云南重楼中不同形态重金属元素含量测定及其化学模式识别研究

目的考察云南重楼中重金属元素不同形态的含量,同时基于主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对其进行化学模式识别。方法采用经典Tessier连续提取法和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对6种重金属元素(Cu、Cd、Cr、Pb、As、Hg)的不同形态进行连续提取和含量测定,并进行化学计量学分析,考察不同生长方式下药材中重金属存在形态与分布的差异性。结果6种重金属元素中Cu超标情况最严重,风险最高,其次为Pb和Cr,野生品重金属超标情况比种植品更严重。PCA无法将27批野生和栽培样品分开,而OPLS-DA可将两者分开。结论以单一元素含量为云南重楼重金属元素含量限定标准具有一定局限性,结合其不同形态的含量测定可能更具实际意义。

云南重楼果皮中1个新的C_(21)甾体皂苷

目的:研究云南重楼果皮中的甾体皂苷类成分。方法:采用HPD-100大孔吸附树脂柱、正相硅胶柱、ODS柱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱和半制备型高效液相色谱等方法对云南重楼果皮70%乙醇渗漉提取物中的甾体皂苷类成分进行系统研究,通过现代波谱学技术结合参考文献对化合物结构进行鉴定。结果:从云南重楼果皮中分离得到8个甾体皂苷类化合物,分别鉴定为:17α-hydroperoxide pregn-5-en-20-one-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(1)、重楼皂苷Ⅳ(2)、ypsilandroside L(3)、重楼皂苷Ⅲ(4)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(5)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-arabinopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(6)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(7)、aethioside A(8)。结论:其中,化合物1为一个新的C_(21)甾体皂苷类化合物,化合物3、5、6、8为首次从重楼属植物中分离得到。

云南重楼的皂苷类化学成分研究

目的 研究云南重楼根状茎中的皂苷类化学成分。方法 利用硅胶柱色谱、硅胶C-18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术,从云南重楼根茎70%乙醇提取物的水饱和正丁醇萃取物中,纯化得到单体成分。通过NMR、MS等波谱分析和酸水解等化学方法对其进行结构鉴定。结果 共分离得到6个皂苷类化合物,分别鉴定为parisyunnanosideⅠ(1)、paristenoside B(2)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,16α,26-三羟基-(23R,25R)-16,23-环胆甾烷醇-5,17(20)-二烯-22-酮-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-17,22-二羟基-(25R)-呋甾-5-烯-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、parisyunnanoside A(5)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基-(25R)-胆甾-5,17(20)-二烯-16,22-二酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)。结论 化合物3、4和6为首次从云南重楼中发现。

云南重楼侧根化学成分及生物活性研究

采用YWD-3F大孔吸附树脂、硅胶层析柱、反相材料(Rp-18)、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)和制备以及半制备HPLC等多种材料和分离手段对云南重楼侧根75%乙醇提取物的化学成分进行研究,结合NMR、MS、UV、IR等现代波谱技术和化学方法进行结构鉴定。结果从云南重楼侧根中分离得到11个化合物,并用Ellman法评价部分化合物的乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物1的IC 50值为39.229μmol/L,具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。

云南重楼种子育苗技术研究

目的：缩短云南重楼种子萌发和出苗所需时间，提高其出苗率；提出在生产中切实可行的云南重楼种子有性繁殖育苗方法。方法：考察不同温度、不同播种方式（播种时间、覆土厚度、地膜覆盖）等因素对云南重楼种子萌发和出苗的影响。结果：云南重楼种子胚后熟和萌发的最适温度在18～20℃，在此温度下处理3～4个月以后，转至0～10℃低温处理2～4个月，可在翌年4月出苗；适宜的播种时间是4月份以前，育苗土覆盖厚度为1cm左右，播种后用黑色地膜进行覆盖，可提高出苗率。结论：上述试验结果可为云南重楼种子育苗提供操作参考。

