产志贺毒素大肠杆菌在中国牦牛及其肉奶制品中的分布与遗传规律研究

产志贺毒素大肠杆菌是一种潜在危害食品安全和公共健康的致病菌。在中国的牦牛养殖业中存在潜在的食源污染风险。不同疫情报道、肠内菌群多样性研究以及地理和季节性变化的分析揭示了牦牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分布情况。通过深入了解产志贺毒素大肠杆菌的风险,为制定更有效的食品安全措施提供了依据,以期为产志贺毒素大肠杆菌在中国牦牛及其肉奶制品中的分布与遗传规律的全面洞察,从而促进食品安全的改进和保护公众健康。

发酵香肠中产志贺毒素大肠杆菌存活和毒力基因表达变化

以产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)主要血清型O157:H7和O26:H11为实验菌,进行发酵香肠接种实验,研究发酵香肠生产过程中这两种菌的存活情况,并采用反转录实时聚合酶链式反应(reverse transcription real-time polymerase chain reaction,RT-real-time PCR)的绝对定量方法分析不同生产阶段菌体和产品中毒力基因表达变化。结果显示:STEC接种组与未接种组之间乳酸菌数、乳酸含量、pH值、a_(w)值在大多生产阶段无显著差异。香肠生产过程中大肠杆菌O157:H7和O26:H11存活菌数分别减少了1.51(lg(CFU/g))和1.39(lg(CFU/g)),均受到显著抑制(P<0.05),但两菌呈现出不一样的受抑制过程。采用RT-real-time PCR绝对定量,消除菌数差异后发现菌体毒力基因表达在生产后期均显著上调(P<0.05);单位质量香肠中大多毒力基因表达量在发酵初期显著增加(P<0.05),且所有毒力基因在生产末期终产品中仍有较高表达量。本研究表明:虽然发酵香肠生产过程中能有效抑制STEC,但却增强了菌体毒力基因的表达,且终产品中毒力基因存在较高表达量。

江苏某奶牛场健康奶牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定及其对小鼠致病性的研究

通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定。基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eaeA、ehxA共4个基因进行检测,对检测出的阳性样品,非O157STEC采用多重PCR结合CT-SMAC平板的分离方法,而O157STEC通过免疫磁珠结合O157显色平板的分离方法。结果表明,该奶牛场STEC的初筛率为16.1%(112/696),分离率为11.1%(77/696)。分离株属于35种O血清型和60种O∶H血清型。该场的优势血清型为O4、O26和O93,O157在该场存在,但并非优势血清型。77个分离株中,stx2基因的检出率为68.8%,远远高于其它毒力基因,如stx1(19.5%)、eaeA(11.7%)和ehxA(20.8%)。该场分离到一些O157和O26血清型的菌株,对小鼠具有较强的致病性。奶牛是STEC的天然宿主,可健康带菌。除了O157STEC外,非O157STEC中一些高致病力菌株对人类的健康也存在威胁。

非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的多位点序列分型研究

目的对国内部分地区非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株进行分子分型分析,了解菌株间的遗传进化关系。方法根据mlst.ucc.ie数据库提供的大肠杆菌多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)方案,对来自我国河南、黑龙江2省的29株非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的7个管家基因进行PCR扩增并测序,通过序列比对确定其等位基因谱及菌株序列型(Sequence type,ST),使用MEGA、eBURST生物信息软件分析不同ST序列群及菌株间的进化关系。结果 29株非O157产志贺毒素大肠杆菌呈现较大的遗传多态性,可分为13个ST型别,其中ST155为优势型别(34.48%)。同时研究发现2个新等位基因型(fumC376、recA214)和3个新序列型(ST2460、ST2467、ST2468)。结论 29株非O157产志贺毒素大肠杆菌菌株之间具有分子多态性,与国际流行菌株具有一定的亲缘关系。加强我国对这一类菌株的检测和监测具有重要的公共卫生意义。

