珍珠蚌肉二肽基肽酶-IV抑制肽的制备与分离

目的:以珍珠蚌肉为原料制备对二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase,DPP)-IV具有抑制作用的生物活性肽。方法:利用两步酶解法并优化珍珠蚌肉酶解条件,筛选体外DPP-IV抑制活性较高组分进行超滤膜浓缩,Superdex^(TM) peptide 10/300 GL凝胶柱层析与反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)技术分离纯化出酶解液中的DPP-IV抑制肽,最终通过液相色谱-串联质谱鉴定其氨基酸序列。结果:中性蛋白酶与碱性蛋白酶对珍珠蚌肉均有良好降解效果,经3 kDa超滤膜浓缩后,酶解产物的DPP-IV抑制率可达67.4%。通过凝胶过滤柱和RP-HPLC进一步分离纯化出6个活性较高的肽段,序列分别为FNAPAM、FIPNY、IYNPPTPF、LAMPYP、FFVVMP和LAGMP。进一步,以分子对接的方式分析6个肽段与DPP-IV的相互作用关系。结论:本研究利用珍珠蚌肉制备DPP-IV抑制肽,可为以水产加工副产物为原料制备功能性食品提供理论参考。

鲟鱼皮中二肽基肽酶-IV抑制肽的分离纯化与鉴定

为从鲟鱼皮中分离提取出二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)抑制活性肽,以鲟鱼皮胶原蛋白为主要材料,利用蛋白酶进行酶解,以DPP-IV抑制率为主要考察指标,在单因素试验的基础上,进一步利用响应面法优化了鲟鱼鱼皮中DPP-IV抑制肽的制备工艺条件,确定最佳酶解条件为:酶解温度50℃、料液比1∶100(g/mL)、pH 6.12、加酶量10170.35 U/g、酶解时间12.12 h。在此基础上,通过超滤、凝胶层析及反相高效液相色谱的方法对酶解产物进行分离纯化;采用液相色谱-串联质谱法对多肽进行鉴定,结果显示纯化后具有DPP-IV抑制活性肽氨基酸组成为:甘氨酸-脯氨酸-丝氨酸-甘氨酸-亮氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-赖氨酸(GPSGLDGAK),IC_(50)值可达(61.27±1.16)μmol/L。本研究结果可为利用鲟鱼皮生产新型的生物活性成分提供参考。

白啤中二肽基肽酶-IV抑制肽的虚拟筛选及活性分析

以青岛白啤作为研究对象,建立一种快速筛选二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)抑制活性肽的方法。白啤经超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱结合De novo软件鉴定出肽段序列,确定了置信度较高的68条肽段。应用Peptide Ranker对68条肽段进行生物活性评分,筛选出评分大于0.5的4条肽段,同时又根据先前文献对抑制DPP-IV活性肽的氨基酸位点研究报道,筛选出13条肽段。对筛选出的17条肽段进行吸收、代谢及毒性预测及分子对接评价,选定了VPFPHTP和LAKLQR两条潜在抑制DPP-IV活性肽段。通过肽段与DPP-IV分子对接构象图表明,选定的2条活性肽均能以氢键及疏水作用紧密结合DPP-IV,从而抑制其活性。利用体外方法验证2条活性肽抑制DPP-IV活性,结果显示2条肽段具有明显的DPP-IV抑制活性。

胃旁路术与二肽基肽酶-IV抑制剂治疗对2型糖尿病患者血糖及肠促胰素水平的影响

目的:观察胃肠旁路术与应用二肽基肽酶-IV(DPP-IV)抑制剂治疗后的2型糖尿病患者糖脂代谢变化及肠-胰岛轴激素分泌,进一步了解术后代谢改变机制。方法:符合入选条件的75例2型糖尿病患者随机分两组:胃肠旁路术组(n=42)与DPP-IV抑制剂治疗组(n=33)。观察并比较治疗后各项代谢指标的改变。结果:两组血糖均有明显下降。胃肠旁路术组患者血糖、血脂、体质量较治疗前均显著下降;DPP-IV抑制剂治疗组体质量、血脂下降较治疗前差异无统计学意义。胃肠旁路术组饮食刺激后胰升糖素样肽-1(GLP-1)水平增加。结论:术后肠促胰素水平的增加可能对糖尿病患者血糖、血脂水平的下降起关键作用。手术治疗明显优于DPP-IV抑制剂治疗。

