基于网络药理学的乳香-没药药对药效机制研究

目的网络药理学方法,研究乳香-没药药对在抗溃疡、抗炎、抗肿瘤和炎症性肠病和镇痛的治疗过程中的共性作用机制。方法借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索乳香-没药药对的化学成分和作用靶点,通过人类基因数据库(Genecards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等多个数据库筛选上述5种疾病相关靶点。利用Cytoscape3.7.1软件构建"药物-靶点-疾病"交互网络图。运用蛋白相互作用(PPI)筛选核心靶点;通过生物学信息注释数据库(DAVID)做基因本体(GO)功能分析和基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果乳香-没药药对共包含403个化合物,247个活性靶点,与五种疾病基因交集获得79个高频基因,通过构建"药物-靶点-疾病"网络及对网络进行分析,共获得20个关键靶标;在对GO富集分析时,获得8个高频共性相关条目,主要病毒感染和肿瘤信号通路等;在对靶标进行KEGG通路分析时,共获得6条高频相关的通路,其中病毒感染和肿瘤信号通路为主要通路。结论本研究结果初步验证了乳香-没药药对在抗溃疡、抗炎、抗肿瘤、炎症性肠病和镇痛这五种疾病治疗的作用机制以及高频共性靶点、基因、信号通路等,为进一步阐述乳香-没药药对作用机制奠定了良好的理论基础。

乳香-没药药对中萜类成分的提取工艺优化研究

目的 优化乳香-没药配伍药对中萜类成分的提取工艺。方法 采用UPLC-TQ/MS联用技术,建立同时测定乳香、没药中10种萜类成分的定量方法;基于单因素试验考察提取方法、乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数的结果,设计正交实验优选乳香-没药药对中萜类成分的提取工艺参数。结果 乳香-没药配伍药对中萜类成分的最佳提取工艺参数为:95%乙醇回流提取,料液比1∶12,提取2次,每次提取时间2 h。在该条件下,总萜类成分百分含量为10.44%。结论 采用正交试验优化的提取工艺稳定可行,操作性强,可为乳香-没药配伍药对中萜类成分的提取制备提供参考,为其进一步开发利用提供科学依据与参考。

含乳香-没药药对中成药的临床应用及配伍分析

目的分析含乳香-没药药对中成药的临床应用及配伍,以期为相关临床应用提供参考。方法对2015年版《中国药典》一部收录的55个含乳香-没药药对中成药进行整理,对其功效、临床应用进行归纳,总结其临床治疗范围,并总结药对配伍研究进展。结果相关中成药具有行气活血化瘀、燥湿温络止痛、解毒益气功效,临床应用主要集中在心脑血管疾病、跌打损伤、湿疹、寒湿痹阻所致关节炎等方面,对药对配伍理论的现代研究方向主要集中在配伍后化学成分溶出及药理作用增强。结论含有乳香-没药药对中成药的临床应用广泛,本研究可为相关临床合理用药及中药配伍理论的研究提供借鉴。

乳香-没药药对含药血清对MCF-7细胞VM及增殖的影响

探究乳香-没药药对含药血清对乳腺癌MCF-7细胞血管生成拟态(VM)及增殖的影响。方法 取乳腺癌MCF-7细胞对数生长期细胞,设立对照试验,实验组中加入不同浓度(0.25、0.5、1、2、4mg/mL)的大鼠乳香-没药药对血清,设立空白对照作为对照组,采用CCK-8法分析乳香没药药对对MCF-7细胞增殖的影响,于450nm处测其吸光度(A值),计算乳香-没药药对含药血清不同浓度下对MCF-7细胞的抑制率。采用体外管道形成抑制试验,计算各组平均管状结构数量。采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测各浓度乳香-没药药对血清下细胞中的VEGF-A、MMP-9蛋白表达水平及其mRNA水平。结果 随着乳香-没药药对血清浓度的升高,A值降低,对细胞的抑制率不断升高,乳香-没药药对含药血清浓度与抑制率成正比;MCF-7细胞平均管状结构数量降低,两者呈负相关;MCF-7细胞中的VEGF-A、MMP-9蛋白相对表达水平及 mRNA相对表达水平不断下降,两者呈负相关。结论 乳香没药药对含药血清能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖生长,减少管状结构的形成,抑制细胞中VEGF-A、MMP-9蛋白及其mRNA 的表达转录。

