交替假单胞菌LP621菌株产右旋糖苷酶的培养条件优化

从江苏连云港海域分离和筛选到1株产右旋糖苷酶的海洋细菌交替假单胞菌Pseudoalteromonas tetraodonis LP621,通过单因素试验和正交试验对该菌株产右旋糖苷酶培养条件进行优化。单因素试验结果表明,最佳培养时间为24 h,最适产酶温度为25℃;产酶pH范围为5.0~11.0,最适产酶pH为6.0;产酶NaCl浓度范围为1%~10%,NaCl浓度为4%时产酶较高;装液量在25%。麦芽糖、胰蛋白胨和酵母膏促进产酶。利用响应面方法对LP621产右旋糖苷酶的发酵条件进行优化。选择培养基pH、时间、麦芽糖浓度和装液量4因素进行优化,结果为pH 7.07,发酵时间21.94 h,麦芽糖浓度0.42%,装液量为21.88%,酶活为270.1U/mL。

交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆

从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长 14 79bp ,编码一个 492AA的蛋白质。酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonashaloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有 95%的相似性 ,包括一个糖基水解酶家族 5的催化结构域 ,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域。对酶性质的初步研究发现 ,CelX的最适温度为 40℃ ,酶的最适pH在 6～

适冷海洋细菌交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)MB-1内切葡聚糖酶基因的克隆和表达

从黄海深海海底淤泥中筛选出一株产纤维素酶的适冷革兰氏阴性杆菌MB 1,克隆和分析了MB 1的 16SrDNA序列 (GenBank接受号 :AY5 5 132 1) ,经鉴定为交替假单胞菌 (Pseudoalteromonas) ,命名为Pseudoalteromonassp .MB 1。克隆了该菌适冷内切葡聚糖酶基因celA(GenBank接受号 :AY5 5 132 2 ) ,并在大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1中进行了表达。重组E .coli菌体破碎后 ,获取上清液 ,其中融合蛋白GST CelA浓度约为 78 5mg L。分析了融合酶GST CelA的性质 ,其最适反应温度为 35℃ ,最适反应pH值为 7 2 ,为中性适冷酶。

交替假单胞菌BYS-2产褐藻胶裂解酶条件研究

以褐藻酸钠作为褐藻胶裂解酶产生菌初筛培养基唯一碳源,从鲍鱼养殖水样中分离获得一株产褐藻胶裂解酶的微生物,形态学和分子生物学16S rDNA鉴定结果显示,该菌株为交替假单胞菌Pseudoalteromonas sp.BYS-2.对该菌株进行产酶条件研究,获得最适产酶配方为:褐藻酸钠1 g·L^(-1),葡萄糖0.5 g·L^(-1),酵母膏10g·L^(-1),黄豆饼粉3 g·L^(-1),(NH_4)_2HPO_4 3 g·L^(-1),初始培养基pH8.0;最佳产酶条件为:接种量2%(体积分数),装液量50 m L/250 m L,发酵温度20℃,摇床转速200 r·min^(-1),在此条件下发酵24 h酶活力可达5.29 U·m L^(-1),比优化前(1.57 U·m L^(-1))提高2.37倍.

交替假单胞菌产几丁质酶的响应面优化

采用响应面法对交替假单胞菌发酵产几丁质酶的培养基进行了优化。首先利用Plackett Burman实验设计筛选出影响产酶的3个主要因素,即胶体几丁质、发酵温度和pH。在此基础上用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken实验设计及响应面分析法确定最佳条件。结果表明,胶体几丁质8.95g/L,蛋白胨2g/L,转速130r/min,接种量2%,发酵温度20℃,pH6.18,发酵时间96h,几丁质酶最大理论酶活为57.95U/mL。经3次实验验证,实际平均酶活与预测酶活相近,比优化前几丁质酶酶活提高了23.77%。

