二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003抗戊型肝炎病毒的研究

研究二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003对戊型肝炎病毒(HEV)复制的影响,为抗HEV治疗提供新型候选药物。用带有高斯荧光素酶的HEV复制子模型研究ASLAN003是否具有抗HEV作用,实时荧光定量PCR和间接免疫荧光检测ASLAN003对HEV RNA复制以及衣壳蛋白表达的抑制作用,细胞毒性试验和间接免疫荧光计算ASLAN003的半数毒性浓度(CC_(50))和半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明,ASLAN003在0.2~50μmol/L浓度范围内能显著抑制HEV复制子在HEK 293T和Huh7细胞内的复制;ASLAN003在1μmol/L浓度能有效抑制HEV RNA复制,使其下降50%;在0.4μmol/L的浓度能够显著抑制衣壳蛋白ORF2的表达。通过对ASLAN003的细胞毒性和抑制HEV效果进行研究发现,其CC_(50)为294μmol/L,而IC_(50)为0.231μmol/L。说明ASLAN003能够有效抑制HEV复制,提示其可作为潜在抗病毒药物。

虎杖中二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的虚拟筛选

目的:从中药虎杖中筛选二氢乳清酸脱氢酶的抑制剂。方法:利用Autodock Tool软件,将二氢乳清酸脱氢酶与虎杖中48个化合物进行对接。结果:虎杖中的大黄素-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷、2,3,5,4'-四羟基芪-2-O-β-D-葡萄糖苷等6个成分对二氢乳清酸脱氢酶具有较强的抑制作用。结论:虎杖可能通过抑制二氢乳清酸脱氢酶发挥抗肿瘤和抗免疫作用。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂在抗疟疾领域的研究进展

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是核酸中嘧啶合成的关键酶,而疟原虫嘧啶补救途径的缺失,使得从头生物合成途径成为疟原虫获得生长所需嘧啶的唯一来源。显然,DHODH可作为抗疟药的潜在作用靶点,对新药的研发具有重要意义。通过药物化学家的不断努力,目前已得到若干潜在的恶性疟原虫二氢乳清酸脱氢酶(Pf DHODH)抑制剂。特别值得一提的是,DSM265(5)具有良好的体内外活性、药代动力学性质且体内安全性,是第一个处于临床研究阶段的Pf DHODH抑制剂,值得期待。本文归纳了近年来DHODH抑制剂在抗疟疾领域的研究进展,并讨论了构效关系,为寻找新的抗疟药提供帮助。

人二氢乳清酸脱氢酶抑制剂在抗炎方面的研究进展

一直以来,炎症都是人类生活的一大杀手,面对炎症问题的愈发严重,研究抗炎方面的药物迫在眉睫。近年来,研究表明人二氢乳清酸脱氢酶(human dihydroorotate dehydrogenase,h DHODH)与多种炎性疾病有着密切的关系,抑制h DHODH可以抑制炎症的发生发展。本文结合前期研究,就h DHODH抑制剂在抗炎方面的研究做一综述。

人二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的潜在用途

人二氢乳清酸脱氢酶(Human dihydroorotate dehydrogenase,h DHODH)是一种参与嘧啶从头合成途径的限速酶,迅速生长和分裂的细胞需要大量的从头合成嘧啶来维持其增长,因此,抑制h DHODH则可抑制嘧啶的从头合成,从而抑制细胞的快速增殖,研究表明,h DHODH可能是一个治疗癌症、移植排异、类风湿性关节炎、自身免疫性疾病、抗病毒等的潜在靶标。本文主要讨论h DHODH在癌症和抗病毒领域的潜在应用。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的设计、合成和构效关系研究

本文将实验室前期发现的1-丁酰基-3-(4-氯苯基)-5-甲硫基-1H-1,2,4-三氮唑作为人类二氢乳清酸脱氢酶(Hs DHODH)抑制剂设计的苗头化合物,为开展结构优化,首先培养并解析了苗头化合物与Hs DHODH的复合物晶体结构;在此基础上,设计合成了一系列基于苗头结构新颖的Hs DHODH抑制剂。活性结果表明,新合成的目标化合物对Hs DHODH具有较好的抑制活性,其中1-呋喃甲酰基-3-(4-三氟甲基苯基)-5-乙硫基-1H-1,2,4-三氮唑的IC50值达到1.50μmol·L^(-1)。结合生物学活性测试及复合物晶体结构对该系列化合物的构效关系进行了分析与总结,为1H-1,2,4-三氮唑衍生物Hs DHODH抑制剂的进一步优化提供了借鉴经验。