检测产志贺毒素大肠杆菌的菌落PCR方法

针对产志贺毒素大肠杆菌的毒力基因stx设计特异性引物,并建立一种菌落PCR方法。菌落PCR模拟实验证实,该方法特异性强,能良好的扩增出O157的stx1和stx2基因,而普通大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌则无PCR扩增产物。应用分子检测初筛、选择性培养、菌落PCR相结合的方法,检测实际食品样品,分离检测到一株携带stx1的产志贺毒素大肠杆菌。本实验建立的菌落PCR方法可应用于食品检验。

牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌分离株的多位点序列分型研究

目的对牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)分析,了解菌株的遗传进化关系及致病潜力。方法根据E.coli MLST数据库(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)提供的MLST方案,对青海玉树牦牛中分离的54株STEC分离株的7个管家基因进行PCR扩增并测序,通过序列比对确定其等位基因及菌株序列型(Sequence type,ST),并使用BioNumerics软件构建最小生成树(Minimum spanning tree,MST),分析牦牛ST型与HUSEC及人源主要流行血清群STEC菌株ST型间的进化关系。结果 54株牦牛STEC菌株呈现高度遗传多态性,可分为31个ST型别,其中包括7个新的等位基因型和17个新的ST型,并存在与HUSEC及主要流行血清群STEC亲缘关系相同或相近的ST型别。结论青藏高原牦牛携带的STEC具有遗传多样性及一定的特异性,部分菌株具有对人致病的潜力。

产志贺毒素大肠杆菌的流行病学及致病因子的研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类危害严重的食源性病原菌,能引起人类的严重疾病,如出血性结肠炎、溶血性尿毒症等,牛、羊等反刍动物是引起人类发病的主要宿主来源。作者总结了产志贺毒素大肠杆菌病的流行病学现状,就产志贺毒素大肠杆菌染色体和毒性质粒上的主要毒力因子的研究进展作一综述。

产志贺毒素大肠杆菌流行病学及主要毒力因子研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能引起包括水样腹泻、出血性结肠炎、尿毒综合症等一系列人体疾病的人畜共患肠道致病菌,其感染在世界范围内包括中国都有过暴发流行。文章阐述了STECO157血清型和非O157血清型的分布特征及流行趋势,同时还对该病的主要毒力因子进行了综述,以期为该病的防控提供科学依据。

产志贺毒素大肠杆菌stx2a和stx2b的血清和牛奶抗体检测

于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N>2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a抗体阳性和stx2b抗体阳性血清各21份(3.93%);415份商品猪血清检测到stx2a抗体阳性血清4份(0.96%),stx2b抗体阳性血清2份(0.48%);326份新鲜牛奶检测到stx2a抗体阳性血清25份(7.46%),stx2b抗体阳性血清21份(6.44%).牛奶中stx2抗体阳性率最高,健康人群血清次之,商品猪血清的阳性率最低.由此表明重庆市STEC菌株中携带stx2基因.

伊犁地区肉牛源产志贺毒素大肠杆菌的血清型和ERIC-PCR基因型研究

目的:了解产志贺毒素大肠杆菌在伊犁地区肉牛养殖环境和加工环节中的污染状况及其遗传多样性,为产业链中食源性致病性大肠杆菌的风险监测和控制提供基础数据。方法:采用传统方法和PCR方法对养殖环节的饲草料和粪便及屠宰环节的553份样品进行产志贺毒素大肠杆菌的污染调查,对分离鉴定的产志贺毒素大肠杆菌进行7种常见血清型(O145、O157、O45、O103、O111、O26、O121)的PCR检测和ERIC-PCR的基因分型。结果:检测553份样品中有39株编码志贺毒素基因,产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的检测率是7.1%。常见血清型PCR检测中血清型O111有2株菌,检出率是5.1%;O145有5株菌,检出率是12.8%。ERIC-PCR基因分型产志贺毒素大肠杆菌有10种基因亚型,分成3簇,A簇有23株菌,相似性在59%~100%,表明这些菌株之间的亲缘关系较近。结论:伊犁地区肉牛粪便是产志贺毒素大肠杆菌的污染源,这些菌株的亲缘关系较近。

