18个野生云芝种质资源及药材品质评价

目的:研究18株野生云芝种质资源的农艺性状和药材品质,为筛选可供人工培育的高产优质云芝药材菌种提供理论参考。方法:测定18株云芝菌丝、子实体农艺性状及子实体多糖、浸出物、麦角甾醇含量和重金属含量,并进行综合评价。结果:菌株YUN5、HN04、JL3、NX17首茬子实体生物产量较高;菌株YUN4、YUN5、DB5、NX4子实体多糖含量均超过2020年版中国药典规定的3.2%;14个菌株子实体浸出物含量均超过药典标准规定的18%,YUN1、HN02、NX6、NX18未达药典标准。子实体中麦角甾醇含量最高菌株为NX4,达到0.58 mg/g;菌株YUN5、HN01、DB4、JL2、NX4子实体中Cr、Cu、As、Cd、Pb含量均未超过标准规定的限量值。结论:菌株NX4、DB5、YUN5在加权评分及主成分分析评价中排名前列且符合2020年版中国药典规定的云芝外观、多糖含量和浸出物含量要求,可作为优质云芝种质资源,同时也可作为云芝药材品质优良菌种;加权评分排名靠前的YUN2、YUN4以及主成分分析排名靠前的NX17子实体外观不符合药典要求,但菌株YUN4的多糖含量、菌株YUN2的浸出物和麦角甾醇含量、菌株NX17的麦角甾醇含量和单袋首茬产量上相对于其他菌株具有优势,可分别考虑作为有效成分提取的菌种资源。

产香云芝菌丝体的培养条件优化及其挥发性成分分析

为获得云芝菌丝体最佳产香培养条件和其挥发性成分,采用单因素试验法考察了不同碳源、氮源、pH值、培养基体积、培养温度、培养时间对云芝菌丝体产生挥发性成分的影响,通过响应面法优化其培养条件,并结合气相色谱-质谱联用法对云芝菌丝体挥发性成分进行分析。结果表明:培养基体积、培养时间、培养温度对云芝菌丝体挥发性成分具有显著影响,最佳培养条件为以蔗糖为碳源、不添加氮源、培养基体积120 mL、培养温度27.5℃、培养时间27 d,在此条件下验证试验结果与理论预测的误差为0.315%。从云芝菌丝体中共检测出6种挥发性成分,包括脂肪醇类3种、芳香族类1种、倍半萜烯类2种,其中1-表双环倍半水芹烯和(E)-菖蒲烯为主要成分,相对含量分别为29.96%和29.17%,为云芝菌丝体在微生物香料的进一步开发应用提供科学依据。

云芝产漆酶培养基优化及发酵液对玉米赤霉烯酮降解的研究

粮食被玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)污染不仅会造成巨大的经济损失,还会对人类和牲畜的健康构成重大威胁。为开发一种经济、绿色、高效且能直接降解ZEN的生物法,以云芝菌株Tv-1为试验菌株,碳源、氮源、漆酶诱导剂(Cu2+和粮油加工副产物)为影响因素,发酵液中的漆酶活力为指标,采用单因素和响应面试验确定云芝产漆酶的最适液体培养基以提高发酵液中漆酶的活力,然后用在最适培养基条件下制备的云芝发酵液直接降解ZEN,研究处理时间对ZEN降解率的影响。结果表明:云芝产漆酶的最适液体培养基为去皮马铃薯200 g/L、麦芽糖19.30 g/L、酵母浸粉2.00 g/L、小麦麸皮42.60 g/L、Cu2+0.48 mmol/L,在此条件下,漆酶活力达到5611.56 U/L,较优化前提高了22.86倍;采用此发酵液直接降解ZEN,第96小时降解率可达92.45%。本研究确定了云芝Tv-1产漆酶的最适发酵液体培养基,且云芝发酵液能够有效降解ZEN,为消减粮食中的ZEN奠定了理论基础。