二氢乳清酸脱氢酶在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤细胞高能量、高营养需求反映肿瘤代谢微环境具有其特殊性,代谢重编程可使肿瘤细胞快速增殖、侵袭、迁移,可以是肿瘤发展内驱力,并能在营养缺乏的微环境中存活。与健康细胞比较,肿瘤细胞不断分裂扩增过程中需要足够的核苷酸。二氢乳清酸脱氢酶(dihydroorotate dehydrogenase,DHODH)是从头合成嘧啶核苷酸限速酶,其抑制剂特立氟胺(Teriflunomide)、布喹那(Brequinar)和来氟米特(Leflunomide)等可抑制核苷酸生成,致细胞停滞于S期,因此DHODH可作为肿瘤治疗靶点。

恶性疟原虫二氢乳清酸脱氢酶抑制剂体外诱导恶性疟原虫耐药的实验研究

目的分析恶性疟原虫二氢乳清酸脱氢酶(Plasmodium falciparum dihydroorotate dehydrogenase,PfDHODH)抑制剂(二氢噻吩酮类化合物,编号50,以下简称PfDHODH抑制剂50)对体外培养恶性疟原虫的作用特点及其诱导耐药的可能机制。方法恶性疟原虫氯喹敏感株(3D7株)和氯喹抗性株(Dd2株)同步化培养后分为不加药对照组、环状体期加药组和大滋养体期加药组,药物终浓度为80 nmol/L。分别在同步化后0 h(环状体期)、24 h(大滋养体期)、42 h涂薄血膜片镜检;通过逐步加大药物浓度的方法,体外诱导产生耐药虫株,3个月后经有限稀释培养,获得单克隆耐药虫株。采用SYBR GreenⅠ染料法检测各耐药虫株对PfDHODH抑制剂50、氯喹和青蒿素的半数抑制浓度(IC_(50));PCR扩增各耐药虫株Pfdhodh基因并测序,分析其突变情况。结果与不加药对照组相比,环状体期加药组恶性疟原虫从滋养体到裂殖体的发育受到明显抑制,大滋养体期加药组恶性疟原虫呈现明显的空泡化,核质密度大大降低。通过体外诱导并经有限稀释培养,获得44株PfDHODH抑制剂50的单克隆耐药虫株,其中,母本为Dd2、3D7的耐药虫株分别为24和20株,它们对PfDHODH抑制剂50的IC_(50)分别为(2.284±0.096)和(0.678±0.018)μmol/L,较母本虫株的(0.018±0.002)和(0.015±0.002)μmol/L分别提高了近130倍和50倍;对氯喹和青蒿素的IC_(50)分别为(0.011±0.002)、(0.014±0.004)和(0.013±0.003)、(0.012±0.001)μmol/L;与母本Dd2虫株相比,Dd2耐药虫株对氯喹的IC_(50)从(0.072±0.002)μmol/L下降为(0.011±0.002)μmol/L。测序分析结果显示,23株Dd2来源的耐药虫株PfDHODH蛋白氨基酸序列发生了G181D的点突变,另有1株除G181D的点突变外,还产生了K32N的点突变;3D7来源的耐药虫株未发现相应突变。结论体外诱导获得PfDHODH抑制剂50的单克隆耐药虫株,G181D的点突变可能是导致恶性疟原虫高水平耐受PfDHODH抑制剂50的重要分子机制。