海洋交替假单胞菌活性物质的研究

海洋交替假单胞菌是一个新鉴定的海洋细菌,其次生代谢产物具有特殊的化学结构和广泛的生物活性而受到研究者的广泛关注。本文以海洋交替假单胞菌为探讨对象,综述海洋交替假单胞菌的生物学特性及其产生的生物活性代谢产物的研究进展,最后对该菌的发展前景进行展望。

一株具有石油烃降解性能的交替假单胞菌的筛选和鉴定

从大连近岸海域筛选出了1株石油降解菌。通过形态学观察、生理生化反应和16SrDNA基因测序方法鉴定该菌株属于交替假单胞菌属。该菌株接种后,前4 d种群数量增长迅速,为对数增长期,4~11 d为稳定期,11 d后细菌密度下降。在22℃、120 r/min的条件下培养7 d,对柴油降解率可达到41.2%。

海洋交替假单胞菌QD1-2抗肿瘤活性辅酶Q衍生物的分离与结构鉴定

海洋交替假单胞菌(Pseudoalteromonas rubra QD1-2)是从青岛海域分离筛选出的一株具有抗肿瘤活性的菌株。为了明确海洋交替假单胞菌(Pseudoalteromonas rubra QD1-2)的抗肿瘤活性成分和结构,利用大孔树脂柱层析、半制备HPLC等分离方法,首次从菌株QD1-2发酵液中分离到了一个单体化合物。通过高分辨率质谱、一维和二维核磁共振波谱等现代波谱技术进行结构鉴定,经测定,分子量为320,分子式为C18H24O5,为辅酶Q2衍生物。最后利用MTT法进行抗肿瘤活性测试,显示了较强的抗肿瘤活性。这一结果揭示了海洋交替假单胞菌产生新颖抗肿瘤化合物巨大的潜力,该属为寻找新型抗肿瘤天然化合物提供了新的来源。

食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶的克隆、表达及酶学性质

目的:在大肠杆菌中高效表达食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶基因,并对重组酶的酶学性质进行研究,为开发酶法去除琼脂硫酸酯的技术奠定基础。方法:通过PCR克隆芳香基硫酸酯酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,并对重组酶的酶学性质进行研究。结果:从食鹿角菜交替假单胞菌克隆得到芳香基硫酸酯酶基因(987 bp),预测编码328个氨基酸残基。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化,SDS-PAGE分析显示,重组酶的分子质量为35.1 ku。以对硝基苯硫酸钾(p-NPS)为底物,酶的比活力达26.7 U/mg,最适反应温度50℃和最适反应pH 7.0,Km为0.65 mmol/L,Vmax为19.99μmol/(mg·min)。除了SDS,重组酶对其他测试的抑制剂和去垢剂具有一定的抗性。重组芳香基硫酸酯酶和龙须菜粗多糖在40℃反应2 h,酶解产物凝胶强度提高2.1倍,可脱除多糖84.9%的硫酸基团。结论 :重组芳香基硫酸酯酶能有效脱除龙须菜粗多糖的硫酸基团,为开发环保、高效的酶法琼脂生产技术奠定基础。

海洋细菌0417产胞外多糖发酵条件的优化

微生物多糖依据其不同的特性被广泛的应用于多个领域。近年来,微生物多糖抗肿瘤、抗炎、抗病毒等生物活性愈来愈受到关注。海洋微生物因其独特的生活环境而使其胞外多糖具有独特的结构和功能。对从威海近海分离筛选到的具有产胞外多糖能力的海洋细菌0417进行发酵条件的优化探究。结果表明,海洋细菌0417产胞外多糖的最佳碳源、氮源分别为葡萄糖和蛋白胨;培养基初始pH值为7.5;碳氮源最佳质量浓度分别为10g/100mL和0.6g/100mL;胞外多糖积累最佳时间为120h。在此条件下培养,海洋细菌0417胞外多糖产量可达1.62mg/mL。

