高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率

采用高效亲和色谱技术(HPAC)对中药成分与人血清白蛋白(H SA)的相互作用进行了研究。首先采用点击化学的方法制备了表面键合有H SA蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率。利用该方法测得模型化合物华法令与H SA的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与H SA的结合率。在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与H SA的相对结合率分别为10.26%和10.20%。同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA的结合率为14.25%。结果表明,HPAC可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致。

亲和色谱法的进展

概述了亲和色谱法分离机理、色谱填料及其应用的新进展，着重介绍了亲和固定相中配基发掘的新途径。全文包括66篇文献。

高效亲和色谱法测定初乳素免疫球蛋白IgG

本方法采用高效亲和色谱的原理 ,在pH6 5磷酸盐缓冲液条件下样品中免疫球蛋白IgG与配基连接 ,在pH2 5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG进行测定。本方法最低检测限为 0 5mg g ,平均回收率为 88 5 %～ 1 0 1 0 % ,相对标准差为± 1 4%。

亲和色谱法的研究进展

亲和色谱法是一种有效的分离纯化蛋白质的方法。本文综述了亲和色谱法中基质和配位体的研究现状,介绍了常用基质和配位体的特点。

螯合金属离子亲和色谱法分离α-氨基酸和肽

以ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０为基质螯合二价铜离子的亲和色谱法分离α－氨基酸和肽，使之得以完全分离。对分离过程的原理进行了讨论。

高效亲和色谱法检测液体奶和奶制品中乳铁蛋白的质量浓度

建立了高效亲和色谱法（HPAC）测定奶和奶制品中乳铁蛋白质量浓度的方法。奶粉及液体奶经水超声提取，有机酸调节pH值沉淀酪蛋白，离心后取上清液经HPAc系统分离检测。色谱测定条件采用HiTrap HeparinHP亲和色谱柱。结果表明，奶粉和液体奶的方法检出限和定量限分别为0．03mg／g和0．1mg／g，乳铁蛋白质量分数和峰面积显著线性相关。鲜牛奶和婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白加标回收率范围72％-101％，KSD≤5．1％。采用本方法检测了牛奶、母乳和婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的质量分数。该方法具有操作简便快捷、准确可靠、重现性好等优点。

肝细胞亲和色谱法体外筛选大黄降脂活性成分研究

目的:评价大黄蒽醌类成分体外降脂活性及筛选其药效成分,探讨其在细胞内的成分代谢。方法:采用体外Hep G2细胞系脂肪变性模型评价大黄蒽醌类成分降脂活性,采用肝细胞亲和色谱法筛选大黄蒽醌类细胞亲和成分,以HPLC法及HPLC-Q-TOF-MS法检测鉴定亲和成分。结果:与正常组相比,建立的体外肝细胞脂肪变性模型组细胞内三酰甘油(TG)含量显著升高(P<0.05),与模型组比较,不同浓度的五种大黄蒽醌类成分作用后给药组细胞内TG含量均显著降低(P<0.05),呈剂量效应关系;肝细胞亲和色谱法筛选出大黄提取液特异性亲和色谱成分主要有4个,分别为芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚四个化合物,而大黄酸发生了细胞内代谢。结论:大黄蒽醌类5种成分均具有体外降脂活性,芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚以原型的形式体外肝细胞降脂,而大黄酸可能以细胞内代谢为芦荟大黄素形式降脂。本研究建立了肝细胞亲和色谱法与体外肝细胞降脂活性评价的联用技术,实现了中药成分体外降脂活性评价,药效成分体外代谢的一体化研究,为大黄蒽醌类调脂药物开发提供科学依据。

G蛋白亲和色谱法纯化动物血清、抗体效果比较

比较 Hitrap G蛋白 Sepharose亲和色谱系统对不同动物血清或腹水的纯化效果 ,为抗体纯化提供依据。结果显示 ,G蛋白对不同动物血清 Ig G吸附能力不同 ,体现在单位体积抗体回收量明显不同 ,这一特点与 A蛋白亲和色谱系统相似。该方法简便快速 ,纯化抗体纯度高 ,免疫活性好 。

IDA型Cu^(2+)-螯合亲和膜色谱法对牛肝过氧化氢酶纯化的研究(英文)

首次采用以改性纤维素为基质、亚氨二乙酸（ＩＤＡ）为取代配基的铜离子螯合膜色谱法对牛肝过氧化氢酶（ＢＬＣ）的分离纯化进行了研究。缓冲液的ｐＨ值对ＢＬＣ与螯合配基的结合影响显著。在选定的色谱条件下，ＢＬＣ粗酶液经ＩＤＡ型Ｃｕ２＋－螯合膜色谱柱一步纯化，比活性平均提高４．７倍，回收率为６７．７％。金属螯合膜色谱柱可用含０．２ｍｏｌ／Ｌ的咪唑或５０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的缓冲液再生，反复使用，后者比前者对柱子的再生效果更好。