噻唑类衍生物二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的三维定量构效关系研究

目的应用三维定量构效关系(3D-QSAR)研究噻唑类衍生物结构的二氢乳清酸脱氢酶抑制活性,为该类药物的设计和筛选提供可靠的理论依据。方法针对38个以噻唑为基本骨架的二氢乳清酸脱氢酶抑制剂,分别应用分子力场分析(Co MFA)和比较分子相似性指数分析(Co MSIA)2种经典的方法进行了三维定量构效关系(3D-QSAR)研究,建立相关模型,验证模型的预测能力,三维等势图分析噻唑类衍生物结构与活性的关系。结果 Co MFA模型的交叉验证系数q2为0.796,相关系数r2为0.978;Co MSIA模型的q2以及r2分别为0.721和0.976;2种模型对化合物的活性预测与实际值接近;三维等势图可以全面直观的分析化合物结构对其活性的影响。结论该3D-QSAR模型三维等势图揭示了结构特征与抑制活性的关系,模型具有较好的预测能力和较强的稳定性,为进一步开发研究打下了较好的基础。

一类来氟米特类似物二氢乳清酸脱氢酶抑制剂作用模式的理论研究

目的:来氟米特是当今临床上类风湿关节炎疾病治疗中最具有显著病情缓解作用的抗风湿药物之一。本文分析二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)与其抑制剂的相互作用模式,以指导新型抗风湿药物的开发。方法:从1D3H晶体结构出发,采用基于配体-受体复合物相互作用的药效团研究方法,建立来氟米特活性代谢物A771726的药效团模型;以晶体中来氟米特活性代谢物A771726为模版,构建42个来氟米特类似物DHODH抑制剂的结构,经结构叠合,采用自组织分子力场分析方法(SOMFA),建立来氟米特活性代谢类似物DHODH抑制剂三维定量构效关系模型;并探讨DHODH与其抑制剂的相互作用模式。结果与结论:建立了合理的来氟米特活性代谢物药效团模型和DHODH抑制剂三维定量构效关系,并且2种方法所得的模型吻合。确定的DHODH与抑制剂的作用模式,可以指导抑制剂的设计,用于开发新型抗风湿药物。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂前药的合成和稳定性及活性评价

本文以课题组前期发现的高活性DHODH抑制剂A为基础,依据前药合成策略,对其羧基进行酯化修饰得到12个前药分子,旨在优化化合物A的稳定性。分子水平抑制活性显示12个前药分子中只有A1~A5有微弱活性,与其作用机制和前药设计相符;随后评价了A1~A12在有机溶剂甲醇和pH为2.0、9.0的缓冲液中的稳定性,结果显示A12在甲醇中能较好的抑制先导分子内成环,A1~A8在酸性条件下易于水解,A9~A12在碱性条件易于水解;最后评价了A1~A12的细胞增殖抑制活性,其中A12表现出很好活性,其IC_(50)值为0.63μmol·L^(-1),与布奎那相当。这些结果为开展进一步体内活性研究奠定了基础。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂BAY2402234的新合成工艺及手性质量控制

文章阐述了制备二氢乳清酸脱氢酶抑制剂BAY2402234的新方法。以苄氧基乙酸乙酯为原料,肼解后与异氰酸乙酯发生亲核加成,并在碱性条件下闭环得5-[(苄氧基)甲基]-4-乙基-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(3),3经2步亲核取代、三氯化硼脱除苄基、羟基缩醛化得到关键中间体4-[4-乙基-5-氧代-3-[[(四氢-2H-吡喃-2-基)氧基]甲基]-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-1-基]-5-氟-2-[[(S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基]氧基]苄腈(7),7经碱性水解后与2-氯-6-氟苯胺发生酰胺缩合,再脱去保护基得到目标产物,高效液相色谱(HPLC)纯度99.71%,总收率17.34%(以苄氧基乙酸乙酯计)。同时建立了BAY2402234与其对映异构体的手性控制方法,新法合成的终产物ee值大于99.9%。

新型口服二氢乳清酸脱氢酶抑制剂——IMU-838

IMU-838是由德国Immunic AG公司研发的一种新型口服二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂。IMU-838具有抗炎和广谱抗病毒作用,目前有多项Ⅱ期临床试验正在进行,以评估IMU-838对复发-缓解型多发性硬化症、原发性硬化性胆管炎、溃疡性结肠炎、类风湿关节炎和新型冠状病毒肺炎的治疗效果。在2020年8月结束的针对复发-缓解型多发性硬化症的Ⅱ期临床试验中,IMU-838达到了所有的主要和关键次要终点。此外,IMU-838的安全性和耐受性均表现良好。本文将对IMU-838的基本信息、作用机制、代谢性质、安全性和临床前研究及临床试验作一概述,以期为临床治疗和药物研究开发提供参考。

琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂对禾谷丝核菌的抑制活性及结合模式

主要由禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis引起的小麦纹枯病是一种土传真菌病害,自20世纪90年代中期以来,黄淮麦区小麦纹枯病逐渐由次要病害上升为主要病害,对常见的杀菌剂类型已经出现了抗性菌株。新商品化的琥珀酸脱氢酶抑制剂类(SDHIs)杀菌剂对禾谷丝核菌的抑制活性尚未见报道。本研究选取3株禾谷丝核菌ZMDBY-9、JZWZ-8和ZMDBY-6,采用菌丝生长速率法测定了10种SDHIs类杀菌剂萎锈灵、氟酰胺、噻呋酰胺、啶酰菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑、氟吡菌酰胺、氟吡菌酰羟胺和联苯吡嗪菌胺对禾谷丝核菌的抑制活性;采用同源模建及分子对接,研究了RcSDH bcd构成的蛋白模型与10种SDHIs类杀菌剂的结合模式,进一步分析了结合能与抑菌效果的关联性。菌丝生长速率法测定结果显示:苯并烯氟菌唑和氟唑菌酰胺对禾谷丝核菌的抑制活性较高,平均有效抑制中浓度(EC50)值小于0.1 mg/L;氟吡菌酰胺与氟唑菌酰羟胺的抑制活性较弱,平均EC50值大于1 mg/L;其他6种杀菌剂的平均EC50值为0.1~0.6 mg/L。分子对接结果显示:在10种SDHIs类杀菌剂中,含吡唑-4-酰胺结构的药剂对禾谷丝核菌的抑制活性最好,结合能更低。其中7种杀菌剂分子的抑制活性与结合能之间存在一定的关联性,表现为抑制活性强结合能往往较低。本文研究结果为SDHIs类杀菌剂在小麦纹枯病化学防治中的应用及基于琥珀酸脱氢酶的药剂设计提供了参考。

微生物来源的二氢乳清酸脱氢酶抑制剂F01WB-1315A,B

【目的】从微生物次生代谢产物中筛选免疫相关疾病治疗药物重要靶点——二氢乳清酸脱氢酶的抑制剂。【方法】利用自建的快速、高效的二氢乳清酸脱氢酶抑制剂的高通量筛选方法,从4560株真菌菌株中筛选阳性菌株。阳性菌株的发酵产物进行分离纯化获得活性化合物,再通过对活性化合物的紫外、质谱、核磁等理化数据的分析进行结构鉴定。【结果】筛选分离得到2个活性化合物F01WB-1315A和F01WB-1315B。F01WB-1315A对二氢乳清酸脱氢酶有强的抑制活性,IC50=0.07μg/mL,于20μg/mL浓度下对体外经ConA刺激活化的脾淋巴细胞增殖只有31.62%的抑制作用。F01WB-1315B对二氢乳清酸脱氢酶也有较强的抑制活性,IC50=0.51μg/mL,并且在20μg/mL浓度下对体外经ConA刺激活化的脾淋巴细胞增殖有98.12%的抑制作用。经过结构解析确定F01WB-1315A与壳二孢呋喃酮(Ascofuranone)结构相同,F01WB-1315B与壳二孢氯素(Ascochlorin)结构相同。【结论】F01WB-1315A和B在分子水平和细胞水平均表现出很好的免疫抑制活性,它们对二氢乳清酸脱氢酶的抑制活性国内外未见报道。

二氢乳清酸脱氢酶在恶性肿瘤进展中的作用机制研究进展

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是一种黄素依赖性的代谢酶,在嘧啶代谢从头合成途径中将二氢乳清酸氧化成乳清酸。同时它位于线粒体上,与细胞氧化磷酸化存在紧密联系。此外,DHODH也是铁死亡途径的一个重要抑制因子。本文主要阐述DHODH影响恶性肿瘤进展的内在作用机制,包括其在嘧啶从头合成、氧化磷酸化及铁死亡等方面的重要作用,为DHODH作为恶性肿瘤临床治疗的潜在靶点提供依据。