HPLC法测定云芝菌发酵茶中9种活性成分及抗氧化活性研究

目的:建立同时测定云芝菌发酵茶中9种活性成分含量的高效液相色谱法,并对发酵前后茶叶中9种活性成分含量和抗氧化活性的变化进行研究。方法:采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05%磷酸溶液和乙腈,梯度洗脱,检测波长为280 nm、流速1.0 mL/min、柱温30℃。结果:与未发酵的对照组绿茶相比,云芝菌发酵茶中咖啡碱的含量无明显变化,没食子酸、可可碱和没食子儿茶素没食子酸酯的含量分别增加了0.4613%、0.3118%和0.5770%,没食子儿茶素、茶碱、表没食子儿茶素、表儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯含量分别减少了0.0156%、0.0178%、1.2938%、1.1062%和4.0241%。体外抗氧化活性试验结果表明,发酵后茶叶对DPPH·和·OH的清除率均有显著性(P<0.05)降低。当浓度为2.0 mg/mL时,云芝菌发酵茶提取液对DPPH·和·OH的清除率分别为7.79%和9.65%。结论:云芝菌的固体发酵可改变茶叶中活性成分的含量和抗氧化活性,研究为云芝菌发酵茶的开发提供了实验依据。

云芝发酵红薯浆水代谢产物对酸奶风味的影响

目的探究云芝发酵红薯浆水(Coriolus versicolor fermentation of sweet potato pulp water,CV-SPPW)代谢产物对酸奶风味的影响。方法该研究测定红薯浆水(sweet potato pulp water,SPPW)发酵前后的理化指标和利用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析CV-SPPW的代谢产物。通过气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和感官评定方法对酸奶的风味进行研究。结果与SPPW相比,CV-SPPW中总多糖、总黄酮、总酚、总三萜的含量分别提高4.79、13.67、10.54、2.74倍,游离氨基酸提高了121.87%;棉籽糖、赤藓酮糖、灵芝酸F等代谢产物分别上升13.70、7.49、7.00倍,这些代谢产物通过糖类热解、美拉德反应等途径形成酸奶的风味物质。与0%酸奶组相比,5%、10%、15%的3组酸奶中香茅醇、4-壬酮、E-2-辛烯醛等风味物质的含量显著增加,赋予酸奶果香味、花香味。结论CV-SPPW能够明显改善酸奶品质,提升酸奶的风味特性,具有很好的应用前景。

非胁迫与砷胁迫培养条件下云芝痕量元素ICP-MS含量分析

目的:通过测定不同处理条件下云芝样品中5个痕量元素含量,评估云芝限量重金属元素安全性及其菌丝体砷(As)富集能力。方法:采用ICP-MS分析非胁迫菌丝体、子实体及As胁迫菌丝体3种处理条件下18批云芝样品中5个痕量元素累积差异、元素间相关性及含量水平,并考察As胁迫下菌丝体对As的富集系数(BCF)。结果:非胁迫条件下培养的18批云芝菌丝体中,DB5菌株中5个痕量元素的总含量较高,As与Cr元素累积量间呈极显著正相关;而非胁迫条件下栽培的子实体中HN04、NX18、NX17菌株累积量较高,As与Cr元素累积量间呈极显著正相关,且As、Cd、Cr、Cu在子实体中累积总量较菌丝体均有提升;As胁迫下所有云芝菌株对中高浓度As均有富集,As平均含量为373.356 mg/kg,富集系数为2.18~12.17。结论:尽管云芝从菌丝体到子实体过程中会加速累积限量重金属元素,但云芝菌丝体和子实体重金属元素安全性不存在较大风险,不过As污染较为严重的环境下培养的云芝可能存在一定的安全隐患。

正交试验法优选液体发酵云芝糖肽提取工艺条件

基于正交试验法优化了液体发酵云芝糖肽的水提醇沉提取工艺。通过提取时间、料液比、提取温度与提取次数等单因素分析,建立了4因素3水平正交试验方案,确定了液体发酵云芝糖肽的最佳水提醇沉提取工艺为提取时间120 min、料液比150 g·L^(-1)、提取温度95℃、提取次数3次,在此条件下,云芝糖肽得率为4.2%。此工艺可为功效成分云芝糖肽的工业化提供参考。

