鸡产蛋下降综合征病毒间接免疫荧光检测方法的建立及应用

为建立检测鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)的间接免疫荧光方法,并对该检测方法的各个步骤进行优化,以鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清和FITC标记的兔抗鸡IgG为组合,对一抗和二抗的最适工作浓度和孵育时间进行了优化,对IFA方法进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,检测接种EDSV的96孔细胞培养板时,多抗血清的最适工作浓度为1∶320,孵育时间为45 min;FITC标记的兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1∶200,孵育时间为30 min;病毒敏感性试验表明,该方法可以检测到10-2 TCID 50/mL的病毒;多抗血清敏感度试验表明,当多抗血清稀释到1∶1280时仍可见较明显的特异性荧光;特异性试验表明,该方法只针对EDSV,而不与禽副流感病毒4型、鸡新城疫病毒等其他病原反应;批内重复性试验和批间重复性试验结果表明,该方法具有较好的重复性和可靠性。结果表明,建立的间接免疫荧光方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性,可为我国禽源性生物材料EDSV的检测提供技术支持,有巨大的市场需求。

中草药治疗产蛋下降综合征引起种鸭输卵管感染导致畸形蛋病例诊治

近年来随着我县鸭养殖量不断增加,各种问题不断发生。除了粪污处理问题严峻造成环保问题凸显外,各种疾病问题也不断高发。临桂区地处桂林市西北部,辖区面积2201平方公里,其中山地丘陵占比1/3左右,基本农田占比1/7,目前我县存栏鸭130万只左右,其中公司种蛋鸭90万只左右,品种以白鸭和麻鸭为主。由于养殖量较大,粪污污染水源成为一个严峻问题,为了缓解环保压力,同时保障养殖户利益,临桂区下发养殖技术,要求对种鸭进行旱养,减少水的利用,从而达到缓解环保的压力。

我国发现的一种引起鸭产蛋下降综合征的新型黄病毒

从2010年4月起，中国东南部分省份的部分鸭场发生一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病，并迅速蔓延至我国各主要养鸭省市，包括浙江、福建、广东、广西、江西、江苏、山东、河南、河北和北京等。疾病影响包括北京鸭和麻鸭在内的多种产蛋鸭，感染鸭最突出的临床症状就是采食量下降伴随产蛋率的骤降，产蛋率在5d内可降至10％，

种番鸭产蛋下降综合征病毒的分离及其PCR鉴定

从临床表现产蛋率下降、产蛋异常的种番鸭输卵管粘膜中分离到1株病毒,经血凝及血凝抑制试验鉴定为产蛋下降综合征病毒,命名为E05。参照GenBank上发表的鸭源产蛋下降综合征病毒基因组序列的保守区设计1对引物,通过PCR技术扩增出286 bp的基因片段,将扩增产物与T载体连接后,转化感受态细胞,筛选出阳性重组质粒进行测序分析。测序结果与GenBank上已发表的EDSV 100kD蛋白序列比对,扩增片段与已登陆的基因片段完全相符,同源性100%。

产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析

通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。

TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立及应用

根据GenBank公布的鸡产蛋下降综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列,设计了2对特异性引物和1条TaqMan探针。以构建的阳性重组质粒为标准品,绘制标准曲线,建立了一种快速检测鸡产蛋下降综合征病毒的TaqMan荧光实时定量PCR方法。该方法最小检出量达10copies.μL-1,在1.0×102～1.0×108copies.μL-1检测范围间有良好的线性关系,特异性、稳定性和重复性也较好。用建立的本方法检测感染鸡产蛋下降综合征病毒鸡群的产蛋分离物,与普通PCR相比,该荧光实时定量PCR方法具有更高的敏感性,可更好地用于鸡产蛋下降综合征病毒的临床检测。

产蛋下降综合征病毒PCR检测方法的建立

根据已报道的腺病毒DNA序列 ,设计合成了 1对核苷酸引物 ,引物间隔约 63 0bp。用该引物对EDS76病毒内蒙古分离株 (N3 ,N4 )和参考株 (AV 1 2 7)核酸进行聚合酶链式反应 (PCR)。结果 ,均扩增出了约 63 0bp的特异性DNA片段。所建立的PCR方法可检出 1 0 0pg的样品模板。结果表明 ,此PCR方法是检测EDS76病毒的一种简便快速。

影响产蛋下降综合征H_(91)疫苗株HA效价的因素

鸡产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）Ｈ９１－１疫苗株ＨＡ效价受接种种毒的浓度和收获时间、鸡红细胞浓度、ＨＡ反应温度、灭活用甲醛溶液浓度、灭活尿囊液存放时间等因素影响。

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感-产蛋下降综合征四联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫LaSota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准;鸡体对该疫苗4种抗原均产生了良好的免疫应答;攻毒试验证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击;所制备疫苗于2～8℃保存12个月后,其免疫效力没有下降。

蛋鸡产蛋下降综合征的诊疗体会

产蛋下降综合征（Egg Drop Syndrom-1976,EDS-76）,俗称减蛋综合征,是由鸭腺病毒甲型（DuckadenovirusA）引起的能使蛋鸡产量下降的病毒性传染病,病鸡不表现明显的临床症状,而以产蛋量下降、蛋壳异常（软壳蛋、薄壳蛋、破损蛋）、蛋体畸形、蛋质低劣等为主要特症。本病可使产蛋量下降15％左右，在产蛋高峰期，产蛋量可骤然下降30％-40％^[1]。

