牛病毒性腹泻、传染性鼻气管炎二联灭活疫苗在内蒙古地区的推广效益分析

针对内蒙古自治区牛病毒性腹泻(BVD)和传染性鼻气管炎(IBR)感染的严峻形势,2021~2023年在内蒙古自治区7个盟市推广免疫了牛病毒性腹泻和传染性鼻气管炎二联灭活疫苗。该疫苗为国内首创呼吸道与消化道一针两防的灭活疫苗,具有高安全性和高效价,有效降低了BVD和IBR发病率,还可节省成本,减少环境污染,带来了显著的经济、生态和社会效益,有力推动了内蒙古自治区养牛业的绿色可持续发展。

基于悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)安全性和免疫产生期研究

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期,试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞,收获抗原液,制备二联灭活疫苗;采用1 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡进行二联灭活疫苗的安全性试验;以0.02、0.05、0.1、0.3、0.5 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIVHI抗体,并于免疫后21日龄攻毒进行免疫保护试验和免疫产生期试验。结果显示:二联灭活疫苗对SPF鸡安全,鸡只无不良反应,疫苗吸收良好;各剂量组免疫后抗体水平均逐渐升高,免疫后21 d NDV HI效价为6.1~8.5 log2,AIV HI效价为7.5~11.2 log2;免疫后21 d,0.02 mL/只剂量组对两种毒株的攻毒保护率均为9/10,其余剂量组均为10/10保护。研究表明,二联灭活疫苗对SPF鸡安全,以0.1 mL/只的剂量免疫SPF鸡21 d可获得对NDV和H9 AIV的有效抵抗。

小反刍兽疫和山羊痘二联灭活疫苗的制备及其免疫原性

为了研制小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)和山羊痘(Goat pox,GTP)二联油剂灭活疫苗,以Vero细胞增殖小反刍兽疫病毒Nigeria75/1 Clone 9株和山羊痘病毒CVCC AV41株,通过细胞病变观察、间接免疫荧光试验和荧光定量PCR确定接种方式、接毒剂量和收毒时间对病毒增殖的影响。采用细胞病变观察、SDS-PAGE和Western-blot比较甲醛、二乙烯亚胺和β-丙内酯灭活病毒的效果。随后在灭活的病毒悬液中加入等体积的油佐剂进行乳化,制备PPRV-GTPV二联油剂灭活疫苗,并参照《中国兽药典》检测疫苗理化性状。为评价疫苗的免疫原性,将24只2月龄临床健康的雷州山羊随机分为3组(每组8只),分别肌肉注射生理盐水、PPRV-GTPV二联灭活疫苗、商品化PPRV-GTPV弱毒疫苗。免疫后14 d和28 d分别检测试验山羊血清PPRV和GTPV中和抗体。结果表明,PPRV和GTPV以100 TCID50/mL的剂量共感染Vero细胞84 h后的病毒滴度较高。用终浓度为0.025%的β-丙内酯4℃处理24 h,能有效灭活PPRV和GTPV;制备的灭活疫苗符合《中国兽药典》相关要求。PPRV和GTPV二联灭活疫苗免疫14 d后,山羊血清PPRV和GTPV中和抗体水平与商品化弱毒疫苗相仿;免疫28 d后,山羊血清PPRV中和抗体显著高于商品化弱毒疫苗,GTPV抗体呈上升趋势,但显著低于商品化弱毒疫苗。试验山羊均未见明显不良反应。综上说明,PPRV-GTPV二联灭活疫苗安全、有效,有望在小反刍兽疫和山羊痘的防制中发挥重要作用。

猪链球菌病二联灭活疫苗的研制

以马链球菌兽疫亚种 (Stretococcusequisubsp zooepidemicus)ATCC35 2 4 6株和猪链球菌 2型 (S suistype 2 )HA980 1株作为生产菌株 ,制备氢氧化铝胶二联灭活疫苗。经过无菌及安全检验合格 ,肌肉接种仔猪 ,每头 2mL。免疫15d后 ,对HA980 1和ATCC35 2 4 6的保护率分别为 10 0 % (2 6 / 2 6 )和 92 3% (2 4 / 2 6 )。用二联灭活苗免疫后 4周内仔猪体内抗体水平持续上升 ,从第 5周开始逐渐下降 ;再次免疫后 ,抗体水平迅速回升 ,12 0d后仍维持较高水平。攻毒保护试验和抗体消长规律的测定显示 ,制备的猪链球菌病二联灭活苗具有良好的免疫保护作用。

仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的研制与应用

为了研制仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗,将大肠埃希菌C83549(K88)、C83644(K99)、C83710(987P)菌株和C型产气荚膜梭菌C59-2菌株分别接种适宜培养基,提取大肠埃希菌纤毛和C型产气荚膜梭菌外毒素,灭活和脱毒后加入冻干保护剂,冷冻干燥制成冻干灭活疫苗。该疫苗性状为类白色海绵状疏松团块,无菌检验合格,疫苗对仔猪和怀孕母猪安全,怀孕母猪免疫该疫苗后所产仔猪对大肠埃希菌和C型产气荚膜梭菌的攻毒保护率均在80%以上。临床应用结果表明,该疫苗能明显提高免疫母猪的窝平仔猪成活数。

CAV基因工程亚单位苗与IBDV二联灭活疫苗的研究

IBDV为自行分离的 VVIBDV COB-C1组织毒 ,毒价为 CEL D50 1 0 5.6 / 0 .2 m L ,CAV为 VP1和 VP2基因克隆进家蚕杆状病毒转基因载体质粒中 ,后经重组 ,筛选后获得的重组VP1和 VP2基因产物。IBDV经甲醛灭活后与CAV按适当比例混合。 1∶ 4与白油佐剂研制成油包水型乳化剂二联疫苗 ,经安全试验、免疫保护试验证明该二联灭活疫苗安全有效 ,免疫种鸡群后可使其后代产生 IBDV和 CAV抗体 。

鳜鱼传染性脾肾坏死病和弹状病毒病二联灭活疫苗毒种及种子批的研究

【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10)后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力。PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因、RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性。对F1、F5和F10代ISKNV、SCRV毒种进行细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性。分别将F1、F5和F10代ISKNV、SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率(RPS)。将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期。【结果】各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为10^(8.58)~10^(8.875) TCID_(50)/mL,ISKNV滴度为10^(7.38)~10^(7.625) TCID_(50)/mL。F1、F5和F10代ISKNV按10^(4) TCID_(50)/mL、SCRV按10^(6.5) TCID_(50)/mL对鳜鱼攻毒(每尾0.1 mL),致死率均超过90%。ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1300 bp的MCP基因和1500 bp的G基因,特异性良好。ISKNV、SCRV毒种无细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染。各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92%以上,SCRV可达84%以上;湿毒-80℃保存,保存期为36个月。【结论】10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验。

鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌二联灭活疫苗研究

将鸭疫里氏杆菌(RA)通过加有血清的改良肉汤培养,得菌数在520亿～2000亿/mL的菌液;鸭大肠杆菌(E.coli)通过普通肉汤培养,得菌数在1000亿～5000亿/mL的菌液,将两菌液甲醛灭活后以2.5∶1的比例混合,再与灭菌的油乳剂以2∶5的比例强力搅拌,制成二联油乳剂灭活疫苗,经无菌检验,安全检验合格后,做免疫保护试验,免疫6日龄雏鸭(0.5mL/只),于18天后攻毒(RA:0.2mL/只;E.coli:0.1mL/只),保护率分别为75%和50%;6日龄一免,14日龄二免(均0.5mL/只),于二免后11天攻毒,保护率分别为100%和80%。

猪链球菌病二联灭活疫苗生产菌株的筛选及培养条件的优化

1997年以来上海地区猪链球菌病的主要致病菌群为马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型,通过动物试验,从10株马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型分离株中筛选出毒力强、免疫原性好的ATCC35246和HA9801株,作为制备疫苗用的生产菌株。对3种不同培养基、血清浓度、葡萄糖浓度、静置和振荡培养、培养基预热等对细菌生长的影响进行了比较。结果表明,用含有2%犊牛血清、0.2%葡萄糖的改良马丁肉汤培养基较为合适;温度对细菌生长的影响很大,培养基接种前预热可以提高细菌产量;振荡培养对细菌生长的影响不大。

ND-IB二联灭活疫苗不同免疫方法对IB部分免疫效果影响的试验

鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触传染性病毒性疾病。鸡传染性支气管炎病毒属于冠状病毒科冠状病毒属,主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统等。鸡传染性支气管炎病毒作为鸡呼吸道疾病综合征的一种原发性病原,极易造成呼吸道疾病的继发感染,使疫情变得更加复杂,病死率升高,给养殖业造成严重的经济损失,不但会引起鸡只死亡,