云南重楼种子萌发过程内源激素含量及酶活性变化研究

为探讨云南重楼种子萌发不同阶段的酶和内源激素的变化,本研究采用生理生化方法测定云南重楼种子萌发不同阶段超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、苹果酸脱氧酶(MDH)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PDH)活性,以及吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA_3)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、反玉米素(TZ)、茉莉酸(JA)6种内源激素的含量,并分析比较其差异。结果表明,云南重楼种子在即将出苗阶段的SOD、POD活性迅速升高,CAT、MDH和G-6-PDH活性降低;IAA、GA_3含量均在即将出苗阶段显著高于其他阶段,种子休眠解除后ABA含量迅速下降。胚根刚突破种皮阶段,其SA、TZ、JA含量均最高,SOD、POD、IAA、GA_3间呈极显著正相关(P<0.01),MDH与G-6-PDH呈极显著正相关(P<0.01),ABA与GA_3呈显著负相关(P<0.05),SA、TZ、JA间呈极显著正相关(P<0.01),IAA/ABA、GA_3/ABA、SA/ABA在种子休眠解除和出苗阶段均呈上升趋势。综上,SOD、POD、GA_3是种子出苗阶段的关键物质,TZ、SA和JA对种子休眠解除具有重要的影响,IAA/ABA、GA_3/ABA及SA/ABA增大对种子休眠解除和出苗均有促进作用。本研究结果为云南重楼种子繁殖提供了理论依据和实践指导。

不同海拔、土壤类型及肥力对云南重楼产量和质量的影响研究

研究了不同海拔高度、土壤类型及肥力条件下云南重楼的生长情况。结果表明,在1700～3100 m海拔范围内,云南重楼的产量与海拔高度没有相关关系,但与土壤的类型、肥力和耕作水平有关系;云南重楼在经常翻用、有机质含量或速效肥力较高的壤土中生长可获得较高的产量。不同海拔、土壤类型及肥力对云南重楼质量没有影响。

云南重楼的甾体皂苷类成分

目的:对重楼属(Paris)植物云南重楼(Paris polyphyllaSmith var.yunnanensis)的甾体皂苷类成分进行研究。方法:采用大孔树脂,硅胶柱色谱,Sephadex LH-20及RP-C18等技术分离纯化单体化合物,根据理化性质、波谱数据鉴定其结构。结果:从云南重楼乙醇提取物中分离并鉴定了9个甾体皂苷类化合物:(23S,25S)-3β,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(1)、重楼皂苷Ⅰ(2)、重楼皂苷Ⅱ(3)、(25R)diosgenin-3-O-β-D-glucopyranoside(4),(25R)diosgenin-3-O-α-L-arabinofuranosyl(1→4)-β-D-glucopy-ranoside(5),(25R)diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside(6),(25R)diosgenin-3-O-β-D-glu-copyranosyl(1→3)[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(7),(25R)pennogenin-3-O-α-L-arabinofura-nosyl(1→4)[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside(8),(25R)pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranoside(9)。结论:化合物1为新化合物。

云南重楼高产栽培施肥研究

为探明肥料施用对云南重楼产量的影响，采用不同梯度施肥水平研究有机肥对云南重楼产量的影响；采用三元二次回归正交设计方法研究NPK无机肥对云南重楼产量的影响。结果表明，云南重楼的高产需要较高的肥力条件，在中等以下的土壤肥力条件下，云南重楼的最佳农家肥施肥量为3000～4500kg/667m2之问。N素和P素是云南重楼生长的养分限制因子。可见，施用适宜有机肥和N、P无机肥可以大幅度提高云南重楼单位面积产量。