川西北牦牛产志贺毒素大肠杆菌的流行病学调查

目的:旨在了解我国川西北草原牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的血清型和重要毒力基因的分布.方法:采用玻片凝集法和PCR方法分别检测STEC的血清型和15种重要的毒力基因.结果:在277份样品中分离鉴定出STEC 85株,分离率为30.69%,存在39个不同的O血清型,无优势血清型;牦牛源STEC毒力基因stx1、stx2、cnf1、cnf2、subA、CDT-V的携带率分别为44.71%、76.47%、2.35%、2.35%、61.16%、17.65%,黏附基因eaeA、iha、saa、efa1的携带率分别为1.18%、76.47%、68.24%、2.35%,以及60-MDa毒性质粒上的基因hlyA、espP、Katp的携带率分别为75.29%、43.53%、4.71%,不携带etpD、toxB基因.结论:STEC在我国川西北牦牛中的携带率高,血清型分布广泛,黏附基因iha和saa广泛分布于各种不同血清型的STEC中,大部分STEC携带毒性质粒,公共卫生学意义值得关注.

产志贺毒素大肠杆菌流行病学和stx基因研究进展

感染产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-pro-ducing Escherichia coli,STEC）能引起人严重的疾病,包括：出血性肠炎（Hemorrhagic coltis,HC）、血栓性血小板紫癜（TTP）和溶血性尿毒综合症（He-molyticuremicsyndrome，HUS）甚至死亡。

产志贺毒素大肠杆菌O138 stx2e基因的克隆与序列分析

目的构建产志贺毒素大肠杆菌O138stx2e基因重组质粒,并比较不同型Stx之间的区别。方法根据GenBank发表的stx2e序列设计了一对特异性引物,用PCR的方法扩增从临床分离到的产志贺毒素大肠杆菌O138的stx2e基因,将其克隆到pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切和PCR鉴定,而后进行测序。并利用DNASIS序列分析软件对GenBank报道的O22菌株和噬菌体P27的stx2e和O138菌株的stx2e基因序列进行了比较分析,并对O138的stx2e氨基酸残基序列与stx1、stx2和O22菌株stx2e序列进行比较。结果所克隆的O138的stx2e与O22菌株和噬菌体P27的stx2e在碱基序列上同源性达到996%,O138的Stx2e与O22的Stx2e在氨基酸水平上其序列完全相同。Stx2e与stx2的同源性在85%以上,而stx2e与stx1的同源性只有42%左右。结论克隆了stx2e基因,为研究stx2e的结构和功能奠定了基础。

野生大熊猫粪便源携Ⅰ类整合子的产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定

为了解四川某地区野生大熊猫体内是否携带产志贺毒素大肠杆菌(STEC),本研究采用选择培养基从采集的野生大熊猫粪便中进行细菌分离,结果得到一株β溶血的大肠杆菌。通过菌落形态学观察、革兰染色镜检、生化试验、16S rDNA序列测定分析、毒力基因检测、致病性实验及药敏实验进一步鉴定。结果表明:该菌株属于STEC;接种2×10~8 cfu/0.2 mL剂量该菌的小鼠在24 h内全部死亡,表明该菌株具有较强的致病性;药敏结果显示,该菌株对四环素、头孢噻肟、复方新诺明、卡那霉素、链霉素、哌拉西林、诺氟沙星、强力霉素、头孢呋辛存在多重耐药;该菌株携带Ⅰ类整合子基因。本研究结果对野生大熊猫疫病防控及健康风险评估具有一定的指导意义。

产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学检测方法研究

[目的]建立快速准确检测食品中产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学方法。[方法]针对产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的stx1、stx2、eaeA、hlyA4种毒力基因,设计了4对特异性引物。[结果]采用多重PCR(multiplexPCR)方法,得到614bp、779bp、450bp和300bp4条片断。[结论]实验结果表明,本文建立的mPCR方法较常规的大肠杆菌检测方法简便、快速、灵敏度高,灵敏度可达15cfu/mL。