妊娠期糖尿病患者血清中胰高血糖素样肽-1及二肽基肽酶-IV的浓度检测及临床意义

目的:研究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和二肽基肽酶-IV(DPP-IV)的水平,并探讨其在妊娠期糖尿病中的作用。方法:采用ELISA法检测43例GDM患者、38例糖耐量正常孕妇及35例正常非孕妇血清GLP-1及DPP-IV的水平;同时测定3组妇女空腹血糖(FPG)、胰岛素(FINS)及糖化血红蛋白(HbA1c)的水平,并根据HOMA稳态模型提出的公式,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素分泌指数(HOMA-HBCI)进一步评价胰岛β细胞的功能。结果:①GDM患者血清GLP-1水平明显低于糖耐量正常孕妇组及正常非孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05),血清DPP-IV水平明显高于糖耐量正常孕妇组及正常非孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05);②GDM患者与另两组相比,存在明显的胰岛素抵抗(HOMA-IR明显增大,P<0.05),而胰岛素分泌明显下降(HOMA-HBCI明显减小,P<0.05),差异均有统计学意义。结论:GDM患者血清GLP-1水平明显下降,而DPP-IV水平明显升高,可能在GDM的发病中发挥一定的作用。

二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性酵母筛选与鉴别

二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂是一类二型糖尿病治疗药物,可通过延缓肠泌素的降解达到控制血糖的效果。该研究对分离自酒醅的酵母菌进行筛选,得到2株具有DPP-Ⅳ抑制活性的酵母菌,命名为菌株J6和J8。通过生理生化反应试验和26S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,这两株酵母菌中,J6为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),J8为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)。

靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV)是治疗II型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能.二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性.本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系.确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37?C、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系.应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选.本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.

二肽基肽酶-Ⅳ介导内皮间质转化在糖尿病肾纤维化过程中的作用及机制研究

目的:探讨二肽基肽酶-Ⅳ在糖尿病肾纤维化中的作用及机制。方法:动物实验中建立糖尿病CD-1小鼠慢性肾纤维化模型,予以二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂干预4周后,检测正常组、糖尿病组及干预组中肾脏组织中二肽基肽酶-Ⅳ的表达及内皮间质转化的变化。细胞实验中培养人微血管内皮细胞,分别予以TGFβ2及二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂或si RNA干预,观察各组中二肽基肽酶-Ⅳ、内皮间质转化及TGFβ/smad信号通路的变化。结果:与正常小鼠相比,糖尿病小鼠肾组织表现出明显纤维化改变、高表达的二肽基肽酶-Ⅳ以及明显增强的内皮间质转化;二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂干预后肾纤维化及内皮间质转化明显缓解及抑制。细胞实验中,二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂或si RNA能明显降低TGFβ2诱导的内皮间质转化及TGFβ/smad信号通路。结论:二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂能通过抑制内皮细胞间质转化来改善糖尿病肾纤维化。

二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂治疗2型糖尿病临床疗效观察

目的:探讨二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂治疗2型糖尿病的临床疗效。方法:将治疗组79例用二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂治疗与对照组78例用中药治疗进行疗效比较观察。结果:治疗组显效率为63.29%,总有效率为91.14%;对照组显效率为41.03%%,总有效率为67.95%。治疗组明显优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂用于治疗2型糖尿病是有效的,并且可以改善胰岛B细胞的功能,抑制胰升糖素释放,达到控制血糖的目的。

牦牛乳酪蛋白水解制备DPP-IV抑制肽的蛋白酶发掘及其酶解工艺优化

发掘制备牦牛乳酪蛋白二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)抑制肽的蛋白酶,并对其酶解工艺进行优化。首先对牦牛乳酪蛋白进行模拟酶切筛选蛋白酶,然后开展单酶和多酶组合水解效果研究。结果表明,制备DPP-IV抑制肽的最佳酶组合为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶,最佳酶解工艺为超声温度64℃、超声功率460 W、超声时间82 min,碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶依次酶解0.5 h,加酶量3000 U/g,酪蛋白水解物DPP-IV抑制率为(67.05±0.79)%,水解度为(30.57±0.72)%。结果表明,将组合酶水解联合超声预处理方法应用于酶解牦牛乳酪蛋白,可获得高活性DPP-IV抑制肽。

计算机模拟纳豆源多肽与DPP-IV和SARS-CoV-2Mpro的相互作用

兼具糖尿病的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease2019,COVID-19)患者病死率明显偏高,抑制Ⅱ型糖尿病关键酶二肽基肽酶4(DPP-IV)和新冠肺炎病毒主蛋白酶(SARS-CoV-2 Mpro)的活性能缓解相应的病症。该研究采用UniProt、NCBI和PDB数据库检索纳豆蛋白,基于BIOPBP-UWM数据库开展计算机模拟胃肠道蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)水解纳豆蛋白的研究,最后利用分子对接技术分别研究纳豆蛋白源多肽与DPP-IV和SARS-CoV-2 Mpro的结合能力,分析参与相互作用的氨基酸残基与分子作用力类型。结果发现,糖转运蛋白与两种酶具有良好的结合效果。特别地,序列为ISQPR、TIPVR和STVTR的多肽对两种酶都具有较高的结合分数(≤-130),被鉴定为DPP-IV和SARS-CoV-2Mpro的双重抑制肽。因此,纳豆蛋白具有缓解Ⅱ型糖尿病病症和作为新型冠状病毒感染病人营养补充剂的潜力。