7个野生云芝基于ITS序列和ISSR的亲缘关系分析

以湖南省的7个野生云芝菌株为试验材料,基于ITS序列进行分子鉴定以确定样品的种属关系,以MEGA 11.0软件中的邻接法构建系统发育树,采用ISSR分子标记技术对样品进行遗传多样性分析并构建DNA指纹图谱,同时辅以拮抗及栽培试验对结果进行验证。结果表明,7个野生菌株与云芝的同源性为95%~100%;构建的系统发育树显示7个菌株均与云芝聚为1支,且菌株NX4和NX6高度同源。筛选到6条重复性好且条带清晰的ISSR引物,平均每条引物扩增出11条谱带,多态位点百分率为95.5%;ISSR遗传聚类图谱显示在相似性为67%时,7个云芝菌株可聚为2类,其中NX4、NX6归于一类,其他5个菌株归于一类且NX3和NX18遗传差异较小。结合拮抗和栽培试验结果,基于子实体半径尺寸可将NX4和NX6归于一类。

超微粉碎云芝子实体对云芝多糖提取的影响

目的:探讨超微粉碎云芝子实体的云芝多糖提取工艺条件。方法:采用超微粉碎技术对云芝进行预处理,所得微粉(5 μm)与云芝子实体进行多糖提取的对比试验,然后对云芝微粉提取多糖进行正交实验,优化提取工艺。结果:云芝微粉的多糖提取收率比云芝子实体的多糖得率平均高出61%,云芝超微粉碎处理后最优提取工艺为:100℃,80 min,提取3次。结论:超微粉碎有利于云芝多糖的提取。

不同云芝菌株及提取工艺所得结合蛋白多糖的分析比较

分别用酚 -硫酸法、L owry- Folin法和高效液相凝胶渗透色谱法 (HPGPC)测定云芝菌丝体提取物云芝糖肽 (1)中糖和蛋白质的含量及分子量。来自 8株菌株的提取物其多糖含量为 41.1%～ 47.4% (P>0 .0 5 ) ;蛋白质含量为2 3.1%～ 36 .6 % (P<0 .0 5 ) ,分子量为 34k D～ 6 8k D。云芝菌丝体经碱提得到的提取物 1- K,多糖含量和分子量分别为 11.0 %和 14k D,均低于其进一步的醇沉物 1- KA(35 .8%和 38k D) ,但两者蛋白质含量为 36 .4%和 38.5 % ,无显著差异。菌丝体水提物 1- U A经纯化后得 1- U C,其多糖含量和分子量分别上升到 71.4%和 5 3k D。

云芝菌用于糖厂废水生物脱色及生产多糖的研究

比较了 4株不同云芝菌PVC0、PVC1、PVC2和PVC3对含有美拉德反应色素、碱降解色素及焦糖色素的模拟废水的生物降解脱色能力及云芝多糖生产能力 .结果表明 ,利用云芝菌可有效脱除精炼糖厂废水中的色素 ,同时获得菌丝体和胞外多糖 ,而且利用精炼糖厂废水生成的菌丝体多糖活性结构没有变化 ,PVC0为首选实验菌株 .

云芝多糖研究进展

近年来,药食用真菌因具有多种生物学功能而受到重视,成为研究热点。云芝多糖由云芝或从其发酵液中分离提取,具有突出的药食用功效和生物活性。文中从云芝多糖的结构、性质、提取纯化、发酵生产、用途与展望等方面进行了综述,为云芝多糖的进一步研究与开发提供参考。

硒云芝多糖对巨噬细胞一氧化氮的影响

目的 研究了硒云芝多糖 (Se- PSK)对巨噬细胞一氧化氮 (NO)含量的影响。方法 用 Grisse法测定 Se-PSK在不同剂量、不同作用时间中 NO的产量 ,并与云芝多糖 (PSK)作同步比较。结果 Se- PSK在 40 0 μg/ m L 作用 48h达到 NO释放的峰值 ,与 PSK比较效果更为明显。结论 Se- PSK能显著促进巨噬细胞释放 NO,并有明显的剂量依赖关系。