食品中产志贺毒素大肠杆菌的多重PCR检测

针对产志贺毒素大肠杆菌的stx2、wzy、hlyA的保守序列,设计特异性的引物,建立一种新的多重PCR检验方法。结果显示,该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,并能良好的区分出O157菌株和非O157型产志贺毒素大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。

人源与牛源非O157产志贺毒素大肠杆菌耐药性分析及脉冲场凝胶电泳分子分型

为了解人源和牛源非O157产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的耐药表型、耐药基因、质粒复制子类型及其之间的同源性,本研究采用K-B纸片法对3株人源非O157 STEC和14株牛源非O157 STEC耐药株进行药敏试验,结果显示3株人源非O157 STEC均耐药,其中2株呈多重耐药(MDR);14株牛源非O157 STEC耐药株中有9株呈MDR。11株MDR-非O157 STEC对4~13种抗生素耐药,包括β-内酰胺类、四环素类、磺胺类、氯霉素类和氨基糖苷类药物,其中10株(1株人源和9株牛源)非O157 STEC的耐药谱中出现氯霉素-链霉素-复方新诺明-四环素组合。通过PCR方法检测非O157 STEC耐药基因floR(氯霉素类)、mph(A)(大环内酯类)、strA、strB(氨基糖苷类)、sulR(磺胺类)和tet(A)、tet(G)(四环素类)和质粒复制子分型,结果显示17株非O157 STEC中有7株携带floR-mph(A)strA-strB-sulR-tet(A)-tet(G),2株携带floR-strA-strB-sulR-tet(A)-tet(G),2株携带tet(A)-tet(G),1株携带floR-mph(A)-tet(A)-tet(G),1株携带floR-mph(A),4株未携带检测的耐药基因;质粒复制子分型显示,IncFIB质粒检测率最高为82%(14/17),IncC和IncW质粒次之(47%,8/17)。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)对人源和牛源非O157 STEC耐药株进行同源性分析,结果显示,人源与牛源非O157 STEC耐药株的相似度低于80%。本研究上述结果表明人源和牛源非O157 STEC均出现了MDR,同源性不高,但这些菌株携带多个耐药基因和质粒,且呈现相似的耐药模式,并且本研究首次在我国新疆地区非O157 STEC中检测出mph(A)基因,提示在动物生产中需谨慎用药,以防止同时具有耐药性和毒力的菌株感染人类。

多重PCR-DHPLC快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌

应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法。以基因wzx O111、rfb EO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法,进行特异性和灵敏度测试,同时进行RT-PCR检测比较灵敏度。该方法具有良好特异性,可以一次PCR扩增同时检测O111、O157;灵敏度达到25 CFU/m L。129份牛肉样品中检出1例O111,3例O157阳性;74份鸡肉样品中检测出O111、O157阳性各1例,67份蔬菜样品中未检测到O111、O157。本文建立O111、O157多重PCR-DHPLC检测方法,操作简便,特异性强,适用于产志贺毒素大肠杆菌筛选检测。

新疆牛源产志贺毒素大肠杆菌耐药性及其ESBLs基因鉴定

本研究的目的是通过调查新疆地区分离的牛源产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的耐药表型和基因型,掌握STEC耐药性的发展和传播规律。本研究对新疆6个地区的牛源(非O157:H7)STEC分离株进行了18种抗生素的药物敏感性试验,并检测菌株中携带的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因。结果显示:4.31%STEC表现为多重耐药,1.91%为产ESBLs菌株。检测到的主要ESBLs基因包括bla_(TEM)和bla_(CTX-M)。这是首次在新疆STEC中检测到bla_(TEM)和bla_(CTX-M)。本研究分离出的多数多重耐药STEC属于系统发育A群。多重耐药STEC可能是由非致病性大肠杆菌获得毒性和耐药基因而形成的。抗生素的选择压力可能对细菌在牛肠道中的定植表现出一定竞争优势,从而增加了耐药STEC对食物的污染。