海洋低温几丁质酶菌株筛选、鉴定及酶谱分析

以胶体几丁质为唯一碳源,从大连渤海湾的底泥样品中分离到1株高产低温几丁质酶的海洋细菌,命名为DL-06。由菌株的形态特征结合16SrDNA系统发育分析,初步确定该菌株属于交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-06)。该菌株经30h摇瓶发酵后测定粗酶液几丁质酶酶活为9.184U/mL,最适反应温度为15℃,60℃孵育1h仍保持50%以上的酶活性,表明该低温酶具有一定热稳定性。经SDSPAGE及酶谱分析,该菌株能够产生至少3种以上不同分子质量的几丁质酶组分。Pseudoalteromonas sp.DL-06产几丁质酶在低温下高活性与热稳定特点,使其具有潜在的工业应用价值。

1株产褐藻胶裂解酶海洋细菌的分离鉴定及其酶学性质

利用以褐藻胶为唯一碳源的培养基分离纯化产褐藻胶裂解酶的海洋细菌,通过形态特征、生理生化和16SrRNA基因鉴定菌株,用紫外法分析纯化酶液的pH、温度作用范围及稳定性等酶学性质.结果表明:从青岛近海分离到1株产褐藻胶裂解酶的菌株QZ-4,革兰阴性杆菌,适宜生长温度和NaCl质量浓度范围分别为15～25℃和15～60g/L;16SrRNA基因序列分析显示,该菌与交替假单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)相似性为97%,GenBank登录号为HM130919;该酶具有同时降解高古罗糖醛酸聚合物和高甘露糖醛酸聚合物的能力,其最适作用pH和温度分别为7.5和40℃,Mg2+、Na+、Fe3+、Mn2+等对酶活力有促进作用,Zn2+有抑制作用,1.0mol/L乙二胺四乙酸可完全抑制其活性;由Lineweaver-Burk(L-B)作图法求得该酶的最大反应速度(Vmax)为0.541U/mL,米氏常数(Km)为0.051mg/mL.

一株产低温右旋糖苷酶海洋细菌的筛选和鉴定

从连云港海域筛选得到一株产低温右旋糖苷酶的菌株LP621,经形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析和鉴定,该菌株为Pseudoalteromonas tetraodonis。该菌产生低温右旋糖苷酶的最适作用温度为30℃,在80℃保温2.5 h后该酶仍具有40%以上的活性。目前尚无Pseudoalteromonas tetraodonis产生低温右旋糖苷酶的报道。菌株LP621产生的右旋糖苷酶作用温度低,耐热性好,有较大的潜在工业应用价值。

一株溶藻细菌(Pseudoalteromonas sp.)的分离鉴定及溶藻活性初探

从海南洋浦港沉积物中分离到一株具有较强溶藻活性的细菌(编号Z3)。通过对该菌株进行形态和生理测试以及16S r DNA序列分析,初步鉴定此菌为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌对链状亚历山大藻(Alexan-drium catenella)和塔马亚历山大藻(Alexandrium tamarense)有溶藻活性,对锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)和中肋骨条藻(Skeletonema costatum)的生长无影响,表明菌株Z3溶藻活性具有种属特异性。通过该菌的菌体悬浮液和除去菌体滤液对链状亚历山大藻实验表明,此菌株具既有直接溶藻作用又有间接溶藻活性。

海洋细菌QY202产κ-卡拉胶酶的分离纯化和性质研究

为获得高效降解卡拉胶菌株,从青岛太平角海域采集的角叉菜表面分离到1株高产κ-卡拉胶酶的海洋交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）QY202,经硫酸铵沉淀、脱盐、DEAE阴离子交换层析等步骤从该菌株发酵液上清中分离纯化得到1种专一性降解κ-卡拉胶的κ-卡拉胶酶,并研究了该酶的基本酶学性质。结果表明该酶被纯化了23.1倍,回收率为43.9%,分子量大小为33.2 kDa。酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,在0-40℃,pH=7.0-8.0之间酶活力较稳定。酶对底物κ-卡拉胶的米氏常数Km值为1.6 mg/mL。Na^＋、K^＋对酶活有促进作用,而Hg^2＋、Cu^2＋强烈抑制酶的活性。酶解κ-卡拉胶的主产物为硫酸新κ-卡拉二糖和硫酸新κ-卡拉四糖。