单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定玉米中伏马毒素B_1、B_2

研究了单克隆免疫亲和柱 -高效液相色谱法测定玉米中伏马毒素B1、B2 的方法。玉米样品经甲醇 -水(4∶1)提取 ,提取液通过FumoniTest免疫亲和柱净化 ,净化液经柱前衍生、SpherisorbC18色谱柱分离、荧光检测器检测、外标法定量。对添加不同含量的伏马毒素B1、B2 进行 5次重复实验 ,得B1的平均回收率为 82 .3%～88.7% ,B2 为 74.9%～ 81.6 %。B1的变异系数 (CV)为 4.9%～ 6 .3% ,B2 为 5 .8%～ 7.2 %。检测低限B1为0 .0 2 0mg/kg,B2 为 0 .0 40mg/kg。

单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定玉米中的玉米赤霉烯酮

研究了单克隆免疫亲和柱 高效液相色谱法测定玉米中玉米赤霉烯酮的方法。样品通过乙腈 水 (体积比9∶1)提取 ,提取液用免疫亲和柱净化 ,WatersC18色谱柱分离 ,荧光检测器检测 ,外标法定量。对添加不同含量的玉米赤霉烯酮进行 6次重复实验 ,平均回收率为 87.8%～ 90 .9% ,变异系数 (CV)为 8.6 %～ 11.3% ,检测低限为0 .0 1mg/kg。

免疫亲和柱-高效液相色谱法测定炒僵蚕中黄曲霉毒素

目的:采用免疫亲和柱-高效液相色谱法,对炒僵蚕饮片中的黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的残留量进行分析,旨在为炒僵蚕饮片质量标准的完善及其市场监管提供依据。方法:样品经过高速匀浆处理,经免疫亲和柱净化,采用高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定。采用YMC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-水(32∶18∶50)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,荧光检测器激发波长为360 nm,发射波长为450 nm,对7批炒僵蚕进行分析。结果:本研究采用的黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)检测方法的线性关系、精密度、回收率良好,黄曲霉霉毒素G_(2)在多批样品检出,检出率为86%,有1批样品中黄曲霉霉毒素G_(1)含量较高,参照《中华人民共和国药典》(2020年版)黄曲霉毒素的限量标准,其黄曲霉毒素B_(2)、G_(1)和G_(2)总量超出限度规定。结论:本研究为首次采用免疫亲和柱-高效液相色谱法对炒僵蚕中黄曲霉素进行筛查,明确其存在安全风险,为炒僵蚕饮片中黄曲霉素的质控提供参考。

硼酸盐亲和色谱法测定HbA_1c效果评价

目的探讨使用硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c的效果。方法采集46例糖尿病患者和20名健康体检者EDTA抗凝静脉血及指血标本,使用硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c,并与Bio-Rad D-10糖化血红蛋白分析仪的测定结果进行对比,分析该法批内、批间变异及线性范围、回收试验、干扰试验等,探讨该法测定HbA1c结果的参考区间和诊断效能。结果硼酸盐亲和色谱法批内与批间平均变异系数分别为1.0%和1.8%,HbA1c在4.0%～15.0%浓度范围内呈线性关系;常见干扰物对本法无明显影响;本法与离子交换高效液相色谱法(HPLC)测定结果呈高度相关(P<0.01)。末稍血与静脉血样本测定结果具有一致性。健康人HbA1c水平的参考区间为4.2%～6.0%;以HbA1c 6.1%为切点,筛查糖尿病的敏感性为80.2%,特异性为87.6%。结论硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c简便实用,准确性、精密度较高,干扰因素少。

硼酸盐亲和色谱法检测糖化血红蛋白的分析性能评价

目的评价硼酸盐亲和色谱法(AC-HPLC)检测糖化血红蛋白(HbA1c)的分析性能。方法参考美国临床与实验室标准化协会(CLSI)发布的方法学评价系列文件(EP文件)及相关文献,对Premier Hb9210系统检测HbA1c的精密度、正确度、分析测量范围以及生物参考区间进行验证,并与厂商声明的性能和有关质量标准进行比较。结果硼酸盐亲和色谱法检测HbA1c两个不同水平的批内精密度(CV%)分别为0.8%和0.6%;总精密度(CV%)分别为1.53%和0.9%。与离子交换高效液相色谱法(IE-HPLC)的VariantⅡ检测系统的相对偏倚为3.26%。与来源于美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)定值样本靶值的相对偏差为2.3%~3.2%,HbA1c浓度为4.1%~16.4%,理论值与实测均值呈线性相关,回归方程为Y=1.0018x+0.3903,r2=0.9942。随机选择的20名健康参考个体糖化血红蛋白浓度均在厂商提供的参考区间内。结论Premier Hb9210糖化血红蛋白分析仪的主要分析性能达到了厂商声明的性能和有关的质量要求,适用于我室检测糖化血红蛋白。