红外光谱结合化学计量学快速鉴别云南重楼不同炮制品

中药炮制是根据中医学理论,改变中药的性味和功效,以达到缓和药性、减毒增效等作用。炮制对中药的活性成分、药效、毒副作用影响甚大,建立一个系统鉴别和评价中药不同炮制品的方法,可为中药质量和临床用药安全提供重要支撑。采用红外光谱法对9种云南重楼不同炮制品进行对比分析,结合化学计量学建立主成分-马氏距离(PCA-MD)判别模型进行鉴别分析。云南重楼不同炮制品的红外光谱经自动基线校正和纵坐标归一化预处理后,取其平均光谱图。九种重楼不同炮制品的平均红外光谱和二阶导数光谱显示:(1)其主要特征吸收峰为3 387,2 923,1 745,1 463,1 338,1 240,1 207,1 158,1 180,1 080,1 048,1 020,988,921,895,859,833,765,708,572和529cm^(-1);(2)重楼不同炮制品红外图谱的峰形基本相似,可显示出重楼所特有的红外光谱特征;(3)重楼不同炮制品红外图谱中少数特征吸收峰数目、位置和吸收强度存在差异,表明重楼经不同炮制后化学成分和含量发生了改变。红外光谱经多元散射校正(MSC),标准正态变量(SNV),一阶求导(1st Der),二阶求导(2nd Der)和平滑(SG)优化处理后,采用Kennard-Stone算法筛选训练集和预测集(3∶1),建立PCA-MD判别分析模型。结果显示,重楼不同炮制品的最佳预处理方法为1st Der+SG(11∶3)。提取前5个主成分,变量特征的解释能力为88.2%,以PC1,PC2和PC3为坐标轴建立PCA-MD三维得分图可知,九种炮制品可完全区分;其中重楼I,H,G和F的聚类效果最好,且前三种炮制品距离较近,表明晒干和烘干处理重楼与传统炮制重楼所含化学成分相似;重楼D和E空间距离较近,推测其经过微波和蒸汽高温处理后化学成分变化相似。预测集样本可准确的归属于训练集,PCA-MD判别模型的准确率为100%。红外光谱结合PCA-MD判别分析可准确区分云南重楼的不同炮制品,为云南重楼炮制品的临床应用提供参考,同时为中药炮制品的鉴别提供了借鉴。

云南重楼根状茎切段苗繁育技术研究

研究了不同生长调节剂、种植时间、土壤湿度、基质等因素对云南重楼根状茎切段潜伏芽萌发和出苗的影响。结果表明:用6-BA 2 mg/L和生根粉ABT1适宜浓度能提高云南重楼根茎切段的繁殖率。其中6-BA 2 mg/L处理云南重楼根茎切段可显著提高切段多芽率。大田常规切段种植时,冬季是进行根状茎切段种植的合适时间;集中育苗时,切段在壤土中进行潜伏芽的萌发效果较好。土壤相对含水量60%左右,可使繁殖材料损失率降低到10%以内。

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。

云南重楼不同地理种源分析评价与研究利用

在相同种植条件下,对来源于云南省23份云南重楼种源进行了物候期、形态特征及经济性状的观察、分析与评价。结果表明,不同地理种源的重楼生长物候期、形态特征及经济性状因地理来源不同有一定的差异;综合物候期、形态特征及经济性状的分析与评价,来自于鹤庆县马鞍山、玉龙县巨甸的重楼为优势种源,可作为今后良种选育的种质材料。

云南重楼的组织培养与植株再生

1植物名称 云南重楼[Paris polyphylla Smith var．yunnanensis（Franch．）Hand．-Mazz．]。 2材料类别 芽。 3培养条件愈伤组织诱导培养基：（1）MS＋6-BA2mg．L。（单位下同）＋NAA0．1；愈伤组织增殖和分化培养基：（2）MS＋6-BA2＋NAA0．5＋KT0．5；生根培养基：（3）1／2MS＋NAA0．5＋IAA0．5。

云南重楼种苗繁育技术

目的:研究云南重楼种苗繁育技术。方法:在对云南重楼种苗繁育技术多年试验研究的基础上,总结了云南重楼有性和无性繁育技术。结果:通过种子胚后熟催芽处理,当年出苗率达到30%以上,种子育苗5年开花结果可移栽作种苗,根茎单重达到8～15g;带顶芽的切段当年可移栽,成苗率达到90%以上,不带顶芽的切段第3年开花结果成苗,成苗率达到98%以上,根茎单重达到7～12g。结论:通过此技术可实现云南重楼种苗的规范化快速生产,促进云南重楼的产业化栽培和发展。