不同新城疫、禽流感二联灭活疫苗免疫效果探讨

在家禽传染病中，新城疫和禽流感仍是制约养鸡经济效益的2种主要传染病。目前，免疫预防仍是防控鸡新城疫（ND）和H9N2亚型禽流感（AI）的有效措施。为有效防控新城疫和H9N2亚型禽流感，瑞普生物和河南农业大学禽病研究所通力合作，成功研制了鸡新城疫（LaSota株）、禽流感H9亚型（HP株）二联灭活疫苗。

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗三种佐剂乳化效果比较

新城疫（ND）和禽流感（AI）是危害养禽业最为严重的两种传染病,广泛分布于世界各国。这其中,ND与H9亚型AI混合感染发病率最高,在临床上最常见,给我国的养禽业造成了严重的经济损失。国内外普遍使用疫苗（有活苗和灭活苗两种）预防这该疾病,单苗的使用较为普遍,但单苗存在使用不便,两次免疫造成养殖成本上升。

间接ELISA检测猪链球菌病二联灭活疫苗抗体动态变化

为了评价猪链球菌病二联灭活苗的免疫效果,建立了检测该疫苗抗体的间接ELISA方法。以HRP-SPA(酶标葡萄球菌蛋白A)作为第二抗体,疫苗菌株超声波破碎抗原为包被抗原。试验证明所建立的间接ELISA特异性好,比琼扩试验敏感200倍。用此方法检测了氢氧化铝胶、蜂胶、矿物油三种佐剂疫苗的抗体消长情况,铝胶苗抗体产生的时间比较早,抗体水平比较高,4～5周达到高峰,随后开始下降,二免后抗体水平迅速回升,120d时仍保持较高的效价(1∶1000);蜂胶苗和油佐剂苗抗体上升比较舒缓,持续时间长,7周后还能维持一定的抗体水平(1∶400)。

仔猪大肠埃希氏菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的效力和安全试验

将带有K88、K99和987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)菌株(C83549、C83644和C83710)和免疫原性良好的C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type C)菌株(C59-2、C59-37和C59-38)第10代基础种子制备的原液进行浓缩、甲醛溶液灭活和脱毒后,按抗原含量,加氢氧化铝胶制成3批二联灭活疫苗。经过对免疫怀孕母猪所产仔猪的攻毒测定,得到疫苗最小的免疫剂量为每头2mL,确定使用剂量为每头4mL。疫苗的免疫攻毒试验结果表明,疫苗在怀孕母猪中采用颈部肌肉注射进行免疫,二次免疫才能使仔猪通过吮吸初乳获得80%以上的被动免疫保护能力,与单苗具有相似的免疫保护力;单剂量、单剂量重复和超剂量的安全性试验结果显示,3批二联灭活疫苗不会引起母猪的全身不良反应和明显的局部反应,无流产,胎儿发育完全正常。

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗乳化工艺研究

在灭活疫苗制造过程中,疫苗的乳化工艺是保证疫苗品质的重要环节,也是影响疫苗稳定性的关键步骤之一[1-3]。试验以《中国兽用生物制品制造与检验规程》（2000年版）的乳化方法为基础,

新囊宝(鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗La Sota株+HQ株)对1日龄白羽肉鸡的免疫效果试验

法氏囊病是一种急性高度接触性传染病，能引起雏鸡的免疫抑制，破坏法氏囊上B淋巴细胞的形成，目前成为危害养鸡业的主要疫病之一。由于法氏囊病毒的特殊性，强毒性疫苗引起的免疫抑制经常发生，增加了本病的预防难度。新囊宝作为一种新型全病毒灭活疫苗，可以减少鸡群排毒和环境污染，消除免疫抑制，为评价本疫苗在白羽肉鸡的免疫效果，本试验分别对新囊宝疫苗免疫后抗体水平监测及攻毒保护，现报告如下。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗预防效果观察

猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻是一个全球性的问题,长期一直困扰着养猪业的发展,它们不仅直接威胁着仔猪的生长发育,而且也是仔猪饲养管理工作中的重点和难点,特别是冬春季节，天气骤变，更容易促发这两种疫病。

鸡新城疫、减蛋综合征二联灭活疫苗效力稳定性试验

兽药生产质量管理规范（简称兽药GMP）对生物制品中疫苗的留样观察一项中要求：在适宜条件下保留的疫苗样品,应在不同时间段定期监测其效力,看能否达到国家标准。2005年版《中华人民共和国兽药典》三部规定：鸡新城疫、减蛋综合征二联灭活疫苗在2～8℃保存,有效期为12个月。