分光光度法测定云芝肝泰中云芝多糖的含量

云芝肝泰系云芝属植物Polystictus versicolor (L) Fr.的干燥子实体粗提物加适量蔗糖制成的冲剂,为免疫调节剂,用于治疗慢性活动性肝炎。

云芝总发酵物及其多糖抗氧化活性比较研究

采用羟自由基和超氧阴离子自由基清除实验以及氧化损伤酵母细胞保护实验模型,研究了云芝总发酵物和云芝多糖的抗氧化活性。云芝总发酵物对于羟自由基清除的半最大效应浓度(EC50)为0.13mg/mL,其清除能力显著优于云芝多糖的0.16mg/mL和阳性对照VC的0.25mg/mL(p<0.05);云芝总发酵物对于超氧阴离子自由基清除的EC50为0.34mg/mL,优于云芝多糖(0.35mg/mL)。氧化损伤酵母细胞保护实验结果显示,与空白对照相比,云芝总发酵物可显著提高氧化损伤酵母细胞存活率(47.4%),其效果与添加的剂量呈正相关性(R>0.9)。这表明,云芝总发酵物对酵母细胞的氧化损伤有明显保护作用,且其作用优于云芝多糖。

液态发酵法生产云芝胞内糖肽

通过筛选比较 6株云芝菌种 ,获得液态发酵生产云芝糖肽较佳菌株CV S和CV H ,经优化摇瓶发酵 ,将菌株CV S放大至 3 0L罐发酵 ,2 8℃发酵 4d ,菌丝体干重达 2 4 9g/L ,菌丝体破碎后 ,超滤浓缩 ,醇沉干燥后 ,云芝胞内糖肽产率达 2 2 3 g/L ,糖肽总糖为 5 5 5 8% ,肽 3 3 5 3 % ,经HPLC检测其分子质量高于 1 0ku的有 2个组分 ,分别为 742 2和 2 5 2ku ,所提取的产品 ,其出峰时间与标准品基本一致 ,总糖、单糖、肽含量符合国家药品标准WS—XG 0 2 1 2 0 0 2的要求。

毛细管区带电泳分离云芝糖肽的方法学研究及其在市售糖肽类药物中的应用

目的 建立云芝糖肽的毛细管区带电泳 (CZE)分离方法。方法 最佳条件为 10mmol·L-1硼酸 ,pH9.18,温度 2 5℃ ,电压 30kV ,毛细管长 5 7cm× 5 μm。 结果 主治功能不同、物质来源不同的不同产品的电泳图谱差别较大。结论 本实验建立的方法快速、简便 ,可以作为云芝糖肽的特征鉴别图谱 ,也可作为糖肽类药物的鉴别手段。

云芝菌丝体多糖的分离纯化研究

利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖 ,初步纯化后 ,用DEAE SepharoseCL 6B进行分离 ,从中分离出两个带电荷多糖组分即CVP Ⅰ和CVP Ⅱ ,对这两个组分分别用SepharoseCL 6B凝胶柱层析进行纯度鉴定 ,均出现单一峰 ,然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收 。

一个云芝菌株的分离及栽培条件优化

对采自湖南省长沙橘子洲头柳树腐木上的野生云芝(Trametes versicolor)进行组织分离和鉴定,并优化分离菌株的栽培条件。利用60%杜仲木屑、20%棉籽壳、17%麦麸、1%蔗糖、1%碳酸钙、1%石膏栽培云芝分离菌株,在螺旋状开袋方式下,生物学效率达84.62%,获得的云芝中多糖含量5.9%,水溶性浸出物含量23.9%,麦角甾醇含量3.1‰,多糖含量和水溶性浸出物含量分别是《中华人民共和国药典》中云芝质量标准的1.84倍和1.33倍。

云芝子实体多糖(CVP)化学结构的研究III.

通过化学、IR和UV光谱等方法发现云芝子实体的热水提取物 CVP 是由多糖、核酸和蛋白质等组成的混合物。通过柱层析方法从 CVP 中纯化出一个多糖组份 B-2-3,经完全水解证实组成它的单糖残基主要为Glc。用 HPLC 方法测得其分子量为 5.01×105。通过对甲基化及 1H 和 13C NMR 数据的分析发现 B-2-3 为一个以β-D-1, 4-Glc、β-D-1, 3-Glc 和β-D-1, 6-Glc 残基构成主链,同时在β-D-1, 3, 6-Glc 及β-D-1, 4, 6-Glc 处产生分枝的多糖。