云南重楼内生细菌的分离鉴定及系统发育树分析

利用云南文山采集的人工栽培和野生云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch)根茎,对其内生细菌进行了分离、纯化及鉴定。分离得到40和44株云南重楼内生细菌。经16S rDNA测序,在NCBI中比对,MEGA4建系统进化树,所得内生细菌分别鉴定为分属于6和8个属。其中,人工栽培云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和肠杆菌属(Enterobacter)分离频率分别为35%、27.5%,是其优势内生细菌群;野生云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和克雷伯氏菌属(Klebsiella)分离频率分别为36.4%、20.4%,是其优势内生细菌群。本研究结果体现了人工栽培和野生云南重楼内生细菌分布的差异及云南重楼根中内生细菌的多样性,也为后续重楼内生菌的多样性开发提供了理论和实验基础。

云南重楼的化学成分

采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20和ODS等色谱技术,对云南重楼的大孔树脂30%乙醇(体积分数)洗脱部位进行分离,得到13个化合物,通过理化常数和波谱手段鉴定其结构.化合物分别鉴定为calonysterone(1),glycoside St-J(2),methyl ester of glycoside St-J(3),cussonoside B(4),methyl 3,4-dihydroxybenzoate(5),α-ecdysone(6),20-hydroxyecdysone(7),pinnatasterone(8),重楼皂苷H(9),重楼皂苷Ⅶ(10),parisaponin I(11),parisyunnanoside B(12)和重楼皂苷Ⅱ(13).其中化合物1-5首次从该属植物中分离得到,1-6首次从该植物中分离得到.

云南重楼种苗分级栽培生长情况分析

目的:研究云南重楼种苗分级栽培对云南重楼生长的影响。方法:对云南重楼不同分级种苗种植3年后的根状茎大小、存活率、根状茎增重、小区产量等指标进行比较研究。结果:优选出最佳的种苗分级。结论:最适宜的云南重楼种苗根状茎为10g左右,种植3年增重倍数可达3倍以上。

云南重楼的高产优质栽培技术初探

云南重楼栽培技术研究主要以解决产量问题为目的,重楼内含物含量的高低往往在研究中被忽视,为了实现重楼高产优质的目标,将云南重楼重新还原于与原生境相似的地块下进行种植,在研究平均净增产量与环境因子关联程度的同时,结合内含物含量加以分析。结果表明,平均净增产量高的内含物含量不一定高,内含物含量高的平均净增产量也不一定高;为了实现高产优质的目标,利用云南重楼各试验点收集的环境因子数据,采用灰色系统理论加以科学的分析,得出以下结论,在14个环境因子中,有效氮、有机质、全氮、全磷、有效磷和有效钾这6个土壤因子与平均净增产量和内含物含量关联密切,其中,有效氮和全氮主要影响云南重楼根茎平均净增产量,有效磷和全磷主要影响云南重楼内含物含量的积累。有机质在平均净增产量和内含物含量协同发展中起重要的作用。

不同环境因子种植云南重楼的差异性研究

为了从研究什么样的环境条件下更适合种植云南重楼和环境因子中与云南重楼平均净增产量关联密切的因子,利用灰色系统理论,将环境因子和平均净增产量组成一个灰色系统,对同一组数据从不同试验点与理想指标的灰色关联分析和平均净增产量与各项环境因子的灰色关联分析两个层面加以研究,结果表明,试验点的灰色关联度排序是:丽江玉龙县石头乡利苴(H5)>大理鹤庆县马场(H7)>丽江玉龙县鲁甸乡拉美荣(H6)>丽江玉龙县石鼓镇(H1)>丽江玉龙县巨甸镇德良(H3)>丽江古城区白沙乡高山所试验基地(H4)>丽江玉龙县巨甸镇金河(H2);环境因子的灰色关联度排序是:有效氮>有机质>全氮>全磷>有效磷>有效钾>降雨量>海拔>p H值>全钾>最热月平均气温>年均气温>年≥10℃积温>最冷月平平均气温。综合分析结果,表明H5、H7和H6试验点的土壤中有效氮、有机质、全氮、全磷都比较协调,易获得高产。针对应用与推广,测土结合配方施肥很关键,对土质粘性和砂性的地块,采取客土措施以改善土壤的微环境有利于云南重楼的生长。