻糖基乳糖(2′-fucosyllactose,2′-FL)和3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose,3-FL)是HMOs的主要组分,具有抑制病原体感染、调节肠道菌群和提高免疫力等功能,其合成方法成为近年内的研究热点。然而,利用化学法或酶法合成2′-FL和3-FL具有反应过程繁琐、成本高以及产物收率低等缺点,无法满足市场的需求,因此,高效的微生物法已被开发应用于2′-FL和3-FL的商业化生产。本文总结2′-FL和3-FL的制备方法,系统阐述微生物法合成2′-FL和3-FL的工程化策略,为后续2′-FL和3-FL的微生物生产提供一定的研究思路。

半乳糖凝集素3和半乳糖凝集素3结合蛋白在子痫前期中的表达和意义

目的:探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素3 (galectin-3, Gal-3)、半乳糖凝集素3结合蛋白(galectin-3 binding proteins, Gal-3BP)的表达及意义。方法:选取青岛大学附属医院收治的子痫前期患者30例为实验组,同期入院体检正常的孕妇30例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-3、Gal-3BP的浓度,经免疫组织化学法检测胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达。采用Pearson双变量关联性分析法分析Gal-3、Gal-3BP与患者临床特征的相关性。结果:实验组外周血Gal-3、Gal-3BP水平均高于对照组(P < 0.05);实验组胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。实验组外周血Gal-3、Gal-3BP浓度分别与平均动脉压、24小时尿蛋白呈正相关(P < 0.05)。结论:Gal-3和Gal-3BP可能与子痫前期的发病有关,或可成为预测子痫前期的生物标记物。

超滤制备无乳糖牛乳蛋白浓缩物的工艺优化

传统牛乳浓缩工艺通过加热蒸发水分实现浓缩,具有蛋白质受热变性、感官品质降低、生产效率低及无法去除乳糖等问题。引入超滤技术以脱脂牛乳为原料制备无乳糖牛乳蛋白浓缩物(milk protein concentrate,MPC)以弥补传统工艺的缺陷,并对分离过程中的分离系统、洗滤模式及操作条件等工艺进行优化。最终采用分离精度为10 kDa的聚醚砜中空纤维超滤膜组件在自制膜分离系统中以40℃、0.1 MPa的操作条件下2倍浓缩、3次反洗补水洗滤制备了乳糖质量浓度为1.17 g/L、蛋白收率为94.0%、蛋白质量浓度为40.01 g/L、pH值为6.98、乳糖脱除率为96.5%的无乳糖MPC。超滤浓缩技术有效去除了乳糖,且工艺优化显著提高了生产效率与产品质量,制备出的无乳糖MPC可实现乳产品组分的优化。

果胶酶对灵武长枣果实发育中阿拉伯半乳糖蛋白分布的影响

以3种不同浓度的果胶酶处理灵武长枣(Ziziphus jujuba‘Lingwu Changzao’)4个不同发育时期的果实,采用免疫细胞化学技术,在细胞水平上对果实阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)表位进行原位分析,探讨果胶酶对其不同发育时期的果实中AGPs分布的影响,为明确果胶酶对果实成熟软化的影响提供解剖学依据。结果表明:JIM13、JIM8和MAC204抗体所标记的抗原荧光强弱在各时期果实的不同组织存在一定的差异。当果肉组织用较低浓度的果胶酶0.028 U·mL^(-1)(E1)处理,果皮组织结构没有明显的变化,果皮及内部薄壁细胞细胞壁表面和细胞间隙中的AGPs抗原表位减少;0.056 U·mL^(-1)(E2)和0.084 U·mL^(-1)(E3)浓度果胶酶处理的果实,果实组织细胞壁解体程度增加,果皮及内部薄壁细胞细胞壁中AGPs抗原表位检测量逐渐降低,果胶酶浓度的增加导致AGPs在果实所有表位排列的更大影响和较低的荧光信号。经果胶酶最高浓度0.084 U·mL^(-1)(E3)处理后,Calcofluor White染色显示细胞壁区域荧光也不同程度减弱或降低,AGPs分布的紊乱和抗原表位的缺失与细胞中纤维素组装的变化有关。比较分析表明,不同发育时期的果实AGPs碳水化合物的分布不同,这与组织结构的变化有关;果胶酶作用下AGPs聚糖链的缺失导致细胞壁组分之间的相关性建立和细胞壁结构的重塑受阻,诱导了整个细胞壁结构的改变,影响了果实的成熟。

β-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的研究

β-半乳糖苷酶的研究进展β-半乳糖苷酶来源及作用机理。β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)普遍存在于动物(幼小动物的肠中)、植物(杏、苹果等)及微生物(细菌、霉菌等)中,能够将乳糖水解为葡萄糖及半乳糖供生物体代谢使用。在生物体体内,β-半乳糖苷酶是由Lac Z基因编码翻译而成的蛋白质酶类,通过提取动物、植物及微生物中的乳糖酶蛋白。