一株海洋耐冷菌的分类鉴定及其生长特性和抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选出一株产广谱高活性抗菌物质的海洋耐冷菌G1，该菌的生长温度范围为10～40℃，最适生长温度为20℃；生长的PH范围为3．O～12．0，最适生长pH为9．0；生长的NaCl质量分数为1％～9％，最适生长NaCl质量分数为4％，无NaCl不生长。根据其形态特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列分析结果，确定其为交替假单胞菌。菌株G1抗菌活性研究表明，其发酵产物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌以及大肠杆菌、鳗弧菌等革兰氏阴性菌都有显著的拮抗作用。结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值。

北冰洋产淀粉酶海洋细菌的筛选与鉴定及其产酶条件的优化

[目的]筛选与鉴定北冰洋产淀粉酶海洋细菌,并对筛选出的细菌进行产酶条件优化。[方法]从156株北冰洋海洋细菌中筛选出淀粉酶高产菌株Arc B84A,并对其进行了菌株形态学鉴定、16S rRNA分子鉴定以及产酶条件优化。[结果]菌株Arc B84A属于交替假单胞菌属。菌株Arc B84A的最佳产酶条件为:培养基起始pH值为7.0～8.0;最佳碳源为0.5%葡萄糖;最佳氮源为1.0%蛋白胨;Tri-tonX-100、Tween-20、Tween-80等表面活性剂可以提高菌株淀粉酶活性,其中1.0%Tween-80的效果最为明显。[结论]该研究为海洋细菌淀粉酶的生产与应用提供了理论依据。

海洋壳聚糖酶高产菌株的筛选和鉴定

从采自连云港连岛海域的海泥中通过透明圈平板筛选法(以胶体壳聚糖为唯一碳源)筛出28株壳聚糖酶产生菌,经过复筛,选取了其中产酶能力最高的菌株为目的菌株,其酶活力达到3.89U/mL。经过形态观察、生理生化和16S rDNA鉴定,将该菌初步鉴定为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。

一株褐藻酸裂解酶高产菌的筛选及其酶学性质研究

从腐烂的海带中筛选出一株褐藻酸裂解酶(Aly)高产菌,经形态学分析、生理生化特征和分子水平鉴定,该菌为交替假单胞菌属,命名为Pseudoalteromonas sp.EE258。利用硫酸铵沉淀、快流速DEAE-琼脂糖凝胶(DEAE-sepharose Fast Flow)和丙烯葡聚糖凝胶(Sephacryl S-100)柱层析等方法,对Pseudoalteromonas sp.EE258产生的褐藻酸裂解酶Aly-EE258进行分离纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定该酶的分子质量为23 ku。酶学性质研究显示:该酶的最适反应温度为40℃,最适反应p H值为7.0,在20℃以下时稳定性较好,Ca2+和Ba2+能明显提高酶的活性,Fe2+、Al3+、Mg2+和乙二胺四乙酸(EDTA)抑制酶的活性。Aly-EE258能不同程度地裂解褐藻酸、聚古洛糖醛酸和聚甘露糖醛酸,其中聚甘露糖醛酸裂解后主要产生单一的低聚寡糖,在实际应用方面具有重要意义。

产纤溶酶菌株L21的鉴定与发酵条件研究

利用纤维蛋白平板法从海参体内肠道中筛选到一株产纤溶酶活力较高的菌株L21,通过16S r DNA序列测定比对分析,初步鉴定菌株L21为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。采用单因素试验、Plackett-Burman试验及响应面法对菌株L21的发酵条件进行优化,结果表明,菌株L21最佳发酵工艺条件为NaCl 1 g/L,CaCl_21.03 g/L,MgSO_40.8 g/L,初始p H 7.40。在此工艺条件下,菌株L21纤溶酶活力达到399.86 U/m L,较优化前(86.09 U/m L)提高了4.64倍。体外溶血实验结果表明该菌株具有作为安全性溶栓剂的潜力。