乳香-没药药对调控乳腺癌大鼠肿瘤血管生长情况的影响

探讨乳香-没药药对调控乳腺癌大鼠肿瘤血管生长情况的影响。方法 选择清洁级SD大鼠,雌性,200+20g,20只,随机分为两组,各10只。观察组大鼠经口灌胃给予乳香-没药水提液,对照组经口灌胃给予0.9^%生理盐水,比较两组肿瘤血管生成拟态情况,统计两组微血管面积、微血管密度水平,以及两组大鼠瘤体积、瘤重情况。结果 观察组存在肿瘤血管生成拟态的比例为1例(10.0%),显著低于对照组的7例(70.0%)(P<0.05),观察组微血管面积和微血管密度分别为(1.9±0.2)cm2和(3.4±0.3)个/cm2,均显著小于对照组(P<0.05),观察组大鼠瘤体积及瘤重分别为(2.3±0.2)mm3和(3.6±0.2)g,均显著小于对照组(P<0.05)。结论 将乳香-没药药对用于乳腺癌大鼠,可有效的抑制肿瘤血管生成拟态形成,降低肿瘤微血管面积及密度,减轻肿瘤体积与瘤重。

“乳香-没药”药对对乳腺增生大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERα表达的影响

目的观察乳香-没药药对对乳腺增生模型大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2及ERα表达的影响,探讨乳香-没药药对干预乳腺增生症的作用机制。方法选取70只未孕雌性SD大鼠,随机筛选10只作为正常对照组,剩余60只大鼠作为模型制备组。行传统激素法造模,常规饲养30d后,分别于正常对照组及模型制备组随机选取1只及6只大鼠处死,取大鼠第二、三对乳腺组织行病理检查。造模成功后,将模型制备组余下54只大鼠随机分为模型组、乳香-没药组、乳香组、没药组、乳癖散结颗粒组、他莫昔芬组,加正常对照组共7组,每组大鼠各9只。行药物灌胃干预,总干预时间为20d。干预结束后,用游标卡尺测量大鼠乳房直径及乳头高度;取大鼠第二、三对乳腺组织,采用HE染色行大鼠乳腺组织形态学检测;应用Real-time PCR法测定大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERα的基因表达情况。结果外观表现结果示:与正常组比较,模型组大鼠乳房直径、乳头高度显著增加(P<0.01);与模型组比较,乳香-没药组、乳癖散结颗粒组及他莫昔芬组大鼠乳房直径、乳头高度明显减小(P<0.01),乳香组乳房直径明显减小(P<0.01)。HE染色显示:与模型组比较,各药物组大鼠乳腺增生病症均有不同程度减轻。qPCR结果示:与正常组比较,模型组大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERαmRNA表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,各药物组Cyclin D1 mRNA表达均显著降低(P<0.01),乳香-没药组、乳香组、乳癖散结颗粒组及他莫昔芬组Cyclin D2 mRNA表达显著降低(P<0.01),乳香-没药组、乳香组、他莫昔芬组ERαmRNA表达显著降低(P<0.01)。结论乳香-没药药对治疗乳腺增生症的作用机制可能与下调乳腺增生大鼠乳腺组织Cydin D1、Cyclin D2及ERα的基因表达水平有关。

基于网络药理学和分子对接技术的“乳香-没药”抑制肿瘤的作用机制探讨

目的利用网络药理学和分子对接技术分析"乳香-没药"配伍抗肿瘤的活性成分-靶点的分子作用的机制。方法通过现有的数据库检索获得"乳香-没药"药对的主要活性成分及其治疗肿瘤的潜在作用靶标;Cytoscape 3.6.0软件构建出化合物-靶点蛋白网络和潜在靶点蛋白-靶点蛋白的相互作用网络,通过数据库(DAVID)对获得的潜在作用靶标进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析,构建活性成分-潜在作用靶标-关键通路网络。使用AutoDockvina软件对活性成分与关键靶点进行分子对接进行活性验证。结果共获得"乳香-没药"药对的活性成分28个,活性成分潜在作用靶标77个。主要富集生物过程包括丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、α型蛋白激酶C等;主要涉及5个信号通路,小G蛋白通路、雌激素通路、骨形态发生蛋白通路。分子对接结果显示活性成分槲皮素、鞣花酸、β-谷甾醇与AKT1、PTGS2、JUN、MMP2、MMP9、IL6、EGFR、CCND1等靶点之间具有较好的结合能力。结论"乳香-没药"含有多种抗肿瘤的有效成分,且这些成分可作用于多靶点,靶标之间的又可相互影响发挥复杂的网络调节作用。