酶联免疫吸附结合免疫亲和柱-高效液相色谱法检测大米中黄曲霉毒素B_1的研究

对大米中两种检测黄曲霉毒素B1方法的结合使用进行了研究,即采用酶联免疫吸附法对大米中黄曲霉毒素B1进行初筛,对可疑样品采用免疫亲和柱-高效液相色谱法进行验证。样品经甲醇水提取、免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、碘柱后衍生、荧光检测器测定。结果表明,黄曲霉毒素B1线性关系良好,相关系数为0.9999,检出限为0.50μg/kg,回收率为89.4%~95.2%,RSD值为1.88%~3.05%。两种方法的结合应用,适用于较大批量样品的检测。

免疫亲和层析净化高效液相色谱法和胶体金快速定量法测定小麦中呕吐毒素含量的比较

采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法和胶体金快速定量法测定小麦中呕吐毒素含量。结果表明:用这两种方法测定添加不同浓度呕吐毒素的小麦,测定结果的相对标准偏差分别为1.59%~3.08%和7.28%~11.50%,且两种方法测定呕吐毒素呈阳性的小麦样品的测定结果相对偏差小,相关系数为0.995,相关性好。这两种方法各有优缺点,免疫亲和层析净化高效液相色谱法精密度好,能够对呕吐毒素进行精准定量,但试验步骤较为复杂,耗时长;胶体金快速定量法检测简便快速,能用于大量样品的快速筛查,预期在粮食中真菌毒素检测方面具有很好的应用前景。

酶联免疫吸附法和免疫亲和柱-高效液相色谱法在检测饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量中的比对研究

为了探讨酶联免疫吸附法检测饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量的可行性,试验采用酶联免疫吸附法(ELISA法)比对免疫亲和柱-高效液相色谱法(IAC-HPLC法),对饲料中黄曲霉毒素B_(1)含量进行了检测,对检测结果的准确度、精密度和样品加标回收率进行了分析。ELISA法线性方程相关系数为0.9952,相对标准偏差(RSD)为1.6%~8.1%,平均加标回收率为105.6%~111.8%。结果表明,ELISA法的准确性、重现性、稳定性好;且ELISA法检测结果与IAC-HPLC法检测结果的相对标准偏差(RSD)为5.4%~19.2%,两种方法的检测结果的偏差可以接受,表明ELISA法能满足检测需求。

亲和色谱纯化蛋白质新进展

通过对３５篇文献的综述。

蛋白A连续床亲和毛细管色谱柱的制备及性能考察

An assay technique for the determination of the human IgG in human plasma has been developed by utilizing protein A immobilized monolithic capillary column. The affinity chromatography experiment was performed on a capillary electrophoresis instrument by using its pressure system as the driving force. Reactive monolithic capillary columns have been prepared by in-situ copolymerization of the monomers in the presence of porogenic dilute, and protein A was immobilized on the monolithic rods directly or through a 11 carbon atom space arm with molded synthetic methods. The non-specific adsorption of two kinds of media has been studied and the results showed that the medium without space arm gives very low non-specific adsorption of BSA. The affinity column without space arm was used to determine the human immunoglobulin G(HIgG) in human serum. The correlative coefficient of the calibration curve reaches 0 998 7. The total time of rapid analysis was less than 0 7 min. The consumption of eluent buffer and sample is much low than by conventional HPLC.

免疫亲和层析纯化大肠癌相关抗原

目的 :从培养的大肠癌细胞Hce 86 93中分离纯化并鉴定大肠癌相关抗原。方法 :利用流式细胞术选择高表达大肠癌相关抗原的大肠癌细胞系 ,分别用单去污及三去污裂解液裂解细胞。然后用 5株抗大肠癌单克隆抗体 (mAb)CYL 1～CYL 5进行Westernblot,分析与大肠癌细胞结合反应最强的mAb。以此mAb作为配基进行亲和层析纯化大肠癌相关抗原 ,纯化结果利用Westernblot法进行鉴定。结果 :大肠癌细胞系Hce 86 93上相关抗原的表达量最高 ;抗大肠癌mAbCYL 2与Hce 86 93的结合力最强。纯化所获与CYL 2特异结合的大肠癌相关抗原 ,Mr 约为 13× 10 3 。该抗原由Mr 为 6 0× 10 3 和70× 10 3 两种亚基组成。结论 :利用mAbCYL 2进行亲和层析 ,从大肠癌细胞系Hce 86 93中获得纯化的肿瘤相关抗原。