引起鸭产蛋下降综合征的BYD病毒感染研究

从2010年4月起,中国东南地区的部分鸭场发生一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病,疫病殃及包括肉种鸭和蛋鸭在内的多种产蛋鸭,感染鸭最突出的临床症状为采食量下降伴随产蛋率的骤降,产蛋率在5d内可降至10%左右,直至停产。

产蛋下降综合征微量血凝抑制试验判定标准的确定

用微量血凝抑制试验测定了8个阳性鸡群和14个阴性鸡群 ,在阳性群167份血清中161份滴度≥1:16,在阴性群648份血清中640份≤1:4。对阴性群数据进行统计学处理 ,并根据正态分布规律 ,将阳性标准定为≥1:16。

产蛋下降综合征病毒DNA限制性酶切分析的研究

选用BamHI、KpnI、PstI、EcoRI、XbaI、HindⅢ等6种限制性内切酶对EDS76病毒内蒙古地区分离株穴N3、B4雪和参考株穴AV-127雪病毒基因组DNA进行酶切分析,均产生4,5,9,4,2和10条DNA片段,而且N3、B4株与参考株病毒基因组DNA之间的酶切图形、片段大小也十分相似,从分子水平上证实N3、B4株是EDS76病毒熏同时也说明限制性内切酶分析法是检测EDS76病毒的一种简便快速的方法。

鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒二重PCR检测方法的建立

参考Gen Bank上已发表的鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS5基因序列和产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列,分别设计了检测DTMUV和EDSV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为242 bp和181 bp。通过退火温度及引物浓度的优化,建立了针对这两种病毒的二重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法可以同时检测DTMUV和EDSV,且不与鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、番鸭呼肠孤病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒以及大肠杆菌的核酸发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对DTMUV的最低检出限为590个拷贝,对EDSV的最低检出限为3 260个拷贝;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。通过检测两种病毒感染的阳性病料各10份,结果显示,该二重PCR检测方法对阳性样品的检出率可达100%。这表明该方法可以用于鸭坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒的检测。

鸭坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒和H9亚型禽流感病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立

参考Gen Bank上已发表的产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列、H9亚型禽流感病毒的HA基因和鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因序列,分别设计了检测EDSV、H9 AIV和DTMUV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为110bp、281bp和266bp。通过PCR验证及引物浓度的优化,建立了针对这3种病毒的三重荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法可以同时检测EDSV、H9 AIV和DTMUV,且不与鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒和大肠杆菌基因组DNA以及鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒的RNA发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对EDSV、H9 AIV和DTMUV核酸的检测下限分别为8.0、4.8和1.3个拷贝,该方法比常规PCR方法敏感10倍;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。通过标准曲线的建立以及临床样品的检测表明,该方法可以用于EDSV、H9 AIV和DTMUV的定性和定量检测。

PCR技术检测产蛋下降综合征病毒核酸的研究

根据已报道的腺病毒DNA序列,设计合成了1对核苷酸引物,引物间隔约630bp。用该引物对EDS_76病毒内蒙古地区分离株(N_3、B_4)和参考株(AV_127)核酸进行聚合酶链式反应(PCR),均扩增出约630bp的特异性DNA片段。对PCR灵敏度进行测定,该法可检出100pg的样品模板。结果表明,PCR是检测EDS_76病毒的一种简便快速、特异性强和灵敏度高的方法。

蛋鸡产蛋下降综合征及其综合防治

鸡产蛋下降综合征是由腺病毒引起的导致蛋鸡产蛋率下降的病毒性传染病。该病症状不明显,主要以产蛋量下降、软壳蛋和畸形蛋增多、蛋品质下降为主要特征,并可以引起蛋鸡生殖系统损伤。本文就产蛋下降综合征的病原学、流行病学、临床症状及综合防治等方面进行综述,以期为广大蛋鸡养殖户提供参考。

鸭的新型黄病毒BYD引起的产蛋下降综合征

从2010年4月份开始,在我国南方部分地区的产蛋鸭群出现一种以产蛋下降为主要特征的传染性疾病,之后迅速传播到国内其他主要养鸭地区,涉及浙江、福建、广东、广西、安徽、江苏、江西、河南、山东、河北和北京等地的鸭场。感染鸭群主要表现为采食量和产蛋急速下降,死亡率为5%～28%。病例剖检的特征性变化主要见于卵巢，表现为卵泡出血、变性和破裂。

鸡产蛋下降综合征的影响因素与防制措施

产蛋下降综合征是20世纪70年代后期发现的一种使商品蛋鸡和种鸡产蛋量下降的病毒（腺病毒EDS-76）性传染病。患病鸡主要表现为群发性产蛋量下降、产蛋异常、蛋体畸形、蛋质低劣等。本病可使产蛋率下降10％～30％，甚至50％，蛋的破损率达到30％～40％，无壳蛋、软壳蛋可达15％，给养鸡业造成严重的经济损失。本文总结出影响鸡产蛋下降综合征的主要因素并提出防制措施，以供同行们参考。

鸡产蛋下降综合征的流行特点及防治措施

产蛋下降综合征又称为"减蛋综合征-76",是由减蛋综合征病毒引起鸡的一种以产蛋下降为主的传染病。该病以群发性产蛋率下降,产软壳蛋为特征。该病流行广泛,对养鸡业危害极大,是危害养鸡业的主要传染病之一,严重影响养鸡业的健康发展。许多鸡户对该病不了解或不重视,平时只重视鸡新城疫、禽流感和传染性喉气管炎等传染病,而忽视对该病采取相应的预防措施,一旦发生该病,可给养鸡户带来很大经济损失。现主要概述该病的流行特点及防治措施。