基于网络药理学探讨乳香——没药药对干预乳腺增生症的分子机制

目的采用网络药理学方法,探索乳香-没药药治疗乳腺增生症的作用机制。方法本研究利用中医药数据库收集筛选乳香-没药药对的化学成分信息,通过Pubchem数据库以及其他化学结构数据库转换成各活性成分有效成分的SMILES式,将SMILES式输入Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测,利用DAVID数据库进行KEGG通路注释分析,最后利用Cytoscape根据收集乳香没药药对的预测靶点和进一步的富集分析,构建活性成分-预测靶点网络模型和成分-靶点-通路网络模型,并分析其作用机制。结果乳香-没药药对抑制乳腺增生主要有乳香脂酸、因香酚、没药甾酮、曼苏宾酸等51个活性成分;雄激素受体、细胞色素P450、微管相关tau蛋白、雌激素受体、类固醇17α-羟化酶/17,20裂解酶、糖皮质激素受体、盐皮质激素受体等271个作用靶点;类固醇激素生物合成,雄激素和雌激素代谢,VEGF、ErbB、mTOR信号通路;类固醇生物合成6条信号通路参与乳腺增生症调控;类固醇生物合成、类固醇代谢、激素调节、激素代谢14个生物过程。结论本研究通过对乳香-没药药对的网络药理学分析,发现了乳香-没药药对乳腺增生症治疗的相关信号通路和生物过程,其作用机制主要涉及抑制乳腺细胞增生、促进细胞凋亡自噬、抑制炎症反应和血管新生等方面,体现了乳香-没药药对在"多成分-多靶点-多途径"方面对乳腺增生症的治疗作用,为理解乳香-没药药对中各有效组分的协同作用提供科学依据。

“乳香—没药”药对对雌二醇诱导的人乳腺细胞在细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关调控因子表达的影响

目的研究乳香-没药药对对雌二醇诱导人乳腺细胞(HBL-100)增殖的影响及可能的作用机制。方法使用不同浓度的雌二醇诱导HBL-100增殖,使用CCK8法确定雌二醇刺激HBL-100增殖的最佳浓度;经CCK8法确定乳香-没药药对、他莫昔芬含药血清作用于HBL-100细胞增殖模型的最佳浓度,采用CCK8法观察乳香-没药药对对雌二醇诱导的HBL-100细胞增殖的影响。使用流式细胞术检测各组的细胞周期分布情况,RT-PCR法检测Cyclin D1、CDK4、CDK6的mRNA表达。结果雌二醇诱导HBL-100细胞增殖的最佳浓度为10-6 mol/L,乳香-没药含药血清、他莫昔芬含药血清抑制细胞增殖最佳浓度均为20%;与生理盐水组相比,乳香-没药药对能显著抑制HBL-100细胞的增殖(P<0.01),与他莫昔芬组相比较,乳香-没药药对更能抑制HBL-100细胞的增殖(P<0.01)。与对照组相比,乳香-没药药对含药血清能使G0/G1期细胞数显著下降(P<0.01),使G2/M期细胞数显著升高(P<0.01),且乳香-没药药对组的Cyclin D1、CDK4、CDK6的mRNA相对表达量均明显下降(P<0.01)。结论乳香-没药药对可抑制雌二醇诱导的HBL-100细胞增殖,并且将HBL-100细胞阻滞在G2/M期,其机制可能与其降低细胞周期相关因子Cyclin D1、CDK4、CDK6 mRNA的表达有关。

中草药提取物对肿瘤细胞增殖的影响

通过研究不同浓度乳香-没药药对含药血清对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,以及对细胞中VEGF-A和MMP-9蛋白以及mRNA相关表达水平的影响,以了解中草药提取物对肿瘤细胞增殖的影响。方法 根据实验数据,我们选择了从0mg/ml到4mg/ml不同浓度的乳香-没药药药对含药血清,并观察其对MCF-7细胞增殖以及VEGF-A和MMP-9蛋白与mRNA表达水平的影响。结果 VEGF-A和MMP-9蛋白以及mRNA在细胞中的表达水平也呈下降趋势。结论 乳香-没药药对含药血清能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,降低细胞中VEGF-A和MMP-9的表达,说明中草药提取物对肿瘤细胞增殖有显著影响。