二氢嘧啶脱氢酶抑制剂吉美拉西的合成

目的合成吉美拉西并改进其合成工艺。方法以丙二腈为起始原料,经缩合、环合、氯化、水解等5步反应制得吉美拉西。结果所得产物经元素分析、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱及质谱等确证了结构。结论改进后的合成路线可行。

新型吡唑乙酰胺类琥珀酸脱氢酶抑制剂的设计、合成及抑菌活性

为开发出新型杀菌剂候选分子,通过柔性改造吡唑甲酰胺杀菌剂结构中的二元酰胺键得到了一系列潜在靶向真菌琥珀酸脱氢酶(SDH)的新型吡唑乙酰胺分子.借助菌丝生长速率法发现了其中具有广谱抑菌特性的二苯醚联吡唑乙酰胺分子(6l),其在药剂质量浓度为50μg/mL时对水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌和草莓灰霉病菌的抑制效果均优于对照药剂噁霉灵.化合物6l对水稻纹枯病菌的半最大效应浓度(EC_(50)值)为19.92μg/mL,抑菌活性明显优于对照药剂噁霉灵和氟吡菌酰胺(EC_(50)分别为76.74和40.36μg/mL).SDH酶活力测试结果表明,真菌体内的SDH是化合物6l抑制水稻纹枯病菌生长的潜在作用靶标.分子对接研究结果显示,化合物6l分子结构中的二苯醚单元能以多种方式与靶标口袋的关键残基结合,对分子发挥抑菌活性起到了关键作用.研究结果表明,二苯醚联吡唑乙酰胺分子对植物病原真菌具有较显著的抑制作用,在其结构基础上进行深度的优化和改造有望得到可有效防控植物病原真菌的新型杀菌剂候选分子.

气相色谱-串联质谱法测定土壤中5种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的残留量

提出了加速溶剂萃取(ASE)联合Qu ECh ERS自动样品制备系统净化,以气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)同时测定土壤中甲呋酰胺、吡噻菌胺、麦锈灵、灭锈胺、呋吡菌胺等5种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂残留量的方法。取风干并过筛后的土壤样品10.00 g,加入5 g硅藻土,研磨均匀后转移到萃取池中,以体积比1∶2的正己烷-乙酸乙酯混合溶液进行萃取,萃取液在旋转蒸发仪上浓缩至10 m L,全部转移至Qu ECh ERS自动样品制备系统的净化管中,振荡5 min,以转速8 000 r·min^(-1)离心5 min,将2 m L上清液于50℃水浴中氮气吹至近干,用正己烷定容至1 m L。在Rxi-5Sil MS色谱柱上按照柱升温程序分离,质谱分析采用多反应监测(MRM)模式,外标法定量。结果表明,5种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的质量浓度在0.005~0.1 mg·L^(-1)内与对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.000 7~0.001 1 mg·kg^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为89.6%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于5.0%。方法用于分析5份不同作物的种植土壤样品,5种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂均未检出。

亚甲基四氢叶酸脱氢酶2(MTHFD2)小分子抑制剂研究进展

为了维持增殖,肿瘤细胞依赖于一碳代谢来支持嘌呤和嘧啶核苷酸的合成。亚甲基四氢叶酸脱氢酶2(Methyle-netetrahydrofolate Dehydrogenase 2,MTHFD2)是肿瘤转化过程中上调程度最高的酶之一,作为线粒体亚甲基四氢叶酸脱氢酶和环水解酶参与一碳代谢。由于MTHFD2仅在胚胎发育期间正常表达,而在正常成人组织不表达或低表达,因此这为根除肿瘤细胞同时保留正常细胞提供了选择性的治疗靶点。综述了近年来已报道的MTHFD2抑制剂的开发、优化和最新进展,讨论其作为抗肿瘤药物的治疗潜力,并提出未来开发的潜在挑战。