构建二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂体外筛选模型及相关化合物抑制活性的测定

目的:建立二肽基肽酶-IV(DPP-IV)抑制剂体外筛选模型,并测定相关化合物的抑制率。方法:提取Caco-2细胞中DPP-IV,测定酶不同活力单位的吸光度(A),绘制活性-吸光度相关性曲线评价酶的活性与A的相关性;以sitagliptin为阳性对照测定其半抑制浓度(IC50)验证本实验模型;以该模型测定sitagliptin衍生物及对DPP-IV有抑制作用化合物的抑制活性。结果:酶的活性在一定范围内与A成直线相关;以本模型测定的sitagliptin IC50为18.354 nmol.L-1;JD-1,JD-2 IC50分别为3.4,2.6μmol.L-1,相关化合物的抑制率在21.45%～27.77%之间。结论:使用本DPP-IV抑制剂筛选模型测定的sitagliptin IC50与文献报道的相近,证明本模型的有效性,所测化合物有一定抑制活性。

抗糖尿病新药维格列汀

维格列汀(vildagliptin)是继西他列汀(sitagliptin)后的又一个二肽基肽酶-IV(DPP-IV)抑制剂,用于治疗2-型糖尿病。临床研究表明,维格列汀是一个口服有效、市场前景良好的药物,单用或与二甲双胍、胰岛素合用都有明显的降血糖作用,且服用安全,耐受性好,不良反应少。现对其作用机制、药效学、药动学、临床疗效进行综述。

乳清蛋白及其生物活性肽调节血糖功能研究进展

乳清蛋白及其生物活性肽具备多种保健功能,其调节血糖的功效受到关注,且乳清蛋白已被证实具有延缓2型糖尿病的功效。糖尿病是当今全球十大致死疾病之一,而90%的糖尿病患者所患为2型糖尿病。生活方式干预和药物营养治疗是当下治疗糖尿病的重要手段。前人的研究表明乳清蛋白及其生物活性肽调节血糖机理包括改善胰岛素抵抗、抑制α-葡萄糖苷酶活性、促进肠促胰素分泌等。本文综述了乳清蛋白及其生物活性肽调节血糖的作用及其调节血糖可能机制的研究进展,归纳了乳清蛋白源二肽基肽酶-IV抑制肽的相关研究,以期为乳品行业革新提供参考。

胃转流术对2型糖尿病大鼠空腹血糖的影响及其机理

目的探讨胃转流术对糖尿病大鼠空腹血糖的影响及其机理。方法采用链脲佐菌素建立糖尿病SD大鼠模型,随机分为糖尿病手术组(DO组,n=10)和糖尿病对照组(DC组,n=10),另取20只非糖尿病大鼠随机分为正常手术组(NO组,n=10)和正常对照组(NC组,n=10)。DO组和NO组大鼠行胃转流术,DC组和NC组大鼠行假手术,分别检测各组大鼠术前、术后72 h和1、4及8周空腹血糖水平以及血清二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度。结果术前DO组与DC组以及NC组与NO组间大鼠空腹血糖差异均无统计学意义(P>0.05);DO组大鼠术后空腹血糖进行性下降,至术后4周达最低,术后8周略有上升,均明显低于术前(P<0.05),DO组大鼠术后各时相空腹血糖均明显高于相应时相的NO组和NC组,但低于DC组(P<0.05);DC组大鼠术前及术后各时相空腹血糖水平的差异均无统计学意义(P>0.05);NO组和NC组大鼠组内不同时相以及相同时相2组间空腹血糖水平差异均无统计学意义(P>0.05)。术前4组大鼠血清DPP-Ⅳ浓度间的差异均无统计学意义(P>0.05);与术前相比,DO组和NO组大鼠术后血清DPP-Ⅳ浓度进行性下降,且均明显低于同组术前结果(P<0.05);DO组大鼠术后各时相血清DPP-Ⅳ浓度均明显低于相应时相DC组(P<0.05),NO组大鼠术后各时相血清DPP-Ⅳ浓度也明显低于相应时相NC组(P<0.05);DC组和NC组大鼠手术前、后各时相血清DPP-Ⅳ浓度的差异均无统计学意义(P>0.05)。术前DO组与DC组间以及NO组与NC组间大鼠血清GLP-1浓度的差异均无统计学意义(P>0.05);DO组和NO组大鼠术后血清GLP-1浓度开始明显升高(P<0.05),至术后4周达最高,术后8周稍下降,均明显高于术前(P<0.05);DO组大鼠术后各时相血清GLP-1浓度均高于相应时相DC组(P<0.05),也高于相应时相NO组(除术后72 h外,均P<0.05);NO组大鼠术后各时相血清GLP-1浓度均明显高于相应时相NC组(P<0.05),NO组内术后血清GLP-1浓度无明显变化(P>0.05);DC组和NC组同组内大鼠手术前、后血清GLP-1浓度无明显变化(P>0.05)。结论胃转流术对2型糖尿病大鼠具有明显的降糖作用,DPP-Ⅳ低分泌和GLP-1的升高在其中起着重要作用,胃转流术但对正常大鼠血糖无影响。